Universidad Rafael Landívar

Sede Regional Jutiapa

Licenciatura En Ciencias Agrícolas Con Énfasis En Riegos

Facultad De Ciencias Ambientales Y Agrícolas

Curso: Fitopatología I

Ing. Edwin Rolando Paredes Mazariegos

NEMATODOS FITOPATOGENOS, CARACTERISTCAS, MUESTREO EN SUELO &

AEREO, DENTIFICACION Y CONTEO EN LABORATORIO.

Alvaro Macabeo Vega Lima

Sección: 01

Carné: 2122815
 ÍNDICE

I. CARACTERISTICAS DE LOS NEMATODOS FITOPATOGENOS ............................................................. - 1 -

1.1 CARACTERISTICAS GENERALES DE LOS NEMATODOS .................................................................. - 1 -

1.1.2CARACTERÍSTICAS DE LOS NEMATODOS FITOPATOGENOS ......................................................... - 1 -

1.1.3 MORFOLOGÍA: ............................................................................................................................. - 1 -

1.1.4 ANATOMIA INTERNA:............................................................................................................ - 2 -

1.1.5 CICLOS DE VIDA: .......................................................................................................................... - 3 -

1.1.6 DISTRIBUCIÓN ECOLOGÍA Y DISEMINACIÓN: .................................................................... - 3 -

2.1 CLASIFICACION E IDENTIFICACIÓN: .................................................................................................... - 3 -

2.2.1 FAMILIA TYLENCHIDAE ................................................................................................................ - 4 -

2.3.1 FAMILIA HOPLALAIMIDAE .................................................................................................. - 4 -

2.4.1 FAMILIA CRICONEMATIDAE ........................................................................................................ - 5 -

2.5.1 FAMILIA HETERODERIDAE ........................................................................................................... - 5 -

2.6.1 FAMILIA TYLENCHULIDAE ............................................................................................................ - 5 -

2.7.1 FAMILIA TYLENCHOLAIMIDAE ..................................................................................................... - 6 -

2.8.1 FAMILIA TYLENCHOLAIMIDAE ..................................................................................................... - 6 -

3.1 FORMAS DE IDENTIDFICACION........................................................................................................... - 6 -

3..2 SÍNTOMAS Y DAÑOS CAUSADOS POR NEMATOS.......................................................................... - 9 -

3.3.1 INTERACCION DE LOS NEMATODOS CON OTROS PATROGENOS DE LAS PLANTAS ...................... - 10 -

II. PRINCIPIOS DE MUESTREO DE NAMATODOS SUELO Y PARTES AEREAS........................................ - 11 -

1.1 RASGOS GENERALES DE LOS NEMATODOS ...................................................................................... - 11 -

1.2.1 ASPECTOS A TENER EN CUENTA ANTES DEL MUESTREO .............................................................. - 11 -

1.2.2 PLANTAS HUÉSPED DE NEMATODOS FITOPATÓGENOS ........................................................... - 12 -

1.3.1 RECOLECCIÓN DE MUESTRAS PARA ANÁLISIS DE NEMATODOS................................................... - 13 -

DONDE MUESTREAR........................................................................................................................... - 13 -

CUANDO MUESTREAR ........................................................................................................................ - 13 -

CÓMO MUESTREAR ............................................................................................................................ - 13 -

1.3.2 CULTIVOS HERBÁCEOS .............................................................................................................. - 14 -

1.3.3 ARBOLES Y ARBUSTOS FRUTALES .............................................................................................. - 14 -

1.3.4 SUELOS CULTIVABLES ................................................................................................................ - 15 -

1.3.5 SUELOS SIN CULTIVO ................................................................................................................. - 16 -

1.4 CONSERVACIÓN DE LAS MUESTRAS ................................................................................................. - 16 -

1.5 ENVÍO DE LAS MUESTRAS................................................................................................................. - 17 -

INTERPRETACIÓN DEL RESULTADO DE LOS ANÁLISIS DE NEMATODOS FITOPATÓGENOS.................... - 17 -

III. EXTRACCION DE NEMATODOS EN EL LABORATORIO................................................................. - 19 -

1.1 MÉTODOS PARA LA EXTRACCIÓN DE NEMÁTODOS DEL SUELO (ECTOPARÁSITOS) ........................ - 19 -

1.1.2 MÉTODO DEL EMBUDO DE BAERMANN: .................................................................................. - 20 -

1.1.3 MÉTODO COMBINADO (TAMIZ-EMBUDO DE BAERMANN): ..................................................... - 20 -

1.1.4 MÉTODO DE FLOTACIÓN (TAMIZ-CENTRÍFUGA): ...................................................................... - 21 -

1.1.5 MÉTODOS PARA LA EXTRACCIÓN DE NEMÁTODOS DE LA RAÍZ (ENDOPARÁSITOS) ................ - 21 -

MANIPULACIÓN DE NEMÁTODOS .......................................................................................................... - 23 -

1.2 IDENTIFICACIÓN DE GÉNEROS DE NEMÁTODOS FITOPARÁSITOS ................................................... - 25 -

IV. CUANTIFICACION DE NEMATOD0S ............................................................................................ - 27 -

