Composición química y actividad hipoglucemiante de extractos de Anacardium

occidentale L. (marañón)

Chemical composition and hypoglycemic activity of extracts from Anacardium

Geovanny Efrén Ramón Japón,I Viviana García Mir,II Osmany Cuesta Rubio,III
Carmita Jaramillo Jarmillo,IV Elizabeth Guzmán Heras V

I
Bioquímico Farmacéutico. Universidad Técnica de Machala. Provincia El Oro,
Ecuador. [email protected], 0981831695
II
Dr.C en Ciencias Farmacéuticas, Docente de lar. Universidad Técnica de Machala.
Provincia El Oro, Ecuador. [email protected],
III
Dr.C. en Ciencias Farmacéuticas Docente de la Universidad Técnica de Machala.
Provincia El Oro, Ecuador. [email protected]
IV
Dra. Bioquímica Farmacéutica. Máster en Ciencias. Docente de la Universidad
Técnica de Machala. Provincia El Oro, Ecuador. [email protected],
0993775151
V
Bioquímica Farmacéutica. Universidad Técnica de Machala. Provincia El Oro,
Ecuador. [email protected], 0939897407

1
RESUMEN
Objetivo: Evaluar la composición química y actividad hipoglucemiante de extractos
hidroalcohólicos de hojas y corteza de Anacardium occidentale L. (marañón).
Métodos: Se realizó el control de calidad de las drogas y extractos, se caracterizó
preliminarmente la composición química mediante tamizaje fitoquímico y
espectrometría de masa y cuantificación por Folin-Ciocalteu y tricloruro de aluminio.
La actividad hipoglucemiante se evaluó mediante el ensayo inducido de glucosa al
40% en ratas Wistar.
Resultados: Las drogas y extractos empleados fueron de calidad. Se estableció
mayor presencia de metabolitos en el extracto de hojas y se confirmó la presencia
de quercetina en las hojas. El contenido de fenoles y de flavonoides fue similar en
ambos extractos y se demostró la actividad hipoglucemiante del extracto de hojas,
no en la corteza.
Conclusión: El extracto hidroalcohólico de las hojas tiene mayor contenido de
metabolitos y actividad hipoglucemiante comparado con el de corteza.
Palabras clave: Anacardium Occidentale L., Diabetes Mellitus, Hiperglucemia.

SUMMARY
Objective: To evaluate chemical composition and hypoglycemic activity on leaves
and barks of Anacardium occidentale L
Methods: Quality control of the drugs and extracts were performed, the chemical
composition was preliminary characterized using phytochemical screening, mass
spectrometry, Folin-Ciocalteu quantification and aluminum trichloride quantification.
The hypoglycemic activity was evaluated using glucose at 40% induced in Wistar
rats.
Results: The drugs and extract were quality. Higher presence of metabolites in
leaves extract was established and presence of quercetin in leaves was confirmed.
The phenols and flavonoids content was similar in both extracts and hypoglycemic
activity was demonstrated on leaves but not on barks.
Conclusion: The hydro-alcoholic extract of leaves present higher content of
metabolites and hypoglycemic activity than the barks extract.

2
Key words: Anacardium Occidentale L., Diabetes Mellitus, Hyperglycemia

3
INTRODUCCIÓN
La Diabetes en Ecuador, de acuerdo al Ministerio de Salud Pública, es la principal
enfermedad causante de muerte y es considerada como catastrófica.1
Se estima una prevalencia de la diabetes que engloba todas las edades a nivel
mundial que aumentará de, 2,8% en el 2000 a 4,4% en el 2030. 2 Agregando
además, que el porcentaje de muertes por diabetes es mayor en países de bajos y
medianos ingresos económicos.3 La diabetes se caracteriza por hiperglucemias
elevadas y prolongadas, y para lograr una normoglucemia es necesario desarrollar
un tratamiento seguro y efectivo, lo que se dificulta incluso con administración de
fármacos hipoglucemiantes, ello abre el camino para la búsqueda de nuevas formas
de tratar la enfermedad.4
Las plantas son una alternativa ante esta necesidad, incluso sus compuestos han
sido modelos para la elaboración de medicamentos sintéticos, por lo cual la OMS ha
impulsado el uso y estudio de plantas.5 Su economía y accesibilidad son las
principales ventajas, al ser numerosas y ampliamente utilizadas para el tratamiento
de cuantiosas enfermedades, encontrando especies que cuentan con ensayos
preclínicos que demuestran su actividad antidiabética.6,7
La OMS hace mención al hecho de que se pueden tratar enfermedades con plantas
medicinales, entre ellas la diabetes y tomando en cuenta el avance que ha tenido el
uso y estudio de drogas naturales, encontramos una planta conocida vulgarmente en
Ecuador como marañón y nombre científico Anacardium occidentale L., que se le
han atribuido propiedades farmacológicas como depurativas, hipoglucemiantes,
antiinflamatorias, anticancerígenas y nutricionales ya que posee metabolitos de gran
importancia terapéutica.8 Por tal motivo se planteó como objetivo, evaluar la
composición química y actividad hipoglucemiante de extractos hidroalcohólicos de
hojas y corteza de Anacardium occidentale L. (marañón).
MÉTODOS
Preparación del material vegetal
Las muestras se recolectaron de árboles de marañón en el sitio la Cuca del cantón
Arenillas, provincia de El Oro, parte costa del Ecuador. Una muestra fue enviada al
Herbario de la Facultad de Ciencias Naturales de la Universidad de Guayaquil para
su determinación taxonómica, registrado con el código GUY2.
Las muestras fueron lavadas con agua corriente y desinfectadas con hipoclorito de
sodio al 0,5 %. Se llevó a 40 ºC en estufas Memmert Basic UNB 400, por 72 h la

