UNIVERSIDAD NACIONAL PEDRO RUIZ GALLO

Informe de practicas
Microbiologa Humana

Yesenia Rub Girn Santa Cruz

BIOLOGIA GENERAL

PRACTICA N1

I. OBJETIVOS: Conocer y aprender las diferentes tcnicas de coloracin y siembra bacteriana. II. FUNDAMENTO TERICO 2.1. Tcnicas de Coloracin Se emplea para distinguir diferentes tipos de clulas o para revelar la presencia de determinados constituyentes celulares, tales como flagelos, esporas, cpsulas, paredes celulares. Las clulas generalmente son tratadas para coagular el protoplasma antes de teirlas, proceso llamado fijacin. Para bacterias, la fijacin por el calor es lo ms corriente, aunque tambin puede fijarse con sustancias qumicas como formaldehido, cidos y alcoholes. Despus de la fijacin, si se aade el colorante, no se producen ulteriores cambios estructurales en el protoplasma. La fijacin produce habitualmente el encogimiento de las clulas; la tincin, por el contrario, hace que las clulas aparezcan mayores que lo que es realmente, de manera que las medidas de las clulas que han sido fijadas o teidas no pueden realizarse con mucha precisin. Algunos colorantes teirn mejor slo despus de que la clula haya sido tratada con otra sustancia qumica, que no es un colorante por s mismo. Esta sustancia se denomina mordiente; un mordiente habitual es el cido tnico. El mordiente se combina con un constituyente celular y lo altera de ta1 modo que ahora s podr atacar el colorante. TINCIN GRAN La tincin de Gram es uno de los mtodos de tincin ms importantes en el laboratorio bacteriolgico y con el que el estudiante debe estar perfectamente familiarizado. Su utilidad prctica es indiscutible y en el trabajo microscpico de rutina del Laboratorio de Microbiologa las referencias a la morfologa celular bacteriana (cocos, bacilos, positivos, negativos, etc) se basan justamente en la tincin de GRAM. Las bacterias GRAM-positivas y GRAM-negativas se tien de forma distinta debido a las diferencias constitutivas en la estructura de sus paredes celulares. Las clulas fijadas al calor sobre un portaobjetos se tien, primero con una solucin de cristal violeta (otros colorantes bsicos no son tan efectivos) y son lavadas despus para quitar el exceso de colorante. En este estado, todas las clulas, tanto las grampositivas como las gramnegativas, estn teidas de azul.

El portaobjetos se cubre entonces con Lugol. El ingrediente activo es aqu el I2; el KI simplemente hace soluble el I2 en agua. El I2 entra en las clulas y forma un complejo insoluble en agua con el cristal violeta. De nuevo tanto las clulas grampositivas como las gramnegativas se encuentran en la misma situacin. Se lleva a cabo despus la decoloracin, usando una mezcla de alcohol-acetona, sustancias en las que es soluble el complejo I2-cristal violeta. Algunos organismos (grampositivas) no se decoloran, mientras que otros (gramnegativos) lo hacen. La diferencia esencial entre esos dos tipos de clulas est por tanto en su resistencia a la decoloracin; esta resistencia se debe probablemente al hecho de que en el caso de bacterias Gram-negativas, la mezcla de alcohol/acetona es un solvente lipdico y disuelve la membrana exterior de la pared de la clula (y tambin puede daar la membrana citoplsmica a la que se une peptidoglicano). La delgada capa de peptidoglicano es incapaz de retener el de complejo cristal violeta-yodo y la clula se decolora. Las clulas grampositivas, a causa de sus paredes celulares ms espesas (tienen ms peptidoglicano y menos lpido), no son permeables al disolvente ya que ste deshidrata la pared celular y cierra los poros, disminuyendo as el espacio entre las molculas y provocando que el de complejo cristal violeta-yodo quede atrapado dentro de la pared celular. Despus de la decoloracin las clulas grampositivas son todava azules, pero las gramnegativas son incoloras. Para poner de manifiesto las clulas gramnegativas se utiliza una coloracin de contraste. Habitualmente es un colorante de color rojo, como la safranina o la fucsina bsica. Despus de la coloracin de contraste las clulas gramnegativas son rojas, mientras que las grampositivas permanecen azules. SIEMBRA BACTERIANA Todos los microorganismos viven y se multiplican gracias a substratos nutritivos que se encuentran en el medio ambiente de forma natural. Pero podemos reproducir dichas condiciones en el laboratorio, a fin de observar la presencia, ausencia o comportamiento de determinados microorganismos. Este mtodo de anlisis se llama "medios de cultivo" y es en estos medios donde se "siembran bacterias" con el fin de estudiar la morfologa de las colonias, conservacin de cepas identificadas, obtencin de toxinas, cultivo y aislamiento de bacterias para elaboracin de productos biolgicos y otros ms. La siembra se puede realizar en placas por estras o en tubos en medio solido (agar inclinado) o liquido (caldo nutriente).

