OBJETIVOS: PONER LOS DE LOS FORMATOS

MARCO TEORICO
La cromatografa es uno de los principales mtodos para la separacin de especies qumicas
estrechamente relacionadas en mezclas complejas. La cromatografa es un mtodo fsico de
separacin basado en la distribucin de los componentes de una mezcla entre dos fases
inmiscibles, una fija o estacionaria y otra mvil.
En todas las separaciones cromatogrficas la muestra se disuelve en una fase mvil, que puede ser
un gas un lquido o un fluido supercrtico. Esta fase mvil se hace pasar a travs de una fase
estacionaria inmiscible, la cual se mantienen fija en una columna o sobre una superficie slida. Las
fases se eligen de tal forma que los componentes de la muestra se distribuyen de modo distinto
entre la fase mvil y la fase estacionaria. Aquellos componentes que son retenidos con ms fuerza
por la fase estacionaria se mueven lentamente con el flujo; por el contrario los componentes que
unen dbilmente a la fase estacionaria, se mueven con rapidez. Como consecuencia de la distinta
movilidad, los componentes de la muestra se separan en bandas discriminadas que pueden
analizarse cualitativa y/o cuantitativamente (1).
Se van a utilizar dos tecnicas cromatograficas en general , cromatografia en capa delgada y en
columna:
En la cromatografa en capa fina (CCF) la fase estacionaria consiste en una capa delgada de un
adsorbente (como por ejemplo gel de slice, almina o celulosa) depositada sobre un soporte
plano como una placa de vidrio, o una lmina de aluminio o de plstico.
La CCF es una tcnica analtica y tiene como objetivo el anlisis de una mezcla de componentes. El
proceso es similar a la cromatografa de papel con la ventaja de que se desarrolla ms
rpidamente, proporciona mejores separaciones y se puede elegir entre diferentes adsorbentes.
La CCF es una tcnica estndar en el laboratorio de qumica orgnica. Debido a su simplicidad y
velocidad, la CCF se utiliza a menudo para monitorizar las reacciones qumicas y tambin para el
anlisis cualitativo de los productos de una reaccin, puesto que permite conocer de manera
rpida y sencilla cuntos componentes hay en una mezcla.

Clculo del factor de retencin Rf
Cuando son visibles, se puede determinar para cada una de las manchas el valor de Rf (factor de
retencin), o la distancia que cada compuesto se desplaza en la placa. Cada compuesto tiene un Rf
caracterstico que depende del disolvente empleado y del tipo de placa de CCF utilizada, pero es
independiente del recorrido del disolvente. De esta manera se puede ayudar a identificar un
compuesto en una mezcla al comparar su Rf con el de un compuesto conocido (preferiblemente
cuando se hacen eluir en la misma placa de CCF.

