Manual

PhiCal Calproctetin ELISA

PhiCal® Calprotectin ELISA Kit

Para la determinación In Vitro de
calprotectina (MRP 8/14, S100A8/A9) en
heces

[PhiCal®: Marca registrada Alemana de Immundiagnostik AG]

Valido desde 30-10-2014

+8 °C

K 6927
+2 °C
96

Immundiagnostik AG, Stubenwald-Allee 8a, D-64625 Bensheim

Tel.: +49 6251 70190-0 Fax: + 49 6251 849430
e.mail: [email protected] www.immundiagnostik.com
Manual PhiCal® Calprotectin (MRP8/14)

Tabla de Contenidos
1. INTENCIÓN DE USO 02
2. RELEVANCIA CLÍNICA 02
3. MATERIAL SUMINISTRADO 03
4. MATERIAL REQUERIDO PERO NO SUMINISTRADO 03
5. PREPARACION Y ALMACENAMIENTO DE REACTIVOS 04
6. PREPARACIÓN Y TOMA DE MUESTRAS 05
Estabilidad y almacenaje de la muestra 05
Extracción de la muestra de heces 05
Dilución de muestras 06
7. PROCEDIMIENTOS DE ENSAYO 06
Principio de las pruebas 06
Procedimiento del test 07
8. RESULTADOS 08
9. LIMITACIONES 09
10. CONTROL DE CALIDAD 09
Rango de referencia 09
Rango de referencia paracalprotectin fecal en niños 09
11. CARACTERÍSTICAS DE RENDIMIENTO 10
Precision y reproducibilidad 10
Especificidad 11
Recuperación de la dilución 11
Sensibilidad analítica 12
Recuperación por perforación 12
12. PRECAUCIONES 12
13. CONSEJOS TÉCNICOS 13
14. NOTAS GENERALES SOBRE EL TEST Y PROCEDIMIENTO DEL TEST 13
15. REFERENCIAS 14
Literatura General 14
Publicaciones usando Immundiagnostik Calprotectina ELISA 14

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 Manual PhiCal® Calprotectin (MRP8/14)

1. INTENCIÓN DE USO
El PhiCal® Calprotectina ELISA descrito está pensado para la determinación
cuantitativa de calprotectina (MRP (8/14, S100A8 / A9) en las heces. Sólo para uso
diagnóstico in vitro.

2. RELEVANCIA CLÍNICA
Nombres alternativos:
• Calgranulin A: MRP8,S100A8,CP-10 (en ratón)
• Calgranulin B: MRP14,S100A9,
• MRP8/14:L1, (p8,14),p34
La calprotectina es una proteína de unión a calcio secretada predominantemente por
neutrófilos y monocitos. Calprotectina fecal es un marcador de enfermedades
gastrointestinales inflamatorias y neoplásicas.
A menudo es difícil distinguir entre el síndrome del intestino irritable y la enfermedad
inflamatoria intestinal crónica. Esto lleva en muchos casos a extensos e innecesarios
exámenes colonoscópicos. La prueba de calprotectina permite una clara diferenciación
entre los dos grupos de pacientes. Los niveles de calprotectina fecal se correlacionan
significativamente con histológia y evaluación endoscópica de actividad de la
enfermedad y la colitis ulcerosa de enfermedad de Crohn así como con la excreción
fecal de granulocitos neutrófilos marcados con indio-111 que ha sido sugerido como el
"patrón oro" de actividad de la enfermedad en la enfermedad inflamatoria intestinal. Sin
embargo, la medición de 111-marcado con indio granulocitos es muy costoso
(hospitalización, análisis y eliminación de material isotópica del paciente) y está
conectado con la exposición radiactiva de los pacientes. Por esta razón, no se
recomienda una aplicación repetida a los niños y mujeres embarazadas.
Los niveles elevados de calprotectina son un mucho mejor predictor de recaída que los
marcadores inflamatorios estándar (PCR, VSG HB). La comparación de este marcador
con análisis de sangre culto ocurrencia fecal estándar en el cáncer colorrectal demuestra
claramente las ventajas de diagnóstico de la prueba de la calprotectina fecal. El
parámetro es de un alto valor diagnóstico: si el nivel de calprotectina en heces es bajo,
la probabilidad es alta de que no existe una enfermedad intestinal orgánica.
Indicaciones
• Marcador de inflamación aguda
• Estimación del grado de inflamación gastrointestinal
• El parámetro para el control de la enfermedad de Morbus Crohn, la colitis
ulcerosa o el estado del paciente después de la extirpación de los pólipos.
• La discriminación entre pacientes con enfermedad inflamatoria intestinal
(enfermedad de Morbus Crohn y la colitis ulcerosa aguda) y síndrome del
intestino irritable cuando se utiliza un sistema de prueba fecal.