V. CONCLUSIONES .............................................................................................................................. - 28 -

BIBLIOGRAGIA ........................................................................................................................................ - 29 -
 INTRODUCCIÓN

Los nematodos del suelo viven en grupos o gremios, compuestos por lo general de cinco grupos
funcionales principales: parásitos de plantas, bacteriófagos, micófagos, depredadores y omnívoros. Por
tal motivo, los nematodos están bien representados a lo largo de la red trófica del suelo. Aunque la
identificación de estos organismos requiere de intenso entrenamiento, en la mayoría de los casos la
identificación de los diferentes grupos funcionales puede lograrse en base a la morfología de su aparato
bucal. En el caso de nematodos parásitos de plantas, el aparato bucal incluye un estilete tipo aguja,
mediante el cual puede causar pérdidas significativas en varios cultivos. Los micófagos, equipados en su
mayoría con un estilete pequeño y delicado, se alimentan de las hifas de hongos saprofitos, patogénicos,
benéficos y micorrízicos; algunos nematodos micófagos son pueden comportarse como parásitos
facultativos de plantas. Los nematodos bacteriófagos, mismos que carecen de estilete, pueden regular el
nitrógeno y el fósforo disponible para las plantas, influir en la nodulación por parte de bacterias tipo
Rhizobium, así como alimentarse y diseminar bacterias benéficas y fitopatógenas. Como típicos
estrategas r, los nematodos bacteriófagos pueden incrementar su población ante cualquier perturbación
del suelo o bien, bajo condiciones de enriquecimiento de nutrimentos, una condición que puede
interpretarse como indicador de la fertilidad del suelo. Los nematodos depredadores tienen la cavidad
bucal equipada con una o más estructuras en forma de dientes, o en algunos casos, poseen un estilete
que les permite alimentarse de otros nematodos, microinvertebrados y protozoarios; en algunos casos,
pueden alimentarse de bacterias y esporas de hongos. Los omnívoros tienen la cavidad bucal armada con
un estilete hueco; son polífagos, con la capacidad de alimentarse de cualquier fuente, por lo que pueden
fungir como micófagos, bacteriófagos, herbívoros y también como depredadores al alimentarse de otros
nematodos.
 OBJETIVOS

General

 Que el alumno conozca y los métodos de extracción más sencillos y prácticos

que son utilizados para extraer, identificar y cuantificar nematodos
fitopatogenos.

Específicos

 Conocer las características principales de los nematodos fitopatogenos.

 Que el alumno conozca las técnicas de manipulación más usadas para realizar la
identificación y conteo de nematodos en un análisis nematológico de una muestra.

 Que el alumno conozca y diferencie las características morfológicas de los

principales géneros de nemátodos fitoparásitos de importancia agrícola.
 -1-

I. CARACTERISTICAS DE LOS NEMATODOS FITOPATOGENOS

1.1 CARACTERISTICAS GENERALES DE LOS NEMATODOS

Tomado de GN. Agrios II y V Edición

Los nematodos pertenecen al reino animal y al phyllum Nemathelmintus, una gran mayoría viven en el
agua salada, dulce y en el suelo, alimentándose de plantas y animales microscópicos. Numerosas
especies atacan y parasitan al hombre y animales produciéndoles enfermedades diversas; así mismo,
varios centenares parasitan y se alimentan de plantas vivas, en las que producen una gran variedad de
enfermedades.

1.1.2CARACTERÍSTICAS DE LOS NEMATODOS FITOPATOGENOS

Los nematodos son los únicos organismos del reino animal que son estudiados en Fitopatología, debido
a que ocasionan síntomas similares a los agentes infecciosos, Estos causan un enorme daño en las
plantas que parasitan, pudiendo ser este directo o indirecto (como vectores).

1.1.3 MORFOLOGÍA:

Los nematodos fitoparásitos son organismos pequeños cuyo tamaño en longitud va de 0.27 a 9 mm.
(Paratylenchus y Paralongydorus maximus, respectivamente; un 90% de las 2500 especies descritas
están comprendidas entre el rango de 0.27 mm – 1.5 mm de longitud; su diámetro reducido hace que
sea muy difícil observarlos a simple vista, pero que pueden apreciar muy bien al microscopio.

Ellos tienen en general, forma filamentosa, redondos, lisos, no segmentados y carecen de patas u otros
apéndices. Las hembras de algunos géneros (Meloidogyne, Heterodera, Globodera, Nacobus) se
hinchan en la madurez y adquieren forma de pera, saco o globosa, un rasgo muy importante en
sistemática lo es la BURSA y el FASMIDIO. (Brusa: extensión de la cutícula en la cola, de los machos que
sirven para sujetar a la hembra u orientarse durante la cópula. Fasmidio) La ilustración siguiente da a
conocer los tamaños y las formas que pueden adquirir algunos géneros de nematodos.
 -2-

1.1.4 ANATOMIA INTERNA:

El cuerpo de un nematodo es más o menos transparente, el cual está cubierto por una cutícula
incolora, la cual muda a través de sus etapas larvarias sucesivas (L1- L4); la cavidad del cuerpo contiene
un líquido a través del cual efectúa la circulación y respiración.