4
corteza y 24 h las hojas. Una vez secas, se redujeron a polvo fino en un molino
Corona de discos, a manivela.
Control de calidad de las drogas crudas
Se realizó, por triplicado, el análisis de humedad y cenizas, según las Normas de la
Organización Mundial de la Salud,9 y Miranda y Cuellar.10
Obtención, control de calidad y tamizaje fitoquímico de los extractos
Se obtuvieron los extractos por el método de percolación, con Etanol:Agua (1:1, v/v)
como disolvente. El pH fue medido con un pH-metro Oakton pH 700, la medición del
índice de refracción y º Brix se realizó en un refractómetro Anton Paar-Abbemat 200.
Los sólidos totales se determinaron por gravimetría y la densidad por picnometría.
Todos estos parámetros se realizaron por triplicado según Miranda y Cuellar.10 En el
tamizaje fitoquímico se desarrollaron los ensayos de Dragendorff, Wagner, Mayer,
Shinoda, Cloruro férrico, Baljet, Felhing y espuma, para la identificación de los
respectivos metabolitos.10
Espectrometría de masas
Se evaporó a sequedad 1 mL de los extractos hidroalcohólicos de hojas y corteza en
un rotaevaporador Buchi y se extrajo 2,3 mg y 1,8 mg respectivamente, luego se
redisolvió en 1 mL de metanol. La solución de las hojas se pasó por una columna
RP18 para retener clorofila y sustancias apolares que interfieren y dañan el sistema
del equipo. Se diluyó a un 1 ppm aproximadamente para lo cual se tomó 1 uL de la
solución madre y se diluyó hasta 1 mL en una mezcla MeOH:H2O (8:2, v/v).
Los espectros se obtuvieron por infusión directa empleando un espectrómetro LTQ-
XL equipado con una fuente de ionización por electronebulización y un analizador de
trampa de iones línea. La velocidad de infusíon fue 3 uL/min y los espectros de
masas se registraron en el rango de 150-1500 Da tanto en modo positivo como
negativo. EL voltaje de ionización usado fue de 3,5 kV). Para confirmar la identidad
de los compuestos se realizaron experimentos EM n y los resultados se compararon
con los datos reportados en la literatura.11,12
Cuantificación de metabolitos en los extractos
Las determinaciones de fenoles y flavonoides se realizaron por los métodos
espectrofotométricos, en el equipo Milton Roy Spectronic 21d. En cada metabolito se
obtuvo la curva de calibración por triplicado. Se determinó la concentración de
fenoles por el método de Folin-Ciocalteu y como material de referencia ácido gálico,
expresado como mg de Ácido Gálico (AG) por mL de extracto. 13 El contenido de