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Manual PhiCal® Calprotectin (MRP8/14)

3. MATERIAL SUMINISTRADO
Cat. No. Label Kit components Quantity
12 x 8
K6927 PLATE PLATE PhiCal Calproctetin ELISA PLATE (pocillos)

K6927 WASHBUF WASHBUF ELISA WASHBUF 2 x 100 ml

K6927 IDK Extract IDK Extract® ELISA IDK Extract 1 x 100 ml

K6927 SAMPLEBUF SAMPLEBUF PhiCal Calproctetin ELISA SAMPLEBUF 1 x 100 ml

K6927 STD STD PhiCal Calproctetin ELISA STD 2 x 5 viales

(500µl lyo.)

K6927 CTRL 1 CTRL 1 PhiCal Calproctetin ELISA CTRL 1 2 x 1 vial

(500µl lyo.)

K6927 CTRL 2 CTRL 2 PhiCal Calproctetin ELISA CTRL 2 2 x 1 vial

(500µl lyo.)

K6927 CONJ CONJ PhiCal Calproctetin ELISA CONJ 15 ml

K6927 SUB SUB ELISA SUB 15 ml

K6927 STOP STOP ELISA STOP 15 ml

4. MATERIAL REQUERIDO PERO NO SUMINISTRADO

• Agua Ultra Pura*
• Balanza de Laboratorio
• Pipetas de precision calibradas y tips 10–1000 µl
• Papel de Aluminio para cubrir la placa de titulación
• Pipetas multi-canal o pipetas repetidoras
• Centrifuga, 3000 g
• Vortex
• Vasos standars de laboratorio o viales plásticos, tazas, etc.
• Lector de placa de microtitulación
* Immundiagnostik AG recomienda el uso de Agua Ultra pura (Agua Tipo 1; ISO 3696),
que está libre de iones disueltos y coloidales y las moléculas orgánicas (libre de
partículas> 0,2 micras) con una conductividad eléctrica de 0.055 S / cm a 25 ° C
(≤ 18,2 MΩ cm).

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 Manual PhiCal® Calprotectin (MRP8/14)

5. PREPARACIÓN Y ALAMCENAMIENTO DE REACTIVOS

• Para ejecutar el ensayo más de una vez, asegúrese de que los reactivos se
almacenan en las condiciones indicadas en la etiqueta. Preparar sólo la
cantidad adecuada necesaria para cada ejecución. El kit se puede usar hasta 4
veces dentro de la fecha de caducidad indicada en la etiqueta.

• Los reactivos con un volumen inferior a 100 µl deben ser centrifugadas antes de
su uso para evitar la pérdida de volumen.

• El tampón de lavado ELISA concentrado (WASHBUF) debe ser diluido 1:10

en agua ultrapura antes de su uso (100 ml de concentrado + 900 ml de agua
ultrapura), mezclar bien. Podría presentarse cristales debido a la alta
concentración de sal en las soluciones madre. Los cristales deben volver a
disolver a temperatura ambiente o a 37 ° C antes de la dilución de las soluciones
buffer. El buffer concentrado es estable a 2 - 8 ° C hasta la fecha de caducidad
indicada en la etiqueta. Solución buffer diluida (buffer de lavado) se puede
almacenar en un matraz cerrado a 2 - 8 ° C durante un mes.