Visualizacin de las manchas
Si los compuestos son coloreados se pueden observar las manchas a simple vista. Si no es as, hay
varios mtodos para visualizar las manchas correspondientes a cada componente de la mezcla.
1. Utilizar luz ultravioleta (UV254) para observar la placa. Normalmente se adiciona un
colorante fluorescente al adsorbente, de forma que la placa sea fluorescente en todas
partes excepto donde haya una mancha correspondiente a un compuesto orgnico.
2. Utilizar reveladores, por ejemplo, vapores de yodo que es un reactivo inespecfico.
3. Emplear reactivos especficos para desarrollar coloracin en las manchas. Esto se puede
hacer sumergiendo la placa de CCF en una disolucin que los contenga o en forma de
spray.
Por otra parte la cromatografia de columna es una tcnica de purificacin, puesto que permite
aislar los compuestos deseados de una mezcla. La cromatografa en columna utiliza una columna
de vidrio vertical que se llena con un soporte slido adsorbente (fase estacionaria: los ms
utilizados son gel de slice (SiO2) y almina (Al2O3)). La muestra que se quiere separar se deposita
en la parte superior de este soporte. El resto de la columna se llena con el eluyente (disolvente
que constituye la fase mvil) que, por efecto de la gravedad, hace mover la muestra a travs de la
columna. Se establece un equilibrio entre el soluto adsorbido en la fase estacionaria y el
disolvente eluyente que fluye por la columna. Debido a que cada uno de los componentes de una
mezcla establecer interacciones diferentes con la fase estacionaria y la mvil, sern
transportados a diferentes velocidades y se conseguir su separacin. As, de manera similar a
otros tipos de cromatografa, las diferencias en las velocidades de desplazamiento a travs del
medio slido se corresponden con diferencias en los tiempos de elucin por la parte inferior de la
columna para cada uno de los componentes de la muestra original, que se recogern en fracciones
diferentes.
La polaridad del eluyente afecta las velocidades relativas con las que los diferentes componentes
de la mezcla se mueven en la columna. Los disolventes polares compiten ms eficientemente con
las molculas polares de una mezcla por los lugares polares del adsorbente. Por lo tanto, un
disolvente polar desplazar las molculas, incluyendo las ms polares, rpidamente a travs de la
columna. Si el disolvente es muy polar la elucin ser muy rpida y generalmente habr poca
separacin de los componentes de la mezcla. Si por el contrario el disolvente es muy apolar, no
eluirn los compuestos de la columna. Por lo tanto, la eleccin del eluyente es crucial para el xito
de la cromatografa en columna. A menudo se utiliza un gradiente creciente de polaridad para la
elucin. La CCF se utiliza para determinar y elegir el sistema solvente adecuado para cada
separacin.
PROCEDIMIENTOS
a. Cromatografia capa delgada
Con la pipeta tomar una pequea cantidad de la solucion problema, y aplique una gota sobre la
capa de silicagel, a 1cm aproximadamente del borde de la placa y trace una marca con un lapiz en
el borde derecho para no perder el punto de aplicacin. Se haran tres aplicaciones ( gotas) de la
solucion, en orden creciente de concentracion en una sola capa. Despues introducir la placa en
una columna de elucion a la que previamente se le coloca un cuadro de papel de filtro para
aumentar la saturacion de los vapores del eluyente. Agregar 4 ml del disolvente y tapar. Una vez
la placa este dentro de la camara no debe ser movida.
Cuando el frente del eluyente este casi en la parte superior de la capa de siligel , abra el frasco
retire la placa y marque el frente del eluyente con un lapiz. Dejela secar al aire. Oara visualizar
revele en primer lugar con la lampara de luz uv.(3)
b. Cromatografia de columna:
Sujetar la columna con las pinzas, introducir hasta el fondo un pequeo pedazo de algodn con la
ayuda de una varilla de vidrio, aadir 10 ml del eluyente, presionar el algodn para que quede
bien ubicado y sin burbujas.
Preparar una suspensin con 10 g de gel de slice para columna en 40 ml del eluyente agitar
durante 5 minutos para eliminar las burbujas, verter esta solucin en la columna.
Aparte en un vaso de 100 ml disolver la muestra problema con la minima cantidad de eluyente ,
verter esta mezcla sobre la columna con el gel de slice.
CUESTIONARIO
1. Qu es la cromatografa?
La cromatografa es uno de los principales mtodos para la separacin de especies qumicas
estrechamente relacionadas en mezclas complejas. La cromatografa es un mtodo fsico de
separacin basado en la distribucin de los componentes de una mezcla entre dos fases
inmiscibles, una fija o estacionaria y otra mvil.
2. Cules son los principales soportes cromatograficos?
La funcin bsica del soporte es la de "mantener" (sostener, retener) la fase estacionaria.
Idealmente debera ser un material inerte que "mantiene" la fase estacionaria sobre su superficie
como una pelcula delgada. La mayora de los soportes cromatogrficos est hecha de diatomita.
Qumicamente es casi todo slice, con algunas impurezas. Tambin se conoce como Tierras
Diatomceas Kiselguhr (palabra alemana). Domina el campo de los soportes debido a su
estructura, superficie y disponibilidad.
3. Cules son los principales mtodos de separacin?
Existen muchas maneras de clasificar los mtodos cromatogrficos, segn su fase mvil se clasifica
en Cromatografa de gases que puede ser a travs de dos sistemas, gas- lquido y gas-slido y
Cromatografa lquida donde el eluente es un lquido y puede ser lquido-liquido, liquido-slido.
Por el mecanismo de retencin-separacin, es decir el tipo de equilibrio implicado en la
transferencia de los solutos entre las fases se encuentra la Cromatografa de reparto, de adsorcin
y de exclusin. Segn la forma de contacto entre las fases se denomina de columna o superficie
plana. Tambin se puede clasificar teniendo en cuenta la fase estacionaria, la dimensionalidad,
escala fsica y gradientes.
4. Qu es el Rf? Cmo se calcula? Cmo se observa si dos compuestos son iguales o no? El
valor del Rf depende del adsorbente utilizado? y del eluyente?
Cuando son visibles, se puede determinar para cada una de las manchas el valor de Rf (factor de
retencin), o la distancia que cada compuesto se desplaza en la placa. Cada compuesto tiene un Rf
caracterstico que depende del disolvente empleado y del tipo de placa de CCF utilizada, pero es
independiente del recorrido del disolvente. De esta manera se puede ayudar a identificar un
compuesto en una mezcla al comparar su Rf con el de un compuesto conocido (preferiblemente
cuando se hacen eluir en la misma placa de CCF.