III. MATERIALES Cultivos bacterianos Placas con Agar Tripticasa soja. Tubos con Caldo Nutriente Batera GRAM Batera de Ziehl-Neelsen. IV. PROCEDIMIENTO A. Tcnica GRAM a) Preparacin del frotis (1 gota de agua destilada + cultivo) b) Agregar la frotis Cristal Violeta y dejar 3` c) Agregar lugol y dejar 1` d) Lavar e) Decolorar con Alcohol-Acetona. f) Lavar. g) Agregar safranina y dejar 1` h) Lavar y secar i) Observar y dibujar Asas bacteriolgicas Lminas portaobjetos. Mechero Aceite de Inmersion, Microscopio

B. Tcnica de Ziehl-Neelsen a) Preparacin del frotis (1 gota de agua destilada + cultivo). b) Agregar al frotis Fucsina Fenicada y calentar hasta la emisin de vapores (repetir 3 veces) dejar 3 c) Lavar. d) Decolorar con Alcohol-Acido. e) Lavar. f) Agregar azul de metileno y dejar 1 g) Lavar y secar.

EVALUACIN DE LOS CULTIVOS POR TINCIN GRAM

1000 X

1000 X

Staphylococcus aureus Cocos GRAM positivos. Racimos irregulares. Inmviles. No esporulados.

E. coli Cocobacilos cortos GRAM negativos. No esporulados. Motil, se mueve por medio de flagelos peritricos. Puede presentar plsmido o sobrevivir sin l. Se encuentra en el intestino de hombre y por ende en las aguas negras .

C. Tcnica de Siembra a) Siembra por agotamiento y estriado en placas de agar. Con un asa estril coger una gota de cultivo y estriar agotando la muestra en un lado de la placa y luego estriar mas separada sobre toda la superficie del medio. Esterilizar nuevamente el asa bacteriolgica. Llevar a incubacin en condiciones aerbicas durante 24 horas. Describir las caractersticas de las colonias desarrollado en el medio.

PRCTICA N2

I. OBJETIVOS Conocer la morfologa y caractersticas de cultivo.. II. FUNDAMENTO TERICO Microorganismo ampliamente distribuido en el ambiente, coloniza al hombre y animales. El hombre es portador asintomtico entre un 20 y un 40% de los adultos sanos y forma parte de la flora normal de muchos sitios del organismo como piel y nasofaringe y tracto gastrointestinal, causando diversas manifestaciones clnicas.Al Gram se evidencia como una coccea Gram positiva de 1um dispuesta en racimos, aunque tambin se le puede evidenciar en cadenas cortas o diplococos. Es inmvil y no forma esporas. Es anaerobio facultativo y crece bien en agar sangre a 37C. Es habitual encontrar una colonia mediana, a veces B-hemoltica, de bordes definidos, blanca o en ocasiones dorada, conocindose tambin como el Staphylococcus dorado. Se identifica con las pruebas de la coagulosa, manitol y termonucleasa, para las cuales es positivo. Algunas pruebas se basan en su susceptibilidad a algunos virus bacterifagos especficos, mediante los cuales se puede clasificar. Es reconocido por su gran capacidad para producir productos extracelulares.Es uno de los microorganismos ms resistentes conocidos, incluso pese a que no forma esporas. Puede mantenerse viable por 6 14 semanas en pus y se necesitan 15 minutos de exposicin al alcohol de 70 para su eliminacin. La tintura de yodo es mucho ms activa y requiere solo 1 minuto. Factores de Virulencia Los factores de virulencia que presenta S. aureus, pueden ser productos extracelulares o propios de la clula bacteriana. Coagulasa. Es una enzima que le da la cualidad de coagular el plasma humano. Existe una coagulasa libre, que es una protena secretada con mltiples formas antignicas, la cual se puede evidenciar en un tubo de ensayo con plasma humano o de conejo, resultando un cogulo de fibrina. Aparte, existe una coagulasa unida a la pared bacteriana que acta como factor de la agregacin plaquetaria. Hemolisinas. Protenas, de las cuales alfa y delta son significativas para el hombre. Alfa es termolbil, pero produce lisis de eritrocitos y toxicidad para otras lneas celulares.