• El buffer concentrado de extracción IDK Extract® debe diluirse con agua

ultrapura 1: 2.5 antes de su uso (100 ml IDK Extract® + 150 ml de agua
ultrapura), mezclar bien. Cristales podrían ocurrir debido a la alta concentración
de sal en las soluciones madre. Antes de la dilución, los cristales deben volver a
disolver a 37 ° C en un baño de agua. El buffer de extracción concentrado IDK
Extract® es estable entre 2 - 8 ° C hasta la fecha de caducidad indicada en la
etiqueta. Solución buffer diluida (buffer de extracción) se puede almacenar en
un matraz cerrado a 2 - 8 ° C durante tres meses.

• El liofilizado STD (standard) y CTRL (controles) son estables a 2 - 8 ° C hasta

la fecha de caducidad indicada en la etiqueta. La STD (standard) y CTRL
(controles) debe ser reconstituido con 500 µl de agua ultra pura. Deje que el
contenido del vial para disolver durante 10 minutos a temperatura ambiente, y
mezclar bien por inversión suave para asegurar la reconstitución completa.
Standars y controles reconstituidos se pueden almacenar a 2 - 8 ° C durante
4 semanas.

• Todos los demás reactivos están listos para usar. Reactivos de prueba son
estables hasta la fecha de caducidad (ver etiqueta del paquete de prueba) cuando
se almacena a 2 - 8 ° C.
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6. PREPARACIÓN Y RECOLECCIÓN DE LA MUESTRA

Estabilidad de la muestra y almacenaje
Heces Frescas
La calprotectina en las heces se describe como estable durante al menos 3 días a
temperatura ambiente (Ton et al. (2000) Clin Chim Acta). Sin embargo, se recomienda
almacenar las muestras por no más de 48 horas a 2-8 ° C. El almacenamiento a largo
plazo se recomienda a -20 ° C. Deje que las muestras congeladas se descongelen
lentamente, preferentemente a 2-8 ° C, y se calientan las muestras a temperatura
ambiente antes del análisis. Evitar la congelación y descongelación repetida de la
muestra. La congelación puede causar granulocitosis de neutrófilos en la muestra de
heces a punto de estallar y liberar calprotectina. Por lo tanto se puede esperar que las
muestras congeladas contengan concentraciones ligeramente elevadas de calprotectina
en comparación con las muestras frescas.
Los aditivos químicos o biológicos en tubos de muestra de heces, pueden interferir con
PhiCal® Cal protectin. Por lo tanto, se debe utilizar tubos sólo vacíos o tubos llenos con
el buffer de extracción IDK Extract® suministrado por Immundiagnostik.
Extractos de heces
Los extractos de heces son estables por 9 días a temperature ambiente, 2–8 °C o -20 °C.
Evite mas de tres ciclos de congelación-descongelación.
Extracción de la muestra de heces
Buffer de extracción diluido IDK Extract® es usado como un buffer de extracción de
la muestra. Recomendamos la siguiente preparación de la muestra:

Sistema de Aplicación de la muestra de heces (SAS) (Cat. No.: K 6998SAS)

Tubode muestra de heces – Instrucciónes de uso

Tenga en cuenta que el factor de dilución de la suspensión de heces final depende de la
cantidad de muestra de heces utilizado y el volumen de la memoria intermedia.
SAS con 1.5 ml de buffer:
Cantidad de heces aplicada: 15mg
Volumen del Buffer: 1.5 ml
Factor de dilución: 1:100
Por favor, siga las instrucciones para la preparación de muestras de
heces utilizando el SAS de la siguiente manera:
a) La muestra de heces en bruto tiene que ser descongelada. Para muestras
particularmente heterogéneas se recomienda una homogeneización mecánica
usando un aplicador, bucle de inoulación o un dispositivo similar.