El sistema digestivo es un tubo hueco que se extiende desde la boca, pasando por el esófago hasta el
intestino, el recto y el ano; a menudo sus labios rodean la boca. Todos los nematodos fitopatógenos
poseen un estilete o lanza que utilizan para perforar las células vegetales. Los sistemas reproductores
están bien desarrollados; las hembras tienen uno o dos ovarios, seguidos por un oviducto y un útero
que termina en una vulva. El macho posee un testículo, una vesícula seminal y termina en un orificio
común con el intestino, hay un par de espículas copulatorias sobresalientes. La reproducción se
efectúa por medio de huevos y puede ser sexual o partenogenética. En muchas especies faltan los
individuos machos.

Hembra.
 -3-

1.1.5 CICLOS DE VIDA:

El ciclo de vida de todos los nematodos fitopatógenos, es por lo general bastante semejante; los
huevos se incuban y se desarrollan larvas, cuya apariencia y estructura es similar a la de los adultos;
estas larvas tienen 4 estadios, el primero a menudo se produce dentro del huevo y en el último, los
nematodos se diferencian en hembras y macho adultos; la hembra puede entonces aparearse y
producir huevos, en ausencia del macho, en forma partenogenética (fecundación sin participación del
macho). El ciclo de huevo a huevo, puede concluir a menudo, al cabo de 3 a 4 semanas, bajo
condiciones ambientales óptimas, en especial la temperatura.

1.1.6 DISTRIBUCIÓN ECOLOGÍA Y DISEMINACIÓN:

Los nematodos fitopatógenos además de vivir en el agua, una buena cantidad vivne en el suelo, donde
son habitantes naturales; y en su camino evolutivo se han adaptado a vivir a expensas de los vegetales y
pueden encontrarse, en el follaje, tallo, y la mayor parte en las raíces y tallos subterráneos donde se
alimentan superficialmente. La temperatura, humedad y aireación del suelo, afectan a la supervivencia
y al movimiento de los nematodos. Estos se encuentran en mayor abundancia en la capa del suelo
comprendida entre los 0-15 cms de profundidad, pero pueden llegarse a encontrar, según el sistema
radicular, alos 30 ó 150 cms; la distancia total que recorre un nematodo probablemente no excede un
metro por estación.

Además de su movimiento propio, los nematodos pueden diseminarse con gran facilidad a través del
equipo agrícola, la irrigación, el drenaje, las patas de los animales, productos agrícolas, plantas de
viveros suelos, etc. También pueden ser salpicados desde la superficie del suelo hasta la parte aérea de
la planta por la lluvia o el riego por aspersión o suben por sí mismo a las hojas a través de las superficies
de humedad.

2.1 CLASIFICACION E IDENTIFICACIÓN:

Todos los nematodos fitoparásitos pertenecen al Phyllum nemathelmintes, clase nemátoda, la

mayoría de los géneros parásitos importantes pertenecen a:
 -4-

 La subclase secernentea o phasmida

 La subclase adenophorea o aphasmida

En la subclase secernentea existe solamente un orden en el cual hay nematodos fitopatógenos,

siendo este el Tylenchida, el cual existen dos superfamilias:

a. Tylenchoidea
b. Aphelenchoidea

SUPERFAMILIA TYLENCHOIDEA: Incluye a las familias siguientes con sus correspondientes

géneros, nombre común y hospedero.

2.2.1 FAMILIA TYLENCHIDAE

GENERO NOMBRE COMUN HOSPEDERO

1. Anguina Nematodo del trigo o agalla de la semilla Trigo

2. Ditylenchus Nematodo del bublo o tallo Cebolla, ajo, alfalfa
3. Tulenchorinchus Nematodo de Acaparamiento Tabaco, maíz
algodón

2.3.1 FAMILIA
HOPLALAIMIDAE

1. Helicotylenchus Nematodo espiral verdadero Polífago

2. Rotylenchus Nematodo espiral Polífago
3. Hoplolaymus Nematodo de lanza Maíz, caña,
algodón
4. Pratylenchus Nematodo Lesionador Cultivos anuales
y prennes
5. Radopholus Nematodo perforador del plátano Plátano, cítricos,
cafeto, caña
6. Rotylenchulus Nemátodo reniforme Algodón, papaya,
tomate, té, apio,
maíz, frijol.
 -5-

7. Dolichodorus Nematodo de lezna Apio, maíz,frijol

2.4.1 FAMILIA CRICONEMATIDAE

1. Criconema Nematodos de anillos Plantas leñosas y maní

2. Criconemoides Nematodos de anillos
3. Paratylenchus Nematodo Alfiler Polífago

2.5.1 FAMILIA HETERODERIDAE

1. Heterodera Nematodo Enquistado Papa, tabaco, soya

remolacha
2. Meloidogyne Nematodo Agallador de la raíz Polífago

E Meloidogyne Incógnita prefiere climas cálidos

S
Meloidogyne Javanica
P prefieren climas templados
E Meoidogyne hapla

C
I
E Meloidogyne arenaria prefiere climas cálidos
S

2.6.1 FAMILIA TYLENCHULIDAE

 -6-

1. Tylenchulus Nemátodo de los cítricos y la vid. Cítricos y Vid

SUPERFAMILIA APHELENCHOIDEA: Comprende a las familas, géneros, nombres comunes y hospederos,

como:

1. Aphelenchoides Nematodo foliar Crisantemo, fresa, arroz 2. Rhadinaphelenchus Nematodo

del coco (provoca en anillo rojo del cocotero) Cocotero

En la subclase Adenophora, sólo existe un orden de importancia, el Dorylaimida, con dos familias de
importancia.

