13.

Describir los principios en que se basan las separaciones en cromatografa

de gases (CG). Describir cada una de las partes del equipo utilizado para la
aplicacin de esta tcnica en los campos cualitativo y cuantitativo.
Caractersticas del equipo SHIMADZU QP2010 PLUS.
PRINCIPIOS: La cromatografa de gases es una tcnica analtica que permite
separar mezclas de compuestos fcilmente volatilizables y trmicamente
estables en sus componentes individuales. En todas las separaciones
cromatogrficas, la muestra se desplaza con una fase mvil, a travs de una
fase estacionaria con la que es inmiscible fijada a una columna o a una
superficie slida. Las dos fases se eligen de tal forma que los componentes de
la muestra se distribuyan de modo distinto entre ambas. Aquellos
componentes fuertemente retenidos por la fase estacionaria se mueven
lentamente con el flujo de la fase mvil; por el contrario, los componentes que
se unen dbilmente se mueven con rapidez. Como consecuencia de la distinta
movilidad, los componentes de la muestra se separan en bandas que pueden
identificarse cualitativa y/o determinarse cuantitativamente. La clasificacin
ms frecuente en cromatografa, la marca el tipo de fase mvil, en este sentido
la cromatografa de gases emplea como fase mvil un gas.
En cromatografa de gases (CG), la muestra se volatiliza y se inyecta en la
cabeza de una columna cromatogrfica. La elucin se produce por el flujo de
una fase mvil de gas inerte, la fase mvil no interacciona con las molculas
del analito cuya nica funcin es la del transporte de este a travs de la
columna. En este punto se produce la separacin de los componentes de la
mezcla, que finalmente son determinados gracias a un detector que amplifica
la seal integrndola y dando lugar a los resultados analticos.
PARTES:

Cilindro de gas portador: Sirve para transportar los componentes de la

muestra a travs de la columna. Para el detector FID, se ha comprobado
que el nitrgeno es mejor por dos razones, la sensibilidad que se obtiene
con l es casi el doble que con helio y la alta densidad del nitrgeno,
reduce la expansin del pico en la columna y aumenta la eficiencia.
Gas portador: El gas portador debe ser un gas inerte, para prevenir su
reaccin con el analito o la columna. Generalmente se emplean gases
como el helio, argn, nitrgeno, hidrogeno o dixido de carbono, y la
eleccin de este gas en ocasiones depende del tipo de detector
empleado. El almacenaje del gas puede ser en balas normales o
empleando un generador, especialmente en el caso del nitrgeno y del
hidrogeno.
Regulador para control de flujo: Sirve para mantener constante el flujo
ya que pequeas variaciones del mismo ocasionan grandes errores en la
interpretacin de cromatogramas.
Puerta de inyeccin o inyector: Es el lugar por donde se introduce la
muestra al cromatgrafo. Su funcin es vaporizar la muestra por
analizar. El inyector se encuentra dentro de un bloque de metal

calentado por resistencias elctricas. La muestra se introduce a travs

de una vlvula muestreadora de gas.
Columna: En ella se efecta la separacin delos componentes de la
muestra.
Horno de la columna: Es el compartimiento del cromatgrafo que
mantiene la columna a temperatura constante. Generalmente es
automatizada dentro del cromatgrafo.
Detector:El detector es la parte del cromatgrafo que se encarga de
determinar cundo ha salido el analito por el final de la columna. Este
dispositivo produce una seal elctrica para indicar la presencia y
cantidad demuestra que se encuentra ubicada en la salida de la
columna.
Registrador: La amplificacin de la seal producida por el detector del
cromatgrafo es enviada a un registrador mecnico que traza la seal
sobre un papel calibrado o un sistema computarizado.

CARACTERSTICAS DEL EQUIPO SHIMADZU QP2010 PLUS.

1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.

Mayor sensibilidad resultante de nuevo diseo innovador

de alta velocidad de adquisicin de datos de escaneo / SIM tecnologa
adquisicin automtica Scan / SIM parmetro de configuracin
Herramientas necesarias para los anlisis de alta velocidad
rango de masas Ampliado 1,5 hasta 1090
Ajuste automtico de los tiempos de retencin
Bsqueda Biblioteca utilizando el ndice de retencin
Informe funcionalidad de personalizacin

14. Detectores de la CG, para que sirve cada uno y en qu se diferencian

Detector de conductividad elctrica: uno de los primeros utilizados para

el trabajo de rutina en cromatografa de gases, ha sido el detector de
conductividad trmica o detector de hilo caliente. Este tipo detector
responde a la diferencia de conductividad trmica existente entre el gas
portador puro y el gas portador mezclado con alguna otra substancia; la
magnitud de la respuesta depender de la diferencia de conductividad
trmica entre el compuesto que eluye de la columna y el gas portador.
Detector de ionizacin de llama: el detector de ionizacin de llama, es
tal vez el ms ampliamente utilizado en cromatografa de gases. Este
tipo de detector es en la prctica de respuesta universal, ya que es
selectivo hacia los compuestos que presenten los enlaces C-H, por lo que
son muy pocos los compuestos que no dan seal de l.
Detector de captura electrnica: el detector de captura electrnica
ocupa probablemente el segundo lugar entre los detectores de ms altas
utilizacin, debindose este hecho a su excepcional sensibilidad (el
detector de captura electrnica es el dispositivo analtico ms sensible
que se conoce). Este hecho junto a su selectividad hacia compuesto de
enorme inters (fundamentalmente en campos de medio ambiente y

