Objetivos

 Que es un espectrofotómetro.

 Conocer la función del espectrofotómetro.

 Como se maneja el espectrofotómetro.

 Cuidados del espectrofotómetro.

 Trazado de curvas espectrales.

 Que parámetro se usa en las curvas espectrales.

 Que indica una curva espectral.

 Para que sirve una curva espectral.

Fundamentos teóricos

 Método Espectrofotométrico.

 Que es un espectrofotómetro.

 Tipos de Espectrometría.

 métodos ópticos espectroscópicos

 Introducción a los métodos ópticos espectroscópicos.

 Espectrometría de absorción molecular.

 Fundamentos de la absorción molecular.

 Leyes cuantitativas de la absorción molecular.

 Cálculos de absorbancia.

 Trazado de curvas espectrales.

 Aplicaciones analíticas.
Introducción

Desde hace muchos años se ha usado el color como ayuda para reconocer las
sustancias químicas; al reemplazar el ojo humano por otros detectores de
radiación se puede estudiar la absorción de sustancias, no solamente en la
zona del espectro visible, sino también en ultravioleta e infrarrojo.

Se denomina espectrofotometría a la medición de la cantidad de energía

radiante que absorbe un sistema químico en función de la longitud de onda de
la radiación, y a las mediciones a una determinada longitud de onda.

La teoría ondulatoria de la luz propone la idea de que un haz de luz es un flujo

de cuantos de energía llamados fotones; la luz de una cierta longitud de onda
está asociada con los fotones, cada uno de los cuales posee una cantidad
definida de energía…

Espectrofotometría
La espectrofotometría es un método analítico que utiliza los efectos de la
interacción de las radiaciones electromagnéticas con la materia (átomos y
moléculas) para medir la absorción o la transmisión de luz por las sustancias.

La espectrofotometría se refiere a los métodos, cuantitativos, de análisis

químico que utilizan la luz para medir la concentración de las sustancias
químicas. Se conocen como métodos espectrofotométricos y, según sea la
radiación utilizada, como espectrofotometría de absorción visible (colorimetría),
ultravioleta, infrarroja

En espectroscopia el término luz no sólo se aplica a la forma visible de

radiación electromagnética, sino también a las formas UV e IR, que son
invisibles. En espectrofotometría de absorbancia se utilizan las regiones del
ultravioleta (UV cercano, de 195-400 nm) y el visible (400-780 nm).

La región UV se define como el rango de longitudes de onda de 195 a 400 nm.

Es una región de energía muy alta. Provoca daño al ojo humano así como
quemadura común. Los compuestos con dobles enlaces aislados, triples
enlaces, enlaces peptídicos, sistemas aromáticos, grupos carbonilos y otros
heteroátomos tienen su máxima absorbancia en la región UV, por lo que ésta
es muy importante para la determinación cualitativa y cuantitativa de
compuestos orgánicos. Diversos factores -como pH, concentración de sal y el
disolvente- que alteran la carga de las moléculas, provocan desplazamientos
de los espectros UV.
La fuente de radiación ultravioleta es una lámpara de deuterio.

En la región visible apreciamos el color visible de una solución y que

corresponde a las longitudes de onda de luz que transmite, no que absorbe. El
color que absorbe es el complementario del color que transmite.

Por tanto, para realizar mediciones de absorción es necesario utilizar la

longitud de onda en la que absorbe luz la solución coloreada.

La fuente de radiación visible suele ser una lámpara de tungsteno y no

proporciona suficiente energía por debajo de 320 nm.

¿Qué es un espectrofotómetro?
Un espectrofotómetro es un instrumento que tiene la capacidad de manejar un
haz de Radiación Electromagnética (REM), comúnmente denominado Luz,
separándolo en facilitar la identificación, calificación y cuantificación de su
energía. Su eficiencia, resolución, sensibilidad y rango espectral, dependerán
de las variables de diseño y de la selección de los componentes ópticos que lo
conforman.

Cuando la luz atraviesa una sustancia, parte de la energía es absorbida. El

color de las sustancias se debe a que estas absorben ciertas longitudes de
onda de la luz blanca que incide sobre ellas, y sólo vemos aquellas longitudes
de onda que no fueron absorbidas.

El espectrofotómetro mide la absorbancia de una muestra en los espectros de

luz ultravioleta y visible (200 a 850 nm). El largo de onda es determinado por un
prisma que descompone el rayo de luz de acuerdo al largo de onda escogido.
Luego la luz pasa por una hendidura que determina la intensidad del haz. Este
haz atraviesa la muestra y llega a un tubo fotográfico, donde es medido. La
cantidad de luz que atraviesa la muestra es el porcentaje (%) de transmitancia.
Podemos usar esta unidad o cambiarla a absorbancia usando la siguiente
ecuación.
%T = - Log Abs.

