Manual Bioquímica General 2015

MANUAL DE PRÁCTICAS
BIOQUÍMICA GENERAL
TERCERA EDICIÓN
Dra. Mirza Ema Ye Gómez
UNIVERSIDAD VERACRUZANA
FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS
INGENIERÍA AMBIENTAL
CAMPUS COATZACOALCOS
2015
1
ÍNDICE
TEMA PAGINA
INTRODUCCIÓN 3
UNIDAD DE COMPETENCIA 4
MEDIDAS DE SEGURIDAD EN EL LABORATORIO 4
RECOMENDACIONES A LOS ALUMNOS 5
INSTRUCTIVO PARA LA ELABORACIÓN DE REPORTES 8
PRACTICA No. 1. PROPIEDADES QUÍMICAS DE LAS PROTEÍNAS 9
PRACTICA No. 2. CINÉTICA QUÍMICA Y CATÁLISIS 15
Primera parte. Valoración del Peróxido de hidrógeno 18
Segunda parte. Determinación del orden de la reacción 18
PRACTICA No. 3. FACTORES QUE MODIFICAN LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA 21
Primera parte. Efecto de la temperatura sobre la actividad enzimática 23
Segunda parte. Efecto del pH sobre la actividad enzimática 24
PRÁCTICA No. 4. DET. ESPECTROFOTOMÉTRICA DE CARBOHIDRATOS 26
Primera parte. Preparación de la curva de calibración 28
Segunda parte. Medición de la muestra problema (Jugo de caña) 28
PRACTICA No. 5. EXTRACCIÓN Y SEPARACIÓN DE ALGUNOS LÍPIDOS 32
Primera parte. Extracción y separación de lecitina y cefalina del huevo 34
Segunda parte. Extracción de lípidos totales del hígado 34
PRÁCTICA No. 6. REGULACIÓN ÁCIDO-BASE DEL ORGANISMO HUMANO 37
PRACTICA No. 7. OXIDACIONES BIOLÓGICAS 42
BIBLIOGRAFÍA 47
2
INTRODUCCIÓN
Las prácticas que se encuentran desarrolladas en este manual, están apegadas

al programa de la Teoría de la experiencia educativa sobre Bioquímica General
dentro del Modelo Educativo Integral y Flexible, con el objeto de que se
complemente de una manera práctica, el conocimiento adquirido en el aula,
reforzando de esa manera el aprendizaje, desarrollando las competencias que
necesita todo el profesionista del área de la Química.
Para lograr ese objetivo este manual se ha diseñado de tal manera que
inicialmente se encuentran las prácticas que de acuerdo al programa, ilustran y
complementan los temas que se estudian en esta experiencia educativa tales
como las referentes a las propiedades físicas y químicas de las proteínas y las
enzimas; posteriormente se realizan prácticas que son de gran importancia para
la predicción de los procesos bioquímicos tales como cinética química, catálisis y
oxidaciones biológicas.
Se incluyen también prácticas sobre el conocimiento de las propiedades de los

lípidos, y sobre los carbohidratos, como parte del estudio de las biomoléculas.
En algunas prácticas se emplea como materia prima algunas partes de

organismos vivos tales como músculos e hígado; así como algunos productos de
animales como saliva, sangre, huevos, etc.
El lenguaje utilizado en este manual es de estilo sencillo y fácilmente

comprensible para los alumnos que llevan a cabo formalmente su preparación
profesional en el área de la bioquímica, haciendo hincapié en aquellos detalles de
gran utilidad cotidiana.
Debido a la gran aplicación de esta Experiencia Educativa en el quehacer

profesional de los Ingenieros Ambientales, tanto en los procesos de
biorremediación como en el diseño de procesos enzimáticos que tiendan a
optimizar la eliminación de muchos contaminantes de tipo orgánico, tales como
hidrocarburos, pesticidas, insecticidas, fertilizantes, etc. Es muy importante el
estudio de la Bioquímica General gracias a la cual es posible percatarse
claramente de la interacción de las sustancias agresivas del entorno con los
delicados procesos biológicos tanto animales como vegetales.
3
UNIDAD DE COMPETENCIA
El estudiante en el laboratorio determina las características físicas y químicas de

las biomoléculas más importantes tales como las proteínas, los carbohidratos y los
lípidos, mediante pruebas químicas, mediciones de parámetros físicos y
observaciones organolépticas; así también utiliza las condiciones adecuadas para
llevar a cabo reacciones enzimáticas, determinando la cinética química de las
mismas. Por otra parte, hace evidente la presencia de enzimas y su actividad en
diversos productos del organismo como la saliva, la sangre y el tejido muscular,
elaborando las gráficas correspondientes para la determinación de la velocidad de
la reacción. Reporta los resultados de una manera clara y ordenada
organizándose en equipos de trabajo con actitud responsable, solidaria y
armónica.
MEDIDAS DE SEGURIDAD EN EL LABORATORIO
Para que el desarrollo de una práctica de laboratorio logre sus objetivos, deberán
seguirse ciertas normas de seguridad con el fin de evitar accidentes al realizar un
experimento; los estudiantes deben seguir con mucho cuidado todas las
instrucciones de su profesor y del manual de prácticas.
A continuación se enumeran una serie de indicaciones:
I. Antes de iniciarse las sesiones experimentales, el profesor o los
encargados de los laboratorios deben:
a. Cerciorarse de que todas las llaves de las mesas de trabajo, en
especial las que están conectadas al gas, funcionen
perfectamente y no haya fugas.
b. Asegurarse de que la campana de extracción de gases y la
regadera de presión tengan un buen funcionamiento.
c. Dar a conocer la ubicación de los extintores, la regadera, el
lavaojos, el botiquín de primeros auxilios, y darles instrucciones
para su manejo en caso de emergencia.
d. Revisar que todo el material de laboratorio, especialmente el de
vidrio, no este roto o estrellado.
II. Antes de realizar la práctica, el estudiante debe ponerse la bata de
trabajo, la cual deberá ser de algodón y los lentes de seguridad.
III. Cuando se trabaje con sustancias que desprendan vapores tóxicos, se
recomienda trabajar en la campana de extracción.
IV. Se prohíbe el uso de lentes de contacto en el laboratorio
V. En la mesa de trabajo deben estar exclusivamente el material y las
sustancias con las cuales se va a experimentar, el manual de prácticas
4
para seguir las instrucciones y la bitácora de laboratorio.
VI. No se debe ingerir alimentos, ni fumar en el laboratorio y menos durante
la realización de la práctica.
VII. Antes de encender el mechero, cerciorarse primero de que esté lo
suficientemente alejado de sustancias volátiles o combustibles y en
seguida prender el cerillo, colocarlo en la boca del mechero y luego abrir
la llave del gas.
VIII. Al usar un reactivo, leer la etiqueta del frasco para evitar equivocaciones
que puedan ser peligrosas.
IX. Para agitar el contenido de un tubo de ensayo no debe taparse la boca
del tubo con el dedo, sino tomar con una mano el extremo abierto y con
la otra aplicar pequeños golpes en la parte inferior.
X. Cuando se caliente cualquier dispositivo, para retirarlo del fuego deben
utilizarse las pinzas adecuadas.
XI. Al calentar sustancias en un tubo de ensaye, éste debe colocarse en
forma inclinada, nunca vertical, y orientado de tal forma que si ocurren
proyecciones no caigan sobre las personas que están en los
alrededores, especialmente en la cara.
XII. Al calentar líquidos en tubos de ensaye, éstos no deben sostenerse
directamente sobre la flama, sino que deben retirarse de vez en cuando,
agitando en forma continua para facilitar la salida de burbujas de gas del
fondo del tubo y así evitar proyecciones.
XIII. Al hervir líquidos en recipientes más grandes, debe agitarse el contenido
con una varilla de vidrio o añadir una o dos perlas para ebullición, con lo
cual se evitará alguna proyección.
XIV. Nunca debe mezclarse el resultado de una reacción con el de otra si no
está indicado en las instrucciones de la práctica.
XV. Cuando se desee diluir un ácido concentrado, nunca debe verterse al
agua sobre el ácido, sino al contrario; el ácido debe añadirse con sumo
cuidado deslizándose lentamente sobre las paredes del recipiente que
contenga el agua.
XVI. Nunca debe probarse y menos ingerirse alguna sustancia química.
XVII. Una sustancia química no debe olerse directamente y menos si se
acaba de calentar. En vez de ello, la muestra se coloca a unos 15 cm de
la nariz y se atraen los vapores abanicándolos con una mano.
XVIII. Cuando se desprenden gases tóxicos en una reacción en cantidades
que pueden afectar el sistema respiratorio, será preciso realizar el
experimento en la campana de extracción, además de evitar una
exposición prolongada a dichos gases.
XIX. Para trabajar con tubos de vidrio será preciso redondear los extremos
filosos directamente en la flama del mechero.
5
XX. Para introducir un tubo de vidrio o un termómetro (previamente
humedecido) en tapones horadados, debe sostenerse el tapón con una
mano y con la otra empujar poco a poco el tubo o el termómetro,
haciéndolo girar como si fuera un sacacorchos para evitar su
rompimiento y, por lo tanto cortaduras en las manos.
XXI. En caso de sufrir un accidente al manipular el equipo de trabajo, debe
acudirse inmediatamente con el profesor y de ser necesario con él
medico.
XXII. Al término de la práctica se debe: Lavar, entregar y/o guardar el material
que se utilizó; cerrar perfectamente los frascos de los reactivos y
cerciorarse de que queden bien cerradas todas las llaves,
especialmente las de gas. (13)
RECOMENDACIONES A LOS ALUMNOS
El estudiante debe:
Cuidar que los reactivos solamente se introduzcan en materiales de