toxicologa), hacen que sea enormemente utilizado para la deteccin y

cuantificacin de trazas.
Detector de nitrgeno-fosforo: tambin conocido como detector
termoinico o detector de llama alcalina), est basado en el hecho de
que la adicin de una sal de metales alcalinos a llama de un detector de
ionizacin aumente la respuesta de este hacia determinados elementos
(fsforo, nitrgeno, azufre, etc.) la selectividad de este tipo de
detectores es muy dependiente de para metros tales como la
temperatura, la forma y el tamao de la llama, la composicin de la sal
alcalina, geometra del detecto, etc.; debido a eta dependencia de
muchos parmetros experimentales, el manejo de este tipo de detector
es difcil, la optimizacin de la respuesta es tediosa y su estabilidad,
debido a perdidas por vaporizacin de la sal alcalina, es muy escaza.
Detector fotomtrico de llama: (FPD) utiliza una llama de hidrogeno para
excitar a un estado electrnico elevado fragmentos de molculas que
contengan tomos de azufre o fosforo. Estos dos elementos son
excitados de forma ptima por la llama de hidrogeno, y cuando retornan
a su estado fundamental emiten las lneas caractersticas de sus
espectros; las lneas analticas de inters son seleccionadas por medio
de un filtro (392 nm para determinar azufre y 526 nm para fsforo) y la
intensidad de la radiacin emitida es medida por medido de un
fotomultiplicador.
Detector de fotoionizacin: los detectores de fotoionizacin estn
basados en la utilizacin de los fotones generados en una lmpara de
descarga para ionizar los compuestos orgnicos que emergen, junto con
el gas portador, de una columna cromatogrfica. Este tipo de detectores,
utilizan para generar la radiacin un tubo de descarga que contiene una
mezcla de gases a baja presin; estos son excitados por medio de una
diferencia de potencial elevada que se mantiene ente dos electrodos. La
variacin en las proporciones de la mezcla de gases de la lmpara,
permite obtener radiacin ultravioleta de diferentes energas, aunque la
ms utilizada es la de 10,2 Ev.
Detector de conductividad electroltica: la utilizacin del detector de
conductividad, est basada en la medida de las variaciones de la
conductividad que representa una disolucin de electrolitos se forman
por disolucin en agua de los productos de las substancias eluidas, por
supuesto, solo las substancias que contengan grupos capaces de
comportarse como electrolitos sern detectables por este medio.

15. Interpretacin de resultados y cromatograma en CG.

Examinar la forma de la informacin cromatogrfica. La salida de un CG

se conoce como cromatograma y es generalmente un grfico de dos
dimensiones. La cantidad de respuesta del detector se mide en el eje Y y
el tiempo de retencin se mide en el eje X.

Estudiar el cromatograma. Este mostrar el espectro de los picos, donde

cada uno representa el analito de la muestra. El tiempo de retencin
puede ayudarle a identificar un analito bajo condiciones apropiadas de
prueba.

Aprenda tanto como pueda sobre la muestra. El analista generalmente

debe tener una idea de qu componentes se encuentran en la muestra
para que el cromatograma tenga sentido. Incluso con esta informacin,
un componente puede no ser detectado si la muestra contiene otro
componente en concentraciones ms altas y con el mismo tiempo de
elucin.

Conectar el CG a un espectmetro de masa. Si bien el patrn de picos

puede usarse para identificar analitos de forma directa, un CG a menudo
entrega sus resultados a un espectmetro de masa o a otro artefacto de
deteccin. Este detector detecta entonces el analito representado por
cada pico.

Determinar la cantidad de cada analito mostrado en el cromatograma.

Los anlisis de CG usan clculos integrales para calcular el rea bajo
cada curva de los picos. Este valor es proporcional a la concentracin
original de cada analito en la muestra.

16. Cromatografa liquida de alta eficiencia HPLC. Principios, instrumentacin,

cromatogramas, aplicaciones.

PRINCIPIOS: La cromatografa lquida (HPLC), es una tcnica utilizada

para separar los componentes de una mezcla. Consiste en una fase
estacionaria no polar (columna) y una fase mvil. La fase estacionaria es
slica que se ha tratado con RMe2SiCl . La fase mvil acta de portador
de la muestra. La muestra en solucin es inyectada en la fase mvil. Los
componentes de la solucin emigran de acuerdo a las interacciones nocovalentes de los compuestos con la columna. Estas interacciones
qumicas, determinan la separacin de los contenidos en la muestra. La
utilizacin de los diferentes detectores depender de la naturaleza de los
compuestos a determinar
INSTRUMENTACION:
VARIAN 920 LC
Bomba de gradiente cuaternaria.
Columna termostatizada rango de temperatura: ambiente+10C65C.
Automuestreador (200 vialesx2ml) con jeringa de inyeccin (050l) con posibilidad de realizar incrementos de 1l.
Detector PDA (diodo array) con un rango de longitudes de onda
(190 -900 nm) con lmpara de deuterio para UV y halgena de
cuarzo para visible, con una resolucin espectral <1nm para el
fotodiodo.

Detector de Fluorescencia: Lmpara de Xe de 150W, y lmpara de

Hg para chequear la longitud de onda. Presin 145psi
Bomba de gradiente ternaria VARIAN INERT 9012
Detector Ultravioleta/Visible Jasco UV-975
Detector de Fluorescencia Jasco FP-920
Columnas disponibles: Vidac Hipersil (25mm x 4.6mm x 5m)
recomendada por EPA para anlisis de PAHs), C18 (15mm x
4.6mm x 5m), C18 (25mm x 4.6mm x 5m).
APLICACIONES:
Esta tcnica est indicada para la separacin de compuestos
orgnicos semivlatile.
Hidrocarburos Poliaromticos (PAHs), Aminocidos: OTA, cido
Flico, Herbicidas,
Vitaminas, Acido tenuazonico, Formaldehdoetc.
Rango de trabajo para muestras lquidas: g L-1- mg L-1
Rango de trabajo para muestras slidas: g Kg-1 - g g-1