III. MATERIALES Cultivo de Stafilococcus. Muestra clnica. Placas con Agar Sangre Tubos con Agar Manitol Salado Tubos con Caldo Nutriente y Glucosado Plasma sanguneo Batera GRAM Laminas portaobjetos Mecheros Reactivo de catalasa Asas bacteriologicas Aceite de inmersin Microscopio

IV. PROCEDIMIENTO A. Estudio de las caractersticas morfolgicas. Coloracin GRAM del cultivo Observar y dibujar.

B. Estudio de las caractersticas culturales. a) Crecimiento en placas agar sangre. b) Produccin de hemolisina: medio de cultivo (Agar Sangre) c) Crecimiento en medio hipertnico: medio de cultivo agar manitol saladoRojo de Fenol 75% de NaCl. C. Estudio de las caractersticas fisiolgicas. 1) Prueba de la catalasa: Reactivo H2O 2) Prueba de fermentacin de la Glucosa Medio de cultivo: clado glucosado. Indicador: Rojo de Fenol

3) Prueba de Fermentacin del Manitol. Medio de cultivo:Agar Manitol Salado. 4) Prueba de Coagulasa Plasma sanguneo. Sepa de S. aureus. V. RESULTADOS

PRACTICA N3

I. OBJETIVOS Conocer la morfologa, las caractersticas culturales y fisiolgicas de Streptococcus pyogenes II. FUNDAMENTO TERICO Los aislamientos de S. Pyogenes son cocos esfricos de 0,5 a 1,0 mm que forman cadenas cortas en las muestras clnicas y cadenas ms largas cuando crecen en medio de cultivo. El crecimiento es ptimo en un medio de agar sangre enriquecido, pero se inhibe si el medio contiene una concentracin elevada de glucosa. Despus de 24 horas de incubacin se observan colonias blancas de 1 a 2 mm con grandes zonas de Beta hemlisis. Las cepas encapsuladas pueden presentar una apariencia mucoide en los medios recin preparados pero pueden estar arrugadas en los medios secos. Las colonias no encapsuladas son pequeas y brillantes.La estructura antignica de S. Pyogenes ha sido estudiada. El marco estructural bsico de la pared celular es la capa de peptidoglicanos, que tiene una composicin parecida a las de las bacterias grampositivas. Dentro de la pared celular estn los antgenos especficos de grupo y de tipo. III. MATERIALES Placas de Agar Sangre Tubos con Caldo glucosa y lactosa Tubos con Caldo Tripticasa Soya Perxido de Hidrgeno IV. PROCEDIMIENTO A. Estudio de Morfologa celular Realizar tincin GRAM del cultivo en Caldo Tripticasa Soya. Observar la morfologa tpica. Observar el crecimiento deStreptococcus pyogenesen placas de Agar Sangre. Descripcin de la colonia: tamao, forma, color, aspecto, bordes, reaccin hemoltica. Observar las caractersticas de crecimiento en tubos con Caldo Tripticasa Soya. Discos de bacitracina Batera GRAM Aceite de inmersin Microscopio

B. Estudios de las Caractersticas culturales

C. Estudio de las Caractersticas fisiolgicas a) Prueba de Catalasa En un porta a partir de una colonia de Agar Sangre.

b) Prueba de Fermentacin de Carbohidratos: glucosa y lactosa Observar la fermentacin de la glucosa y lactosa en medio lquido. c) Prueba de susceptibilidad de bacitracina Observar la susceptibilidad en placas de Agar Sangre. V. RESULTADOS

Prueba de Catalasa

Bacterias que viven en ambientes aerobios requieren de catalasa para convertir el perxido de hidrgeno en agua y oxgeno molecular.Es positiva la prueba cuando se ponen en contacto una bacteria con actividad catalasa con H2O2 3% y se producen burbujas de oxgeno.Se emplea para diferenciar el gnero Staphylococcus (catalasa positivo) del gnero Streptococcus (catalasa negativo).