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 Manual PhiCal® Calprotectin (MRP8/14)
b) Llenar el tubo de muestra vacía con 1,5 ml de uso listos para el tampón
de extracción IDK Extract® antes de utilizarlo con la muestra.
Importante: Deje que el Buffer de extracción que alcance la temperatura
ambiente.
c) Desenrosque el tubo (parte amarilla de la tapa) para abrir. Inserte la varilla de
medición amarilla en la muestra. La parte inferior de la varilla tiene muescas
que deben ser cubiertos por completo con las heces después de insertarlo en la
muestra. Colocar la varilla de medición en el tubo. Al poner el volver a pegar
en el tubo, el material sobrante se quitó y dejó 15 mg de muestra a diluirse.
Atornillar firmemente para cerrar el tubo.
d) Agitar el tubo bien hasta que no se muestra de materia fecal permanece
en las muescas. Importante: Por favor, asegúrese de que usted tiene una
suspensión homogénea al máximo después de la agitación. Especialmente
con muestras más sólida, sumergiendo la muestra en el tubo con tampón de
aplicación. 10 minutos mejora el resultado.
e) Permitir que la muestra repose por aplicación. 10 minutos hasta que los
sedimentos se ha asentado. El material flotante como cáscaras de los
granos puede ser descuidado.
f) desenroscar con cuidado la tapa completa del tubo incluyendo el anillo
de turquesa, más la varilla de nivel. Tapa y la varilla de medición
Descartar. Asegúrese de que el sedimento no se dispersa de nuevo.
Dilución I: 1:100

Dilución de muestras
La suspensión del procedimiento de preparación de la muestra (dilución I)
con SAMPLEBUF 01:25 (buffer de dilución de la muestra). por ejemplo:
40 µl suspensión (dilución I) + 960 µl SAMPLEBUF = 1:25 (dilución II)
Los resultados en la dilución final es de 1:2500.
Para análisis, pipeta 100 µl de dilución II por pocillo.

7. PROCEDIMIENTO DE ENSAYO

Principio de la prueba
El ensayo utiliza la técnica de sándwich de dos sitios con dos anticuerpos
monoclonales seleccionados que se unen a la calprotectina humana.
Normas, controles y muestras diluidas de los pacientes que se sometieron a
ensayo para la calprotectina humana se añaden a los pocillos de microplacas
recubiertas con anticuerpos calprotectina humana un alto monoclonal anti afín.
Durante la primera etapa de incubación, la calprotectina en las muestras está

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obligada por el anticuerpo inmovilizado. A continuación, un conjugado marcado
con peroxidasa se añade a cada pocillo y la siguiente complejo se forma:
anticuerpo de captura calprotectina humana - conjugado de peroxidasa.
Tetrametilbenzidina (TMB) se utiliza como un sustrato para la peroxidasa. Por
último, se añade una solución de parada ácida para finalizar la operación re. El
color cambia de azul a amarillo. La intensidad del color amarillo está
directamente proporcional a la concentración de calprotectina de la muestra. Una
respuesta a la dosis actual cinco de la unidad de absorbancia (densidad óptica,
OD) frente a la concentración se genera, usando los valores obtenidos a partir de
estándar. La calprotectina presentes en las muestras de pacientes, se determina
directamente a partir de esta curva.
Procedimiento del test
Se recomienda llevar a cabo pruebas por duplicado..
Lleve todos los reactivos y muestras a temeperatura ambiente (15 - 30 °C) y
1.
mezcle bien
Marca las posiciones de STD / SAMPLE / CTRL (standard / muetras /
2.
controles) en una hoja de protocolo
Tome como muchas tiras de microtitulaciónsegún sea necesario de kit.
3. Tienda tiras no utilizadas a 2 - 8 ° C. Las tiras son estables hasta la fecha de
caducidad indicada en la etiqueta
4. Añada 100 µl de STD / SAMPLE / CTRL dentro del respectivo pocillo
Cubra la placa e incubar por 30 minutos a temperatura ambiente
5. (15 - 30 °C)
Aspirar el contenido de cada pocillo. Lavar cada pocillo 5 x con 250 µl de
6. tampón de lavado. Después de la etapa de lavado final, la placa de
microtitulación invertido debe estar firmemente unos golpecitos sobre
papel absorbente
7. Añada 100 µl CONJ (conjugado)dentro de cada pocillo
Cubra la placa e incubar por 30 minutos a temperatura ambiente
8.
(15 - 30 °C)
Aspirar el contenido de cada pocillo. Lavar cada pocillo 5 x con 250 µl de
9. tampón de lavado. Después de la etapa de lavado final, la placa de
microtitulación invertido debe estar firmemente unos golpecitos sobre
papel absorbente
10. Añada 100 µl de SUB (substrato) dentro de cada pocillo
Incubar a 10 -20 minutes a temperatura ambiente (15 - 30 °C) en la
11.
oscuridad*