2.7.1 FAMILIA TYLENCHOLAIMIDAE

1. Longidorus Nematodo aguja

2. Xiphinema Nematodo daga Polífagos

2.8.1 FAMILIA TYLENCHOLAIMIDAE

1. Trocodorus Nematodo de raíz en escobilla Hortalizas y otros cultivos

Para la identificación de nematodos fitoparásitos, los fitopatólogos prácticos han seleccionado una
serie de características para determinar los géneros de importancia entre las que sobresalen:

3.1 FORMAS DE IDENTIDFICACION

a) Presentación y tipo de estilete

b) Forma del nematodo
c) Forma y disposición del esófago
d) Forma de la cola
e) Forma y disposición del ovario de las hembras
 -7-

HABITOS Y SINTOMATOLOGÍA:

En lo concerniente al parasitismo, los nematodos del suelo pueden dividirse en tres grupos:

a) SAPROFAGOS: Son aquellos que obtienen sus alimentos directamente de la materia orgánica en
descomposición.

b) PREDATORES: son aquellos que se alimentan de pequeños animales y otros nematodos.

c) FITOPARASITOS: Son aquellos que se alimentan de plantas superiores e inferiores (raíz, yemas,
tallos y hojas)

Como la gran mayoría afectan la raíz de acuerdo a sus hábitos se les puede clasificar en:

 ECTOPARASITOS: Los que se alimentan de la raíz desde el exterior

 ENDOPARÁSITOS: Los que penetran dentro de la raíz para alimentarse

Estos últimos pueden ser:

 Endoparásitos Migratorios: son los que cambian continuamente de lugar

(penetran y salen del hospedero)
 Endoparásitos Sedentarios: son los que no cambian de sitio, y viven dentro del
hospedero una parte o toda su vida.
 -8-

A continuación, se resumen los SÍNTOMAS Y EFECTOS causados por los nemétodos:

Muerte o aberración de yemas apicales

Género Aphelenchoides Mal formación y necrosis de hojas y tallos

Síntomas en partes aéreas

Género Anguina Causan agallas en espigas de algunos

Cereales y otras monocotiledóneas
 -9-

3..2 SÍNTOMAS Y DAÑOS CAUSADOS POR NEMATOS

 - 10 -

3.3.1 INTERACCION DE LOS NEMATODOS CON OTROS

PATROGENOS DE LAS PLANTAS

Los nematodos pueden causar enfermedades en las plantas por sí mismo; al operar en el suelo donde
constantemente están rodeados por hongos, bacterias patógenas que muchos de los cuales pueden
también causar enfermedades en las plantas, interactúan para afectar a plantas hospederas. Se
conocen varios complejos de enfermedades hongonemátodos, por ejemplo: La marchitez de varias
plantas por Fusarium aumenta en severidad e incidencia cuando las plantas son infestadas por los
nematodos lesionador, picador, reniforme, perforador, del acaparamiento de plantas o por el agallador
de la raíz. También se han observado asociaciones con verticillium, con el ahogamiento o mal del
talluelo por pythium, la pudrición de la raíz por Rhizoctonia y Phytophthora, etc. Se conocen
relativamente pocos casos de complejos de enfermedades por bacteriasnemátodos. Así por ejemplo el
nematodo del nudo o agalla de la raíz, aumenta la frecuencia y severidad de la marchitez bacteriana
del tabaco producida por Pseudomonas solanacearum; en general los nematodos proveen heridas que
permiten la penetración de bacterias.

Es importante el papel de los nematodos del géneno Xiphinema, Longidorus y Trychodorus, como
únicos vectores de ciertos virus.
 - 11 -

II. PRINCIPIOS DE MUESTREO DE NAMATODOS SUELO Y PARTES

AEREAS

1.1 RASGOS GENERALES DE LOS NEMATODOS

Gusanos redondos o cilíndricos, de menos de 1 mm, están presentes en todos los ambientes, y después
de los protozoos, son el grupo animal más numeroso del suelo.

De las 10.000 especies en total, solamente unas 1.000 habitan el suelo, aunque en una muestra de
suelo, es posible que solo haya 10 a 25 especies.

No participan directamente en la descomposición de la materia orgánica del suelo, son depredadores de

otros microorganismos o parásitos de las plantas, y a su vez son parasitados o consumidos por otros
organismos, como parte de la cadena alimenticia del suelo.

Los nematodos fitopatógenos se caracterizan por la presencia del llamado estilete, espina hueca por
donde absorben la savia de las plantas.

Presentan altos niveles reproductivos, con 5 ó 6 generaciones anuales. Su ciclo de vida tiene una
duración de unas 3-4 semanas en las condiciones más favorables.

