Pruebas Bioquimicas Cuadro

PRUEBA
DESAMINACIN Y
DESCARBOXILACIN
DE AMINOCIDOS EN
MEDIO LIA.
PRUEBA DE VOGESPROSKAUER
FUNDAMENTO
MEDIO
INOCULACION
En
este
medio
se
determina
la
descarboxilacin de la Agar de hierro y lisina (LIA)
lisina que se lleva a cabo
en anaerobiosis y la
desaminacin de la lisina
que se lleva acabo en
aerobiosis.
La reaccin de VogesProskauer se basa en la

conversin
del
acetilmetilcarbinol
(acetona) en diacetilo por
accin del KOH al 40 % y
el oxgeno atmosfrico, la
acetona se convierte en
diacetilo el - naftol acta
como catalizador para
revelar un complejo de
color rojo.
Caldo Voges Proskauer
Inocular
por
picadura y estra
un tubo con medio
LIA a partir de la
suspensin.
Incubar el tubo a
35 C durante 24 h
RESULTADOS
Desaminacin
de
aminocidos
Positiva: La superficie del
tubo es de color rojo vino.
Negativa: La superficie no
tiene cambios.
Descarboxilacin
de
aminocidos
Positiva: El fondo del tubo
es de color prpura.
Negativa: El fondo del
tubo es de color amarillo
Prueba positiva: Color
rojo ladrillo en la superficie
del medio de cultivo
(Produccin de acetoina)
Inocular un tubo
que contenga caldo
Voges
Proskauer
con 0.1 ml de la
suspensin
Incubar el tubo a
35C durante 24 h.
*Despus
de
incubar, Prueba negativa: No hay
agregar
6
gotas
de cambio en el color del
solucin de alfa-naftol y 2 medio.
gotas de solucin de KOH,
en ese orden estricto y
agitar suavemente, dejar
en reposo 10-15 minutos y
observar los cambios en el
medio.
Determinar la capacidad e
PRUEBA DEL
CIANURO DE POTASIO un organismo de vivir y
reproducirse en un medio
que contenga cianuro de
potasio.
Caldo cianuro de potasio

(KCN)
Inocular por asada

un tubo con caldo
cianuro de potasio
(KCN) a partir de la
suspensin.
Incubar a 35 C
durante 24 a 48 h
Positiva: Presencia de
crecimiento (turbidez)
Negativa: Ausencia de
crecimiento (medio claro)
REDUCCIN DE
NITRATOS A NITRITOS
HIDRLISIS DE
ALMIDN
Capacidad
de
un
organismo para reducir
nitratos a nitritos es una
caracterstica importante
utilizada para la
identificacin
y
diferenciacin de muchas
especies,
todas
las
enterobacterias,
excepto
ciertos biotipos de
Enterobacter agglomerans
reducen los nitratos.
Los
organismos
que
reducen nitratos tienen la
capacidad
de
obtener
oxgeno de los nitratos
para formar nitritos y
otros
productos
de
reduccin.
Determinar la capacidad
de un microorganismo
para secretar la enzima
amilasa
para
la
degradacin de almidn
en
molculas
ms
pequeas
para
ser
utilizadas
en
su
metabolismo.
Caldo nitrato
Agar almidn.
Inocular 0.1 ml de
la suspensin a un
tubo con caldo
nitrato
Despus
de
incubar, determinar
la presencia de
nitritos, aadiendo
al tubo 3 gotas de
alfa-naftilamina y 3
gotas de cido
sulfanlico.
Positiva: Aparicin de un
color rojo en 30 s
Negativa: Sin cambio de
color.
En una caja con Positivo.- Si se forma un

agar almidn se halo claro alrededor de la
procede a inocular estra.
por estras simple
la placa
Incubar la caja a Negativo.- No se forma un