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12. Añada 100 µl de STOP (solución de parada) dentro de cada pocillo,

mezcle bien.
Determine la absorción inmediatamente con el lector de ELISA a 450 nm
contra 620 nm (o 690 nm) como referencia. Si no hay ninguna longitud de
13. onda de referencia está disponible, sólo lectura a 450 nm. Si la extinción
del más alto nivel supera el rango del fotómetro, la absorción se debe
medir inmediatamente a 405 nm frente a 620 nm como referencia.
* La intensidad del cambio de color es sensible a la temperatura. Se recomienda observar
el cambio de color y para detener la reacción de la buena diferenciación.
Para los procesadores automatizados ELISA se da un protocolo que puede ser ajustado
de acuerdo a las especificaciones de la respectiva plataforma automática.
Para más información, póngase en contacto con su proveedor o Immundiagnostik AG.

8. RESULTADOS
Los siguientes algoritmos se pueden usar alternativamente para calcular los
resultados. Recomendamos el uso mediante el "algoritmo de 4 parámetros“.

1. Algoritmo de 4 parámetros
Se recomienda utilizar una ordenada lineal de la densidad óptica y una abscisa
logarítmica de la concentración. Cuando se utiliza un eje de abscisas logarítmica, el
calibrador cero debe ser especificado con un valor menor que 1 (por ejemplo, 0.001).
2. Cálculo punto a punto
Recomendamos una ordenada lineal de la densidad óptica y una abscisa lineal
de la concentración.
3. Algoritmo Spline
Recomendamos una ordenada lineal de la densidad óptica y una abscisa lineal de
la concentración.
La plausibilidad de los pares de valores debe ser examinado antes de la
evaluación automática de los resultados. Si esta opción no está disponible con
el programa utilizado, se debe hacer manualmente un control de los valores
apareados.
Muestras de heces
Los niveles obtenidos de Calprotectina en las muestras de heces deben ser
multiplicados con el factor de dilución de 2500 (dilución I x dilución II).

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9. LIMITACIONES
Las muestras con un diámetro exterior mayor que el diámetro exterior del calibrador
más alto deben diluirse más con SAMPLEBUF y analizadas nuevamente.
10. CONTROL DE CALIDAD
Immundiagnostik recomienda el uso de controles externos para el control de
calidad interno, si es posible.
Las muestras de control se deben analizar con cada ejecución. Los resultados,
generados a partir de la lisis de las muestras de control analógica, deben ser
evaluados para la aceptabilidad utilizando métodos estadísticos apropiados. Los
resultados de las muestras de los pacientes pueden no ser válidos, si dentro del
mismo ensayo uno o más valores de la muestra de control de calidad están fuera de
los límites aceptables.
Rango de referencia
1 g de heces es equivalente a 1 ml.
• E l valor de la mediana en adultos sanos es de aproximadamente 25 mg /
kg.
• Las muestras que dan valores por encima de 50 mg / kg se consideran
positivos.
Se recomienda que cada laboratorio establezca sus propios valores de
referencia de concentración.
Nota: Muchos factores de confusión pueden causar el aumento de los
niveles de calprotectina fecal en ausencia de IBD o IBD en una fase de la
enfermedad quiescente, e. g. el uso de los AINES (medicamentos
antiinflamatorios no esteroideos), cualquier infección gastrointestinal
intercurrentes, y la presencia de tumores malignos. Estos factores deben
ser considerados en la interpretación de los resultados de las pruebas y el
tratamiento de la IBD *.
*D’Haens et al. Inflamm Bowel Dis, 2012; van Rheenen et al. BMJ, 2010
Rangos de referencia para calprotectin fecal en niños.
Hestvik E et al. (2011) BMC Pediatrics 11:9 doi:10.1186/1471-2431-11-9
Metodo: 302 niños aparentemente sanos, de edad de 0-12 años, en Kampala, Uganda, se
pusieron a prueba para la concentración de calprotectina fecal.
Tabla 1: La concentración de Calprotectina fecalen niños aparentemente sanos.
Calprotectina fecal
Age Numero Mediana [mg/kg]
0–3 meses 14 (4.6) 345 (195–621)
3–6 meses 13 (4.3) 278 (85–988)
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Calprotectina fecal
Edad Numero
Mediana [mg/kg]
6–12 meses 27 (8.9) 183 (109–418)
1–4 años 89 (29.5) 75 (53–119)
4–12 años 159 (52.6) 28 (25–35)