PRUEBA DE FERMENTACIN DE CARBOHIDRATOS PRACTICA N4

I. OBJETIVOS Conocer las caractersticas morfolgicas culturales y fisiolgicas de Neisseria II. FUNDAMENTO TERICO El gnero Neisseria incluye bacterias con morfologa de diplococcos Gram-negativos con unareaccin positiva a las pruebas de oxidasa y catalasa. Conjuntamente con los gneros Moraxella (incluyendo Branhamella catarrhalis , actualmente Moraxella catarrhalis), yKingella conforman lafamilia Neisseriaceae. En el gneroNeisseria, el cual tiene la mayor importancia clnica dentro de la familiaNeisseriaceae, se incluyen las siguientes especies:N. gonorrhoeae, N. meningitidis, N. lactamica, N. cinrea, N. polysaccharea, N. subflava,N. sicca, N. mucosa.Los diplococos Gram negativos del gneroNeisseriase asemejan a granos de caf yalgunos producen cpsula. Las especies deNeisseriase caracterizan por ser demetabolismo aerobio y el crecimiento de las especies patgenas se ve favorecido medianteincubacin en una atmsfera altamente hmeda y enriquecida a5-8%de CO2.Su temperatura de crecimiento es ptima entre los 35-37oC y tienen requerimientosnutricionales complejos. Algunas especies son capaces de degradar unos pocoscarbohidratos, mientras que otras son completamente incapaces de hacerlo, mientras que lasespecies saprfitas, primarias especialmente, para el producen ser pigmentos sonN. carotenoides.Las especies patgenas humano

gonorrhoeaeYN.meningitidis.N. gonorrhoeaees nutricionalmente mucho ms exigente queN. meningitidis,de manera tal que puede crecer nicamente en medios enriquecidos como agar chocolate,pero no puede crecer en agar sangre, mientras queN. meningitidispuede crecer tanto enagar sangre como en agar chocolate. III. MATERIALES Placas de Agar Chocolate Tubos con Caldo glucosa, maltosa, sacarosa Tubos con Caldo Tripticasa Soya Perxido de Hidrgeno IV. PROCEDIMIENTO Reactivo de Oxidasa Batera GRAM Aceite de inmersin Microscopio

A. Estudio de Morfologa celular Realizar tincin GRAM del cultivo en Caldo Tripticasa Soya. Observar la morfologa tpica. Observar el crecimiento de Neisseriasp. en placas de Agar Chocolate. Descripcin de la colonia: tamao, forma, color, aspecto, bordes. Observar las caractersticas de crecimiento en tubos con Caldo Tripticasa Soya.

B. Estudios de las Caractersticas culturales

C. Estudio de las caractersticas fisiolgicas a) Prueba de Catalasa En un porta a partir de una colonia de Agar Chocolate. b) Prueba de fermentacin de carbohidratos: glucosa, maltosa, sacarosa. Observar la fermentacin en medio lquido. c) Prueba de Oxidasa Coger una colonia de Agar Chocolate y colocarla sobre el Reactivo de Oxidasa. V. RESULTADOS

PRACTICA N5

I. OBJETIVOS Sembrar, leer e interpretar las caractersticas morfolgicas culturales y fisiolgicas de Enterobacterias mediantealgunas pruebas bioqumicas tiles en la identificacin. II. FUNDAMENTO TERICO Las pruebas bioqumicas se basan en la determinacin de la presencia o ausencia de diferentes enzimas codificadas por el material gentico del cromosoma bacteriano. Estas enzimas (catalasas, coagulasas, decarboxilasas, desaminasas, ureasas, peroxidasas, etc) involucradas en el metabolismo bacteriano, pueden ser evidenciadas en medios de cultivo especiales que contienen los substratos (DNA, hidratos de carbono, aminocidos, etc) sobre los cuales ellas actan, junto con un sistema indicador que va a poner de manifiesto la degradacin del substrato o la presencia de un metabolito especfico (cido frmico, cido lctico, cido succnico, indol, etc).Las pruebas bioqumicas tambin evalan: la capacidad de reducir ciertos iones (ferroso a frrico), la presencia o ausencia de flagelos (prueba de movilidad), la produccin o no de hemolisinas, el requerimiento o no de algunos factores especiales (protenas sricas), la produccin o no de algunas toxinas con capacidad virulenta (toxina diftrica, toxina botulnica). III. MATERIALES Cultivos MacConkey Cultivosmicrobianos diferenciales TSI LIA Agar Citrato de Simons Caldo Peptona en medio microbianos en agar Caldo Rojo de Metilo KOVAC`S Rojo de Metilo

