Реактив Эллмана
| Реактив Эллмана | |
|---|---|
 | |
| Общие | |
| Систематическое наименование |
5-(3-карбокси-4-нитрофенил)дисульфанил-2-нитробензойная кислота |
| Сокращения | ДТНБ; DTNB |
| Традиционные названия | Дитионитробензойная кислота; 5,5'-Дитиобис(2-нитробензойная кислота) |
| Хим. формула | C14H8N2O8S2 |
| Физические свойства | |
| Молярная масса | 396,34 г/моль |
| Термические свойства | |
| Температура | |
| • кипения | 240 - 245 °C |
| Классификация | |
| Рег. номер CAS | 69-78-3 |
| PubChem | 6254 |
| Рег. номер EINECS | 200-714-4 |
| SMILES | |
| InChI | |
| ChEBI | 86228 |
| ChemSpider | 6018 |
| Безопасность | |
| Фразы риска (R) | R36, R37, R38 |
| Фразы безопасности (S) | S26, S36 |
| Краткие характер. опасности (H) |
H315, H319, H335 |
| Меры предостор. (P) |
P261, P305, P338, P351 |
| Приведены данные для стандартных условий (25 °C, 100 кПа), если не указано иное. | |
 Медиафайлы на Викискладе | |
Реактив Эллмана или 5,5'-дитиобис-(2-нитробензойная кислота) (ДТНБ)[1] — химическое соединение, используемое для количественного анализа тиоловых групп в образце[2]. Широко используется в биохимии для определения содержания цистеинов в белках и пептидах. Метод был предложен Джорджем Л. Эллманом в 1959 году[3].
Приготовление
[править | править код]В оригинальной статье Эллмана[2] описывается, что он приготовил этот реактив, окислив 2-нитро-5-хлорбензальдегид до карбоновой кислоты, и ввёл тиоловую группу через сульфид натрия, а затем соединил два мономера, окислив их йодом. В наше время этот реактив можно приобрести в готовом виде.
Тест Эллмана
[править | править код]При реакции сульфгидрильных (тиоловых) групп с реактивом Эллмана происходит разрыв дисульфидной связи в реактиве, и образуется 2-нитро-5-тиобензойная кислота, которая легко переходит в хиноидную форму в воде при нейтральных и щелочных рH и имеет ярко-жёлтую окраску.
Реакция ДНТБ с тиолом (R-SH).
Реакция протекает быстро и со стехиометрией один к одному. Образовавшийся продукт в хиноидной форме (тионитрофильный анион) обладает сильным поглощением при 412 нм и может количественно определяться при помощи спектрофотометра. Для разбавленных буферных растворов используется молярный коэффициент экстинкции 14,150 M−1 см−1[4][5], а для растворов с высокой концентрацией солей, например в растворе 6-ти молярного гуанидин хлорида или мочевины — 13,700 M−1 см−1[5]. К несчастью, в оригинальной работе 1959 года коэффициент экстинкции для разбавленных растворов был занижен до 13,600 M−1 см−1, и эта ошибка со временем закрепилась в литературе[3]. Коммерческий ДТНБ не всегда полностью чист, поэтому для получения точных и воспроизводимых результатов его следует перекристаллизовать[5].
Реактив Эллмана позволяет измерить концентрации низкомолекулярных тиолов, таких как глутатион, при этом производить измерения можно как в чистом растворе так и в биологическом образце, например в крови[6].
Реактив Эллмана используют при определении активности глутатионпероксидазы; при этом для измерения активности изоферментов с широкой тиоловой специфичностью может быть использован не только глутатион, но также цистеин и гомоцистеин, благодаря равноэффективности реактива Эллмана для определения концентрации любого из тиолов.[7]
Примечания
[править | править код]- ↑ 5,5′-Dithiobis(2-nitrobenzoic acid) Архивная копия от 16 июля 2011 на Wayback Machine at Sigma-Aldrich
- ↑ 1 2 Ellman G. L. Tissue sulfhydryl groups (англ.) // Archives of Biochemistry and Biophysics[англ.] : journal. — Elsevier, 1959. — Vol. 82, no. 1. — P. 70—7. — doi:10.1016/0003-9861(59)90090-6. — PMID 13650640.
- ↑ 1 2 Riener C. K., Kada G., Gruber H. J. Quick measurement of protein sulfhydryls with Ellman's reagent and with 4,4'-dithiodipyridine (англ.) // Anal Bioanal Chem[англ.] : journal. — 2002. — Vol. 373, no. 4—5. — P. 266—276. — doi:10.1007/s00216-002-1347-2. — PMID 12110978.
- ↑ Collier H. B. Letter: A note on the molar absorptivity of reduced Ellman's reagent, 3-carboxylato-4-nitrothiophenolate (англ.) // Anal. Biochem.[англ.] : journal. — 1973. — Vol. 56, no. 1. — P. 310—311. — doi:10.1016/0003-2697(73)90196-6. — PMID 4764694.
- ↑ 1 2 3 Riddles P. W., Blakeley R. L., Zerner B. Reassessment of Ellman's reagent (англ.) // Meth. Enzymol. : journal. — 1983. — Vol. 91. Methods in Enzymology. — P. 49—60. — ISBN 978-0-12-181991-0. — doi:10.1016/S0076-6879(83)91010-8. — PMID 6855597.
- ↑ Sedlak J., Lindsay R. H. Estimation of total, protein-bound, and nonprotein sulfhydryl groups in tissue with Ellman's reagent (англ.) // Anal. Biochem.[англ.] : journal. — 1968. — Vol. 25, no. 1. — P. 192—205. — doi:10.1016/0003-2697(68)90092-4. — PMID 4973948.
- ↑ Разыграев А.В., Таборская К.И., Петросян М.А., Тумасова Ж.Н. Тиолпероксидазные активности плазмы крови крыс, определяемые с использованием пероксида водорода и 5,5`-дитиобис(2-нитробензойной кислоты) (рус.) // Биомедицинская химия. — 2016. — Т. 62, вып. 4. — С. 431–438. — doi:10.18097/PBMC20166204431. Архивировано 12 декабря 2021 года.
Внешние ссылки
[править | править код]- Quantitation of sulfhydryls DTNB, Ellman’s reagent (с неправильным коэффициентом поглощения)