Laboratorio de Análisis Instrumental Práctica # 5. Determinación colorimétrica del Hierro en soluciones acuosas por espectrometría.

Determinación colorimétrica del Hierro en soluciones acuosas

por espectrometría de absorción de luz visible
Mejías, Marian. Sulbarán, Betzabeth. Uzcategui, Ezequiel.
[email protected], [email protected], [email protected]
Laboratorio de Química Industrial
Escuela de Ingeniería Química. Departamento de Química Industrial y Aplicada
Mérida, estado Mérida, abril de 2018 Departamento de Química Industrial y Aplicada
Mérida, estado Mérida, abril de 2018

Resumen
Las mediciones fotométricas o espectrofotométricas se pueden emplear ara la localización del punto de equivalencia en
una titulación. Es por ello que esta técnica se utiliza para la determinación de la concentración de especies, siempre y
cuando el analito, producto o reactivo absorban radiación. De esta forma, la práctica se enfocó en la determinación de
la concentración de hierro en una solución mediante la titulación colorimétrica de su complejo (ferroína) el cual
absorbe en luz visible y la evaluación de los efectos del tiempo, pH y matriz sobre la estabilidad del mismo. Para ello,
fueron realizadas cinco experiencias: en la primera se preparó una solución de hierro, hidroxilamina y o-fenantrolina
y se le midió la absorbancia cada cinco minutos durante media hora y después cada 20 min en los cuales se concluyó
que la estabilidad del complejo coloreado se alcanza a un tiempo de 30 min; durante la segunda se realizó una
titulación colorimétrica, esto con el fin de encontrar la concentración de hierro en la muestra inicial, dando un valor
de 0,001916486 ±0,05 M; para la tercera se dejó fija la concentración, se varió el pH y se midió la absorbancia y
como estaba variaba, logrando descubrir que el pH óptimo para la formación de este complejo es 5. Al analizar la
variación de la absorbancia de la solución en función de las sales se concluyó que estas sales no producen una
variación significativa en la absorbancia del complejo coloreado; en la última se realizó un barrido espectral para la
primera solución. Finalmente, se realizó un barrido espectral para el complejo ferroína y se confirmó que la longitud
de onda óptima es 512 nm, ya que, a 512 nm, la absorbancia es máxima, por lo tanto, el producto coloreado, tendrá un
color intenso a dicha longitud de onda.

Introducción

La absorción de radiación por una especie es la interacción de los fotones incidentes con los
electrones de los orbitales atómicos (s, p, d, f) o moleculares (σ, π, n), que se presenta mediante las
etapas de excitación y relajación llevándose a cabo de forma continua mientras la especie se
exponga a la luz, lo que permite observar sus soluciones de un color determinado. (González &
Calderón, 2014). Las radiaciones electromagnéticas correspondientes a la región del UV-Vis.
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*
aportan la energía suficiente para que tengan lugar transiciones electrónicas entre orbitales σ→σ ;
* * *
n→σ ; π→π ; n→π , transferencia de cargas y, por último, de campos ligandos.

Figura 1. Niveles de Energía electrónicos de los orbitales moleculares. (Skoog, Holler, & Nieman, 2001)

Las propiedades espectrales de las moléculas orgánicas dependen del tipo de electrones de
valencia, de sus posibilidades cuánticas de absorción de radiación uv-visible y de la presencia de
grupos cromóforos en ellas. En la Figura 2 se muestra la estructura del grupo carbonilo donde se
ilustran los tipos de electrones de valencia.

Figura 2. Estructura del grupo carbonilo y tipos de electrones de valencia

Los electrones σ conforman los enlaces simples saturados u orbitales moleculares de enlace
del tipo σ, mientras que los electrones π conforman los enlaces múltiples no saturados u orbitales π.
Estos grupos no saturados son los que reciben el nombre grupos cromóforos.
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Por último, los electrones n son pares solitarios que no están enlazados y que ocupan un
orbital de no enlace. La aparición de color en algunas sustancias orgánicas está relacionada con la
presencia de uno o varios grupos cromóforos cuyos electrones π son excitados fácilmente por la
absorción de radiación de la región ultravioleta cercano y visible (200 – 800 nm), de energía
correspondiente (λ específica) a las posibilidades cuánticas para la transición electrónica. Dos
ejemplos clásicos y extremos son la zanahoria y el tomate cuyo color (naranja y rojo) se debe a la
presencia de β-carotenos cuyas moléculas contienen una alta conjugación de dobles enlaces
(polienos). En la Figura 3 se muestran las características de absorción de algunos grupos
cromóforos.

La absorción de radiación ultravioleta y visible en las moléculas orgánicas depende de estos

grupos funcionales (cromóforos) que contienen electrones de valencia de baja energía de excitación.
El espectro de estas moléculas es complejo, debido a la superposición de transiciones rotacionales y
vibracionales en las transiciones electrónicas que da una combinación de líneas sobrepuestas,
generando así una banda de absorción que a menudo parece continua. La compleja naturaleza de los
espectros hace difícil o imposible el análisis teórico detallado. No obstante, a partir de
consideraciones sobre los orbitales moleculares se pueden obtener conclusiones concernientes a este
tipo de transiciones electrónicas, responsables de un espectro de absorción dado. (Amézquita &
Mendoza , 2018).

Figura 3. Características de Absorción de algunos Cromóforos comunes (Skoog, Holler, & Nieman, 2001).
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De esta manera, la mayoría de las experiencias de espectroscopía de absorción en la zona

UV de compuestos orgánicos, está basada en las transiciones de los electrones n y π al estado
excitado π*. Esto, debido a que las bandas de absorción para estas transiciones caen en la región del
espectro UV-Visible (200 nm a 700 nm).

No obstante, al momento de formar especies absorbentes por añadidura de reactivos

adecuados es necesario tomar en consideración factores como: el pH ( vital en la formación de
complejos), la concentración de los reactivos (según la Ley de Beer), esperar el tiempo adecuado
para la medida (cuando el absorbente es estable y su formación es rápida, no es necesario
controlarlo), la temperatura necesaria, el orden de adición de los reactivos (A veces requiere una
secuencia específica), eliminación de interferencias (enmascaramiento, extracción de disolventes) y
la concentración de sales (altas concentraciones influyen sobre la absorción por la formación de
asociaciones iónicas). (González C. , 2010).

Numerosos reactivos reaccionan selectivamente con especies no absorbentes y generan

productos que absorben fuertemente en la región ultravioleta y visible. El éxito de la aplicación de
tales reactivos en el análisis cuantitativo requiere, normalmente, que la reacción de formación del
color sea prácticamente completa. Hay que señalar que los reactivos que generan color también se
utilizan, a menudo, para la determinación de especies absorbentes, como los iones de los metales de
transición; la absortividad molar del producto es con frecuencia, varios órdenes de magnitud
superior a la de las especies no combinadas.

Un gran número de agentes complejantes encuentran aplicación en la determinación de

especies inorgánicas. Los agentes quelantes orgánicos, que forman complejos coloreados estables
con los cationes, son por ejemplo la o-fenantrolina para la determinación del hierro.

Continuando con el mismo orden de ideas, las mediciones espectrofotométricas son

utilizadas para determinar el punto de equivalencia en una titulación, donde la especie de interés
absorbe radiación. En esta técnica, el gráfico a construir relaciona la absorbancia, corregida por
cambios de volumen, como una función del volumen de titulante y presenta dos regiones lineales
con pendientes diferentes, una que se ubica al comienzo de la titulación y otra después del punto de
equivalencia, tal como se observa en la Figura 4. De esta forma, el punto final será la intersección
de las líneas extrapoladas, por tal motivo, si la solución no cumple con la Ley de Beer, el gráfico
mostrará regiones curvas y no podrá determinarse el punto final.
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Figura 4.Curvas de valoración fotométrica características

En este contexto, la práctica se basó en determinar la concentración de hierro en una

solución problema por titulación colorimétrica de su complejo coloreado con o-fenantrolina, así
como en evaluar el efecto del tiempo, pH y composición de la matriz de la solución sobre la
precisión del análisis. Para ello, se añadió un exceso de clorhidrato de hidroxilamina como agente
reductor de la especie Fe+2 a Fe+3 y luego, como las soluciones de hierro casi no presentan color, fue
necesaria la formación de un complejo coloreado de hierro/fenantrolina denominado ferroína, todo
esto mediante las reacciones mostradas a continuación.

Reacción 1

Reacción 2

Materiales y Métodos

En primera instancia, se procedió a calibrar el espectrómetro Milton Roy Company modelo

Spetronic 20D+ de apreciación ± 0,01 A con agua como blanco, llevándolo a 0 % y 100 %
Absorbancia. Paso que fue realizada antes de cada medida de absorbancia con el blanco (agua
destilada). Posteriormente, para observar la estabilidad del color del complejo de hierro en función
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del tiempo se preparó una solución de 2 ml de hierro III con 0,5 ml de hidroxilamina al 10 %,
pasados unos minutos se le agregaron 1 ml de orto-fenantrolina y se enrazó con agua hasta alcanzar
25 ml, empleando pipetas de 5±0,01ml, 1±0,001ml y un matraz aforado de 25±0,1ml, para luego,
tomar medidas de absorbancia a una longitud de onda de 512nm cada 5 minutos por un espacio de
30 min y después cada 20 min hasta terminar todas las experiencias del laboratorio. Seguidamente,
para la determinación de la concentración de hierro en solución por titulación colorimétrica, se
prepararon siete soluciones iguales a la primera, pero variando el volumen añadido de orto-
fenantrolina como sigue; con 0,05; 0,1; 0,2; 0,3; 0,5; 1,5 y 2 ml y después se le midió la absorbancia
a 512nm. De igual manera, para evaluar la estabilidad del color en función del pH, se midió la
absorbancia a 512 nm a soluciones similares a la primera, pero a diferentes pH; 2, 4, 5, 9, y 12. Para
pH 5 se utilizó la solución ya preparada al principio, para pH 2 y 4 se añadieron gotas de acetato de
sodio, para pH 9 amoniaco concentrado y para pH 12 Hidróxido de sodio. Después, con el propósito
de conocer el efecto de las sales, alícuotas de la solución empleada en la primera experiencia, se
agregaron a la cubeta, se mezclaron en dos oportunidades con fluoruro de sodio (G.A 99%, MERK)
y oxalato de sodio (Allied Chemical Corporation), por separado, y se tomó lectura de la absorbancia
a 512nm para cada una. Finalmente, fueron recolectados los datos necesarios para la construcción
del espectro de absorción del complejo de hierro, midiendo la absorbancia para doce longitudes de
onda entre 375 y 625nm a la solución preparada durante la primera experiencia.

Resultados y Discusión de resultados

La reacción de formación del complejo coloreado de hierro/fenantrolina o ferroína se

muestra en la parte introductoria (reacción 2). La formación de este complejo se sabe que se da
porque en la reacción actúan dos reactivos, uno de estos es el sulfato de amonio y hierro II
hexahidratado (reacción 1) y el otro que es la orto-fenantrolina, donde el hecho de que haya la
presencia de muchos cationes metálicos por parte del primer reactivo, hace que sea un ácido de
Lewis ya que cede sus electrones que son aceptados por la orto-fenantrolina actuando esta última
como base de Lewis. Juntas Reaccionan para formar, un enlace covalente coordinado dando como
producto un complejo-tris de coordinación.

Previo a la formación del complejo, se debe agregar un agente reductor como la

hidroxilamina para que el ion fe+3 se reduzca, y quede en un estado de oxidación de fe+2 (reacción
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1), es por ello, que el agente reductor (clorhidrato de hidroxilamina) se adiciona antes de desarrollar
el color y así garantizar la formación del complejo coloreado por reacción de este anión reducido
(fe+2) ya que esta forma un complejo más adecuado con la orto-fenantrolina.

Por último, la formación del complejo de hierro (II) con fenantrolina se da a un pH entre 2 y
4, para la afirmación de la formación del complejo. Hay que tener en cuenta que, para certificar el
color rojo, es necesario adicionarle acetato de sodio incluso para evitar precipitados de sales de
hierro donde en la formación de un complejo incrementa la solubilidad de un compuesto
escasamente soluble.

Para el estudio de la estabilidad del complejo coloreado, se graficó la absorbancia del mismo
con respecto al tiempo a una longitud de ondas definida de 512 nm para los 4 grupos del laboratorio
(ver Figura 5), en la cual se puede apreciar que la absorbancia cambia con el tiempo, alcanzando
valores constantes para todos los grupos de laboratorio después de 30 minutos; tiempo en el cual
existe la permanencia de las características del complejo. En general, se puede afirmar que para este
intervalo de tiempo se desarrolla la máxima intensidad del color (máxima absorbancia). La
absorbancia a la cual se mantiene constante no es la misma para todos los grupos ya que depende de
otros factores como lo son el analista que preparo las muestras (llevando consigo errores humanos
al realizar las mediciones) o el espectrómetro utilizado por los grupos debido a que algunos
presentas ciertos desvíos por desgaste del equipo o por mal manejo del mismo. Solo los grupos 2 y
4 tuvieron la misma curva de estabilidad.

Estabilidad del complejo coloreado

0.65
0.63
0.61
0.59
Absorbancia

0.57 Grupo 1
0.55
0.53 Grupo 2
0.51 Grupo 3
0.49
Grupo 4
0.47
0.45
0 20 40 60 80 100 120 140 160
tiempo [min]

Figura 5. Estabilidad de color del complejo de hierro coloreado en función del tiempo a 512 nm.
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Seguidamente, se determinó la concentración de hierro en una solución por titulación

colorimétrica con o-fenantrolina, donde es necesario llevar el pH de la solución a 5 con acetato de
sodio, debido a que al agregar acetato de sodio a la solución; en la cual existe un equilibrio dado por
la reacción de formación de ferroína (reacción 2), el ion acetato establece un equilibrio con los
iones hidronio presentes, desplazando el primer equilibrio hacia la formación de ferroína.

Se midió la absorbancia para distintas concentraciones de solución de o-fenantrolina, que

permitió construir la Figura 6 (solo se analizó la del grupo 1, debido a que el grupo 2 y 4 no
presentan el comportamiento esperado, y el grupo 3 tiene prácticamente el mismo comportamiento
que el 1) de la cual se obtuvieron 2 rectas con r2 de 0,991 y 0,998 respectivamente, la primera con
mayor pendiente respecto a la segunda, comportamiento esperado para la titulación de una solución
que no absorbe radiación de luz visible con un titulante que absorbe poco, pero el producto
coloreado si lo hace con gran medida. Al inicio de la titulación, a medida que se forma la ferroína,
aumenta la absorbancia hasta llegar al punto de equivalencia a partir del cual la absorbancia tiende a
mantenerse constante, debido a que la producción de ferroína se detiene. La intersección de las
rectas se traduce en el punto de equivalencia y con este se obtuvo una concentración de FeCl de
0,001916486 ±0,05 M (ver muestra de cálculo para la obtención de este resultado)

Figura 6. Titulación colorimétrica, Absorbancia vs Volumen de o-fenantrolina.

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En cuanto a la estabilidad de color del complejo de hierro coloreado o ferroína en función

del pH, se midió Absorbancia para distintos pH, representados a continuación en la Figura 7:

Como se puede apreciar, la estabilidad del complejo en función del pH alcanza un máximo
de absorbancia a pH de 4, solo para el grupo 2, por lo tanto, este es el rango de acidez que favorece
la formación de la ferroína. En cambio para los demás grupos el estudio de la misma no fue
satisfactorio ya que las tendencias para estos grupos no presentaron un máximo de absorbancia
notable y los resultados muestras una línea que baja y sube sin un patrón fijo, manteniéndose casi
constante, estos puede deberse a que los instrumentos utilizados para realizar las soluciones estaban
contaminados por mal lavado (caso que les paso al grupo 1) o que las pipetas con las que se
tomaban las muestras se habían contaminado, o simplemente que el equipo reporto mal los valores
de absorbancia.

Figura 7. Estabilidad del complejo coloreado en función del pH a 512 nm.

Por otro lado, para el estudio de la estabilidad del complejo de hierro coloreado en función
de las sales se tiene que, existe una variación de la absorbancia de la solución a medida que se
agregan distintas sales al sistema (ver Tabla 2). Estas variaciones en la absorbancia son causas de
un desplazamiento en el equilibrio, donde los incrementos de absorbancia indican que el equilibrio
se desplazó hacia la formación de ferroína o a la estabilización de la misma. Por otro lado, el flúor,
los oxalatos pueden formar complejos con el hierro. Dependiendo de la estabilidad entre estos
complejos y la ferroína la absorbancia puede disminuir o aumentar en función si se forman nuevos
complejos, disminuyendo la cantidad de ferroína y por lo tanto de la absorbancia. En nuestro caso la
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absorbancia no cambio considerablemente al agregar estos dos tipos de sales, lo que nos lleva a
decir que, o las sales estaban contaminadas con impurezas y esto no nos permitió apreciar de
manera cuantificable la influencia de las mismas con respeto a la matriz salina, o simplemente la
cantidad de sal agregada no produce un cambio considerable en la absorbancia.

Como se puede apreciar en la Figura 4, el barrido espectral obtenido de la solución

patrón de hierro confirma que la longitud de onda óptima para la realización de la
experiencia es 512 nm; es decir, es el valor en el cual existe el máximo de absorbancia, lo
que significa que el color es intenso a esta longitud de onda, por lo tanto, es la apropiada
para el estudio colorimétrico de hierro.

Barrido Espectral
0.61
0.51
Absorbancia

0.41
0.31
0.21 Grupo 1
0.11
0.01
370 420 470 520 570 620
Longitud de ondas [nm]

Figura 8. Espectro de absorción del complejo coloreado o ferroína.

Conclusiones

 Los métodos espectrométricos de absorción de luz visible tienen aplicabilidad
en el análisis de sustancias no coloreadas, por medio de su reacción con grupos.

 La concentración de hierro en una muestra problema, resultando un valor de

0,001916486 ±0,05 M.
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 La presencia de sales en la matriz no produjo cambios significativos en la

absorbancia de la solución de ferroína.

 la estabilidad del complejo se encuentra después de transcurridos 30 minutos

y para un pH entre 4 y 5

Referencias

Amézquita, F., & Mendoza , D. (25 de abril de 2018). Curso Básico de Espectroscopía Ultravioleta
-Visible. Obtenido de Universidad de Guanajuato, Facultad de Química: http://quimica.ugto.
mx/revista/TallerBasicoUvVis.pdf.

Douglas A. Skoog, West, D., Holler, J., & Crouch, S. (2014). Fundamentos de química analítica
(Novena ed.). Santa Fe: Cengage Learning Editores, S.A.

González, A., & Calderón, S. (2014). Manual de Trabajo para el Laboratorio de Análisis
Instrumental. Merida: Universidad de Los Andes, Escuela de Ingeniería Química.

González, C. (2010). Análisis aplicado a la ingeniería química. . Mexico: Universidad Autónoma

de México, Facultad de Química.

Skoog, D., Holler, F., & Nieman, T. (2001). Principios de Análisis Instrumental (quinta ed.).
Madrid: Mc Graw Hill.

Anexos
Muestra de cálculo

Para el cálculo de la concentración de FeCl3 en la muestra inicial, se le midió a distintos

volúmenes de o-fenantrolina usados con una misma cantidad de muestra, la absorbancia medida a
512 nm y así se calculo el volumen equivalente de o-fenantrolina, que resulta de la intercepción de
las dos rectas formadas en la figura xxx.