Reactivo de

Lminas Asas bacteriolgicas Mecheros Aceite de inmersin Microscopios

IV. PROCEDIMIENTO

A. EstudioMorfolgico Realizar un frotis de cada uno de los cultivos y teir con la tcnica de GRAM. Observar y establecer diferencias y semejanzas.

B. Estudios de las Caractersticas culturales Observar y evaluar el crecimiento de las cepas de Agar Mac Conkey. Dibujar y establecer diferencias.

C. Estudio de las Caractersticas fisiolgicas a) Prueba de fermentacin de carbohidratos Medio de cultivo: Agar Hierro con Triple Azcar (TSI Lac./Sac./Gluc.) Observar el crecimiento de cada uno de las cepas de estudio en Agar TSI. Explicar el fundamento de la prueba y establecer las diferencias. Dibujar. b) Prueba de Descarboxilacinde Lisina Medio de cultivo: Agar Hierro con Lisina Observar el crecimiento de cada uno de las cepas de estudio en medio LIA. Explicar el fundamento de la prueba y establecer las diferencias. Dibujar. c) Produccin de Indol Medio de cultivo: Caldo Peptonado Reactivo KOVAC`S Agregar al cultivo bacteriano unas gotas de reactivo de KOVAC`S. Observar la reaccin de cada uno de las cepas. Explicar el fundamento de la prueba y establecer las diferencias. Dibujar. d) Prueba del Rojo de Metilo Medio de cultivo: Caldo Rojo de Metilo VogesProskawer Reactivo Rojo de Metilo Agregar al cultivo bacteriano unas gotas del reactivo. Observar la reaccin de cada uno de las cepas. Explicar el fundamento de la prueba y establecer las diferencias. Dibujar. e) Prueba de citrato

Medio de cultivo: Agar Citrato de Simons Observar el crecimiento de cada uno de las cepas de estudio en Agar Citrato de Simons. Explicar el fundamento de la prueba y establecer las diferencias. Dibujar. V. RESULTADOS

PRACTICA N 7

I. OBJETIVOS II. MATERIALES Cultivos microbianos en agar Mac Conkey Cultivos TSI LIA Agar Citrato de Simons Caldo Peptona Caldo Rojo de Metilo microbianos en medio diferenciales Reactivo de KOVAC`S Rojo de Metilo

Lminas Asas bacteriolgicas Mecheros Aceite de inmersin Microscopios

III. PROCEDIMIENTO A. Estudio de Morfolgico Realizar un frotis de cada uno de los cultivos y teir con la tcnica de GRAM. Observar y establecer diferencias y semejanzas. Observar y evaluar el crecimiento de las cepas de Agar Mac Conkey. Dibujar y establecer diferencias.

B. Estudios de las Caractersticas culturales

C. Estudio de las Caractersticas fisiolgicas a) Prueba de fermentacin de carbohidratos Medio de cultivo: Agar Hierro con Triple Azcar (TSI Lac./Sac./Gluc.) Observar el crecimiento de cada uno de las cepas de estudio en Agar TSI. Explicar el fundamento de la prueba y establecer las diferencias. Dibujar. b) Prueba de Descarboxilacin de Lisina Medio de cultivo: Agar Hierro con Lisina Observar el crecimiento de cada uno de las cepas de estudio en medio LIA. Explicar el fundamento de la prueba y establecer las diferencias. Dibujar. c) Produccin de Indol

Medio de cultivo: Caldo Peptonado Reactivo KOVAC`S Agregar al cultivo bacteriano unas gotas de reactivo de KOVAC`S. Observar la reaccin de cada uno de las cepas. Explicar el fundamento de la prueba y establecer las diferencias. Dibujar. d) Prueba del Rojo de Metilo Medio de cultivo: Caldo Rojo de Metilo VogesProskawer Reactivo Rojo de Metilo Agregar al cultivo bacteriano unas gotas del reactivo. Observar la reaccin de cada uno de las cepas. Explicar el fundamento de la prueba y establecer las diferencias. Dibujar. e) Prueba de citrato Medio de cultivo: Agar Citrato de Simons Observar el crecimiento de cada uno de las cepas de estudio en Agar Citrato de Simons. Explicar el fundamento de la prueba y establecer las diferencias. Dibujar.