laboratorio, limpios, secos y a temperatura ambiente.
Lavar siempre el material que se va a emplear antes de cada
determinación, enjuagarlo muy bien con agua de la llave para eliminar
cualquier residuo de detergente y después escurrirlo sobre una toalla
o papel absorbente, durante el tiempo necesario para que se seque. Si
quedan algunas gotas adheridas en el interior es necesario secarlas
ya sea utilizando una porción de papel absorbente si el material es de
boca ancha, en caso contrario, calentando el material con el mechero
bunsen durante unos minutos procurando que la salida del aire
caliente se dirija hacia arriba y después esperar el tiempo necesario
para que se enfríe.
Leer el procedimiento de las prácticas antes de ejecutarlas.
Rotular cuidadosamente cada uno de los reactivos y soluciones
empleadas para evitar confusiones entre ellas.
Observar minuciosamente y críticamente cada uno de los cambios
ocurridos y registrar cuidadosa y ordenadamente: los cambios de
color, de aspecto, de temperatura, la velocidad de las reacciones,
olores percibidos, desprendimiento de gases, etc., así como los datos
numéricos de las mediciones efectuadas, y todo aquello que se
considere necesario, en su bitácora de laboratorio, señalando el
número y nombre de la práctica así como la fecha en que se
realizaron las anotaciones.
6
Realizar cuidadosamente sus experimentos, procurando entender el
porqué de los hechos.
Consultar los libros de texto o investigar en Internet antes y después
de la ejecución de las prácticas para comprender él porque de las
operaciones que se han de ejecutar, así como para aclarar las dudas
que surjan al realizar sus experimentos, para llegar a sus propias
conclusiones.
Cuidar la higiene y evitar la contaminación al trabajar con animales y
productos de origen animal.
7
INSTRUCTIVO PARA LA ELABORACIÓN DE
REPORTES
1. Anotar el sustento teórico, las competencias, las tablas de materiales y

reactivos y el procedimiento de la práctica.
2. Después del procedimiento, colocar el diagrama de bloques y las

observaciones con las imágenes.
3. Anotar los resultados en el espacio correspondiente y redactar una

discusión sobre los mismos, basados en las observaciones realizadas.
4. Redactar la conclusión en relación con las competencias que se pretende

desarrollar en los estudiantes.
5. Resolver el cuestionario.
6. Colocar la fotografía del Vo. Bo. obtenido en la bitácora de laboratorio.
7. Anotar la fecha en que se realizó la práctica.
8. Subir el archivo electrónico del reporte a la plataforma EMINUS en el

periodo indicado para ello.
9. Realizar las correcciones indicadas por la docente en el reporte en la

retroalimentación.
8
EXPERIENCIA EDUCATIVA: _BIOQUÍMICA GENERAL_______
PRÁCTICA No. 1
PROPIEDADES QUÍMICAS DE LAS PROTEÍNAS
SUSTENTO TEÓRICO
Las reacciones de desnaturalización y precipitación de proteínas explican los

efectos del calor o de los metales pesados y ácidos sobre la actividad de las
enzimas.
La reacción de Biuret debe su nombre a que también es positiva con la biurea,
por poseer un enlace peptídico. El color se debe a la formación de un complejo de
coordinación de Cobre con 4 átomos de N peptídico.
La reacción de Biuret así como la reacción xantoproteica, se deben a la presencia
de aminoácidos fenólicos en la proteína, siendo la tirosina la más frecuente.
COMPETENCIAS
El estudiante:
 Realiza reacciones de desnaturalización y precipitación de proteínas, que
tienen importancia en métodos de separación de algunas proteínas.
 Lleva a cabo reacciones de color típicas del enlace peptídico (reacción de
Biuret) y la reacción xantoproteica.
DESCRIPCIÓN DE LA PRÁCTICA
En esta práctica se realizarán 5 reacciones de precipitación de proteínas

mediante adición de: 1) alcohol o cetona, 2) metales pesados, 3) ácidos orgánicos
fuertes, 4) sulfato de amonio (salting out) y 5) reactivo de Esbach, la precipitación
de las proteínas se debe a que sufren una desnaturalización (cambio de
conformación estructural) en presencia de los reactivos mencionados
También se realizarán 2 reacciones coloridas de las proteínas: 1) la reacción de
Biuret, la cual da positiva en presencia de las uniones peptídicas, comunes en las
proteínas y 2) la reacción Xantoproteica, que sirven para identificar las proteínas
9
que contienen aminoácidos aromáticas en su molécula.
MATERIAL
14 Tubos de ensaye 13 x 100 mm

Gradilla
Embudo de filtración
Soporte y anillo metálico
Mechero bunsen
1 Vaso de pp de 250 mL
2 vaso de pp de 150 mL
Pinzas para tubo de ensaye
4 Papel filtro
Agitador de vidrio
Piseta de 250 mL
Papel pH
Balanza analítica
2 pipetas graduadas de 5 mL
REACTIVOS
2 mL de Caseína al 0.5 %
3 mL de Acido nítrico concentrado
2 mL de NH4OH concentrado
2 mL de Solución A de Biuret
2 mL de Solución B de Biuret
5 gotas de Solucion de PdCl2 al 5%
5 gotas de sol. de AgNO3 al 5 %
2 mLde Etanol al 95%
2 mL de sol. de Acido Tricloroacético al 5 %
2 mL de sol. saturada de sulfato de amonio.
2 mL de sol. de sulfato de amonio al 50 %
2 mL de sol. de sulfato de amonio al 10 %
4 mL de solución de Ninhidrina
3 mL de Reactivo de Esbach
MATERIAL BIOLÓGICO:
Clara de huevo diluida 1:5 (Diluir la clara de 2
huevos con 4 partes de agua destilada).
20 mL de Solución de gelatina al 0.5 %
10
PROCEDIMIENTO
1. Precipitación de proteína con etanol o acetona. Los alcoholes y la

acetona son agentes desnaturalizantes de proteínas ya que las
deshidratan al competir por el agua de solvatación y por lo tanto las
precipita.
 A 2 mL de clara de huevo diluida, se agregan 2 mL de alcohol al 95%
o de acetona. Se anota el resultado observado.
2. Precipitación por metales pesados. Las proteínas cuando se encuentran
en solución a pH superiores a su punto isoeléctrico son capaces de
reaccionar con diferentes metales pesados formando los correspondientes
proteinatos insolubles.
 Se preparan 2 tubos con 1 mL de clara de huevo diluida cada uno.
 Se agrega a uno de ellos, 5 gotas de AgNO3 al 5% y al otro 5 gotas
de PdCl2,. Se mezcla bien y se anota el resultado. (Si no ocurre
precipitación compruebe el pH).
3. Precipitación de gelatina con reactivo de Esbach. La gelatina es una
proteína desnaturalizada proveniente de la acción del calor sobre el
colágeno. No precipita con ácidos fuertes ni da la reacción del núcleo
fenólico (xantoproteíca), pero sí precipita bastante selectivamente con el
reactivo de Esbach.
 A 3 mL de gelatina al 0.5% se le agrega 3 mL de reactivo de Esbach.
Se anota el color del precipitado. Se calienta suavemente y se anota
el cambio que se observe.
4. Reacción del Biuret. Todas las moléculas que contengan 2 o más

uniones peptídicas, por lo tanto todas las proteínas y todos los péptidos no
menores de 3 unidades, dan positiva esta reacción. El nombre se debe al
compuesto biurea (NH2-CO-NH-CO-NH2) el cual da positiva la prueba.
 A 2 mL de clara de huevo diluida y a 2 mL de gelatina al 0.5%, se les
agrega lentamente y agitando, 1 mL de solución A de Biuret (NaOH al
40%).
 Después se agrega gota a gota y agitando, 1 mL de solución B de
Biuret (CuSO4 al 1%). Se anota el cambio de color.
 Obsérvese que un exceso de sulfato de Cobre, por su color propio,
puede enmascarar la reacción. Se anota y se comparan los
resultados de los dos tubos.
5. Reacción Xantoproteica. Esta reacción se debe a la formación de
nitroderivados aromáticos por reacción del ácido nítrico sobre grupos
bencénicos que poseen algunos aminoácidos como la fenilalanina, la
11
tirosina y el triptofano. Por lo tanto la dan positiva todas aquellas proteínas
que tengan aminoácidos aromáticos en su molécula.
 Se prepara una serie de 3 tubos de ensayo, numerados; se agrega
en cada uno 2 mL de las siguientes soluciones: Caseína, Gelatina y
clara de huevo.
 Se añade 1 mL de ácido nítrico concentrado, se calienta ligeramente
y se observa una coloración amarilla característica.
 Se deja enfriar la solución y se añaden cuidadosamente unas gotas
de hidróxido de amonio concentrado, resbalando por las paredes del
tubo, para lograr la estratificación. En la interfase se observará un
anillo naranja.
6. Precipitación con ácidos orgánicos fuertes. Los ácidos fuertes son
capaces de desnaturalizar a las proteínas formando productos insolubles.
 A 2 mL de clara de huevo diluida, se agrega lentamente y agitando, 1
mL de disolución de ácido tricloroacético (TCA).
 Se filtra.
 El filtrado, que debe ser transparente, se trata con 1 mL de disolución
de ninhidrina para demostrar que no hay proteínas. Si la reacción con
ninhidrina es positiva (en caliente) quiere decir que la reacción no fue
cuantitativa, por la falta de agitación o porque se requiere mas TCA.
7. Precipitación Salina (Salting Out). Por regla general, las proteínas en
solución son menos solubles cuando se aumenta la fuerza iónica y esto se
puede lograr adicionando sales solubles como el sulfato de amonio. Sin
embargo, la concentración para precipitar diferentes proteínas es variable.
Esta diferencia en sensibilidad se ha utilizado para separar y purificar
proteínas, por ejemplo, las albúminas y globulinas de la clara de huevo
 Se pesan exactamente 3 papeles filtro y se anotan los pesos.
 Se toman 2 mL de solución de clara de huevo, se diluyen en 2 mL de
agua destilada y se agrega agitando, 2 mL de disolución saturada de
sulfato de amonio.
 Se filtra a través de uno de los papeles pesados.
 En el filtrado se determina la presencia de las proteínas, con
ninhidrina.
 Se repite el procedimiento con otros 2 mL de clara diluida, usando
ahora una disolución al 50% de sulfato de amonio y con otros 2 mL,
utilizando disolución al 10% de la misma sal.
 Se dejan secar perfectamente los papeles, se pesan y se anotan los
pesos de los 3 precipitados obtenidos que han quedados retenidos
en los papeles filtro.
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MANEJO DE RESIDUOS Y SUBPRODUCTOS
El contenido de uno de los tubos de la precipitación por metales pesados (el

precipitado con cloruro de paladio) se coloca en un frasco rotulado:
Proteína + PdCl2
El contenido de los demás tubos es inocuo y puede desecharse de la siguiente

manera:
Sólidos: Se depositan en una hoja de papel y se colocan en el bote de la basura.
Líquidos: Se desechan en el lavabo.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Anote sus resultados en la siguiente tabla:
Reacción
Acidos
Etanol o Metales Xantopro- Salting-
Esbach Biuret Orgánicos
Sustancia acetona pesados teica Out
fuertes
Gelatina
Caseína
Clara de
huevo
CONCLUSIÓN
CUESTIONARIO
1. Escriba la reacción de formación de biurea por calentamiento de la urea

2. Escriba la formula del Complejo de coordinación de la biurea con los iones
Cu2+
3. Escriba la formula del ácido tricloroacético y el valor de su constante de
disociación. Explique porque es un ácido tan fuerte.
4. Investigue la composición del reactivo de Esbach.
5. Explique por qué se tiñe de amarillo la piel al contacto con el HNO 3.
13
6. ¿Tiene alguna influencia el pH en el efecto de los metales pesados sobre
las proteínas?
BIBLIOGRAFÍA
 LENHINGER, A. (1991) Bioquímica. 15ª edición. Ed. Omega. Barcelona,

España.
 MATHEWS, C. K., VAN HOLDE, K. E. (1998). Bioquímica. 2ª edición. Ed.
McGraw-Hill. Interamericana, España.
ARTÍCULOS RELACIONADOS CON LA PRÁCTICA
LUQUE Guillén M. Victoria. (2009). Estructura y propiedades de las proteínas. Master

Ingeniería Biomédica. http://www.uv.es/tunon/pdf_doc/proteinas_09.pdf
Vo. Bo.
Fecha:
14
EXPERIENCIA EDUCATIVA: _BIOQUÍMICA GENERAL____
PRÁCTICA No. 2
CINÉTICA QUÍMICA Y CATÁLISIS
SUSTENTO TEÓRICO
La velocidad de una reacción química puede medirse por varios métodos. Uno de
los más utilizados consiste en tomar muestras de la mezcla reaccionante, a un
tiempo dado, suspender la reacción y analizar los componentes de la mezcla en
ese momento. Esto en ocasiones no es fácil, ya que muchas reacciones en
solución acuosa son instantáneas.
Las reacciones químicas de acuerdo a la teoría del complejo enzima-sustrato, por
el número de moléculas que toman parte en ellas se clasifican en:
 Monomoleculares, cuando participa una sola moléculas: A B
 Bimoleculares, cuando participan dos moléculas: A+B AB
 Trimoleculares, cuando participan 3 moléculas simultánemente:
A+B+C ABC
Cuando se estudia la cinética de una reacción, tiene más importancia conocer el
orden de la reacción que el tipo. El orden de una reacción nos indica la relación
entre la velocidad y la concentración de los reactivos, por lo que se clasifican en
reacciones de:
Orden cero En estas reacciones, la velocidad no es afectada por la
concentración. Está determinada por algún otro factor limitante
como absorción de luz, velocidad de difusión, etc.
Primer orden Son aquellas en las que, la velocidad de reacción es
directamente proporcional a la concentración de una de las
sustancias reaccionantes.
Segundo Son aquellas en las cuales la velocidad de la reacción es
orden proporcional a la concentración de 2 sustancias reaccionantes.
Tercer orden Son aquellas en las cuales la velocidad de reacción es
proporcional a la concentración de 3 sustancias reaccionantes.
15
La mayor parte de las reacciones enzimáticas se caracterizan por seguir el
modelo correspondiente a las reacciones de primer orden.
Matemáticamente, la reacción puede representarse así: Kc = dc / dt . . . . . . (1)
Siendo: Kc = Constante específica de la velocidad de reacción.
dc = Diferencial de la concentración.
dt = Diferencial del tiempo.
Si representamos por:
s = Concentración inicial del sustrato.
x = Cantidad de sustrato que ha reaccionado en un intervalo de
tiempo.
s – x = Concentración del sustrato en el tiempo
t = Tiempo.
La ecuación (1) puede expresarse en función de s, x y t y al integrarla nos queda:
2.303 s
Kc = ----------- log ----------- . . . . . . . . . . . . . . . . (2)
t s–x
Cuando se ha completado la descomposición de la mitad del sustrato, la ecuación
se simplifica:
s = 2 (s-x)
Kc = (2.303 / t1/2) log [2(s-x) / s-x]
Finalmente nos queda:
t1/2 = 0.693 / Kc . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . (3)
Donde t1/2 es el período de vida media, es decir, el tiempo necesario para que se
descomponga la mitad de una cantidad dada de sustrato.1
COMPETENCIAS
El estudiante:
 Predice la velocidad de una reacción química y describe el curso de la
misma.
 Determina el orden de reacción de la descomposición del peróxido de
hidrógeno catalizada por la enzima peroxidasa.
1
UACAM:2002
16
Esta práctica se realizará en dos partes:

 En la primera parte se llevará a cabo la valoración volumétrica del contenido de
peróxido de hidrógeno en un frasco comercial de agua oxigenada, mediante
una titulación de óxido-reducción empleando permanganato de sodio
previamente valorado. Una vez hecha la cuantificación, se guarda el frasco en
el almacén de la facultad a 21ºC aproximadamente.
 En la segunda parte se medirá la actividad de la enzima peroxidasa, presente
en la sangre humana, adicionando a una solución sanguínea diluida, una
cantidad exactamente medida de peróxido de hidrógeno, y cronométricamente
se detiene la reacción en porciones de la mezcla a los 30, 60, 120, 300 y 600
segundos, añadiendo ácido sulfúrico y disminuyendo la temperatura en baño
de hielo. Posteriormente se realiza la valoración volumétrica mediante
permanganimetría del contenido de peróxido de hidrógeno que quedó sin
descomponerse por la acción de la peroxidasa.
 Se establecerá mediante fórmulas matemáticas la velocidad inicial de la
reacción(Vo) en cada matraz, la constante específica de la velocidad de la
reacción (Kc), y se grafica la velocidad (Vo) en función del tiempo.
MATERIAL
5 Matraz erlenmeyer de 250 mL

Pipeta volumétrica de 10 mL
Matraz volumétrico de 100 mL
Soporte metálico
Pinzas para bureta
Bureta ámbar
Vaso de pp de 50 mL
Baño maría
Embudo de separación
Anillo metálico
Probeta de 25 mL
Reloj o cronómetro
Traer: Hielo en las dos sesiones
REACTIVOS
Primera y segunda parte:
60 mL de Peróxido de hidrógeno nuevo
60 mL de ácido sulfúrico 1:4
Solución de KMnO4 0.1 N
Segunda parte:
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50 mL de sangre desfibrinada al 0.06 %
PROCEDIMIENTO
Primera parte. Valoración del peróxido de hidrógeno
1. Se toma una alícuota del frasco de agua oxigenada comercial (se recomiendan
10 mL).
2. Se afora a 100 ml en un matraz volumétrico, con agua destilada.
3. Se toma una alícuota de 10 mL de esta dilución y se coloca en un matraz
Erlenmeyer de 250 mL que contenga 100 mL de agua destilada, acidulando
con 30 mL de H2SO4 (1:4).
4. Se enfría con baño de hielo y se titula con solución 0.1 N de Permanganato de
potasio colocada en una bureta ámbar. (Ver figura 7). El punto final de la
titulación lo observará cuando persista un ligero color rosa, por exceso de la
solución de permanganato.. NOTA: En la titulación con el permanganato, las
primeras proporciones se decoloran con lentitud, debido a que se requiere la
formación de sulfato de manganeso, el cual actúa como catalizador de la
reacción.
5. Se realiza la determinación por duplicado y si los resultados no coinciden se
repite el procedimiento.
6. Se calcula la cantidad de Peróxido presente en la muestra mediante la fórmula:
V x N x meq. x 100 x Factor de dilución
gr % de H 2O2 = ---------------------------------------------------------
alícuota
Donde:
V = mL de KMnO4 gastados en la titulación.
N = Normalidad del KMnO4.(meq./mL)
meq. del Peróxido de hidrógeno = 0.017 gr / meq.
Factor de dilución: 10
Alícuota = mL de muestra colocados en el matraz.
7. Se calcula la equivalencia de los gramos % obtenidos en moles/L. Esto
representa el valor de s (Concentración inicial).
8. Se guarda el Peróxido de hidrógeno valorado en el almacén del laboratorio,
anotando en la etiqueta los moles/L de H2O2 calculados y el equipo
correspondiente.
Segunda parte: Determinación del orden de la reacción
18
1. Se colocan en cada uno de 5 matraces Erlenmeyer de 250 mL, 100 mL de
agua destilada y 30 mL de ácido sulfúrico. Se rotulan de la manera siguiente:
30 segundos, 1 minuto, 2 minutos, 5 minutos y 10 minutos respectivamente y
se colocan en un baño de hielo durante 15 minutos.
2. Se coloca un embudo de separación de 250 mL en un anillo metálico sujeto a
un soporte metálico. Se le depositan 50 mL de sangre desfibrinada al 0.06 %.
3. Registrando cuidadosamente los datos con un cronómetro o un reloj con
segundero, se adiciona al embudo 50 mL de la solución de peróxido de
hidrógeno valorada en la sesión anterior. No se agita ni se le coloca el tapón al
embudo.(SE ANOTA LA HORA DE PREPARACIÓN DE LA MEZCLA CON
EXACTITUD).
4. Exactamente 30 seg. después de agregar el peróxido, se abre la llave del
embudo y se miden 10 mL de la mezcla en una probeta de 25 mL, resbalando
el líquido por las paredes de la probeta, realizando esta acción lo más rápido
posible y sin tomar en cuenta la espuma que se forme después de la medición;
se transfiere cada muestra a los matraces erlenmeyer que contienen la mezcla
agua/H2SO4 fría para detener el proceso enzimático y se titulan con solución
de permanganato de potasio 0.1 N, en la forma ya explicada. Se toman 4
muestras más a los 60, 120, 300 y 600 seg.
5. Se calculan los g % de Peróxido de hidrógeno que quedan en cada matraz al
detener el proceso enzimático a determinado tiempo, aplicando la misma
fórmula del inciso 4 (eliminando el factor de dilución) y calculando los moles/L.
Estos valores representan la concentración final en cada matraz : x
6. Se anotan los resultados en la tabla correspondiente y se realizan los cálculos
indicados.
7. Se elabora una gráfica colocando el valor de Vo en el eje Y y el tiempo (en
segundos) en el eje X.
MANEJO DE RESIDUOS Y SUBPRODUCTOS:
El contenido de los matraces puede desecharse en el drenaje
t (seg) mL de KmnO4 (s-x) mol L-1 Vo : Log (s / s-x ) Kc = 2.303/t [log (s / s-
Eje X Eje Y x)]
0
30
60
120
180
300
19
CONCLUSIÓN
CUESTIONARIO
1. Investigar la reacción de óxido-reducción que se produce en la titulación

del peróxido de hidrógeno con el permanganato de potasio.
2. ¿Cuál es la razón de utilizar el ácido sulfúrico en la titulación?
BIBLIOGRAFÍA
BOHINSKI, R. C. (1991). Bioquímica. 5ª edición. Ed. Addison - Wesley