1.2.1 ASPECTOS A TENER EN CUENTA ANTES DEL MUESTREO

• No hay suelo que no tenga nematodos, aunque para producir daños, su número tiene que ser elevado
y las especies de plantas, sensibles a ellos.
• Su control consiste en combinar distintas tácticas, control químico, cultural y biológico, hasta reducir
el número de nematodos, compatible con el normal desarrollo de la planta.
• Al ser microscópicos, solamente se pueden cuantificar en laboratorio.
• Viven mejor en suelos arenosos, húmedos y con cultivo. Son muy sensibles a la sequía y a la falta de
cultivo.
• No es fácil saber si una planta está siendo atacada por nematodos. Sus síntomas se confunden con
otros problemas, sequía, exceso de agua ó carencia de nutrientes.
• Suelen manifestarse por rodales en el terreno.
• Su presencia se presenta por un debilitamiento progresivo de la planta y un marchitamiento sin
explicación.
 - 12 -

1.2.2 PLANTAS HUÉSPED DE NEMATODOS FITOPATÓGENOS

PLANTA HUESPED
NEMATODO PROBLEMA

• Partes aéreas. Semillas y bulbos.

• Ditylenchus dipsaci AJO

• • Globodera rostochiensis • • Quiste

PATATA
Globodera Pallida Quiste
• Meloidogyne • Nódulos raíz Quiste
TOMATE
• Globodera pallida •
• Meloidogyne Pratylenchus
TABACO • Nódulos raíz
•
• Heterodera glycines SOJA • Quistes. Vector de hongos
• Aphelenchoides besseyi • Semilla Tallo
ARROZ
• Ditylenchus angustus •
• Heterodera oryzae • Raíz
• Hirschmanniella oryzae • Raíz
• Heterodera avenae • Quistes. Vector de hongos
• Anguinia tritici CEREAL. TRIGO • Semilla
• Meloidogyne • Nódulos
• Partes aéreas. Semillas y bulbos.
• Ditylenchus dipsaci ALFALFA

• Meloidogyne

• Tylenchulus VID • Nódulos raíz

semipenetrans • Raíz
• Macroposthonia • Raíz
xenoplax Xiphinema • Raíz. Vector de virus.
• index
• Meloidogyne hispanica PRUNUS. PERAL • Nódulos raíz Raíz
• Pratylenchus •
• Tylenchulus

semipenetrans Radopholus CÍTRICOS • Raíz

• similis
• Tylenchulus semipenetrans
•
Pratylenchus crenatus OLIVO Raíz Raíz
• •
• Heterodera schachtii REMOLACHA • Quistes. Vector de hongos.
ORNAMENTALE • Partes aéreas. Semillas y bulbos.
• Aphelenchoides fragirae
S
 - 13 -

• • Aphelenchoides fragirae • Partes aéreas. Semillas y bulbos.

FRESA
Aphelenchoides besseyi
• Ditylenchus myceliophagus • Partes aéreas. Semillas y bulbos.
Aphelenchoides Partes aéreas. Semillas y bulbos.
CHAMPIÑON
• composticola •

• Helicotylenchus multicintus
PLATANERA •

• Heterodera zeae MAIZ •

• Meloidogine ALGODON •
• Heterodera goettingiana GUISANTE •
• Ditylenchus dipsaci CEBOLLA •
• Bursaphelenchus xylophilus
PINO •

1.3.1 RECOLECCIÓN DE MUESTRAS PARA ANÁLISIS DE

NEMATODOS

DONDE MUESTREAR

En una zona dónde los cultivos no crecen normalmente puede haber presencia excesiva de nematodos:
- En terrenos con cultivos establecidos, estas zonas suelen ser circulares.
- En ocasiones el patrón sigue en una fila del cultivo
- Raramente se produce un daño generalizado en toda una parcela
- Las muestras siempre deben tomarse en la zona alrededor de las raíces de plantas que no están
creciendo adecuadamente.
- En parcelas que no tienen cultivo el muestreo se hace recorriendo toda la parcela.

CUANDO MUESTREAR

Las muestras de suelo pueden ser recolectadas en cualquier época del año, aunque se debe evitar el
muestreo en suelos excesivamente secos o mojados. Cuando se hace rotación de cultivos, el muestreo
se debe hacer cuando aún está el cultivo anterior, para saber si hay que desinfectar antes de plantar el
cultivo del año siguiente.

CÓMO MUESTREAR
 - 14 -

La profundidad del muestreo depende del cultivo, la zona adecuada de muestreo es a la altura de las
raíces de cada tipo de planta. No se debe tomar muestras donde haya plantas muy afectadas, en las que
las plantas estén muertas, porque los nematodos se habrán desaparecido ya de estas zonas.

Nunca se debe incluir en la muestra suelo de la parte superficial, dónde la temperatura y

condiciones de humedad limitan las poblaciones de nematodos.

Las herramientas más aconsejables para el muestreo de nematodos son los tubos o barrenas.