El espectrofotómetro nos puede dar ambos valores a la misma vez, ahorrando

la necesidad de hacer los cálculos. (Transmitancia= cantidad de luz que
atraviesa la mezcla).
Una característica del instrumento es la necesidad de “blanquear” el aparato
antes de cada lectura. Esto se hace colocando una cubeta con una solución
control que tenga todos los componentes de la reacción menos la sustancia
que va a ser medida en el instrumento y ajustando la lectura a cero
absorbancia.

El propósito de esto es eliminar el registro de absorbancia (background) que

puedan presentar los demás componentes de la reacción a ese largo de onda
particular. Todas las moléculas presentan absorbancia porque todas interfieren
con el paso de la luz. Sólo que la absorbancia será óptima a un largo de onda
de luz específico para cada tipo de sustancia.

Componentes de un espectrofotómetro
La medición de absorbancia de la luz por las moléculas se realiza en unos
aparatos llamados espectrofotómetros. Aunque pueden variar en diseño, en
especial con la incorporación de ordenadores para el análisis de datos, todos
los espectrofotómetros constan, según se indica en la figura, de:

1. Una fuente de energía radiante: lámpara de deuterio y tungsteno.

2. Un monocromador para la selección de radiaciones de una

determinada longitud de onda: filtros, prismas, redes de difracción.

3. Un compartimento donde se aloja un recipiente transparente

(cubetas o tubos) que contenga la muestra Pueden ser de vidrio,
cuarzo o plástico transparente. Para medir en UV se deben usar las
de cuarzo o sílice fundido, porque el vidrio no transmite la radiación
UV.

4. Un detector de luz y un amplificador convertidor de las señales

luminosas en señales eléctricas.

5. Un registrador o sistema de lectura de datos.

 Utilidad.
Los espectrofotómetros son útiles debido a la relación de la intensidad del color
en una muestra y su relación a la cantidad de solute dentro de la muestra. Por
ejemplo, si usted utiliza una solución del colorante rojo del alimento en agua, y
mida la cantidad de luz azul absorbida cuando pasa a través de la solución,
una fluctuación mensurable del voltaje puede ser inducido en una fotocélula en
el lado opuesto.

Si ahora la solución del tinte rojo es diluida por la adición del agua el color será
menos intenso. Así, hay una relación entre el voltaje y la cantidad de tinte en la
muestra.

El espectrofotómetro tiene la capacidad de proyectar un haz de luz

monocromática (de una longitud de onda particular) a través de una muestra y
medir la cantidad de luz que es absorbida por dicha muestra. Esto le permite al
experimentador realizar dos funciones:

Nos da información sobre la naturaleza de la sustancia en la muestra. Esto

podemos lograrlo midiendo la absorbancia (Abs) a distintos largos de onda (l) y
graficar estos valores en función del largo de onda, formando un
espectrograma. Como cada sustancia tiene unas propiedades espectrales
únicas, distintas sustancias producen distintos espectrogramas. Esto se debe a
que cada sustancia tiene un arreglo de átomos tridimensional particular que
hace que cada sustancia tenga características únicas.

Tipos de Espectrometría

Hay tres grandes tipos de métodos espectro-métricos para identificar los

elementos presentes en la materia y determinar sus concentraciones: la
espectrometría óptica, la espectrometría de masas y la espectrometría de
rayos X.

En la espectrometría óptica, los elementos presentes en una muestra se

convierten en átomos o iones elementales en estado gaseoso por medio de un
proceso denominado atomización. De esta manera se mide la absorción
ultravioleta/visible, la emisión o la fluorescencia de las especies atómicas en el
vapor. En la espectrometría de masas atómica, las muestras también se
atomizan, sin embargo, en este caso, los átomos en estado gaseoso se
convierten en iones positivos (generalmente con una única carga) y se separan
en función de su relación masa-carga. Los datos cuantitativos se obtienen por
el recuento de los iones separados. En la espectrometría de rayos X, se
necesita atomizar, ya que, para la mayoría de los elementos, los espectros de
rayos X son independientes de cómo se encuentren dichos elementos
combinados químicamente en una muestra.

Espectrometría de absorción molecular

La espectroscopia de absorción molecular se basa en la medida de la
transmitancia T o de la absorbancia A de disoluciones que se encuentranen
cubetas transparentes que tienen un camino óptico de b cm. Normalmente, la
concentración c de un analito absorbente está relacionada linealmente con la
absorbancia como representa la ecuación

A= -logT=logP0P=εbc

Todas las variables de esta ecuación se definen en la Tabla 13-1. Esta

ecuación es una representación matemática de la ley de Beer

Fundamentos de la absorción molecular

 Transmitancia y Absorbancia
Cuando un rayo de luz de una determinada longitud de onda de intensidad Io
incide perpendicularmente sobre una disolución de un compuesto químico que
absorbe luz o cromóforo, el compuesto absorberá una parte de la radiación
incidente (Ia) y dejará pasar el resto (It), de forma que se cumple: Io = Ia + It

La transmitancia (T) de una sustancia en solución es la relación entre la

cantidad de luz transmitida que llega al detector una vez que ha atravesado la
muestra, It, y la cantidad de luz que incidió sobre ella, Io, y se representa
normalmente en tanto por ciento:

% T = It/Io x 100
La transmitancia nos da una medida física de la relación de intensidad
incidente y transmitida al pasar por la muestra. La relación entre %T y la
concentración no es lineal, pero asume una relación logarítmica inversa.