5
flavonoides se desarrolló mediante el método de Tricloruro de Aluminio, y rutina
como sustancia patrón, expresado como mg de rutina por mL de extracto.14
Evaluación de la actividad hipoglucemiante de los extractos
La evaluación farmacológica se realizó en ratas Wistar, con hiperglucemia inducida
por glucosa al 40%.15 A las ratas destinadas a la experimentación se les retiró el
alimento 2 h previas al ensayo, se organizaron cuatro grupos de 3 animales cada
uno y se los anestesió ligeramente con tiopental sódico. Las lecturas de la glucosa
se realizaron con sangre obtenida por punción en la cola descartando las dos
primeras gotas y usando un glucómetro digital y tiras reactivas True Result.
Se realizó una lectura de glucosa inicial, considerando como ratas normoglucemicas,
a aquellas que se encontraron entre 60 y 135 mg/dL con una media de 75 mg/dL.16
Con una cánula y una jeringa se administró por vía oral la metformina a dosis de 500
mg/kg a un primer grupo (control), y los extractos de hojas y corteza en dosis de 750
mg/kg a otros dos grupos. Transcurridos 60 min de la aplicación de los tratamientos
se indujo la hiperglucemia administrando la solución de glucosa (2 mL/200 g), por
vía intraperitoneal a los grupos anteriores y a un cuarto grupo (control de
hiperglucemia). Las lecturas se realizaron a los 15, 30, 60 y 120 min después de la
administración de la glucosa.
Análisis estadístico
Los datos de la investigación fueron procesados mediante t de Student, anova y
regresión lineal, con el software estadístico SPSS versión. 21. Los resultados se
expresaron como media/desviación estándar.
RESULTADOS
Control de calidad de las drogas crudas y extractos
La humedad residual en hojas es 5,76 % y en corteza 7,71 %. Las cenizas totales,
solubles en agua e insolubles en HCl en hojas son 3,54 %, 1,48 % y 0,49 %
respectivamente, y en corteza 2,45 %, 1,68 % y 0,71 %. En la tabla 1 podemos
observar valores promedios de los parámetros evaluados en cada extracto. Estas
determinaciones mostraron diferencias significativas entre hojas y corteza (p<0,05).
Tamizaje Fitoquímico
La presencia de flavonoides, alcaloides, fenoles, taninos, cumarinas, saponinas y
azucares reductores se obtuvo en el extracto de hojas, mientras que se identifica
alcaloides, fenoles, saponinas y azúcares reductores en el extracto de corteza.

6
Espectrometría de masas
Se obtuvo espectros de masas, en los que se observa varios compuestos presentes
en los extractos, llamando la atención picos de elevado peso molecular que
ionizaron perfectamente en modo negativo mostrados en las figuras 1 y 2. Al realizar
la fragmentación del pico 301 y revisión en las literaturas, se logró precisar el
flavonoide quercetina en el extracto de hojas, así se observa en la figura 3, sin
embargo no se confirmó la identidad de otros compuestos.
Cuantificación de metabolitos
Se obtuvo las curvas de calibración para cada metabolito. Los análisis de regresión
lineal, mostraron coeficientes de determinación (R2) cercanos a 1 y con el valor de
p=0,0001 (<0,05) en el ANOVA lo que constata la confiabilidad de los resultados-
Los valores obtenidos son: fenoles 19,18 mg/mL y 18,58 mg/mL y flavonoides 2,75
mg/mL y 0,73 mg/mL, para hojas y corteza respectivamente de los extractos
hidroalcohólicos.
Evaluación de la actividad hipoglucemiante de los extractos
El ensayo hipoglucemiante representado en la figura 4, nos muestra el
comportamiento de los extractos frente a un fármaco comercial y un control de
hiperglucemia, donde se puede evidenciar que el extracto de hojas se comporta
similar a la metformina (fármaco comercial) y en comparación con el control de
hiperglucemia este extracto no deja que los niveles de glucosa alcancen los de dicho
control. Por el contrario el extracto de corteza casi no presenta diferencias comprado
con el control de hiperglucemia y los niveles se asemejan a este. Por tal motivo se
puede decir que el extracto de hojas posee buena propiedad hipoglucemiante y el de
corteza no la presentó. Esto fue corroborado mediante ANOVA y el test de Duncan,
con valores de p>0,05 para los grupos de hojas y metformina entre si y p<0,05
comparando estos dos grupos con los de corteza y control. Esto indica que los
grupos hojas y metformina son iguales, pero difieren de los de corteza y control.
DISCUSIÓN
Para asegurar que se trabajó con drogas y extractos de buena calidad se llevó a
cabo el respectivo control. Los valores de humedad y cenizas obtenidas
demostraron que se usaron drogas de calidad, por estar dentro de los rangos
permitidos, humedad no mayor al 10 %, 10 y cenizas no mayor al 12 %. 17 En los
extractos, los indicadores de calidad fueron evaluados y se asemejan a los
reconocidos en plantas medicinales (ver tabla 1).18,19