PRACTICA N 8

I. OBJETIVOS II. MATERIALES Cultivos microbianos en agar Mac Conkey Cultivos TSI LIA Agar Citrato de Simons Caldo Peptona Caldo Rojo de Metilo microbianos en medio diferenciales Reactivo de KOVAC`S Rojo de Metilo

Lminas Asas bacteriolgicas Mecheros Aceite de inmersin Microscopios

III. PROCEDIMIENTO A. Estudio de Morfolgico Realizar un frotis de cada uno de los cultivos y teir con la tcnica de GRAM. Observar y establecer diferencias y semejanzas. Observar y evaluar el crecimiento de las cepas de Agar Mac Conkey. Dibujar y establecer diferencias.

B. Estudios de las Caractersticas culturales

C. Estudio de las Caractersticas fisiolgicas a) Prueba de fermentacin de carbohidratos Medio de cultivo: Agar Hierro con Triple Azcar (TSI Lac./Sac./Gluc.) Observar el crecimiento de cada uno de las cepas de estudio en Agar TSI. Explicar el fundamento de la prueba y establecer las diferencias. Dibujar. b) Prueba de Descarboxilacin de Lisina Medio de cultivo: Agar Hierro con Lisina Observar el crecimiento de cada uno de las cepas de estudio en medio LIA. Explicar el fundamento de la prueba y establecer las diferencias. Dibujar.

c) Produccin de Indol Medio de cultivo: Caldo Peptonado Reactivo KOVAC`S Agregar al cultivo bacteriano unas gotas de reactivo de KOVAC`S. Observar la reaccin de cada uno de las cepas. Explicar el fundamento de la prueba y establecer las diferencias. Dibujar. d) Prueba del Rojo de Metilo Medio de cultivo: Caldo Rojo de Metilo VogesProskawer Reactivo Rojo de Metilo Agregar al cultivo bacteriano unas gotas del reactivo. Observar la reaccin de cada uno de las cepas. Explicar el fundamento de la prueba y establecer las diferencias. Dibujar. e) Prueba de citrato Medio de cultivo: Agar Citrato de Simons Observar el crecimiento de cada uno de las cepas de estudio en Agar Citrato de Simons. Explicar el fundamento de la prueba y establecer las diferencias. Dibujar.

PRACTICA N9

I. OBJETIVOS II. Conocer la morfologa y la disposicin de Bacillus anthracis. MARCO TEORICO:

Bacillus anthracis es inmvil y capsulada. La endospora caracterstica de Bacillus es de forma redondeada y de situacin central, sin deformar la clula. Cada clula mide entre 1 y 6 m. Las esporas son muy resistentes a la temperatura y a los desinfectantes qumicos, aunque se muestran muy sensibles a la penicilina. Es frecuente encontrar esporas en productos derivados de animales como lana o pienso. El proceso de esporulacin se realiza siempre fuera del animal infectado. Las esporas se transforman en la forma vegetativa en medios favorables como la sangre y otros tejidos biolgicos, ya sea animales o humanos, en particular ricos en aminocidos, nucletidos y en glucosa. El Bacillus anthracis es un organismo aerobio. Las esporas suelen encontrarse en suelos alcalinos, y se cree que la germinacin est relacionada con cambios bruscos de temperatura. Las bacterias penetran a travs de heridas (carbunco cutneo), va oral (carbunco gastrointestinal) o por inhalacin (carbunco inhalatorio), y ste ltimo es el ms grave. Una vez dentro del husped, las bacterias se difunden y se multiplican en los ganglios linfticos hasta que alcanzan el torrente sanguneo.

III.

MATERIAL Cultivos de Bacillus anthracis. Placas con agar nutriente. Tubos con caldo nutriente. Tubos con agar almidn. Batera gran. Laminas portaobjetos. Asas bacteriolgicas. Microscopios Aceite de inmersin. Reactivo: lugol

IV.

RESULTADOS: