Pentilen Tetraazol
Pentilen Tetraazol
Pentilen Tetraazol
central
del extracto etanlico
y fracciones de Hygrophila tyttha
Leonard
Sandra Y. Ariza, Javier Rincn y Mario F. Guerrero 1
1
RESUMEN
Se evalu en ratones albinos ICR el perfil de actividad que sobre el
sistema nervioso central ejercen el extracto etanlico y las
fracciones acuosa, clorofrmica, metanlica y hexnica obtenidas de
Hygrophila tyttha (Acanthaceae. NV: amansamachos). Para tal fin se
utilizaron pruebas destinadas a detectar posible actividad ansioltica
(laberinto en cruz elevado), antidepresiva (nado forzado),
anticonvulsivante (pentilentetrazol, electrochoque) e hipntica
(potenciacin de sueo inducido por pentobarbital). Se efectu un
estudio fitoqumico bioguiado para determinar las fracciones con
mayor actividad. La fraccin clorofrmica, a juzgar por los altos
ndices de proteccin obtenidos en el modelo del electroshock (90%)
y el patrn de respuesta mostrado en la prueba del laberinto en cruz
elevado (comparable a diazepam), posiblemente aglutina la mayor
proporcin de metabolitos activos. Segn el anlisis fitoqumico,
stos pueden corresponder a compuestos tipo cumarinas,
flavonoides, esteroides y/o terpenos y saponinas. A la luz de estos
resultados se encuentra justificacin al uso etnobotnico de esta
especie y se destaca el potencial de Hygrophila tyttha como fuente
natural de posibles compuestos con aplicacin teraputica en
trastornos de ansiedad y convulsivos.
Palabras clave: acanthaceae, Hygrophila tyttha, amansamachos,
ansioltico, anticonvulsivante.
SUMMARY
EFFECTS
LEONARD
ON THE
CNS
The central nervous effects elicited by the ethanolic extract and the
aqueous, chloroformic, methanolic and hexanic fractions obtained
from Hygrophila tyttha were evaluated in ICR mice. To achieve this
objective, tests to prove anxiolytic (elevated plus-maze),
antidepressant
(forced
swimming),
anticonvulsant
(pentylenetetrazol, electroshock), and hypnotic (pentobarbital
induced sleep) activity were applied. A bioguided phytochemical
study was carried out to determine the most active fractions.
According to the high protection scores obtained by the electroshock
model (90%) and the activity registered by the elevated plus maze
(comparable to diazepam), the chloroformic fraction possibly
contains the main active compounds, such as coumarins, flavonoids,
steroids and/or terpenoids and saponins, according to the
phytochemical analyses. These results support the ethnobotanical
use and the therapeutic potential of Hygrophila tyttha as a natural
source of therapeutic compounds for the treatment of central
disorders like anxiety and seizures.
Key words: Acanthaceae,
anxiolytic, anticonvulsant.
Hygrophila
tyttha,
amansamachos,
INTRODUCCIN
Segn la Organizacin Mundial de la Salud el 80% de la poblacin
mundial depende en forma directa o indirecta de las plantas
medicinales para su atencin primaria en salud (1). La idea
generalizada de una menor incidencia de efectos secundarios, el
costo accesible y una aparente efectividad en los tratamientos
son, entre otros, los factores que han influido en la creciente
demanda de productos naturales con fines medicinales. Por
encima de estas consideraciones, el hecho de constituir una
METODOLOGA
Preparacin del extracto
Diez kilos de la parte area de la planta (tallos y hojas) se
recolectaron en el municipio de Palmira (Valle). Un ejemplar se
deposit en el Herbario Nacional Colombiano de la Universidad
Nacional, bajo el cdigo COL 511937, para su respectiva
Animales de experimentacin
Se emplearon ratones machos ICR de 25 a 35 g de peso, criados y
mantenidos en el Bioterio del Departamento de Farmacia, con
ciclos de 12h luz/12h oscuridad, temperatura 211 C, agua y
comida a libre demanda.
Condiciones de experimentacin
En cada una de las pruebas se utilizaron 10 ratones por cada
tratamiento. El extracto y/o las fracciones se administraron por va
oral despus de 6 horas de ayuno, y una hora despus de
administrados los tratamientos se procedi a la realizacin del
ensayo. Una vez finalizadas las pruebas, los ratones se
sacrificaron por dislocacin cervical. El vehculo utilizado para
dispersar el extracto y las fracciones as como para la
administracin de los animales del grupo control fue la mezcla de:
glicerina 10%, propilenglicol-400 3%, polisorbato-80 2% y agua
destilada 85%, con un volumen de 0.01 mL/g de peso.
Test de Irwin: con el fin de determinar el perfil neurofarmacolgico
del extracto se realiz el Test de Irwin para lo cual se evaluaron 9
dosis (7, 15, 30, 60, 125, 250, 500, 1.000 y 2.000 mg/Kg)
utilizando 3 animales por cada dosis. El comportamiento de los
animales se observ a la , 1, 2, 6 y 24 horas posaplicacin.
