PRACTICA 5 Metabolismo Bacteriano
PRACTICA 5 Metabolismo Bacteriano
PRACTICA 5 Metabolismo Bacteriano
I. INTRODUCCION:
El Metabolismo bacteriano consiste de un gran nmero de reacciones qumicas destinadas a
transformar las molculas nutritivas en energa y componentes estructurales necesarios para
los microorganismos, dichas reacciones qumicas son catalizadas por enzimas.
Las necesidades mnimas para el crecimiento son una fuente de carbono, nitrgeno, una
fuente de energa, agua y diversos iones. Aunque el oxgeno es esencial para unas bacterias,
para otras constituye una sustancia txica. Este tipo de bacterias son conocidas como
anaerobias estrictas. En cambio otras bacterias como Mycobacterium tuberculosis
requieren la presencia de oxgeno molecular para su crecimiento y en consecuencia se
denominan Aerobias estrictas y otras pueden crecer tanto en presencia como en ausencia de
oxgenos a estas se les llama anaerobias facultativas. Aunque algunas bacterias obtienen la
energa de compuestos qumicos otros lo toman directamente de la energa luminosa
II. COMPETENCIAS:
Al finalizar la sgte. Practica el alumno ser capaz de:
- Realizar pruebas bioqumicas que son de utilidad general para la identificacin de bacterias.
- Realizar las lecturas e interpretaciones correspondientes de las pruebas bioqumicas
efectuadas
IV. PROCEDIMIENTO
A. DEGRADACIN DE GLUCOSA, LACTOSA, SACAROSA, PRODUCCIN DE GAS E H2S en
medio Agar TSI: (Triple Azcar,
Hierro)
Medio empleado para la diferenciacin de enterobacterias en base a la fermentacin de los
hidratos de carbono
glucosa, sacarosa y lactosa y a la produccin de cido sulfdrico
Muestra: Cultivos Bacterianos
Medio de Cultivo: TSI
Procedimiento:
Rotular los tubos con medio de TSI
Coger una asa de siembra en punta y flamear al rojo vivo deja enfriar
Coger un cultivo bacteriano y sembrar por picadura en el fondo y estra en la superficie del
medio TSI
flameando la boca del tubo
Incubar a 37C por 24 hrs.
Realizar la lectura
Lectura e interpretacin del TSI:
a) La degradacin de los azcares con formacin de cido (acidez positiva) se manifiesta por
un cambio de color
del indicador Rojo de fenol que hace virar
- el color del medio de anaranjado rojizo a amarillo, en caso de acidez y se simboliza
con la letra A,
- o por un viraje del medio de anaranjado rojizo a rojo intenso en caso de alcalinizacin
(alcalinidad positiva) y se simboliza con la letra K.
b) La presencia de gas se manifiesta por el resquebrajamiento del medio (Gas positivo). Se
simboliza segn su
intensidad de 1+ a 3+.
c) Produccin de H2S: El tiosulfato es reducido por algunos grmenes a cido sulfhidrco, el
cual reacciona con la
sal frrica produciendo sulfuro de hierro que se manifiesta por un precipitado negro
en el medio (H2S positivo).
Se simboliza de acuerdo a su intensidad de 1+ a 3+.
d) Lectura:
- Pico alcalino/fondo alcalino (NN): No hay fermentacin de azcares. Caracterstica de bacterias
no fermentadoras.
- Pico alcalino/fondo Amarillo (K/A) : Glucosa fermentada,
Ni lactosa ni sacarosa fermentadas.
- Pico alcalino/fondo Amarillo y negro (K/A/H 2S +): Glucosa fermentada,
Ni lactosa, ni sacarosa fermentadas,
produccin de cido sulfhdrico.
- Pico Amarillo/fondo Amarillo ( A/A/H2S - ): Glucosa y lactosa y/o sacarosa fermentadas.
H2S : Negativo.
F. DEGRADACION DE LA UREA
Evala en las bacterias la capacidad de utilizar la urea como fuente de nitrgeno, mediante
la enzima ureasa, que degrada la urea en dixido de carbono y amoniaco. El amoniaco acta
como fuente de nitrgeno y capta protones, transformndose en amonio y alcalinizando el
medio. Contiene rojo fenol como indicador de pH, el cual vira el medio a fucsia cuando el pH
se torna alcalino.
Finalidad: Determinar la hidrlisis de la Urea por bacterias.
Medio de cultivo: Agar Urea de Christensen
Procedimiento:
Rotular los tubos con medio Urea
Coger una asa de siembra en punta y flamear al rojo vivo deja enfriar
Coger un cultivo bacteriano sembrar por estra en la superficie del medio
Incubar a 37C por 24 hrs.
Realizar la lectura
Lectura e Interpretacin de los resultados.
La positividad viene dada por una coloracin rosada o fucsia en el medio. Ejm Proteus
sp es positivo para la prueba
G. AGAR Mc CONKEY :
El Agar Mc Conkey es un medio Slido, Diferencial y Selectivo para el aislamiento de
Enterobacterias
Permite diferenciar bacterias que fermentan o no, la lactosa en muestras clnicas, de agua
y alimentos.
Las peptonas, aportan los nutrientes necesarios para el desarrollo bacteriano,
Las sales biliares y el cristal violeta inhiben el desarrollo de gran parte de la flora Gram
positiva.
Procedimiento:
Rotular las placas
Coger una asa de siembra en aro y flamear al rojo vivo deja enfriar
Coger con el asa un cultivo bacteriano sembrar por agotamiento en la superficie del
medio
Incubar a 37C por 24 hrs.
Realizar la lectura
Fundamento:
Por fermentacin de la lactosa, se producir cido lo que disminuye el pH alrededor de la
colonia. Esto
produce un viraje del color del indicador de pH (rojo neutro), y darn al medio un
aspecto rosceo con un
halo turbio debido al descenso del pH provocados por los cidos biliares en las
colonias. Si por el contrario
son Lactosa (-) el medio se alcalinizar por el uso de la peptona y se tornar amarillo
o incoloro
Lectura e Interpretacin
Las colonias lactosa positivas son rojas o rosadas con un halo turbio debido al descenso
de pH
Las colonias Lactosa negativas son incoloras
H. Agar XLD :
El Agar XLD (Xilosa Lisina Desoxicolato) es un medio selectivo y de diferenciacin,
utilizado para el aislamiento y diferenciacin de enterobacterias patgenas especialmente
del gnero Salmonella, Shigella y Providencia.
V. RESULTADOS:
El alumno deber dibujar cada uno de los medios utilizados del color de inicio y las
variaciones de color que stos
tuvieron con su debido fundamento, ordenadamente.
VI. CUESTIONARIO:
Por qu es necesario ajustar el pH del medio?
Para qu se aade el agar-agar? Qu cualidades tiene esta sustancia?
Medio
Color
de Prueba Indicador Color final Resultado
inicial
cultivo
Negruzco H2S (+)
Tiosulfato de sodio y Rojo
H2S Amarillo H2S (-)
sulfato ferroso naranja
Glucosa, Amarillo Acido: A
Rojo
TSI Sacarosa y Rojo de fenol rojo Alcalino: K
naranja
Lactosa,
burbujas de aire o Gas (burbujas) Gas (+)
Gas resquebrajamiento No Gas Gas (-)
del medio
Violeta intenso Decarboxilacin
Decarboxilas Prpura de
LIA violeta Amarillo (+)
a Bromocresol
Decarboxilacin
(-)
LIA Deaminasa Prpura de violeta Rojizo Deaminacin (+)
Bromocresol