35C durante 24 h. halo claro alrededor de la
*Despus de la incubacin estra.
aadir unas gotas de lugol
cubriendo la superficie de
la placa.
Determinar la movilidad,
produccin de indol y de
sulfuro de hidrgeno en un
mismo tubo.
SIM
SIM (MOVILIDAD,
PRODUCCIN DE CIDO
SULFHDRICO)
UTILIZACIN DEL
CITRATO
Determinar
si
un
microorganismo es capaz
de utilizar citrato como
nica fuente de carbono y
compuestos amoniacales
como nica fuente de
nitrgeno
en
su
metabolismo, provocando
una
alcalinizacin
del
medio.
Citrato de Simmons
Siembra por picadura

35C
24
horas
Despus aadir 3
gotas del reactivo
de Kovacs
Siembra por estra abierta

en forma de S en un tubo
35 C
24 horas.
Produccin
de
H2S:
Presencia
de
un
precipitado color negro
alrededor de la picadura o
en
todo
el
tubo
Produccin de Indol:
Presencia de un anillo de
color rojo en la superficie al
adicionarle el reactivo de
Kovacs.
Movilidad:
Turbidez
alrededor de la picadura.
Positivo: Desarrollo
abundante con o sin
alcalinizacin (color azul).
Negativa:
No
hay
desarrollo (medio de color
verde).
Capacidad
de
un
microorganismo realizar la
lisis de los glbulos rojos
(hemlisis) producida por
la accin de una enzima
llamada hemolisina
Agar Sangre
HEMLISIS
COAGULASA
Permite
diferenciar
Staphylococcus
aureus
(coagulasa positivo) del
resto de especies de
Staphylococcus
(coagulasas negativos). La
tcnica en tubo detecta
coagulasa libre y ligada.
Plasma citratado de conejo
Por
inoculacin
directa del material
en estudio, estriar
sobre la superficie
del
medio
de
cultivo.
Bacterias de fcil
crecimiento:
en
aerobiosis, a 35-37
C hasta 48 horas.
Bacterias exigentes
en
sus
requerimientos
nutricionales:
en
atmsfera con 5 %
de CO2, a 35-37 C
durante
24-48
horas
Se
emulsionan
varias colonias en
un tubo con 0,5ml
de plasma citratado
de
conejo.
Se
incuba a 35 y se
chequea
la
formacin
del
cogulo a las 4
horas.
Hemlisis alfa: es una

hemlisis parcial y la zona
de crecimiento aparece
rodeada de un halo de
color
verdoso.
Hemlisis beta: en este
caso la hemlisis es total y
el halo que rodea a las
colonias es totalmente
transparente.
Hemlisis gamma (no
hemlisis): el
microorganismo
en
cuestin no es capaz de
realizar la hemlisis y por
tanto no existe halo
alrededor de la colonia.
Positivo: formacin de un
coagulo
Negativo: sin cambios
Prueba
Fundamento
medios
Forma de
Resultados
inoculacin
Produccin de
urea
La urea es una
diamida del cido
carbnico y esta es
Caldo urea
fcilmente
hidrolizada con la
(es un medio diferencial)
liberacin
de
amonaco y dixido
de
carbono.
La
enzima ureasa que
posee
un
microorganismo
puede hidrolizar a la
urea
que
esta
presente en el medio
de
cultivo
de
acuerdo
con
la
siguiente reaccin:
El
amonaco
reaccionan
en
solucin para formar
carbonato
de
amonio,
producindose una
alcalinizacin y un
aumento del pH del
medio
Inocular un tubo con

caldo urea con una
asada
de
la
suspensin
microbiana, si se
utiliza agar urea se
estra la superficie
del medio se incuba
a 35 C durante 24
h.
Positiva: Color rosa

fucsia en el medio.
Negativa: Sin cambio de
color en el medio.
Prueba
Fundamento
medios
Forma de
Resultados
inoculacin
TSI
(fermentacin
glucosa,
produccin
cido
sulfhdrico
produccin
de
de
de
y
gas)
En el medio de cultivo, el extracto de