Prueba del suelo agujereado: este ensayo se utiliz para clasificar
los animales de acuerdo con su grado basal de ansiedad como
paso previo para la aplicacin de la prueba del laberinto en cruz
elevado. El mtodo fue introducido en 1962 por Boisser y Simn y
est diseado para medir la respuesta de un animal a un
ambiente no familiar. Se utiliza una caja de acrlico transparente
(50 x 50 x 30 cm) a 10 cm de altura, con 9 orificios de 2 cm de
dimetro ubicados de manera equidistante. El ensayo se realiza
colocando el animal en el centro de la plataforma y se evala la
RESULTADOS
Estudio fitoqumico
El anlisis fitoqumico preliminar aplicado al extracto etanlico
permiti identificar mediante ensayos cualitativos, los grupos de
metabolitos presentes en la especie. La presencia de stos se
confirm realizando cromatografas en capa delgada. Dentro de
estos metabolitos se destacan: cumarinas, flavonoides, esteroides
y/o terpenos y saponinas. Con el fraccionamiento fitoqumico se
obtuvieron 4 fracciones de diferente polaridad: acuosa,
clorofrmica, metanlica y hexnica.
Estudio farmacolgico
Test de Irwin: mediante esta prueba se pudo determinar que el
extracto etanlico de Hygrophila tyttha posee un efecto depresor
sobre el sistema nervioso central. Con dosis superiores a 120
mg/k.o., se empezaron a evidenciar los primeros cambios en el
patrn de comportamiento, tales como disminucin de la
actividad motora, leve disminucin de la fuerza prensil y
disminucin del reflejo pineal y corneal. Con dosis de 1.000 y
2.000 mg/Kg se hicieron mucho ms evidentes los signos de
sedacin. Estos cambios aparecieron entre los 30 minutos y las 2
horas posaplicacin, hacia las 6 horas se observ una
recuperacin del comportamiento normal en los animales.
ENSAYOS
* p0.05, Chi2.
Figura 3. Efecto del extracto etanlico de Hygrophila tyttha (500 mg/kg,
vo) y fenitona (20 mg/Kg, vo) en el modelo de convulsin inducida por
electrochoque en ratones.
* p 0,05, Chi2.
Figura 4. Efecto del extracto etanlico de Hygrophila tyttha (500 mg/kg,
vo) y Clonazepam (0.5 mg/Kg, vo) en el modelo de convulsin inducida
por pentilentetrazol en ratones.
ENSAYOS
* p<0.05.
Figura 7. Efecto de las fracciones clorofrmica 500 mg/Kg, acuosa 500
mg/Kg, metanlica 200 mg /Kg y hexnica 100 mg/Kg y diazepam 0.5
mg/ Kg, sobre la frecuencia de entrada y el tiempo de permanencia en
las zonas abiertas del LCE. Los datos se expresan como el promedio
(EMS).
* p0.05, Chi2.
Figura 8. Efecto de las fracciones primarias clorofrmica, metanlica y
hexnica (500 mg/kg v.o.) y fenitona (10 mg/kg, vo) en el modelo de
convulsin inducida por electrochoque en ratones.
DISCUSIN
En este estudio se verific la actividad sobre el sistema nervioso
central del extracto etanlico y fracciones de Hygrophila tyttha
que dan cuenta del potencial ansioltico y anticonvulsivante de
esta especie.
Con el extracto etanlico se observ cierta
actividad en los modelos de laberinto en cruz elevado y
electrochoque mientras que la respuesta en los modelos de nado
forzado pentilentetrazol y sueo inducido con pentobarbital fue
negativa. El hecho de que el extracto posea actividad en el
modelo del electrochoque pero a la vez carezca de sta frente a
pentilentetrazol
sugiere
que
los
mecanismos
de
tipo
benzodiazepnico/gabargico no estaran implicados en su
mecanismo de accin, ya que generalmente diazepam y anlogos
suelen ser activos frente a esos dos modelos de convulsin (17).
De otro lado, aunque la mayora de las sustancias depresoras
AGRADECIMIENTOS
Este trabajo se realiz con el apoyo econmico de la Vicerrectora
de Investigacin de la Universidad Nacional de Colombia. Los
autores agradecen al Grupo de Investigacin Bsqueda de
Principios Bioactivos en Plantas del Departamento de Farmacia y
al profesor Edgar Linares del Instituto de Ciencias Naturales,
Facultad de Ciencias, Universidad Nacional de Colombia.
REFERENCIAS
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T.S. Minoru, H.Takeda y T. Matsumiya, Protective effects of 5HT1A receptor agonists against emotional changes produced
by stress stimuli are related to their neuroendocrine effects,
British Journal of Pharmacology, 134, 585 (2001).