La absorbancia (A) es un concepto más relacionado con la muestra puesto

que nos indica la cantidad de luz absorbida por la misma, y se define como el
logaritmo de 1/T, en consecuencia:

A = log 1/T = -log T = -log It/ Io.

Cuando la intensidad incidente y transmitida son iguales (Io = It), la
transmitancia es del 100% e indica que la muestra no absorbe a una
determinada longitud de onda, y entonces A vale log 1 = 0.

La cantidad de luz absorbida dependerá de la distancia que atraviesa la luz a

través de la solución del cromóforo y de la concentración de éste.

 Ley de Lambert-Beer
Esta ley expresa la relación entre absorbancia de luz monocromática (de
longitud de onda fija) y concentración de un cromóforo en solución:
 A = log I/Io = ε·c·l

La absorbancia de una solución es directamente proporcional a su

concentración a mayor número de moléculas mayor interacción de la luz con
ellas; también depende de la distancia que recorre la luz por la solución a igual
concentración, cuanto mayor distancia recorre la luz por la muestra más
moléculas se encontrará-; y por último, depende de ε, una constante de
proporcionalidad -denominada coeficiente de extinción- que es específica de
cada cromóforo. Como A es adimensional, las dimensiones de ε dependen de
las de c y l. La segunda magnitud (l) se expresa siempre en cm mientras que la
primera (c) se hace, siempre que sea posible, en M, con lo que las dimensiones
de ε resultan ser M-1·cm-1. Este coeficiente así expresado, en términos de
unidades de concentración molar (o un submúltiplo apropiado), se denomina
coeficiente de extinción molar (εM). Cuando, por desconocerse el peso
molecular del soluto, la concentración de la disolución se expresa en otras
unidades distintas de M, por ejemplo g·L-1, las dimensiones de ε resultan ser
distintas, por ejemplo g-1·L·cm-1, y al coeficiente así expresado se denomina
coeficiente de extinción específico (εs).

La ley de Lambert-Beer se cumple para soluciones diluidas; para valores de c

altos, ε varía con la concentración, debido a fenómenos de dispersión de la luz,
agregación de moléculas, cambios del medio, etc.

 Instrumentación para la medición de absorbancias de la

luz visible y ultravioleta: espectrofotómetro UV-visible
La medición de absorbancia de la luz por las moléculas se realiza en unos
aparatos llamados espectrofotómetros. Aunque pueden variar en diseño, en
especial con la incorporación de ordenadores para el análisis de datos, todos
los espectrofotómetros constan, según se indica en la figura, de:

1. Una fuente de energía radiante: lámpara de deuterio y tungsteno.

2. Un monocromador para la selección de radiaciones de una determinada
longitud de onda: filtros, prismas, redes de difracción.
3. Un compartimento donde se aloja un recipiente transparente (cubetas o
tubos) que contenga la muestra Pueden ser de vidrio, cuarzo o plástico
transparente. Para medir en UV se deben usar las de cuarzo o sílice
fundido, porque el vidrio no transmite la radiación UV.
4. Un detector de luz y un amplificador convertidor de las señales
luminosas en señales eléctricas.
5. Un registrador o sistema de lectura de datos.

Desde el punto de vista operativo, el primer paso es seleccionar la fuente de

luz y longitud de onda a la que se va a realizar la medida. Hay
espectrofotómetros de un solo haz (con una sola celdilla para alojar la cubeta
con la muestra) y de doble haz (con dos celdillas para dos cubetas); en nuestro
caso se trabajará con los de un solo haz.
Se mide primero la absorbancia del disolvente (conocido como blanco) y al que
se le asigna el valor de cero mediante el ajuste del mando, de forma que la
intensidad incidente y transmitida sean iguales (Io = It), y por tanto la
absorbancia es cero. A continuación se pone en la celdilla la cubeta con la
muestra y se lee la absorbancia de ésta.

 Obtención de un espectro de absorción

El espectro de absorción es una representación gráfica que indica cantidad de
luz absorbida (ε) a diferentes valores de λ.

A partir de una solución diluida de un compuesto, cuya absorbancia máxima

entra dentro del rango de medida del espectrofotómetro, se verá el valor de
absorbancia a diferentes longitudes de onda frente a un blanco que contenga el
disolvente de la solución de la muestra a caracterizar. A partir del espectro de
absorción se obtendrá el valor de λ al que el compuesto presenta la mayor
absorbancia (λmax). Dicho λ se utilizará a la hora de hacer determinaciones
cualitativas y cuantitativas del compuesto.