Conclusión: Las concentraciones de calprotectina fecal en los niños sanos en

Uganda son comparables a los de niños sanos que viven en países de ingresos
altos. En niños sanos Calprotectina es alta; en los niños mayores de 4 años la
concentración de calprotectina fecal es baja.

Fagerberg UL et al. (2003) J Pediatr Gastroenterol Nutr 37:468-472

Método: Se probaron 117 niños sanos de edades 4-17 años para la concentración de
calprotectina fecal.
Tabla 2: Concentración de calprotectina fecal en niños sanos por edad.
Calprotectina fecal
Edad Numero Mediana [mg/kg]
4–6 años 27 28.2
7–10 años 30 13.5
11–14 años 27 9.9
15–17 años 33 14.6

Conclusión: El nivel sugerido de corte para los adultos (<50 mg / kg) se puede
utilizar para los niños de 4-17 años.

11. CARACTERÍSTICAS DE DISEÑO

Precisión y reproducibilidad
Intra-Ensayo (n = 20)
Calprotectina
Muestra [mg/l] CV [%]

1 89.2 5.6
2 229.1 3.2

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Manual PhiCal® Calprotectin (MRP8/14)

Inter-Ensayo (n = 12)
Calprotectina
Muestra [mg/l] CV [%]

1 107.8 4.4
2 476.1 8.9

Especificidad
No se observó reactividad cruzada con las siguientes proteínas plasmáticas:
• Lisozyma 0%
• PMN-Elastasa 0%
• Mieloperoxidasa 0%
• Lactoferrin 0%

Recuperación de la Dilución
Tres muestras de los pacientes se diluyeron con SAMPLEBUF y analizados. Los
resultados se muestran a continuación (n = 3):
Calprotectina Calprotectina
Muestra Dilución esperada medida
[mg/l] [mg/l]
1:2500 820
A 1:5000 410 425
1:10000 205 192
1:2500 1120
B 1:5000 560 561
1:10000 280 266.5
1:1250 643.0
1:2500 321.5 344.0
1:5000 160.8 157.8
1:10000 80.4 80.0
C
1:20000 40.2 39.7
1:40000 20.1 17.6
1:80000 10.0 9.5
1:160000 5.0 5.0

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 Manual PhiCal® Calprotectin (MRP8/14)

Sensibilidad Analítica
El límite de detección se estableció como B0 + 6 SD. El estándar Zero se
midió 22 veces. Los valores se calcularon en relación a la concentración de la
curva de calibración y resultaron en
• un límite de detección de 2.099 ng / ml sin tener en cuenta el factor de
dilución de la muestra
• un límite de detección de 5,2475 mg / l con el examen de la muestra factor
de dilución
Recuperación de perforación
Dos muetsras fueron perforadas con tres diferentes concentraciones de calprotectina
y medido usando éste ensayo. (n = 2)
Muestra no Calprotectina Calprotectina
Perforado
Muestra perforada esperada medida
[µg/ml] [µg/ml]
[ng/ml] [ng/ml]
18 10.5 28.5 29.6
18 17.5 35.5 35.6
1 18 40.5 58.5 59.3
18 63.3 81.3 83.2
18 173.2 191.2 188.7
20.7 10.5 31.2 33.3
20.7 17.5 38.2 41.0
2
20.7 40.5 61.2 62.7
20.7 63.3 84.0 90.8

12. PRECAUCIONES
• Todos los reactivos en el kit de paquete son para uso diagnóstico in vitro.

• Las muestras de control se deben analizar con cada ejecución.