Iberoamericana, E. U. A.
LENHINGER, A. (1991) Bioquímica. 15ª edición. Ed. Omega. Barcelona, España.
MATHEWS, C. K., VAN HOLDE, K. E. (1998). Bioquímica. 2ª edición. Ed.
McGraw-Hill. Interamericana, España.
CINÉTICA ENZIMÁTICA
file:///C:/Users/SEARS/OneDrive/BIOQUIMICAS/BIOQU%C3%8DMICA%202015/
art%C3%ADculo%20sobre%20cin%C3%A9tica%20enzim%C3%A1tica.pdf
Vo.Bo.
FECHA
20
PRÁCTICA No. 3
FACTORES QUE MODIFICAN LA

ACTIVIDAD ENZIMÁTICA
SUSTENTO TEÓRICO
La vida depende de una serie de reacciones químicas cuyo curso y velocidad

están determinados por la presencia de diversos catalizadores orgánicos
denominados enzimas: (del griego: en = en, zymo = fermento). La definición de
enzimas dada por Woldschmidt y Leitz las describe como: catalizadores
producidos por las células, pero que pueden actuar fuera de ellas a
diferencia de vitaminas y hormonas. La mayor parte de las reacciones
biológicas serían cinéticamente insignificantes si no fuera por las enzimas.
La mayor parte de las enzimas, desde el punto de vista químico, son compuestos
que pertenecen al grupo de las proteínas (aunque algunas sólo reaccionan
asociadas a un grupo no proteico, grupo prostético o coenzima). Debido a su
carácter proteínico, las enzimas son muy sensibles a cualquier cambio físico,
químico o fisicoquímico. Así, cualquier cambio en la temperatura, el pH, la fuerza
iónica, la adición de sales, la presencia de agentes oxidantes o reductores, la
presencia de metales pesados, etc., producen modificaciones profundas en su
actividad. En general, cualquier factor que sea capaz de desnaturalizar a las
proteínas será capaz de alterar su actividad.
La velocidad de cualquier reacción cambia al modificarse la temperatura, debido
a los cambios de energía cinética. Generalmente por cada 10 °C de cada
aumento en la temperatura se duplica la velocidad: esto se conoce como la
reacción de Van’t Hoff., o coeficiente de temperatura QT 10  2.
Sin embargo, debido a la constitución proteínica de las enzimas, las temperaturas
altas producen desnaturalización y una marcada disminución en la actividad
catalítica.
21
Para la gran mayoría de enzimas de animales homotermos, la temperatura
óptima está alrededor de 37 °C; cerca de 60 °C la mayor parte de las proteínas se
inactivan.
El pH es uno de los factores que más afecta la actividad de las enzimas, ya que
afecta la estabilidad de la moléculas por desnaturalización, o bien afecta su carga
eléctrica. Muchos de los grupos ionizables presentes en la molécula de la enzima
pueden ser necesarios para la catálisis y los cambios de pH afectan el grado de
ionización.
Para que se realice la unión en el complejo enzima-sustrato es necesaria una
adecuada distribución de cargas en ambas moléculas. El pH óptimo es aquel en
el cual ciertos grupos funcionales poseen la carga apropiada para asegurar la
formación del complejo ES en las mejores condiciones.
Además como ya se mencionó, los pH extremos provocan desnaturalización de
la molécula enzimática y por tanto, inactivación de la misma.
Cada enzima posee un pH óptimo en el cual su actividad es máxima; para la
mayoría de las enzimas, la actividad óptima se encuentra entre los valores de pH
de 6 a 8. Sin embargo, existen excepciones, por ejemplo, para la pepsina del jugo
gástrico es máxima a un pH de 1.5 que es muy ácido, o para la fosfatasa alcalina
que se encuentra en huesos y otros órganos cuyo pH óptimo es de 9.5.
COMPETENCIA
El estudiante:
Determina el efecto que producen algunos factores sobre la actividad enzimática.
Esta práctica se realiza en dos partes.

En la primera parte se coloca almidón como sustrato en 6 tubos de ensaye y en
presencia de una solución amortiguadora de pH, se pone en contacto con la
enzima amilasa, la cual cataliza la ruptura del almidón en moléculas de
monosacárido, y cada uno de los tubos se pone en condiciones diferentes de
temperatura.
Después de 15 minutos de reacción en esas condiciones, se enfrían los tubos y
se les agrega el reactivo de Fehling A y B, el cual tiene la capacidad de producir
un precipitado rojo de cobre en presencia de los monosacáridos los cuales son
azúcares reductores, de esa manera se podrá determinar si hubo ruptura del
polímero y cuáles fueron las condiciones óptimas de temperatura en que la
enzima amilasa actuó para producir mayor ruptura del almidón.
En la segunda parte, similar a la primera, los tubos con almidón y la enzima
22
amilasa se ponen en contacto con soluciones con diferente valor de pH. En este
caso se determina que valor de pH es el óptimo para que la enzima amilasa
actuara para favorecer la ruptura del polímero.
MATERIAL
Probeta graduada de 50 mL
Agitador de vidrio
8 tubos de ensaye de 13 x 100 mm
Gradilla
Tripié metálico
Mechero bunsen
Tela de alambre con asbesto REACTIVOS
Vaso de pp de 400 mL
Cuba hidroneumática
Traer Hielo en la primera sesión

Primera sesión
Sustrato de almidón 8 mg/mL
Solución (1:80) de amilasa salival
Solución reguladora de fosfatos 0.02 M pH = 7
Reactivos de Fehling A y Fehling B
Segunda sesión:
Sustrato de almidón 8 mg/mL
Solución (1:80) de amilasa salival
Soluciones reguladoras de pH = 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9
y 10
Solución de NaOH 2N
Reactivos de Fehling A y Fehling B
PROCEDIMIENTO
PRIMERA PARTE: Efecto de la temperatura sobre la actividad enzimática
1. Se prepara una solución (1:80) de amilasa salival, diluyendo 0.25 mL de saliva

en 19.75 mL de agua destilada. (Esta solución debe prepararse utilizando
material perfectamente limpios y usarse inmediatamente, ya que las enzimas
en soluciones diluídas se inactivan con facilidad. Se recomienda conservar
esta solución en baño de hielo).
2. Se prepara una serie de siete tubos como se indica:
23
Reactivos Tubo No.
1 2 3 4 5 6 7
Sustrato de almidón 8 mg/mL - 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
Solución reguladora de fosfatos 0.02 - 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5
M pH = 7
Agua 5 3 3 3 3 3 3
Incubar 5 minutos a: 25°C 5°C 25°C 40°C 50°C 60°C 92°C
Enzima: Solución (1:80) de amilasa - 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
salival
Se agitan bien los tubos
Incubarlos 15 minutos a: 25°C 5°C 25°C 40°C 50°C 60°C 92°C
Se agrega a cada tubo 1 mL de R. de Fehling A y 1 mL de R. de Fehling B (*)
Se agitan bien los tubos.
Se ponen en baño maría a ebullición durante 5 minutos.
(*) Nota: Este reactivo desarrolla un color rojo caoba en presencia de azúcares
reductores.
3. Se enfrían los tubos y sin agitarlos se observa el sedimento formado,

empleando el tubo 1 como blanco.
SEGUNDA PARTE: Efecto del ph sobre la actividad enzimática.
1. Prepare una serie de 8 tubos de ensayo, siguiendo las instrucciones de la

siguiente tabla:
Reactivos Tubo No.

1 2 3 4 5 6 7 8
Sustrato de almidón 8
- 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
mg/mL
Solución reguladora al pH pH=7 pH=3 pH=5 pH=6 pH=7 pH=8 pH=9 pH=10
indicado:
mL: 5 4 4 4 4 4 4 4
Enzima: Solución (1:80)
- 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
de amilasa
Se agitan bien los tubos y se incuban a 40 °C por 15 minutos.
Se agregan a cada tubo 0.5 mL de NaOH 2N y se agitan bien
Se agrega a cada tubo 1 mL de R. de Fehling A y 1 mL de R. de Fehling B
Se agitan bien los tubos.
Se ponen en baño maría a ebullición durante 5 minutos.
2. Se enfrían los tubos y sin agitarlos se observa el sedimento formado,

empleando el tubo 1 como blanco.
MANEJO DE RESIDUOS Y SUBPRODUCTOS

24
El contenido de los tubos puede desecharse en el drenaje.
Primera parte:
Se anotan los resultados indicando mediante cruces la cantidad de precipitado

producido en cada uno de los tubos en el cuadro siguiente:
Temperatura (°C) 5 25 40 50 60 92
Reacción de Fehling
Segunda parte:
Anote sus resultados indicando mediante cruces la cantidad de precipitado

producida en cada uno de los tubos en el cuadro siguiente:
pH 3 5 6 7 8 9 10
R. de Fehling
Se analizan los resultados obtenidos y se sacan las conclusiones
CONCLUSIÓN
CUESTIONARIO
1. En base a los resultados obtenidos diga ¿Cuál es el pH óptimo para la

actividad de la amilasa salival?
2. En base a los resultados obtenidos diga ¿Cuál es la temperatura óptima
para la actividad de la amilasa salival?
3. ¿Cuál es el azúcar que se libera en la hidrólisis del almidón?
4. Investigar qué es un azúcar reductor.
BIBLIOGRAFÍA
25
BELLO Gil Daniel, CARRERA Bocourt Emilia, DIAZ Maqueira Yuset. (2006).
Determinación de azúcares reductores totales en jugos mezclados de caña de
azúcar utilizando el método del ácido 3,5 dinitrosalicílico. Instituto Cubano de
Investigaciones de los Derivados de la Caña de Azúcar. Cubanstituto Cubano de
Investigaciones.
http://www.redalyc.org/pdf/2231/223120664006.pdf
Cuba
Vo.Bo.
FECHA
26
PRÁCTICA No. 4
DETERMINACIÓN ESPECTROFOTOMÉTRICA DE CARBOHIDRATOS
SUSTENTO TEÓRICO
Sumner y colaboradores desarrollaron un método utilizando el ácido 3,5

dinitrosalicílico (DNS) para calcular la concentración de azúcares reductores en
distintos materiales. El procedimiento se basa en una reacción redox que ocurre
entre el DNS y los azúcares reductores presentes en la muestra. Este método ha
sufrido varias modificaciones a través de los años para adecuarse al análisis de
diferentes materiales y su principal ventaja radica en su alta sensibilidad y
productividad debido a que es un método espectrofotométrico.
El método del DNS no es recomendable utilizarlo para la determinación de
azúcares reductores en muestras intensamente coloreadas como mieles y caldos
de fermentación que la contengan. Estudios de Otero y colaboradores muestran
dispersión en la determinación de azúcares reductores en mieles por el método
del DNS con la modificación de Miller.
En la actualidad, en especial la producción de alcohol a partir de jugos mezclados
de caña de azúcar necesita del desarrollo de nuevos procedimientos analíticos:
precisos, de elevada productividad y de poca manipulación técnica que permitan
llevar con exactitud la contabilidad y eficiencia global del proceso.
En este trabajo se desarrollará un procedimiento para la determinación de
azúcares reductores totales en jugos mezclados de caña de azúcar por el método
del ácido 3,5 dinitrosalicílico.
COMPETENCIA
El estudiante:
Determina la cantidad de azúcares reductores presentes en el jugo de la caña de

azúcar mediante un método espectrofotométrico.
27
Esta práctica se realizará en dos sesiones:
En la primera sesión, se elaborará la curva de calibración de la glucosa
preparando una serie de tubos de ensayo con diluciones de concentración
conocida, a partir de una solución STD de glucosa, y se pondrá en contacto con
el reactivo dinitro salicílico (DNS), calentando a ebullición durante 5 minutos, para
obtener el desarrollo de color el cual podrá ser medido, una vez enfriado a
temperatura ambiente, mediante un espectrofotómetro UV-visible a una longitud
de onda definida, registrando la absorbancia de luz por la muestra. La intensidad
de la coloración resulta directamente proporcional a la concentración de la
glucosa en cada muestra. Con los datos obtenidos se procede a obtener la curva
de calibración, graficando la concentración contra la absorbancia de cada tubo.
En la segunda sesión, se centrifugará y filtrará una muestra de jugo de caña y se
procederá a obtener la inversión de los azúcares en la muestra mediante un
tratamiento con ácido clorhídrico diluido y calentamiento; después de un tiempo
de reacción deberá neutralizarse con hidróxido de sodio y posteriormente se
realizarán diluciones acuosas de la muestra de jugo de caña invertido (JCI)
Se preparará una serie de 5 tubos con diluciones de las muestras de JCI, se
pondrán en contacto con el reactivo DNS, se calentarán a ebullición por 5 minutos
y después se enfriarán. Se tomarán las lecturas de absorbancia a cada uno de los
tubos a la misma longitud de onda de la primera sesión, en el mismo
espectrofotómetro empleado por los operarios.
Con los datos obtenidos (absorbancias) de las muestras de jugo de caña se
determinará el contenido de glucosa de las mismas empleando para ello la curva
de calibración elaborada en la primera sesión.2
MATERIAL

2 Gradillas para tubo de ensaye
Papel fitro de filtrado rápido
4 matraces volumétricos de 50 mL
Vaso de 600 mL
Mechero Bunsen
Tripié metálico
Tela de asbesto
Termómetro
Piseta con agua destilada
5 pipetas graduadas de 5 Ml
2
ICIDCA. 2006
28
EQUIPO
Espectrofotómetro UV-visible
Centrífuga de 10,000 rpm
Potenciómetro
REACTIVOS
Reactivo DNS
HCl al 50 % en agua
NaOH al 10 % en agua
Sol. STD de glucosa de 1.5 g/L
Jugo de caña de azúcar
PROCEDIMIENTO
Primera parte. Preparación de la curva de calibración.

1. Se prepara una gradilla con 7 tubos de ensaye de 13 x 100 mm para
preparar 5 mL de las siguientes concentraciones: Blanco, 0.5, 0.7, 0.9, 1.1,
1.3 y 1.5 g/L de glucosa a partir de la solución STD con 1.5 g/L de este
azúcar, roturándolos adecuadamente y procediendo de la siguiente
manera.
Tubo Blanco 0.5 0.7 0.9 1.1 1.3 1.5

mL de STD glucosa 1.5 0.0 1.67 2.33 3 3.67 4.3 5
g/L
mL de agua 5 3.33 2.67 2 1.33 0.7 0
2. Agitar los tubos cuidadosamente y preparar en otra gradilla otros 7 tubos

de ensaye de 13 x 100 mm, rotulándolos adecuadamente de acuerdo a las
instrucciones siguientes:
1.5 /1000 mL = 0.0015 g/mL x 1.67= 0.0025 g/5 mL =
Tubos Blanco 0.5 0.7 0.9 1.1 1.3 1.5
mL de los tubos anteriores 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
mL de Reactivo DNS 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
Agitar cuidadosamente
Colocar 5 minutos en un vaso de pp de 600 mL con 200 mL de agua a
100ºC
Enfriar a temperatura ambiente
Agregar a cada tubo 5 mL de agua destilada
29
Leer la absorbancia de cada tubo a 540 nm en un espectrofotómetro
UV-visible. Llevar a cero el instrumento con el blanco de reactivos.
Trazar la grafica de la curva de calibración: concentración (Eje X) vs
absorbancia (Eje Y)
Segunda parte. Medición de la muestra problema (Jugo de caña)
1. Medir 10 mL de jugo de caña de azúcar, colocarlo en un tubo de

ensaye de 18 x 150 mm y centrifugarlo 10 minutos a 10,000 rpm. Filtrar
el sobrenadante en un papel de filtrado rápido.
2. Colocar con una pipeta volumétrica 0.5 mL del jugo filtrado en un tubo
de ensaye de 18 x 150 mm, agregarle 2.5 mL de HCl al 50 %, mezclar
bien.
3. Colocar el tubo en un vaso de 600 mL que tenga aproximadamente 100
mL de agua de la llave a una temperatura de 65 ºC y mantenerlo ahí
durante 10 minutos a esas condiciones.
4. Se deja enfriar a temperatura ambiente y se vacía a un vaso de pp de
100 mL procurando enjuagar el tubo con 5 mL de agua destilada;
agregar otros 15 mL de agua destilada al vaso. Neutralizar la solución
con NaOH al 10 % apoyándose con un potenciómetro.
5. Vaciar la solución cuantitativamente a un matraz volumétrico de 50 mL,
aforar con agua destilada y rotularlo como jugo de caña invertido
(JCI).
6. Preparar 5 tubos de ensaye de 18 x 150 mm rotulados de la siguiente
manera: Blanco, 25%, 50%, 75% y 100%.
7. Preparar las diluciones de la manera siguiente:
Tubo Blanco 25 % 50 % 75 % 100 %

mL de Sol. JCI 0 2.5 5 7.5 10
mL de Agua 10 7.5 5 2.5 0
8. Agitar perfectamente estos tubos y preparar otra gradilla con 5 tubos

de ensaye de 13 x 100 mm y numerarlos adecuadamente, de acuerdo
a las siguientes instrucciones:
Tubo Blanco 25% 50% 75% 100%

mL de los tubos 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
anteriores
mL de reactivo DNS 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
Colocar 5 minutos en un vaso de pp de 600 mL con 200 mL de agua a
30
100ºC
Enfriar a temperatura ambiente
Agregar a cada tubo 5 mL de agua destilada
Leer la absorbancia de cada tubo a 540 nm en un espectrofotómetro
UV-visible. Llevar a cero el instrumento con el blanco de reactivos.
Determinar la concentración de glucosa en cada tubo, utilizando la
curva de calibración elaborada en la sesión anterior.
.
MANEJO DE RESIDUOS:
El contenido de los tubos puede desecharse en el drenaje.
Primera parte:
Datos obtenidos
Tubo Concentración Absorbancia
(g/L de glucosa)
0 (Blanco) ---- 0.0000
1 0.5
2 0.7
3 0.9
4 1.1
5 1.3
6 1.5
Curva de calibración:
Segunda parte:
Concentración de la glucosa en el jugo de la caña.
Tubo Absorbancia Concentración de glucosa (g/L)

7 (25%)
8 (50 %)
9 (75%)
10 (100%)
Nota: La concentración del Jugo de Caña Invertido se obtiene de la gráfica de la

concentración de la glucosa
31
CONCLUSIÓN
CUESTIONARIO
1. Realizar los cálculos para la preparación de las diluciones de la glucosa a

partir del STD de glucosa al 1.5 g/L
2. Investigar la reacción redox que ocurre entre el DNS y los azúcares
reductores presentes en la muestra.
BIBLIOGRAFÍA
ICIDCA. 2006. Determinación de azúcares reductores totales en jugos mezclados

de caña de azúcar, utilizando el método del ácido 3,5-dinitrosalicílico. Instituto
Cubano de Investigaciones de los derivados de la caña de azúcar.
Vo.Bo.
FECHA
32
PRÁCTICA No. 5
EXTRACCIÓN Y SEPARACIÓN DE ALGUNOS LÍPIDOS
SUSTENTO TEÓRICO
Los lípidos son un conjunto de moléculas orgánicas (la mayoría biomoléculas)

compuestas principalmente por carbono e hidrógeno y en menor medida oxígeno,
aunque también pueden contener fósforo, azufre y nitrógeno. Tienen como
característica principal el ser hidrófobas (insolubles en agua) y solubles
en disolventes orgánicos como la bencina, el benceno y el cloroformo. En el uso
coloquial, a los lípidos se les llama incorrectamente grasas, ya que las grasas
son solo un tipo de lípidos procedentes de animales.
Los lípidos cumplen funciones diversas en los organismos vivientes, entre ellas la
de reserva energética (como los triglicéridos), la estructural (como
los fosfolípidos de las bicapas) y la reguladora (como las hormonas esteroides).
Las grasas y los aceites son usualmente mezclas de glicéridos mixtos, es decir,
ésteres del glicerol con diversos ácidos grasos. Los ácidos grasos más
abundantes en las plantas y los animales superiores, tienen un número par de
átomos de carbono, tales como ácidos saturados palmítico (C16) y esteárico (C18);
y los no saturados oléico y linoléico.
La yema es la porción amarilla del huevo; está recubierta por la membrana
vitelina que la separa de la clara y la protege de una posible rotura. El color está
determinado principalmente por la dieta de la gallina. Puede presentar una
mancha rojiza, que corresponde al disco germinativo, a partir de la cual se
desarrollaría el pollo en caso de que el huevo hubiera sido fecundado. Es una
dispersión de diferentes tipos de partículas suspendidas en una solución proteíca.
La cantidad de proteína sobre sustancia seca es de 31,1% y la de grasa del
65,8%, con gran cantidad de lipoproteínas de baja densidad (LDL) ricas en
colesterol. La fase continua (78%) está formada por un extracto seco de proteínas
globulares y lipoproteínas de baja densidad (LDL), mientras que la fase dispersa
(20%) lo está con proteínas globulares y lipoproteínas de alta densidad (HDL).
Normalmente el hígado tiene 5 g de contenido de grasa por cada 100g de peso,
siendo los fosfolípidos los que más abundan llegando a constituir
33
aproximadamente hasta el 50% del contenido total, en menos proporción (7%) se
hayan los triglicéridos y colesterol no esterificado (1).
COMPETENCIAS
El estudiante:
1. Aisla lípidos a partir de materiales biológicos.
2. Extrae y separa de la yema de huevo, dos grupos de lípidos muy
importantes, ambos conocidos como fosfolípidos, por contener fósforo:
Lecitinas y Cefalínas.
3. Extrae los lípidos totales del hígado.
Esta práctica se realizará en dos sesiones:

En la primera se llevará a cabo una extracción de los lípidos presentes en la
yema del huevo, mediante solventes éter etílico. Posteriormente se lleva a
cabo la precipitación de los fosfolípidos empleando la acetona, los que se
separan de los demás por filtración y finalmente se separan la lecitina de la
cefalina, aprovechando la solubilidad de la primera en alcohol frío.
En la segunda sesión se extraerán los lípidos totales del hígado de un animal,
mediante extracción con éter y alcohol en caliente, para después eliminarlos
por evaporación y hacer una purificación mediante redisolución con éter de
petróleo para filtrar las impurezas y obtener los lípidos mediante el secado del
líquido filtrado.
MATERIAL
1 vaso de pp de 100 mL
Agitador de vidrio
Embudo de filtración rápida
3 Papeles filtro
Soporte metálico
Anillo metálico
Tubo de ensaye de 18 x 150 mm
Cuba para baño maría
Parrilla eléctrica
Balanza granataria
Navaja o bisturí
Mortero con pistilo
Guantes desechables
34
2 Matraz Erlenmeyer de 125 mL
Termómetro de 0 a 100 °C
Probeta de 100 mL
Bolsas de polietileno
REACTIVOS
Acetona
Etanol
Éter etílico
Éter de petróleo
Sulfato de sódio anhidro
Mezcla Etanol-Éter 3:1
Hielo
Muestras biológicas:
1 huevo de gallina
1 hígado de pollo o de otro
animal.
PROCEDIMIENTO
PRIMERA PARTE. Extracción y separación de Lecitina y Cefalina del huevo.
1. Se separa la yema de un huevo en un vaso de precipitado de 100 mL

(pesado previamente vacío) y se pesa.
2. Se agrega 10 mL de éter etílico o un poco más hasta cubrir totalmente la
yema y se agita con una varilla de vidrio para homogeneizar bien.
3. Se agrega lentamente y sin dejar de agitar, un volumen de acetona igual al
de éter. Se observará que la acetona provoca la precipitación de los
fosfolípidos, en tanto que las grasas y el colesterol permanecen disueltos.
4. Se filtra la mezcla obtenida en un papel filtro previamente pesado,
después de dejar en reposo unos minutos. El precipitado -que contiene
lecitina y cefalina- se lava con alcohol bien frío, recibiendo el filtrado en un
tubo de 18 x 150 mm, seco, limpio y pesado.
5. La lecitina es más soluble en alcohol frío por lo tanto queda en el papel
filtro únicamente cefalina.
6. Para obtener la lecitina, se evapora el alcohol lentamente en baño de
vapor. Se dejan secar los dos precipitados y se pesan.
7. Se calcula el porcentaje de lecitina y cefalina presentes en la yema de
huevo examinada.
35
SEGUNDA PARTE: Extracción de lípidos totales del hígado.
1. Se pesa el hígado del animal y se anota este peso.

2. Se corta el tejido en fragmentos pequeños y se ponen en un mortero una
porción de 2.0 g, con un peso igual de sulfato de sodio anhidro.
3. Se muele la mezcla en el mortero hasta obtener una pasta homogénea.
4. Se agregan 5 mL de alcohol y se continúa homogeneizando.
5. Se transfiere la papilla a un matraz erlenmeyer de 125 mL ayudándose con
3 porciones más de alcohol, de 5 mL cada una, de modo que quede limpio
el mortero.
6. Se coloca el matraz en un baño de agua a 70°C y se mantiene agitando a
esa temperatura durante 10 minutos.
7. Se deja enfriar y se agregan 10 mL de éter etílico para completar la
extracción;
8. Se agita bien y se deja reposar hasta que se asiente bien.
9. Se filtra el sobrenadante por decantación recibiéndolo en otro matraz
erlenmeyer de 125 mL y se agrega al residuo otra porción de 10 mL de
mezcla de alcohol-éter en proporción 3:1; que se calienta a 70°C y se filtra
en la misma forma.
10. Se repite por tercera vez la extracción con otros 10 mL de mezcla alcohol-
éter. Se evapora el éter en los filtrados reunidos, colocando el matraz en el
baño caliente, sin flama, hasta que no se desprenda olor a disolventes.
11. Se enfría el matraz y se agregan 10 mL de éter de petróleo, agitando, para
volver a disolver los lípidos.
12. Se filtra, recibiendo el filtrado en una probeta seca y lavando el residuo con
éter de petróleo hasta completar un volumen total de filtrado de 25 mL.
13. Se vacía en una cápsula de porcelana previamente pesada y se elimina el
solvente por evaporación.
14. Se pesa la cápsula con los lípidos secos y se descuenta el peso de la
cápsula.
15. Se calcula el contenido de grasa en el hígado completo.
MANEJO DE RESIDUOS Y PRODUCTOS

Colocar todos los desechos sólidos biológicos en bolsas de plástico, amarrarlas
perfectamente bien y depositarlos en el bote de la basura.
36
Primera parte
Pesada de los materiales vacíos:

Peso del vaso de pp de 100 mL seco_____________ gr
Peso del tubo de 18 x 150 mm seco______________ gr
Peso del papel filtro___________________________ gr
Pesada de los materiales con muestra:

Peso del vaso de pp de 100 mL más la yema ________________gr
Peso del papel filtro con la cefalina secos ___________________ gr
Peso del tubo de 18 x 150 mm con la lecitina secos ___________ gr
Peso de la yema del huevo __________________gr

Peso de la lecitina_________________________ gr
Peso de la cefalina_________________________ gr
Porcentaje de lecitina en la yema _____________

Porcentaje de cefalina en la yema _____________
Segunda parte
Peso del hígado completo _________________________ gr

Peso de la cápsula vacía seca _______________________ gr
Peso de la cápsula con los lípidos secos____________ gr
Peso de los lípidos en 2 gr de muestra de hígado ______________gr

Contenido de grasa en el hígado completo ___________________ gr
CONCLUSIÓN
CUESTIONARIO
1. Escriba Las fórmulas estructurales de todos los productos de hidrólisis de

la 1-a-lecitina (dioleil fosfatidil colina)
2. Escriba la formula general de la cefalina
3. ¿En que consiste la condición patológica conocida como “hígado graso”, y
cuales son sus causas más frecuentes?
37
BIBLIOGRAFÍA
PEÑA Carrasco Juan Diego. HIGADO GRASO. Unidad de Videoendoscopia

digestiva. Hospital Clínica Kennedy.
http://www.gastroenterologosecuador.com/patologias/higado.htm
Vo.Bo.
FECHA
38
PRÁCTICA No. 6
REGULACIÓN ÁCIDO-BASE DEL ORGANISMO HUMANO
SUSTENTO TEÓRICO
Dentro de los mecanismos de regulación de que dispone el organismo para

mantener la Integridad fisiológica, aquellos involucrados en la homeostasis del pH
en los fluidos extracelulares desempeñan un papel crucial para la supervivencia
del individuo.
En este sentido cabe señalar que, como resultado de la oxidación de los
alimentos, un humano adulto promedio produce alrededor de 20 moles de CO2 al
día. Al difundir a la sangre, gran parte de dicho gas se combina con al agua en el
interior de los eritrocitos, produciendo ácido carbónico (H2CO3), reacción que es
seguida por la disociación del H2CO3 para producir el anión bicarbonato HCO3 - y
un ión hidrógeno (H+). Dado el carácter de ácido débil del H2CO3, la fracción
disociada del mismo es pequeña; sin embargo, considerando la gran cantidad de
CO2 que produce el organismo, la acidificación de los fluidos extracelulares sería
importante en ausencia de mecanismos reguladores.
En el hombre, la intervención de los pulmones y los riñones evita que ocurra tal
acidificación manteniendo en un nivel constante la concentración de H+ y, por
consiguiente, del pH. Para entender el papel que juegan ambos órganos en la
homeostasis del equilibrio ácido-base, debe tenerse presente que el sistema del
ácido carbónico implica la participación de un componente gaseoso o volátil (el
CO2) y dos componentes no volátiles (el HCO3 - y el H+). En la sangre, el
equilibrio entre dichos componentes determina el valor del pH sanguíneo, que
puede evaluarse mediante la bien conocida ecuación de Henderson-Hasselbach.
En el individuo normal, dicho valor fluctúa en un promedio 7.4, siendo la sangre
venosa –enriquecida en CO2 - ligeramente más ácida en relación con la sangre
arterial. Ahora bien, ya que a temperatura ambiente el CO2 existe en estado
gaseoso, la cantidad de CO2 disuelto en la sangre dependerá de la presión
parcial (PCO2) ejercida por el mismo a nivel de los alvéolos pulmonares. En el
humano, la magnitud de dicha PCO2 es de aproximadamente 40 mm Hg lo que se
traduce en una concentración de CO2 sanguíneo de aproximadamente 25 mm
Hg; este último valor incluye no solo el CO2 como tal, sino también el bicarbonato
y el ácido carbónico.
39
Considerando el pH sanguíneo normal y el pKa del sistema bicarbonato-ácido
carbónico, es precisamente la PCO2 la que es controlada por los pulmones, ya
que durante el proceso de la exhalación se elimina CO2, manteniendo constante
la PCO2 en los alvéolos y evitando así que aumente el nivel de CO2, disuelto en la
sangre. Todo proceso o patología que se manifieste en una alteración en la
frecuencia y/o profundidad del proceso de inhalación-exhalación, dará como
resultado una alteración de la PCO2 alveolar – aumentándola o disminuyéndola,
con la siguiente modificación del nivel de CO2 disuelto en sangre y por
consiguiente, del pH.
Por lo que respecta a los riñones, su participación en el mantenimiento de un pH
extracelular constante se da a través de dos mecanismos: la excreción de
equivalentes ácidos (H+) hacia la orina y la regulación de la cantidad de HCO3-
reabsorbido hacia la sangre desde el filtrado glomerular. A diferencia del
intercambio gaseoso en los pulmones, los mecanismos de regulación renal son
de largo plazo, por lo que su efecto será manifiesto en cuestión de horas.
Su importancia se enfatiza en situaciones patológicas donde se altera el
intercambio de gases pulmonar (es decir, en la acidosis y alcalosis respiratorias),
en cuyo caso es necesario aumentar o disminuir la tasa de reabsorción del HCO3-
, o bien en estados fisiológicos que producen cantidades importantes de ácidos
orgánicos (por ejemplo, en la diabetes no controlada o durante el ejercicio
intenso) donde se incrementa la excreción de H+ . Gran parte de este último
aparece en la orina acomplejado con el amoniaco en forma de ión amonio (NH4 +)
o asociado con el fosfato en forma de fosfato monobásico de sodio (NaH2PO4),
representando este último la llamada acidez titulable. En general, el pH de la
orina será un reflejo de la producción de ácidos no volátiles por el organismo. El
resultado final de los mecanismos fisiológicos que participan en el mantenimiento
del equilibrio ácido-base es el de mantener el pH extracelular en un rango
compatible con el funcionamiento adecuado del organismo.3
COMPETENCIAS
El estudiante:
1. Comprueba las actividades reguladoras del pulmón y el riñón para
mantener el equilibrio ácido-base en condiciones que tienden a romperlo.
2. Mediante la determinación del pH, observa la variación de la concentración
de hidrogeniones en la orina de un individuo que ha realizado ejercicio
muscular intenso.
3. Mediante la medición del pH, observa la variación de la concentración de
hidrogeniones en la orina de un individuo que ha ingerido bicarbonato de
sodio.
3
UNAM: 2013-2014
40
4. Relaciona los resultados obtenidos con los cambios metabólicos originados
por el ejercicio muscular intenso y la alcalosis metabólica por ingesta de
bicarbonato de sodio.
Esta práctica consta de mediciones de pH en muestras de orina recolectadas,

durante una hora, de individuos sometidos a dos situaciones diferentes; uno
de ellos, realizando ejercicio intenso y el otro después de ingerir una cantidad
medida de solución de bicarbonato de sodio. En ambos casos se comprobará
la regulación que efectúa el organismo humano para mantener la homeostasis
del pH en los fluidos extracelulares.
MATERIAL
10 Fcos. de 100 mL de polietileno con tapa
EQUIPO
Potenciómetro o pHmetro
REACTIVOS
1500 mL de agua para beber embotellada

250 mL de solución de Bicarbonato de sodio al 3 %
Muestras de orina recién emitida en diversas condiciones
PROCEDIMIENTO
A. Variación de hidrogeniones por el ejercicio muscular intenso.
Dos alumnos por equipo desayunarán o comerán normalmente (evitar

ingestión de jugos ácidos, bebidas alcohólicas); después harán lo que se
indica a continuación.
Uno de los alumnos arriba mencionados efectuará lo siguiente:
1. Tomar 250 ml de agua una hora antes de la clase práctica. Vaciar la vejiga
y descartar esa orina.
2. Tomar 250 ml de agua inmediatamente antes de la clase práctica.
3. Recolectar aproximadamente 25 ml de orina en el frasco para muestra.
4. Medir el pH inmediatamente
41
5. Realizar ejercicio muscular intenso, como subir y bajar varias veces las
escaleras de tres o cuatro pisos u otro ejercicio sugerido por el profesor.
6. Obtener muestras de orina cada 15 minutos, como en el inciso 3, hasta
completar por lo menos cuatro muestras más.
7. A cada muestra se le determinará el pH inmediatamente después de haber
sido obtenida ya que con el tiempo el pH tiende a aumentar debido a la
pérdida de dióxido de carbono y a que el crecimiento bacteriano produce
amoniaco a partir de la urea.
8. Trazar una gráfica de pH contra tiempo.
B. Variación de hidrogeniones por la ingesta de Bicarbonato de sodio.
El segundo alumno que se preparó para la prueba, efectuará lo siguiente:

1. Tomar 250 ml de agua una hora antes de la clase práctica. Vaciar la vejiga
y descartar esa orina.
2. Tomar 250 ml de agua inmediatamente antes de la clase práctica.
3. Recolectar aproximadamente 25 ml de orina en el frasco para muestra
4. Medir el pH inmediatamente.
5. Ingerir 250 ml de agua con 7.5 g de bicarbonato de sodio.
6. Obtener muestras de orina cada 15 minutos, hasta completar por lo menos
4 muestras más.
7. A cada muestra se le determinará el pH inmediatamente después de haber
sido obtenida.
8. Trazar una gráfica de pH contra tiempo.
MANEJO DE RESIDUOS
Depositar las muestras de orina en el inodoro de la institución.
Valores de pH de la parte A.
pH de la muestra inicial de orina___________________

pH de la muestra de orina a los 15 minutos de iniciado el ejercicio___________
Valores de pH de la parte B.
pH de la muestra inicial de orina___________________
pH de la muestra de orina 15 minutos después de ingerir el NaHCO3 _________
42
A. Gráfica de la variación de pH en el tiempo por el ejercicio intenso.
B. Gráfica de la variación de pH en el tiempo después de la ingesta de

Bicarbonato de socio.
CONCLUSIÓN
CUESTIONARIO
1. ¿Por qué es importante que se mantenga constante, dentro de ciertos

límites, el pH en el organismo?
2. ¿Cuáles son las reacciones de formación del ácido carbónico (H2CO3) a
partir de CO2 y H2O, y de su disociación para formar el ion bicarbonato?
Escríbalas.
3. ¿Qué sistemas amortiguadores participan directamente en la regulación
del pH sanguíneo?
BIBLIOGRAFÍA
pH en el cuerpo humano y la salud. (2010). Enciclopedia de salud, dietética y

psicología.
http://www.enciclopediasalud.com/categorias/otros-temas/articulos/ph-en-el-
cuerpo-humano-y-la-salud
Vo.Bo.
FECHA
43
PRÁCTICA No. 7
OXIDACIONES BIOLÓGICAS
SUSTENTO TEÓRICO
De todas las propiedades que posee un ser vivo, quizá la más característica es su
capacidad para utilizar y transformar la energía del medio ambiente. Todos los
procesos químicos y físicos que están relacionados con la obtención de la
energía en un ser vivo se denomina respiración. Sin embargo, este término se
utiliza para designar simplemente la entrada y salida de aire de un
compartimiento a otro. Un término que cada día se utiliza más como sinónimo
bioquímico de respiración es bioenergética, aunque este término es más amplio
que respiración, ya que quedan incluidos los procesos fotosintéticos.
Todos los procesos químicos que constituyen la respiración conducen a la
oxidación de substancias denominadas metabolitos, hasta CO 2 y H2O. Por regla
general, todas las reacciones de oxidación son reacciones exergónicas, es decir,
liberan energía cuando se efectúan; en ocasiones toda la energía se libera como
calor, como ocurre cuando se quema u oxida un pedazo de madera.
Sin embargo, un organismo viviente no es una máquina térmica y, por tanto, debe
poseer un mecanismo enzimático que le permita capturar y almacenar la energía
liberada en los procesos de oxidación. La utilización o captura de la energía
involucra la participación de enzimas específicas, capaces de catalizar la
conversión del ADP en ATP (reacción endergónica).
Todas las oxidaciones biológicas se caracterizan por su rapidez y por la suavidad
con que se realizan, todas se llevan a cabo en medio acuoso, a pH generalmente
neutro y a bajas temperaturas. Esto confirma el hecho de pensar que todos estos
procesos son catalizados por enzimas.
Warburg fue uno de los primero investigadores que trató de explicar las
oxidaciones biológicas suponiendo una activación del oxígeno. Comprobó que
la velocidad de oxidación de varios aminoácidos era aumentada si añadía al
sistema “carbón de sangre”, pero no, si agregaba “carbón vegetal”.
Posteriormente pudo comprobar que el hierro que llevaba como impureza el
carbón de sangre era el responsable de la catálisis. Su teoría fue demostrada
plenamente al lograr aislar una enzima que contiene hierro. Actualmente se sabe
44
que en los tejidos existe un sistema de enzimas que contienen hierro, mediante el
cual el oxigeno molecular se activa y actúa como un agente oxidante.
Wieland observó que la activación del oxígeno era insuficiente para explicar las
oxidaciones tisulares. Consideraba que el proceso básico en la oxidación de los
metabolitos es la activación del hidrógeno por la acción de enzimas
denominadas deshidrogenasas, las cuales transportan el hidrógeno a diferentes
aceptores que pueden ser el oxígeno u otros agentes oxidantes.
Szent Györgyi coincilió las dos teorías al suponer que es necesaria la activación
del hidrógeno y también la del oxígeno. Keillin supuso que interviene, como
eslabón intermediario, el citocromo.
Sin embargo, las oxidaciones biológicas no son tan sencillas, pues se ha
comprobado que en la oxidación de cada metabolito intervienen una gran
cantidad de aceptores de hidrógeno.4
COMPETENCIA
El estudiante:
Demuestra la actividad de la deshidrogenasa láctica, basada en la reducción del