1.3.2 CULTIVOS HERBÁCEOS

Toma de Muestras de Suelos para Nematodos en Cultivos Herbáceos

1 Tomar la muestra a 5 centímetros de la base de la planta y a unos 15 – 20 cm de profundidad.
2 Despreciar siempre los 5 – 10 primeros centímetros de suelo.
Tomar submuestras de unos 8 – 10 puntos que tengan síntomas moderados siguiendo este patrón:

4 Juntar todas las submuestras y enviar al laboratorio alrededor de 500 g de suelo.

A veces, por indicación del laboratorio, es conveniente adjuntar a la muestra de suelo material vegetal.

Toma de Muestras de Plantas para Nematodos en Cultivos Herbáceos

Si el cultivo se encuentra en estado de plántula, tomas unas 3 – 4 plantas enteras de la zona afectada. Sacudir
1
suavemente para eliminar tierra sobrante.
2 Si las plantas son mayores, incluir 2 plantas, eliminar los tallos de las plantas y enviar solo el sistema radicular.
3 Las plantas maduras y más voluminosas son demasiado grandes, incluir solo algunas raíces.

1.3.3 ARBOLES Y ARBUSTOS FRUTALES

 - 15 -

Toma de Muestras de Suelos para Nematodos en Frutales

1 Despreciar los primeros 5 cm de suelo
2 En función de la profundidad de las raíces, tomar las muestras entre 25 y 40 cm, cavando con una pala.
El punto de muestreo es entre la parte exterior de la copa y el tronco, según el siguiente esquema:

4 Tomar muestras de 4 o 5 árboles hasta completar 500 g de suelo.

5 Si es posible, evitar tomar las muestras dónde haya malas hierbas.

1.3.4 SUELOS CULTIVABLES

Toma de Muestras de Suelos para Nematodos en suelos cultivables

1 Despreciar los primeros 5 cm de suelo
A una altura de unos 15 cm tomar, repartidos por toda la parcela ( o zona afectada) 8 – 10 muestras, según el siguiente
patrón:

3 Enviar al laboratorio unos 500 g de suelo.

 - 16 -

1.3.5 SUELOS SIN CULTIVO

Toma de Muestras de Suelos sin Cultivo para Nematodos

1 Despreciar los primeros 5 cm de suelo
Tomar 8 – 10 submuestras desplazándose en zig-zag a lo largo de toda la parcela, según el siguiente patrón:

3 La profundidad de muestreo debe ser a unos 15 – 20 cm.

4 Enviar al laboratorio un total de 500 g de suelo.

1.4 CONSERVACIÓN DE LAS MUESTRAS

La conservación de muestra para un análisis de nematodos es diferente a la de una muestra para análisis
de fertilidad. Los nematodos son organismos vivos y requieren humedad para poder sobrevivir.

Para poder ser aislados, identificados y cuantificados han de llegar vivos al laboratorio. Se deben
adoptar medidas para evitar que se seque la muestra, exponerla al sol o dejarla dentro de vehículos. La
temperatura hasta que llegue al laboratorio no debe exceder los 32 ºC.

Colocar la muestra en una bolsa fuerte y cerrar de forma que no se derrame. Se pueden hacer unos
pequeños agujeros con un alfiler o pequeño punzón.
 - 17 -

1.5 ENVÍO DE LAS MUESTRAS

El envío de muestras al laboratorio ha de ser lo antes posible (ideal antes de 48 h). Evitar enviar
muestras antes del fin de semana, mejor hacerlo en los primeros días de la semana para que le de
tiempo al laboratorio a procesar las muestras.

Si la muestra se ha de mantener durante la noche antes de enviarla al laboratorio, lo mejor es

refrigerarla a 4 ºC en un frigorífico convencional.

INTERPRETACIÓN DEL RESULTADO DE LOS ANÁLISIS DE NEMATODOS FITOPATÓGENOS

Los análisis nematológicos son una herramienta fundamental a la hora de tomar decisiones sobre
control nematológico.

Sin embargo, estos análisis no tienen gran valor si la toma de muestras no se ha realizado de forma que
sean representativas del área seleccionada, o si las muestras no llegan al laboratorio bien conservadas.

En general, la producción vegetal va disminuyendo en el tiempo conforme aumentan las densidades de

nemátodos en suelo.

En el momento de la siembra o plantación es buen momento para analizar la población de nematodos

en el suelo, número y especie.

Se observa como hay pequeñas pérdidas de producción a densidades menores de 10 nemátodos por g
de suelo, (este es el llamado límite de tolerancia T), las perdidas aumentan conforme las densidades de
nemátodos pasan a ser mayores.

Aunque se observen perdidas a densidades entre 10 y 20 nemátodos por g de suelo, estas no serían
suficientes como para justificar el uso de un tratamiento (este es el llamado umbral económico de daño
E) por encima de él, el tratamiento del suelo con un nematicida sería recomendable.