• Materiales humano usados en los componentes del kit pasaron pruebas que demostraron ser
negativos para el VIH, la hepatitis B y la hepatitis C. Sin embargo, por razones de seguridad,
todos los componentes del kit deben ser tratados como potencialmente infecciosos.

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 Manual PhiCal® Calprotectin (MRP8/14)
• Los reactivos del kit contienen azida de sodio o Proclin como bactericidas. La azida sódica y
Proclin son tóxicos. Sustratos para las reacciones enzimáticas de color son tóxicos y
cancerígenos. Evite el contacto con la piel o las membranas mucosas.

• La solución de parada consiste en ácido sulfúrico diluido, un ácido fuerte. Aunque diluido, que
aún debe ser manejado con cuidado. Puede causar quemaduras y debe ser manejado
con guantes, protección ocular y ropa de protección adecuada. Cualquier derrame
debe limpiarse inmediatamente con abundante cantidad de agua. No vapor de la
respiración y evitar la inhalación.

13. CONSEJOS TÉCNICOS

• No intercambie diferentes números de lote de cualquier componente del kit en
el mismo ensayo. Además recomendamos no montar pozos de diferentes placas
de microtitulación para el análisis, aunque sean del mismo lote que los pozos de
placas de microtitulación ya abiertas están expuestas a diferentes condiciones
que los sellados.
• Los reactivos no deben utilizarse después de la fecha de caducidad indicada en
la etiqueta del kit.
• La solución de sustrato debe permanecer incolora hasta su uso.
• Para asegurar resultados exactos, adecuada adherencia de los selladores de
placas durante los pasos de incubación es necesario.
• Evite la formación de espuma al mezclar los reactivos.

14. NOTAS GENERALES SOBRE EL TEST Y PROCEDIMIENTOS

DEL TEST
• Este ensayo se produce y se distribuye de acuerdo a las directrices IVD de
98/79 / CE.

• Las directrices de control de calidad deben ser seguidas.

• Los volúmenes de tiempo de incubación, temperatura de incubación y de pipeteo de los

componentes se definen por el productor. Cualquier variación del procedimiento de prueba, que
no está coordinado con el productor, puede influir en los resultados de la prueba.
Immundiagnostik AG puede, por tanto, no se hace responsable de cualquier mago da-
resultantes del uso incorrecto.

• Las reclamaciones de garantía y quejas con respecto a las deficiencias que estar registrado
dentro de los 14 días después de la recepción del producto. El producto se debe enviar a un
Immundiagnostik AG junto con una queja por escrito.

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Manual PhiCal® Calprotectin (MRP8/14)

15. REFERENCIAS

Literatura General
1. D’Haens, G. et al. Fecal calprotectin is a surrogate marker for endoscopic lesions
in inflammatory bowel disease. Inflammatory bowel diseases 18, 2218–24 (2012).
2. Fagerberg, U. L., Lööf, L., Merzoug, R. D., Hansson, L.-O.& Finkel, Y. Fecal calprotec-
tin levels in healthy children studied with an improved assay. Journal of pediatric
gastroenterology and nutrition 37, 468–72 (2003).
3. Fagerhol, M.K. Calprotectin, a faecal marker of organic gastrointestinal abnorma-
lity. Lancet 356, 1783–4 (2000).
4. Hestvik, E. et al. Faecal calprotectin concentrations in apparently healthy children
aged 0-12 years in urban Kampala, Uganda: a community-based survey. BMC pe-
diatrics 11, 9 (2011).
5. Poullis, A., Foster,R.,Northfield, T.C. & Mendall, M. A. Review article: faecal mar-
kers in the assessment of activity in inflammatory bowel disease. Alimentary phar-
macology & therapeutics 16, 675–81 (2002).
6. Tibble, J. et al. A simple method for assessing intestinal inflammation in Crohn’s
disease. Gut 47, 506–13 (2000).
7. Tibble, J. A., Sigthorsson, G., Bridger,S., Fagerhol, M. K.& Bjarnason, I.Surrogate
markers of intestinal inflammation are predictive of relapse in patients with in-
flammatory bowel disease. Gastroenterology 119, 15–22 (2000).
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