azul de metileno (aceptor de electrones) el cual al reducirse se decolora
formando una leucobase, y es simultánea a la oxidación del sustrato
correspondiente, por lo que la observación puede hacerse de manera cuantitativa.
En esta práctica se demostrará la actividad de la deshidrogenasa láctica presente

en los músculos de las patas de las ratas. Se aísla la enzima HDL mediante
extracción acuosa caliente, así como la coenzima NAD+ de estos tejidos mediante
la extracción con solución salina en frío, y posteriormente se ponen en contacto
con el sustrato de lactato (una sal del ácido láctico) y azul de metileno para
observar la reducción de éste al producirse la decoloración, la cual indica que la
oxidación del sustrato se llevó a cabo.
MATERIAL
4 vasos de pp de 100 mL
Balanza granataria
Matraz erlenmeyer de 125 mL
Una cuba para baño maría
Mechero bunsen, tripié y tela de asbesto
2 Morteros con pistilo
2 Tubos para centrífuga
4
UACAM:2002
45
Agitador de vidrio
Termómetro de 0 a 100 °C
Guantes, cubreboca y bolsas de
polietileno
Cuchillo filoso o bisturí
Un frasco grande de boca grande con
tapa
Una tabla para cortar
EQUIPO
Centrífuga
REACTIVOS
Eter etílico
Agua destilada
50 mL de Solución de NaCl al 0.9 %
4 mL de KCN al 0.5 %
3 mL de lactato de sodio al 1 %
1.5 mL de azul de metileno 0.002 M
Vaselina
Una rata blanca viva
Hielo
PROCEDIMIENTO
1. Se coloca un algodón impregnado con éter etílico en el interior de un
frasco grande con tapa.
2. Se introduce una rata en el frasco y cuando esté dormida se mata.
3. Se disecan los músculos de las patas traseras, se pesan por separado dos
porciones de 4 g cada una y se colocan en hielo.
Preparación de la coenzima (NAD+)
1. Se colocan en un matraz Erlenmeyer de 125 mL, 4 g de músculo de las

patas traseras (cortados en fragmentos pequeños).
2. Se agrega agua destilada en proporción de 1 a 6.
3. Se hierve durante 5 minutos.
4. Se colocan los fragmentos hervidos en un mortero y se trituran
perfectamente.
5. Se pasa el triturado a un tubo de centrífuga y se enjuaga el mortero con el
agua donde se hirvieron los fragmentos, pasando todo al mismo tubo.
46
6. Se centrífuga a 3,000 rpm durante 15 minutos.
7. Se recoge el sobrenadante y se etiqueta como coenzima NAD+.
8. Se desecha el precipitado.
Preparación de la enzima deshidrogenasa láctica (LDH).

1. Enfriar 50 mL de una solución de NaCl al 0.9 % y un mortero.
2. Colocar en el mortero ya frío, los otros 4 g de músculos de las patas de la
rata.
3. Se trituran perfectamente agregando la solución fría de NaCl en proporción
de 8 mL por gramo de tejido.
4. El triturado se transfiere a un vaso de precipitados y se deja reposar en frío
durante 30 minutos.
5. Se pasa a un tubo y se centrifuga en frío a 3,000 rpm durante 15 minutos.
6. Se recoge el sobrenadante y se etiqueta como deshidrogenasa láctica
(LDH).
7. El precipitado se desecha.
Demostración de la actividad de la LDH.
1. Preparar una serie de tubos como se indica a continuación:
Reactivos en mL Tubos No
1 2 3 4
KCN al 0.5 % 1.0 1.0 1.0 1.0
Lactato al 1 % 1.0 1.0 0.0 1.0
Azul de metileno 0.002 M 0.3 0.3 0.3 0.3
Agua destilada 0.0 1.0 1.0 1.0
Sobrenadante “Coenzima NAD+” 1.0 0.0 1.0 1.0
Sobrenadante “Enzima LDH” 1.0 1.0 1.0 0.0
Mezclar bien el contenido de cada tubo
Vaselina 0.5 0.5 0.5 0.5
2. Una vez agregada la vaselina, no agitar el contenido de los tubos.

3. Incubar en baño maría a 37 °C y hacer observaciones sobre la coloración
de los tubos a los 0, 10, 20 y 30 minutos.
4. Anote en el cuadro de resultados, el “grado de coloración” utilizando
“cruces” (de una a tres).
MANEJO DE RESIDUOS
Colocar todos los residuos biológicos en una bolsa de plástico, eliminar el aire del
interior y amarrarla perfectamente bien. Depositarla en los botes de basura del
área exterior del laboratorio.
47
RESULTADOS
Tubo No.
1 2 3 4
(minutos)
0
10
20
30
Explique sus resultados con base al contenido de cada tubo.
CONCLUSIÓN
CUESTIONARIO
1. Investigar la función biológica de la deshidrogenasa láctica.

2. Investigar la función biológica de la coenzima nicotín-adenín dinucleótido
(NAD+)
3. ¿Cuál es la diferencia entre enzimas y coenzimas?
BIBLIOGRAFÍA
ARANDA Torrelio Eduardo. (2010). Interpretación de la deshidrogenasa láctica

(DHL). Revista de la Sociedad Boliviana de Pediatría.
http://www.scielo.org.bo/scielo.php?pid=S1024-
06752010000200009&script=sci_arttext
Vo.Bo.
FECHA
48
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2. UNAM. (2013-2014). Manual de Bioquímica.
http://bq.unam.mx/wikidep/uploads/Main/Manual_2013-2014.pdf
3. UACAM.(2002). Manual de Bioquímica.
https://www.google.com.mx/search?newwindow=1&es_sm=93&q=Manual+
de+Bioqu%C3%ADmica.+Universidad+de+campeche&oq=Manual+de+Bio
qu%C3%ADmica.+Universidad+de+campeche&gs_l=serp.12...16009.2767
3.0.30576.34.27.7.0.0.4.327.3858.0j10j5j3.18.0.msedr...0...1c.1.61.serp..20
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Omega
5. LUQUE Guillén M. Victoria. (2009). Estructura y propiedades de las
proteínas. Master Ingeniería Biomédica.
http://www.uv.es/tunon/pdf_doc/proteinas_09.pdf
6. CINÉTICA ENZIMÁTICA
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7. BELLO Gil Daniel, CARRERA Bocourt Emilia, DIAZ Maqueira Yuset.
(2006). Determinación de azúcares reductores totales en jugos mezclados
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Instituto Cubano de Investigaciones de los Derivados de la Caña de
Azúcar. Cubanstituto Cubano de Investigaciones.
http://www.redalyc.org/pdf/2231/223120664006.pdf
8. Estudio del comportamiento de la fibra Lyocell frente a la hidrólisis
enzimática con
celulasas.file:///C:/Users/SEARS/OneDrive/BIOQUIMICAS/BIOQU%C3%8
DMICA%202015/Reaccion%20glucosa%20DNS%20Pag.%20142.pdf
9. PEÑA Carrasco Juan Diego. HIGADO GRASO. Unidad de
Videoendoscopia digestiva. Hospital Clínica
Kennedy.http://www.gastroenterologosecuador.com/patologias/higado.htm
10. pH en el cuerpo humano y la salud. (2010). Enciclopedia de salud, dietética
y psicología. http://www.enciclopediasalud.com/categorias/otros-
temas/articulos/ph-en-el-cuerpo-humano-y-la-salud
11. ARANDA Torrelio Eduardo. (2010). Interpretación de la deshidrogenasa
láctica (DHL). Revista de la Sociedad Boliviana de Pediatría.
http://www.scielo.org.bo/scielo.php?pid=S1024-
06752010000200009&script=sci_arttext
49
Esta tercera edición del manual de prácticas de laboratorio fue compilada,
modificada y actualizada por la Dra. Mirza Ema Ye Gómez, catedrática titular
de la Experiencia Educativa de BIOQUÍMICA GENERAL que se imparte a los
alumnos de Ingeniería Ambiental en la Facultad de Ciencias Químicas de la
Universidad Veracruzana, Campus Coatzacoalcos.
Coatzacoalcos, Ver., febrero de 2015.
50

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MANUAL DE PRÁCTICAS

Las prácticas que se encuentran desarrolladas en este manual, están apegadas

Se incluyen también prácticas sobre el conocimiento de las propiedades de los

En algunas prácticas se emplea como materia prima algunas partes de

El lenguaje utilizado en este manual es de estilo sencillo y fácilmente

Debido a la gran aplicación de esta Experiencia Educativa en el quehacer

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MEDIDAS DE SEGURIDAD EN EL LABORATORIO

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Cuidar que los reactivos solamente se introduzcan en materiales de

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2. Después del procedimiento, colocar el diagrama de bloques y las

3. Anotar los resultados en el espacio correspondiente y redactar una

4. Redactar la conclusión en relación con las competencias que se pretende

6. Colocar la fotografía del Vo. Bo. obtenido en la bitácora de laboratorio.

7. Anotar la fecha en que se realizó la práctica.

8. Subir el archivo electrónico del reporte a la plataforma EMINUS en el

9. Realizar las correcciones indicadas por la docente en el reporte en la

EXPERIENCIA EDUCATIVA: _BIOQUÍMICA GENERAL_______

PROPIEDADES QUÍMICAS DE LAS PROTEÍNAS

Las reacciones de desnaturalización y precipitación de proteínas explican los

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1. Se prepara una solución (1:80) de amilasa salival, diluyendo 0.25 mL de saliva

3. Se enfrían los tubos y sin agitarlos se observa el sedimento formado,

SEGUNDA PARTE: Efecto del ph sobre la actividad enzimática.

1. Prepare una serie de 8 tubos de ensayo, siguiendo las instrucciones de la

Reactivos Tubo No.

2. Se enfrían los tubos y sin agitarlos se observa el sedimento formado,

MANEJO DE RESIDUOS Y SUBPRODUCTOS

Se anotan los resultados indicando mediante cruces la cantidad de precipitado

Anote sus resultados indicando mediante cruces la cantidad de precipitado

Se analizan los resultados obtenidos y se sacan las conclusiones

1. En base a los resultados obtenidos diga ¿Cuál es el pH óptimo para la