Tanto el límite de tolerancia como el umbral económico dependen de las condiciones agronómicas y
ambientales locales, por lo que el éxito de un sistema predictivo estará supeditado a la existencia de
datos locales sobre las pérdidas causadas por nemátodos.
 - 18 -

No obstante, y simplemente a modo orientativo la siguiente tabla muestra límites de tolerancia y

umbrales económicos de daño, expresados en nemátodos o huevos por 100 g de suelo, para diversos
cultivos y nemátodos en áreas de clima mediterráneo. Los valores están basados en diversas
publicaciones con datos sobre umbrales de daño en zonas de clima mediterráneo

Tabla. Valores orientativos de los límites de tolerancia y umbrales económicos para diversos cultivos y
nemátodos. Niveles de nemátodos por 100 g de suelo en el momento de la siembra.

Cultivo Nematodo Limite de Tolerancia Umbral Económico

Avena Ditylenchus dipsaci 1 25
Fresa Meloidogyne spp 1 2
Pratylenchus spp. 2 5

Frutales Hueso Meloidogyne spp. 10 200

Pratylenchus spp. 10 300

Maiz Meloidogyne spp 10 100

Pratylenchus spp 40 100

Patata Meloidogyne spp 10 100

Globodera rostochiensis 50 1500

Globodera pallida 10 300

Pimiento Meloidogyne spp. 3 30

Tomate Meloidogyne spp. 2 20
Pratylenchus spp. 10 100

Trigo Heterodera avenae 250 1000

Pratylenchus thornei 1000 3000

Pratylenchus neglectus 500 2000

Vid Meloidogyne spp. 20 200

Remolacha Heterodera spp. 20 60
Meloidogyne spp. 20 60
 - 19 -

III. EXTRACCION DE NEMATODOS EN EL LABORATORIO

1.1 MÉTODOS PARA LA EXTRACCIÓN DE NEMÁTODOS DEL SUELO

(ECTOPARÁSITOS)

Las muestras traídas del campo tienen que ser procesadas en el laboratorio para obtener los nemátodos
y observarlos con la ayuda del microscopio para su identificación y conteo. Hay nematodos fitoparásitos
que se alimentan de las raíces como ectoparásitos, los que siempre estarán en el suelo; pero otros se
introducen al sistema radical (endoparásitos) del cual se alimentan e incluso algunos se mueven hasta
las partes áreas. El método de extracción será de acuerdo al tipo de nemátodos mencionados
anteriormente.

MATERIAL REQUERIDO

EQUIPO
Centrífuga
Microscopio de disección

MATERIAL
Muestras de suelo con nematodos
Embudos de 10-15 mm de diámetro
Tubos de goma
Pinzas de presión
Malla de alambre
Papel filtro
Etiquetas
Probeta
Cubeta de plástico
Tamiz de 100 mallas por pulgada cuadrada.
Tamiz de 325 mallas por pulgada cuadrada.
Tamiz de 500 mallas por pulgada cuadrada.
REACTIVOS
Kaolín
Sucrosa
 - 20 -

PREPARACIÓN DE LA MUESTRA
La muestra que se recogió en el campo se esparce sobre un pedazo de plástico, se desmenuzan los
terrones, se eliminan las piedras y separamos las raíces para procesarlas posteriormente y extraer los
nemátodos endoparásitos. Una vez mullido el suelo, se procede a homogenizarlo con el fin de que las
submuestras formen una muestra compuesta, finalmente se distribuye en el plástico.

1.1.2 MÉTODO DEL EMBUDO DE BAERMANN: Primero se coloca un tubo de goma (8-10
cm. de largo) al cuello de un embudo de 10-15 mm. de diámetro, enseguida se lavan ambos
perfectamente y luego se coloca una pinza de presión en el tubo de goma para cerrar el paso del agua.
Después se procede a llenar con agua hasta 1 cm. bajo del borde del embudo y se coloca el embudo en
la gradilla. Enseguida se etiqueta con los datos necesarios como: # de muestra, hospedero, fecha y lugar
de colecta

Una vez que se ha hecho lo anterior, se procede a preparar una tela de alambre que de antemano esté
amoldada al embudo, sobre ella se coloca un papel facial (kleneex) y luego la muestra de suelo (40-50
grs.), se envuelve la muestra y se humedece con una piceta, se coloca la tela de alambre sobre el
embudo cuidando que esta toque el agua del embudo. Dejamos el embudo en reposo y a las 24 horas se
sacan en un vaso de precipitado unos 10 ml. de agua. En ellos van los nemátodos parásitos y saprofitos
que pasaron por el papel facial y la malla.

Si se desea, se pueden observar directamente los nemátodos al microscopio de disección, esto se hace
colocando unos 5 ml. de la suspensión en un vidrio de reloj, luego se observan. En caso contrario o
después de realizado lo anterior, se procede a matarlos y fijarlos para su preservación por tiempo
indefinido.

1.1.3 MÉTODO COMBINADO (TAMIZ-EMBUDO DE BAERMANN): Del suelo distribuido

en el plástico, se toman muestras en diversos puntos agregándose a una probeta que contiene 200 CC
de agua hasta aforar a 300 CC. El contenido de la probeta se pasa a una cubeta A, con 4-5 lts. de agua,
en la cual se siguen desmenuzando los terrones hasta que se disuelva bien el suelo. Se agita la solución y
la dejamos reposar durante 15-30 segundos para que se sedimente el material pesado y los nemátodos
permanezcan flotando. El contenido de la cubeta A, se pasa a través de un tamiz de 100 mallas por
 - 21 -

pulgada cuadrada a una cubeta B, en la cual se agita y la dejamos sedimentar para pasarlo por un tamiz
de 325 (ó 500) y lo que queda en él se pasa al embudo de Baermann.