5. Qu es la serie elutrpica. Indique cuales son los principales disolventes que se usan. Qu
caractersticas se buscan en la fase mvil que se emplea en la CCD?
Una serie eluotrpica es un listado de varios compuestos ordenados segn su poder de elucin
para un adsorbente dado. Tales series son tiles para determinar los disolventes necesarios en la
cromatografa de una mezcla de compuestos qumicos. Normalmente tales series comienzan con
disolventes no-polares, como el n-hexano, y finalizan en disolventes polares como metanol o agua.
El orden de disolventes en una serie eluotrpica depende a la vez de la fase estacionaria as como
del compuesto empleado para determinar el orden.







6. Qu es un revelador, como se dividen, Cules son los reveladores ms empleados en
CCD?
Los reveladores cromatogrficos se utilizan para que se d una reaccin qumica entre l y los
componentes separados, los reveladores ms usados son el revelador de yodo y el cido sulfrico.
7. Por qu la CCD es un criterio parcial y no total de identificacin?
Porque la CCD solo indica la cantidad de sustancias que se encuentran en la muestra inicial, o sus
impurezas, adems de indicarnos la polaridad de dichas sustancias junto con nuestro eluyente
demostraremos si se trata desustancias muy similares en cuanto a sus propiedades
8. Cmo influye en la separacin por CCD?
a) Aplicacin de solucin muy concentrada: La muestra se mostrara con mayor coloracin a la hora
de obtener los resultados de la cromatografa es por eso que debemos tener una muestra con una
concentracin media para que sea visible pero no demasiado como para que no podamos
distinguir sus fases.

b) Utilizar eluyente de alta polaridad: La polaridad del eluyente nos indica el desplazamiento que
nuestras muestras pueden alcanzar en la placa de estudio (slica gel) es por eso tambin que
debemos cuidar el eluyente para poder analizar correctamente nuestra muestra
c) Emplear gran cantidad de eluyente en la cmara de cromatografa: esto provocara que nuestra
muestra se diluya demasiado lo que generara un error considerando el tamao de nuestra placa
debemos considerar una cantidad moderada para evitar el desplazamiento innecesario de la
muestra.

9. . Qu tratamiento es necesario darle a la almina para reutilizarla? Qu solventes se
emplean con este soporte cromatogrfico?
La almina u xido de aluminio es un adsorbente ligeramente bsico debido a que en el proceso
de extraccin de la almina a partir de la bauxita quedan algunas molculas de hidrxido de
aluminio adheridas a la almina, dndole a sta un carcter bsico. No consigue un desarrollo tan
alto de la sustancia depositada como el gel de slice.
La almina puede ser tratada qumicamente para conseguir alminas cidas, bsicas y neutras.
Puede contener aglomerantes y/o indicadores ultravioletas. Es un adsorbente de carcter polar,
de tal forma que retendr con mayor avidez a los componentes polares.
10. Como se emplea la CCD a nivel preparativo

11. Cmo se aplica la muestra en la placa? Por qu se suele usar un papel filtro en la cmara
cromatogrfica?

La placa debe quedar libre de grumos y rugosidades, que afectaran al desarrollo del proceso
cromatogrfico. Para ello existen en el mercado extensores que se utilizan para crear de forma
mecnica placas homogneas del espesor deseado. Si no se disponer de extensor, el proceso a
seguir es el siguiente:
Mezclar en un Erlenmeyer el agua y el adsorbente.
Agitar enrgicamente.
Extender la papilla sobre el soporte de vidrio.
Hacer oscilar la papilla de un lado a otro.
Golpear con el dedo la parte inferior del soporte.




































BIBLIOGRAFIA
1. http://laboratoriotecnicasinstrumentales.es/cromatografa 11/12/2013 08:10 am
2. http://www.ub.edu/oblq/oblq%20castellano/cromatografia_tipus.html 11/12/2013
08:23 am
3. http://organica1.org/1311/1311_6.pdf 11/12/13 08:35 am
4.