El espectro de absorción de un cromóforo depende, fundamentalmente, de la

estructura química de la molécula.
No obstante, hay una gran cantidad de factores que originan variaciones en los
valores de λmax y εM, entre los que se incluye el pH, la polaridad del solvente
o moléculas vecinas y la orientación de los cromóforos vecinos; y cada uno
afecta de forma particular. Por ejemplo, variaciones originadas por cambios de
pH son debidas al efecto de éste sobre la ionización del compuesto. A
continuación se muestran como ejemplo los espectros de absorción de HNTS
(un reactivo empleado para la determinación de especies oxidantes) y
comprobándose que por espectrotometría se puede seguir el efecto que
ejercen
 Cálculos de absorbancia
Para obtener una curva de calibrado de un compuesto se preparan soluciones
de diferentes concentraciones del mismo, determinándose para cada una de
ellas el valor de absorbancia a λmax. Estos valores de absorbancia se
representan en el eje de abscisas (eje de x) y los de concentración en el eje de
ordenadas (eje de y). Se observará que, a bajas concentraciones, el aumento
de concentración se corresponde con un incremento lineal en la absorbancia
(zona de cumplimiento de la ley de Lambert-Beer). A concentraciones altas la
linealidad se pierde y se observa que la línea se aplana, por lo que las medidas
son poco fiables.

La representación de Lambert-Beer, A = ε·c·l, nos permitirá calcular el valor del

coeficiente de extinción molar, que corresponde a la pendiente de la recta.

Trazado de la curva espectral (Espectro de absorción del

compuesto).

 Preparar a partir de una droga p.a. una solución del componente que se
desea determinar en una concentración estipulada y trazar la curva
espectral, realizando para ello una serie de medidas de absorbancia a
distintas longitudes de onda y [c] constante.
 Sobre la curva espectral, seleccionar la longitud de onda de trabajo que
corresponda a un máximo de la curva. Se logra así máxima sensibilidad
y reproducibilidad.
 Preparar una serie de soluciones patrones de concentraciones
crecientes y perfectamente conocidas en el componente a determinar.
Parte experimental
a) Instalación y encendido del espectrofotómetro de absorción:

 Breve descripción del equipo: durante la presente práctica se trabajó

con un espectrofotómetro de absorción de un solo haz, el cual
presenta compartimientos para 4 celdas (las cuales contienen el
analito), un estabilizador de voltaje, entre otras características. Dicho
equipo nos permite determinar la transmitancia, absorbancia y la
concentración del analito a distintas longitudes de onda, entre otras
funciones.

 Al momento de encender el equipo se debe tomar las siguientes

consideraciones:

1. Enchufar el equipo y luego prender el estabilizador, esperar

unos minutos
2. Encender el espectrofotómetro y esperar a q el sistema
eléctrico y de lámparas se caliente
b. Trabajo con el espectrofotómetro: determinación de la transmitancia.

 Al momento de trabajar con el espectrofotómetro, se debe tener

precaución y precisión, debido a que el deterioro de algunas de
las partes del equipo conlleva al error en la lectura de las
muestras, y en el peor de los casos inutilización del mismo.
 Durante la experiencia con tres tipos diferentes de reactivos
(azosulfamida, azul de metileno, dicromato de potasio), se
siguieron los siguientes pasos:

1. Lavar la celdita (en la cual contendrá el analito) con agua

destilada y limpiar con sumo cuidado debido a que la
ralladura de la celda o el ingreso de objetos extraños
(como pelos) afectarán las lecturas de la muestra a
analizar (se recomienda limpiarlas con papel fino)
2. Introducir las celdas, una de las cuales contiene el analito y
la otra; la sustancia “blanco” (sustancia en la cual se
encuentra disuelta mi analito), al espectrofotómetro para su
posterior análisis.
3. Calibrar el equipo, analizando primero la muestra blanco,
para el posterior análisis de la muestra problema.
4. Determinar la transmitancia del analito, estableciendo las
longitudes de onda con las que se desea irradiar la
muestra problema (como el equipo es de un solo haz se
deberá jalar una palanca hasta permitir que la fuente de luz
irradie a la celdita en la posición en la que se encuentra).
 Azosulfamida

Λ (nm) %T A
450 60.7 0.2168113

460 57.7 0.2388242

470 52.7 0.2781894

480 46.7 0.3306831

490 41.5 0.3819519

500 36 0.4436975

510 33.7 0.4723701

520 31.9 0.4962093

530 31.7 0.4989407

540 33.4 0.4762535

550 37.6 0.4248122

560 44.1 0.3555614

570 51.9 0.2848326

580 63.7 0.1958606

590 68.4 0.1649439

600 74.6 0.1272612

610 79.4 0.1001795

620 83.1 0.080399

630 86.7 0.0619809

640 90.2 0.0447935

650 93.2 0.0305841

660 95.6 0.0195421

670 97.4 0.011441

680 98.5 0.0065638

690 99.4 0.0026136

 Azul de metileno

Λ (nm) %T A

550 84.1 0.075204

560 77.5 0.1106983
570 70.3 0.1530447
580 61.2 0.2132486
590 51.4 0.2890369
600 42.6 0.3705904
610 37.3 0.4282912
620 35.7 0.4473318
630 33.5 0.4749552
640 28.6 0.543634
650 23.1 0.636388
660 20.8 0.6819367
670 25.3 0.5968795
680 47.2 0.326058
690 75.5 0.122053
700 92.6 0.033389
710 98.6 0.0061231
 Bicromato de Potasio

Λ (nm) %T A

420 33.7 0.4723701

430 33.5 0.4749552

440 33.2 0.4788619

450 34.9 0.4571746

460 39.3 0.4056074

470 46.3 0.334419

480 55.3 0.2572749

490 65.1 0.186419

 500 74.5 0.1278437

510 82.4 0.0840728

520 88.4 0.0535477

530 92.5 0.0338583

540 94.7 0.02365

550 95.7 0.0190881

560 95.9 0.0181814

Resultados

1. Espectrofotometría de absorción molecular de

azosulfamida
Gráfica estándar:

Pico:

a. Λ (nm) = 525 nm A: 0.232 (Teórico)

b. Λ (nm) = 530 nm A: 0.4989 (Practico)

1. Espectrofotometría de absorción molecular de Azul de

metileno
En comparación con el espectro obtenido experimentalmente, podemos
apreciar que, al igual que el espectro patrón, el mayor pico de absorbancia se
presenta en la longitud de onda aproximada de 660nm. Esto puede deberse a
los dobles enlaces presentes en la molécula de azul de metileno, los cuales
posiblemente originen grupos cromóforos, como por ejemplo los enlaces
dobles conjugados de su sistema de anillos.

Pico: Λ (nm) = 660 % T = 20.8 A = 0.6819367

2. Espectrofotometría de absorción molecular de Dicromato

de potasio
En comparación con el patrón de K2Cr2O4, podemos apreciar similitudes en
ambos espectros, como por ejemplo el mayor pico de absorción. Sin embargo,
no se dispone de la información suficiente, dado que el espectro patrón trabaja
un mayor rango de longitudes de onda que el espectro obtenido
experimentalmente. Podemos afirmar que el espectro posee sus características
gracias a los grupos cromóforos que posee y a sus dobles enlaces.

Pico: Λ (nm) = 440 % T = 33.2 A = 0.4788619

Discusión
Si comparamos nuestra gráfica de absorbancia con nuestra gráfica estándar
nos daremos cuenta que en la gráfica experimental el pico se encuentra en la
longitud de onda de 530 nm con una absorbancia de 0.4989 y en nuestra
gráfica estándar se encuentra en la longitud de 525 nm con una absorbancia de
0.232. Nos damos cuenta que las longitudes difieren en pequeñas cantidades
comprobando que exactamente se trataba de azosulfamida al coincidir los
picos. La diferencia en la absorbancia se debería más a las concentraciones
con las que se ha trabajado notándose que nuestra muestra se encontraba
más concentrada. Cabe recordar que hay una gran cantidad de factores que
originan variaciones en los valores de λmáx, entre los que se incluye el pH, la
polaridad del solvente o moléculas vecinas y la rientación de los cromóforos
vecinos afectando cada uno de forma particular.

Cuestionario
 1. ¿Cuáles son los errores que se cometen en un laboratorio
analítico?

Los errores cometidos a lo largo de la práctica en el laboratorio son explicados

de 2 formas; podemos verlos desde un punto de vista objetivo y clasificarlos
(sistemáticos y aleatorios), de acuerdo a la bibliografía, a fin de manejar
conceptos esquematizados. Pero existe otra gama de errores a los cuales los
podemos denominar “errores subjetivos” ocasionados por el usuario -el
encargado de manejar la maquinaria. Los errores, generalmente, se presentan
en conjunto, con esto quiero decir que, tanto el usuario como los resultados
presentan un margen de equivocación. Ciertos cálculos y mediciones hacen
engorroso a un método –y a sus resultados- y por ende, acarrean una serie de
complicaciones hacia el ordenador lo cual se manifiesta como: error.

(a)Exacto y preciso
(b)Inexacto e preciso
(c) Exacto e impreciso
(d)Inexacto e impreciso

Entonces podemos decir que la

exactitud depende de la comparación
entre el valor verdadero y el valor
central de los resultados. Y la
precisión se visualiza como el grado
de concordancia de los resultados
(repetitividad). Los errores aparecen
cuando se pierde la exactitud (error
sistemático) y cuando los valores del
resultado nos oscilan alrededor de su
valor central; dispersos (error
aleatorio).
Distribución de errores

Numerosos estudios indican que al repetir mediciones de un mismo parámetro,

la función de probabilidad obtenida sigue el modelo de distribución Gaussiana o
normal. Estos estudios estadísticos afirman que la repetitividad de un
experimento generan una serie de resultados que, así como presentan un valor
medio, también poseen un grado de dispersión entre sí mismos. Este grado es
medible gracias a un estadígrafo denominado “desviación estándar”, así como
también la “varianza” o el coeficiente de variación determina el grado de
dispersión entre los resultados.

Errores en el muestreo

Los errores más importantes que pueden cometerse en todo el procesos de

toma de muestra, preparación y análisis, en especial para el análisis de trazas,
son debidos a la contaminación, pérdida de analitos y variaciones de la
composición y forma química de los mismos.

Contaminación

La contaminación durante el muestreo puede ser debida al medio ambiente, a

la operación del muestreo en sí (error objetivo) y/o al personal muestreador
(error subjetivo). La contaminación por el medio ambiente puede provenir del
polvo y de contaminantes volátiles existentes en el aire. Por otra parte, si las
herramientas empleadas en el muestreo no son del material adecuado para las
diferentes muestras a tomar y elementos a analizar, también pueden contribuir
significativamente a la contaminación de las muestras. En el muestreo de
muchos materiales se recomienda el empleo de material no metálico
(polietileno, polipropileno, teflón, cuarzo, ágata) que a veces hay que recurrir a
fabricarlos en el laboratorio, pero aun así muchos de estos materiales son
potencialmente contaminantes de ciertos elementos.
 1. Clasificación y la forma de evitar y disminuir los errores
en el laboratorio de analítica instrumental.

Clasificación
Los errores no siguen una ley determinada y su origen está en múltiples
causas. Atendiendo a las causas que los producen, los errores se pueden
clasificar en dos grandes grupos:

1. Errores indeterminados o aleatorios

Son errores de los que no se puede determinar el tamaño o el signo. Este tipo
de errores lleva a que el resultado de la medición tenga una cierta distribución,
es decir que al repetir la medición varias veces el valor medido fluctúe. Son
inevitables pero se pueden reducir repitiendo la medición y tomando un
promedio.

Posibles causas:

 interacción del operador y el aparato de medición

 condiciones experimentales fluctuantes
 variabilidad inherente en los instrumentos de medición

1. Errores sistemáticos o determinados

Son errores que se repiten constantemente a lo largo del experimento, siendo

su influencia de una única forma ya sea por exceso o bien por defecto. Las
posibles causas de este tipo de errores son:

 una calibración incorrecta del instrumento de medición

  un error consistente en el uso del instrumento
 el uso de fórmulas incorrectas
 condiciones experimentales inadecuadas

Este tipo de error no se puede reducir repitiendo la medición. Para evitar

errores sistemáticos causados por una técnica de medición específica se
utilizan distintas técnicas de medición.

1. ¿Cuáles son las características que deben presentar

una fuente de radiación, un monocromador y un
detector espectrofotométrico?
Las partes mencionadas deben cumplir con las siguientes características:

a. Fuentes: Una fuente de radiación debe generar un haz de radiación con

potencia suficiente para que se detecte y se mida con facilidad para
poderla utilizar en estudios espectroscópicos. Además su potencia debe
ser estable durante períodos de tiempo razonables.

La potencia radiante de una fuente varía exponencialmente con la

tensión de su fuente de alimentación. Por ello, para proporcionar la
estabilidad requerida se necesita a menudo una fuente e potencia
regulada.

b. Monocromador: Los monocromadores se diseñan para realizar barridos

espectrales (variar en forma continua y en un alto intervalo la longitud de
onda una radiación. Son similares en cuanto a su construcción
mecánica, ya que todos poseen rendijas (de entrada y salida), espejos
(lente colimadora o espejo que produce un haz de luz paralelo de
radiación), un prisma o red (dispersa la radiación en sus longitudes de
onda individuales) y un focalizador.

Para ser fiables, los materiales con los que se fabrican estos
componentes dependen de las regiones de longitud de onda a la que se
destine su uso.

c. Detectores: Se definen como dispositivos que convierten la energía

radiante en energía eléctrica.

Un detector ideal debe tener una elevada sensibilidad, una elevada

relación señal/ruido y una respuesta constante en un intervalo
considerable de longitudes de onda. Además, debe de tener un tiempo
de respuesta rápido y una señal de salida igual a cero en ausencia de
iluminación. En adición, la señal eléctrica producida por el transductor
debería ser directamente proporcional a la potencia radiante.

1. ¿Qué diferencia hay entre calibrar un instrumento y

calificar un instrumento?
Un instrumento es calificado de acuerdo a las especificaciones del fabricante
para un instrumento dado: su modelo y serie así como las modificaciones
implementadas y puestas de manifiesto en el manual. La calibración en cambio
es un procedimiento del analista quien modifica las lecturas del instrumento con
una sustancia patrón o estándar (generalmente el solvente en el cual se
encuentra el analito) para poder adaptar una lectura del instrumento a las
necesidades del analista para una muestra o un conjunto de ellas.

La forma de calibración más sencilla es la que utiliza un solo patrón. Este

modelo es útil sólo cuando el patrón es absolutamente confiable. Además, se
supone que la señal cero del instrumento corresponde al cero de concentración
de la especie que se quiere determinar. Entre el cero y valor obtenido para el
patrón se realiza una interpolación lineal, pero la extrapolación más allá de la
concentración de patrón no es recomendada.

2. ¿Por qué se utiliza celdas de cuarzo cuando se trabaja

con radiaciones ultravioleta?
Al igual que los elementos ópticos de los monocromadores, las celdas o
cubetas que contienen las muestras se deben fabricar de un material que sea
transparente a la radiación de la región espectral de interés. Para trabajar en la
región ultravioleta (por debajo de 350 nm), se considera uno de los materiales
más adecuados las celdas de cuarzo, debido a que transmite las radiaciones
comprendidas entre 200 nm y 3300nm; es por esto que se puede afirmar que
este material es transparente a la región UV y visible (algo que no ocurre con
las celdas de vidrio, que no son transparentes a la región ultravioleta).

Sin embargo, dicho material es muy costoso, por lo que se debe trabajar con él
con sumo cuidado.

3. Determinar la energía, la frecuencia y el número de

ondas de las longitudes de onda analítica obtenidos en
los espectros trazados

Número de ondas
λ (nm) Energía (Joules) Frecuencia (s-1)
(onda por metro)

450 4.4173792×10-21 6.666×1012 2222222

460 4.3213492×10-21 6.521×1012 2173913

470 4.2294056×10-21 6.382×1012 2127659

480 4.1412930×10-21 6.249×1012 2083333

490 4.0567768×10-21 6.122×1012 2040816

500 3.9756413×10-21 5.999×1012 2000000

510 3.8976875×10-21 5.882×1012 1960784

520 3.8227320×10-21 5.769×1012 1923076

530 3.7506050×10-21 5.660×1012 1886792

 540 3.6811493×10-21 5.555×1012 1851851

550 3.6142194×10-21 5.454×1012 1818181

560 3.5496797×10-21 5.357×1012 1785714

570 3.4874046×10-21 5.263×1012 1754386

580 3.4272770×10-21 5.172×1012 1724137

590 3.3691875×10-21 5.084×1012 1694915

600 3.3130344×10-21 4.999×1012 1666666

610 3.2587224×10-21 4.918×1012 1639344

620 3.2061623×10-21 4.838×1012 1612903

630 3.1552709×10-21 4.761×1012 1587301

640 3.1059697×10-21 4.687×1012 1562500

650 3.0581856×10-21 4.615×1012 1538461

660 3.0118495×10-21 4.545×1012 1515151

670 2.9668965×10-21 4.477×1012 1492537

680 2.9232656×10-21 4.411×1012 1470588

690 2.8808995×10-21 4.347×1012 1449275

700 2.8397438×10-21 4.285×1012 1428571

(*) La longitud de onda subrayada representa a la longitud óptima, la de

máxima absorción.

Anexos

Célula fotoeléctrica
Una célula fotoeléctrica, también llamada célula, fotocélula o celda fotovoltaica,
es un dispositivo electrónico que permite transformar la energía luminosa
(fotones) en energía eléctrica (electrones) mediante el efecto fotovoltaico.

Compuestos de un material que presenta efecto fotoeléctrico: absorben fotones

de luz y emiten electrones. Cuando estos electrones libres son capturados, el
resultado es una corriente eléctrica que puede ser utilizada como electricidad.

La eficiencia de conversión media obtenida por las células disponibles

comercialmente (producidas a partir de silicio monocristalino) está alrededor del
11-12%, pero según la tecnología utilizada varía desde el 6% de las células de
silicio amorfo hasta el 14-19% de las células de silicio monocristalino. También
existen Las células multicapa, normalmente de Arseniuro de galio, que
alcanzan eficiencias del 30%. En laboratorio se ha superado el 42% con
nuevos paneles experimentales.[cita requerida]

La vida útil media a máximo rendimiento se sitúa en torno a los 25 años,

período a partir del cual la potencia entregada disminuye.

Al grupo de células fotoeléctricas para energía solar se le conoce como panel

fotovoltaico. Los paneles fotovoltaicos consisten en una red de células solares
conectadas como circuito en serie para aumentar la tensión de salida hasta el
valor deseado (usualmente se utilizan 12V ó 24V) a la vez que se conectan
varias redes como circuito paralelo para aumentar la corriente eléctrica que es
capaz de proporcionar el dispositivo.