carne y la pluripeptona, aportan los
nutrientes adecuados para el
desarrollo bacteriano. La lactosa,
sacarosa y glucosa son los hidratos
de
carbono
fermentables.
El
tiosulfato de sodio es el sustrato
necesario para la produccin de
cido sulfhdrico, el sulfato de hierro
y amonio, es la fuente de iones
Fe3+ , los cuales se combinan con el
cido sulfhdrico y producen sulfuro
de hierro, de color negro. El rojo de
fenol es el indicador de pH, y el
cloruro de sodio mantiene el balance
osmtico.
Por fermentacin de azcares, se
producen cidos, que se detectan
por medio del indicador rojo de
fenol,el cual vira al color amarillo en
medio cido. El tiosulfato de sodio
se reduce a sulfuro de hidrgeno el
que reacciona luego con una sal de
Agar TSI
(es un medio diferencial)
A partir de un cultivo
puro, sembrar en
TSI, picando el fondo
y extendiendo sobre
la
superficie
del
medio.
Se incuba a 35-37C
durante 24 horas, en
aerobiosis.
1-Pico alcalino/fondo cido (pico rojo/fondo

amarillo): el microorganismo solamente
fermenta la glucosa.
2-Pico cido/fondo cido (pico amarillo/fondo

amarillo): el microorganismo fermenta
glucosa, lactosa y/o sacarosa.
3-Pico alcalino/fondo alcalino (pico rojo/fondo
rojo): el microorganismo es no fermentador
de azcares.
4-La presencia de burbujas, o ruptura del
medio de cultivo, indica que el
microorganismo produce gas.
hierro proporcionando el tpico

sulfuro de hierro de color negro.
Prueba
Caldo nutritivo
Fundamento
Medio no selectivo,
contiene
pluripeptona y
extracto de carne
que constituyen la
fuente de carbono y
nitrgeno necesarias
para el adecuado
desarrollo
bacteriano.
Puede ser utilizado
adems, como
5-El ennegrecimiento del medio indica que el

microorganismo produce cido sulfhdrico.
Medio
Caldo nutritivo
Agar nutritivo
Inoculacin
Se inocula directa
de la muestra ya sea
estra simple o
cruzada a segn sea
el anlisis.
Se incuba en
aerobiosis, a 35-37
C durante 24 horas.
Resultados
Examinar los tubos para evaluar el
crecimiento por turbiedad.
preenriquecimiento
en la bsqueda de
Salmonella spp. a
partir de alimentos,
ya que permite
recuperar clulas
daadas, diluir
metabolitos txicos y
sustancias
inhibitorias.
Prueba
Prueba de
Oxidasa
Fundamento
Los discos contienen
oxalato de dimetilpara-fenilendiamina,
el cual es el sustrato
de la enzima oxidasa.
Medio
Agar
soya
Inoculacion
Tripticasa
En tubo a partir de un
cultivo puro, hacer
una
suspensin
densa en 0.2 ml de
agua
destilada
Resultados
Positivo: observacin de color rojofucsia en el disco y/o solucin.
Los microorganismos
que
producen
la
enzima oxidasa se
evidencian porque en
presencia de oxgeno
atmosfrico
y
citocromo c, se oxida
el sustrato presente
en los discos a un
compuesto de color
rojo-fucsia.
estril, y agregar un
disco
de
OX.
En
portaobjetos:
humedecer el disco
de OX con una gota
de agua y luego
colocar sobre l la
colonia en estudio.
Generalmente dentro
del minuto, y a
temperatura
ambiente se detectan
los
resultados
positivos.
Una
reaccin
lenta,
pasado
los
2
minutos,
debe
considerarse
negativa.
Negativo: el disco permanece sin

cambio de color.

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PRUEBA

La reaccin de VogesProskauer se basa en la

Caldo Voges Proskauer

Caldo cianuro de potasio

Inocular por asada

En una caja con Positivo.- Si se forma un

Incubar la caja a Negativo.- No se forma un

Siembra por picadura

Siembra por estra abierta

Plasma citratado de conejo

Hemlisis alfa: es una

Inocular un tubo con

Positiva: Color rosa

En el medio de cultivo, el extracto de

1-Pico alcalino/fondo cido (pico rojo/fondo

2-Pico cido/fondo cido (pico amarillo/fondo

hierro proporcionando el tpico

5-El ennegrecimiento del medio indica que el

Negativo: el disco permanece sin

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