Determinación del punto de equivalencia para la valoración colorimétrica.

De la valoración colorimétrica de la solución de Fe+3, para distintos volúmenes de orto-

fenantrolina se obtuvo la gráfica N° 2 a la cual se efectuó regresión lineal antes y después del punto
de equivalencia obteniéndose las siguientes ecuaciones de las rectas, para el grupo 1.

𝑦 = 0,5311. 𝑋 − 0,0407 (𝐸𝑐𝑢𝑎𝑐𝑖𝑜𝑛 1) Y 𝑦 = 0,025. 𝑋 + 0,0407 (𝐸𝑐𝑢𝑎𝑐𝑖𝑜𝑛 2)

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Sustituyendo esta última en la primera se obtiene el valor de volumen equivalente para la

cual el cual todo el Fe(Cl)3 reacciona completamente con la o-fenantrolina produciendo el complejo
coloreado (Ferroína) y a partir del cual la absorbancia permanece constante.

Se obtienen el volumen de O-fenantrolina en el punto de equivalencia.

𝑉𝑂−𝑓𝑒𝑛𝑎𝑛𝑡𝑟𝑜𝑙𝑖𝑛𝑎 = 𝑋 = 0,46 𝑚𝑙
Determinación de la Molaridad de la o-fenantrolina utilizada

0,3gr 1mol 1000ml mol

𝑀 [𝑂 − 𝑓𝑒𝑛𝑎𝑛𝑡𝑟𝑜𝑙𝑖𝑛𝑎] = ∗ ∗ = 0,01664 = 0,016647 M
100ml 180,21gr 1L L

Calculo de la concentración del FeCl3 en la solución de 50 mL y la solución inicial de 2

mL:

𝑁1(FeCl3)𝑥𝑉1(FeCl3) = 𝑁2(𝑜𝑟𝑡𝑜𝐹)𝑥𝑉2(𝑜𝑟𝑡𝑜𝐹)

0,016647 𝑀 𝑥 0,46 𝑚𝑙
𝑁FeCl3(100ml) = = 0,00001045𝑀
50 𝑚𝑙

Para el volumen inicial de 4 ml de FeCl3

50 𝑚𝑙 𝑥 0,00001045 𝑀
𝑁FeCl3(4ml) = = 0,001916486 𝑀
4 𝑚𝑙
Tabla 1. Datos de los distintos grupos para la experiencia 1 (estabilidad del complejo).
Grupo numero 1 Grupo numero 2 Grupo numero 3 Grupo numero 4

Tiempo, Absorbancia Tiempo, Absorbancia Tiempo, Absorbancia Tiempo, Absorbancia

min min min min
0 0,508 0 0,53 0 0,640 0 0,53
5 0,505 5 0,54 5 0,610 5 0,54
10 0,503 10 0,52 10 0,600 10 0,52

15 0,5 15 0,53 15 0,600 15 0,53

20 0,499 20 0,52 20 0,600 20 0,52

25 0,498 25 0,52 25 0,590 25 0,52

30 0,497 30 0,52 30 0,600 30 0,52

50 0,497 50 0,52 50 0,590 50 0,52
70 0,497 70 0,52 70 0,590 70 0,52

90 0,497 90 0,51 90 0,590 90 0,51

110 0,497 110 0,51 110 0,590 110 0,51
130 0,497 130 0,51 130 0,590 130 0,51

150 0,497 150 0,51 150 0,590 150 0,51

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Tabla 2. Datos de la estabilidad del complejo en presencia de sales

Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4

Sal Masa, mg Absorbancia Masa, mg Absorbancia Masa, mg Absorbancia Masa, mg Absorbancia

Oxalato 7
101,6 0,502 412,0 0,50 0,59 70,7 0,590
de sodio 70

Fluoruro 2
103,7 0,507 129,8 0,50 0,58 230 0,58
de sodio 30