El tipo de corriente eléctrica que proporcionan es corriente continua, por lo que

si necesitamos corriente alterna o aumentar su tensión, tendremos que añadir
un inversor y/o un convertidor de potencia.

Principio de funcionamiento
En un semiconductor expuesto a la luz, un fotón de energía arranca un
electrón, creando al pasar un «hueco». Normalmente, el electrón encuentra
rápidamente un hueco para volver a llenarlo, y la energía proporcionada por el
fotón, pues, se disipa. El principio de una célula fotovoltaica es obligar a los
electrones y a los huecos a avanzar hacia el lado opuesto del material en lugar
de simplemente recombinarse en él: así, se producirá una diferencia de
potencial y por lo tanto tensión entre las dos partes del material, como ocurre
en una pila.

Para ello, se crea un campo eléctrico permanente, a través de una unión PN,
entre dos capas dopadas respectivamente, P y N:
Estructura de una célula fotovoltaica:

 La capa superior de la celda se compone de silicio dopado de tipo N. En

esta capa, hay un número de electrones libres mayor que una capa de
silicio puro, de ahí el nombre del dopaje N, como carga negativa
(electrones). El material permanece eléctricamente neutro: es la red
cristalina quien tiene globalmente una carga positiva.
  La capa inferior de la celda se compone de silicio dopado de tipo P. Esta
capa tiene por lo tanto una cantidad media de electrones libres menor
que una capa de silicio puro, los electrones están ligados a la red
cristalina que, en consecuencia, está cargada positivamente. La
conducción eléctrica está asegurada por los huecos, positivos (P).

En el momento de la creación de la unión PN, los electrones libres de la capa N

entran en la capa P y se recombinan con los huecos en la región P. Existirá así
durante toda la vida de la unión, una carga positiva en la región N a lo largo de
la unión (porque faltan electrones) y una carga negativa en la región en P a lo
largo de la unión (porque los huecos han desaparecido); el conjunto forma la
«Zona de Carga de Espacio» (ZCE) y existe un campo eléctrico entre las dos,
de N hacia P. Este campo eléctrico hace de la ZCE un [diodo]], que solo
permite el flujo de corriente en una dirección: los electrones pueden moverse
de la región P a la N, pero no en la dirección opuesta y por el contrario los
huecos no pasan más que de N hacia P.no

En funcionamiento, cuando un fotón arranca un electrón a la matriz, creando un

electrón libre y un hueco, bajo el efecto de este campo eléctrico cada uno va en
dirección opuesta: los electrones se acumulan en la región N (para convertirse
en polo negativo), mientras que los huecos se acumulan en la región dopada P
(que se convierte en el polo positivo). Este fenómeno es más eficaz en la
(ZCE), donde casi no hay portadores de carga (electrones o huecos), ya que
son anulados, o en la cercanía inmediata a la (ZCE): cuando un fotón crea un
par electrón-hueco, se separaron y es improbable que encuentren a su
opuesto, pero si la creación tiene lugar en un sitio más alejado de la unión, el
electrón (convertido en hueco) mantiene una gran oportunidad para
recombinarse antes de llegar a la zona N (resp. la zona P). Pero la ZCE es
necesariamente muy delgada, así que no es útil dar un gran espesor a la
célula.

En suma, una célula fotovoltaica es el equivalente de un Generador de Energía

a la que hemos añadido un diodo.

Es preciso añadir contactos eléctricos (que permitan pasar la luz: en la práctica,

mediante un contacto de rejilla, una capa antireflectante para garantizar la
correcta absorción de fotones, etc.

Para que la célula funcione, y produzca la potencia máxima de corriente se le

añade la banda prohibida de los semiconductores a nivel de energía de los
fotones. Es posible aumentar las uniones a fin de explotar al máximo el
espectro de energía de los fotones, lo que produce las células multijuntas.

Bibliografía
 Skoog, Holler, Nieman “Principios de Análisis Instrumental” 5ta edición
ed. Mc Graw Hill Madrid, España pág 153-177.

 Bender G. T “Métodos de Instrumentación de Análisis en Química

Clínica” ed. Acribia S.A. Zaragoa, España 1987 pág.49, 80.

 Espectrofotometría: Espectros de absorción y cuantificación

colorimétrica de biomoléculas. Nieves Abril, Antonio Bárcena.

 Hesse M, Meier H, Zeeh B. Métodos espectroscópicos en química

orgánica. 5ª Edición. Madrid. Editorial Síntesis S.A. 1997.

 Bender Gary. Métodos instrumentales de analítica en química clínica.

Editorial Acribia S.A. 1992.

 Skoog D, Holler J, Nieman T. Principios de análisis instrumental. 5ª

Edición. España. McGraw-Hill.2001.