7
Así mismo, según el tamizaje fitoquimico, los compuestos detectados en los
extractos hidroalchólicos permitieron establecer una diferencia química entre estos,
teniendo presente la existencia de mayor cantidad de metabolitos en el extracto de
hojas en comparación con el de corteza.
Los compuestos de elevado peso molecular observados en los espectros de masas,
fueron relacionarlos con polímeros de fenoles y de flavonoides (ver figs.1 y 2).
Además, la cuantificación reveló valores considerables de estos metabolitos en cada
extracto.
El ensayo de la actividad hipoglucemiante demostró actividad del extracto de hojas
a diferencia del de la corteza que no tuvo el mismo comportamiento. Estos
resultados se pueden relacionar con la diferencia química establecida entre los
extractos en el tamizaje fitoquímico y cuantificación, además de la Quercetina
identificada en hojas (ver fig. 3), sustancia que puede influir son la homeostasis de la
glucosa en músculos esqueléticos como en el hígado, beneficiando al efecto
hipoglucemiante.20 Asimismo el de hojas contiene mayor concentración de fenoles
compuestos que son una eficaz arma en el tratamiento de las hiperglucemias
tempranas, al inhibir la producción de la α-glucosidasa y β-galactosidasa,21 y
flavonoides que inhiben el transporte de glucosa ayudando a mantener la
homeostasis glicémica.22
Los resultados obtenidos del ensayo hipoglucemiante concuerdan con estudios que
reportan la disminución significativa de los niveles de glucosa en ratas con diabetes
inducida, aplicando dosis de 300 mg/Kg.23 de extracto metanólico de hojas de
marañón, pero difiere con investigaciones que demuestran la reducción de los
niveles de glucosa en ratas diabéticas con tratamiento de extractos alcohólicos de
cortezas de marañón en dosis de 34 mg/Kg, 200 mg/Kg y 300 mg/kg de extracto.24
Finalmente se puede concluir que tanto en las drogas como en los extractos, existe
difieren entre sí respecto a los parámetros evaluados, pero están dentro de los
valores normales establecidos en las bibliografías. Asimismo que el extracto de
hojas presentó mayor cantidad de metabolitos en su composición, y una
concentración superior de fenoles y flavonoides en comparación con el de corteza.
El extracto de hojas mostró buena propiedad hipoglucemiante al contrario del de
corteza que no la presentó.

8
 REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
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9
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10
Tabla 1: Parámetros de calidad de los extractos obtenidos (media/SD)
Extracto (%) ° Brix (%) ST pH ÍR D (g/mL)

Hojas 25,23/0,08 8,59/0,27 5,38/0,01 1,3726/6E-03 0,948/0,04

#12374 IT: 10.000 ST: 0.79 uS: 5 NL: 4.29E4

939.22
100

95

90

85 183.06
339.34
325.31
80

75

70

65

60
Relative Intensity

55

50 940.18

45 301.21
1091.09
40

35

30

25
285.19
20 769.23
340.39 941.24
537.20 787.20
463.27
15 447.24 1243.01
615.17
271.14
545.37 617.26 1243.99
10 1037.03 1093.02
255.29 341.31 712.93
375.20 621.46 788.23 937.14 1188.94 1244.96
5 1394.90 1395.94
897.26 913.18 1036.28
1121.32 1368.70
0
200 300 400 500 600 700 800 900 1000 1100 1200 1300 1400 1500
m/z

Fig. 1. Espectro de masas obtenido del extracto de hojas en modo negativo

#13804 IT: 0.250 ST: 0.72 uS: 5 NL: 7.60E6

413.28
100

95

90

391.13
85

80

75

70

65

60
Relative Intensity

55

50

45

40

35

30
414.30
445.28
25

20

15
166.88
278.96 803.01
10 390.52
447.33 805.34
281.06 477.38
5
292.28 478.36 522.97 527.21 802.17 806.49 835.03
180.97 866.93 992.45 1109.67 1194.30 1262.80 1353.91 1398.07
0
200 300 400 500 600 700 800 900 1000 1100 1200 1300 1400 1500
m/z

Fig. 2. Espectro de masas obtenido del extracto de corteza en modo negativo

11
 #12484 IT: 100.000 ST: 0.33 uS: 1 NL: 8.46E3
F: ITMS - c ESI Full ms2 [email protected] [80.00-1500.00]

178.92
100

95

90

85

80

75

70 150.86

65

60
Relative Intensity

55

50

45

40

35

30

25

20 256.97
272.08 301.00
15
256.19
10
193.07
5 106.93
302.93 318.76
0
100 200 300 400 500 600 700 800 900 1000 1100 1200 1300 1400 1500
m/z

Fig. 3. Espectro EM2 obtenido a partir de m/z 301, presente en el espectro de masas
del extracto de las hojas

Fig. 4. Comportamiento hipoglucemiante de los extractos

12