Practica VII Cromatografia Flash
Practica VII Cromatografia Flash
Practica VII Cromatografia Flash
Presentado a:
Fernando Agudelo Aguirre
RESUMEN
En esta práctica de laboratorio se llevó a cabo una cromatografía de columna abierta flash, la cual es una técnica
que se utiliza para aislar o separar moléculas de mezclas complejas. Esta técnica utiliza gas comprimido, como
aire, nitrógeno, en algunos casos, una bomba en lugar de gas. Para el desarrollo de esta, se empleó una bomba de
inflar llantas de bicicleta, la cual permitió acelerar el procedimiento, moviendo el solvente a través de la columna.
El objetivo de esta práctica fue la separación de una mezcla de violeta cristal y naranja de metilo, utilizando para
este gel de sílice como adsorbente y etanol como eluyente. El primero en obtenerse fue el naranja de metilo, el
cual se recolectó en tres fracciones. Por último, con la ayuda de una mezcla de etanol/trietilamina en relación 9:1
se logró obtener el segundo colorante.
Palabras claves: Violeta cristal, naranja de metilo, etanol, trietilamina, sílice, adsorbente, eluyente.
INTRODUCCION.
Cromatografía en columna es una de las técnicas más útiles para purificar compuestos. Esta técnica utiliza una
fase estacionaria, que se embala en una columna, y una fase móvil que pasa a través de la columna. Esta técnica
aprovecha las diferencias de polaridad entre compuestos, permitiendo que las moléculas suelen estar
separado. las dos fases estacionarias más comunes para cromatografía en columna son gel de sílice (SiO 2) y
alúmina (Al2O3), con más común utiliza fases móviles siendo solventes orgánicos. El o los solventes para la fase
móvil dependen de la polaridad de las moléculas de ser purificada. Más compuestos polares requieren típicamente
más disolventes polares con el fin de facilitar el paso de las moléculas a través de la fase estacionaria. Una vez
finalizado el proceso de purificación del solvente puede eliminarse de las fracciones recogidas utilizando un
evaporador rotatorio para producir el material aislado.
La Cromatografía flash es una evolución de la cromatografía en columna que todavía es de uso general en los
laboratorios de síntesis orgánica. En general el compuesto de interés, separado por TLC, ha de tener un Rf de 0.15
a 0.20 con el soporte y fase móvil seleccionada. La fase móvil, en general, es binaria con uno de los dos solventes
de mayor polaridad para permitir ajustar fácilmente la polaridad media y optimizar la separación. En flash la fase
1
LABORATORIO VII FITOQUÍMICA II
estacionaria más usada es gel de sílice por lo que al aumentar la polaridad del solvente aumenta la velocidad de
elución de todos los componentes de la mezcla. Las fases móviles binarias de polaridad creciente más usuales son
cloruro de metileno/hexano, éter/hexano, hexano/etil acetato y cloruro de metileno/metanol. Estas fases móviles,
excepto hexano/etil acetato, obligan a trabajar en campana de seguridad. Una vez que la mezcla se ha introducido
en la parte superior de la columna, los compuestos con mayor solubilidad bajan por la columna a velocidades más
rápidas que aquellos con menor solubilidad. La gravedad facilita este movimiento, con compuestos más altamente
solubles, que se mueven hacia abajo más rápido que el flujo de la mezcla. Esto permite recolectar estos
compuestos altamente solubles.
2
LABORATORIO VII FITOQUÍMICA II
frutos de más de 60
plantas, en las que actúa como un
pesticida natural que paraliza y mata
ciertas clases de insecto
Los alcaloides son sin duda uno de
los principios activos de mayor
interés en el estudio de la acción
medicinal de las plantas. Se tratan de
sustancias de origen
predominantemente vegetal (solo
existen
unos pocos y raros alcaloides en
el reino animal) que tienen una
reacción básica o alcalina.
Presentan una gran cantidad de
hidrogeno y disfrutan de una marcada
5
LABORATORIO VII FITOQUÍMICA II
1
acción medicinal.
La cafeína es un compuesto alcaloide
(del grupo de las xantinas) que actúa
como estimulante en los
humanos. La cafeína es el mismo
compuesto químico que la guaranina
(llamada así por la guaraná),
la mateína (por el mate) y la teína
(por el té). Originalmente se pensaba
que estas sustancias tenían
diferencias químicas, pero después se
descubrió que son idénticas.
La cafeína se encuentra
principalmente en los frutos de la
planta de café, en la planta de té, en la
6
LABORATORIO VII FITOQUÍMICA II
7
LABORATORIO VII FITOQUÍMICA II
8
LABORATORIO VII FITOQUÍMICA II
PROCEDIMIENTO
9
LABORATORIO VII FITOQUÍMICA II
El etanol que se fue recogiendo de la columna se incorporó al vaso donde se preparó la suspensión adsorbente-
eluyente para así recuperar el gel de sílice que hubiera podido quedar y se transvasó todo de nuevo a la columna.
Seguidamente se dejó que el eluyente bajara hasta una altura sobre el adsorbente de aproximadamente 1-2 mm, se
cerró la llave de la columna, se quitó el embudo y con una pipeta se añadió cuidadosamente 15 gotas de la
solución preparada de cristal violeta y naranja de metilo (figura 4). luego se añadió lenta y cuidadosamente el
eluyente (etanol) para no distorsionar el frente de la columna. Por último, se abrió la llave y se continuó
añadiendo etanol para desarrollar la columna hasta que se recoja el primer colorante, con la ayuda de mangueras y
de la bomba de aire, se agilizó el proceso, pero estando muy pendientes de no dejar secar el eluyente (figura 5).
Después se utilizó una mezcla de disolventes: etanol/trietilamina en proporción 9:1 como eluyente para el
segundo colorante (violeta cristal).
11
LABORATORIO VII FITOQUÍMICA II
Fig. 2 Llenado de la columna con el eluyente Fig.3 llenado de la columna con gel de sílice
Fig.4 Adición de solución naranja de metilo y violeta cristal. Fig.5 separación con ayuda de mangueras y bomba de aire.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
de cristal violeta (figura 6 y 7), esto hace que se retenga mediante la polaridad de los compuestos orgánicos. En
este laboratorio se debe tener en cuenta que uno de los principios más importantes y evaluados es la velocidad de
arrastre de cada componente (naranja de metilo y cristal violeta) dependiendo de su grado de absorción en la fase
estacionaria y su afinidad por la fase móvil.
Por medio de una bomba de aire, se logró dar una mayor presión a la columna, acelerando el flujo del eluyente y
haciendo rápido su paso por la fase estacionaria (gel de sílice). De lo anterior se deriva el nombre de
cromatografía flash, porque se logra separar rápidamente la solución de cristal violeta y naranja de metilo. Por
último, cabe resaltar que durante todo el proceso no se dejó secar la columna y se vertía constantemente el etanol
cuando este se iba acabando, para evitar el fraccionamiento en la columna y posibles daños en el proceso, así
mismo es de gran importancia a la hora de llenar la columna que esta no sea en seco, primeramente, se debe
impregnar con el eluyente para evitar burbujas y obtener una buena cromatografía.
Como comentario adicional se pudo evidenciar la separación de los dos compuestos en la columna debido a la
coloración que los caracterizan, pero si necesitamos hacer la separación de una mezcla de componentes con igual
coloración o traslucidas, para esto se empleara una lampara de luz ultravioleta y así poder evidenciar la separación
de los componentes de la misma.
CONCLUSIONES
16
LABORATORIO VII FITOQUÍMICA II
CUESTIONARIO
1. ¿Qué debe hacerse para encontrar el eluyente adecuado para una sustancia en una cromatografía en
columna?
Si la sustancia es polar, el eluyente debe de ser un eluyente polar, pero si no es polar, se debe de utilizar un
eluyente no polar, con el fin de que se alcance la máxima solubilidad y que las fuerzas intermoleculares
ayuden a que el soluto pase a través de la columna. Si no se conoce la polaridad de las sustancias a separar, se
debe hacer TLC (cromatografía en capa delgada) y teniendo en cuenta el factor de retraso que debe estar entre
el 0,2 y 0,3 se dice que se ha escogido un buen solvente y se puede proceder a realizar la cromatografía en
columna.
La cromatografía de adsorción es una técnica que esta particularmente bien adaptada para la separación de
polaridad baja y media, se utiliza muy comúnmente para:
Determinación del porcentaje de formación de una molécula de síntesis, en una planta de síntesis
orgánica.
Control de calidad de pureza de solventes, como alcohol etílico anhidro, tolueno, xileno, benceno, que
entran como materias primas a una planta.
Control de calidad de la pureza de materias primas entrantes a bodega de una fábrica de productos
medicinales, tales como: alcohol etílico al 95%, propilenglicol, glicerina, alcohol isopropílico, o-
toluidina, paracetamol, butanol, octanol, benzaldehído, acetato de etilo, éter di etílico, alcanfor, y muchos
otros.
En fábricas de adhesivos, pegamentos, pinturas, para controlar que el producto terminado lleve las
cantidades indicadas de solventes, humectantes, colorantes, gomas, resinas, poliuretanos, secantes,
rellenantes, esponjantes, suspensores, emulsificantes.
En fábricas de alimentos, para control de calidad de producto terminado y materias primas, tales como
proteínas, aromatizantes, determinación de colorantes.
En la industria petrolera, es un método indispensable, para analizar las composiciones de casi todos los
productos que van saliendo, del cracking, los tipos de gasolinas, los compuestos orgánicos destinados a
síntesis.
17
LABORATORIO VII FITOQUÍMICA II
3. Escriba una lista de eluyentes utilizados en cromatografía en columna en orden de polaridad decreciente
(anote su bibliografía).
La fase móvil consiste en un disolvente o mezcla de disolventes, seleccionado en base a su polaridad con el
fin de optimizar la separación de los componentes de la muestra en la columna. De forma orientativa se puede
establecer el siguiente orden de polaridades para los disolventes usados con mayor asiduidad:
Agua
Metanol
Acetonitrilo
Acetona
Etanol
MEK
Isopropanol
Acetato de etilo
THF
Diclorometano
Éter
Tolueno
Hexano
(Eduardo Primo Yufera. Química orgánica básica y aplicada: De la molécula a la industria. Volumen 2. Pag
1228)
Éter de petróleo < tetracloruro de carbono < ciclohexano < éter etílico < acetona < benceno < acetato de etilo
< cloroformo < etanol < metanol < agua < piridina < ácido acético
REFERENCIAS
Chicharro, M. 2005. Cromatografía, principios y aplicaciones. Análisis Químico.
http://www.uam.es/personal_pdi/ciencias/mo nchi/alim/traba3.pdf
18
LABORATORIO VII FITOQUÍMICA II
Eduardo Primo Yufera. Química orgánica básica y aplicada: De la molécula a la industria. Volumen 2.
Pag 1228
19