1.1.4 MÉTODO DE FLOTACIÓN (TAMIZ-CENTRÍFUGA): Lo que queda en el tamiz de 325 ó

500 se pasa a un vaso de precipitado y se distribuyen los tubos de la centrifuga a los que previamente se
les agregó 0.5-1.0 g de kaolín, el cual se mezcla bien y se centrifuga a 3000 rpm por 5 minutos, lo que
permite la sedimentación de los nemátodos junto con las partículas de suelo (favorecido por el kaolín).
Después se decanta el sobrenadante eliminando la materia orgánica suspendida.

El sobrenadante eliminado se sustituye por solución sucrosa (45 g. de solución sucrosa o azúcar refinada
en 100 CC. de agua destilada) y se mezcla con la muestra. Se centrifuga a 3000 rpm durante 2 minutos y
el sobrenadante se pasa por el tamiz de 325 ó 500 mallas donde los nemátodos quedan retenidos
procediéndose inmediatamente a lavarlos sumergiendo el tamiz en agua para eliminar el azúcar del
cuerpo de los nemátodos. Con la ayuda de una piceta se pasan a un vaso de precipitado, quedando listo
los nemátodos para hacer observaciones al microscopio y/o matarlos y fijarlos para estudios posteriores
de identificación y conteo.

Tomado de: PACHECO, A. J. (2000). Manual de prácticas de laboratorio de Nematología. Juan José Ríos,
Sin; México. 20 pp.

1.1.5 MÉTODOS PARA LA EXTRACCIÓN DE NEMÁTODOS DE LA RAÍZ

(ENDOPARÁSITOS)

Paralelamente al grupo de los nemátodos ectoparásitos (es decir, aquellos que se alimentan
externamente de la raíz y cuyo hábitat es el suelo), existe el grupo de los endoparásitos que se han
adaptado a vivir dentro de los tejidos vegetales y que ya no dependen totalmente del ambiente del
suelo, sino más bien de lo que ocurre en la planta. Así pues, podemos encontrar nemátodos desde la
raíz, tallos y hojas hasta en las flores, frutos y semillas, y que constituyen un serio problema para la
agricultura porque son un grupo mucho más peligroso que el anterior. Para la extracción de estos
nemátodos, existen algunos métodos que por su sencillez y efectividad vale la pena conocerlos.

EQUIPO

Microscopio de disección
 - 22 -

Licuadora

MATERIAL
Raíces infectadas por nematodos
Navajas
Embudos
Tamiz 325 mallas por pulgada cuadrada
Agujas de disección

REACTIVOS
Kaolín
Sucrosa

Preparación de la muestra

OBSERVACIÓN DIRECTA: Se usa en raíces con agallamiento, se utilizan agujas de disección para
desmenuzar las agallas y extraer hembras, juveniles, machos y masas de huevecillos de los nemátodos
que causan agallas (Meloidogyne spp. y Nacobbus spp.).

INCUBACIÓN: Las raíces previamente lavadas o el follaje son cortados en pequeñas piezas y se
colocan en un recipiente con agua limpia dejándose reposar por unas 24-48 horas para que los
nemátodos salgan de los tejidos.

LICUADORA CENTRÍFUGA: Las raíces lavadas se licuan a alta velocidad durante un minuto y el
licuado se centrifuga de igual forma que en la flotación para nemátodos ectoparásitos.

EMBUDO DE BAERMANN: Se procede de igual forma que lo descrito para ectoparásitos, solo que
aquí usamos en lugar de suelo, pequeñas piezas de raíces previamente lavadas.

LICUADO-TAMIZADO: Lavar el material vegetal y cortar alrededor de 5 g. de raíces; los trocitos de

raíz se colocan en una licuadora en 100 ml. de agua y licuar durante un minuto. El material licuado se
pasa a través de un tamiz de 325 mallas, recogiendo el material en un vaso de precipitado. Después
observar al microscopio de disección.
 - 23 -

Tomado de: GERARDO, A. M. (2002). Manual de prácticas de Micología. Juan José Ríos, Sin; México. 35
pp.

MANIPULACIÓN DE NEMÁTODOS

La manipulación de los nematodos previo a su identificación y conteo una vez que han sido extraídos
por las técnicas usadas en el laboratorio, es un proceso muy importante porque lleva implícitos el
matado, fijado y pesca de estos organismos.

MATERIAL REQUERIDO

EQUIPO Microscopio de
disección

MATERIAL
Vidrio de reloj
Lámpara de alcohol
Pipetas
Palillos de bambú
Vasos de precipitado
Tubos de ensayo Portaobjetos

REACTIVOS
Agua
Fijador FA. 4:10

desarrollo de la práctica
MATADO: Existen varios métodos para realizar el matado de los nemátodos pero todos ellos lo hacen
tratando de evitar su distorsión. Hay 2 formas generales para realizar esta operación, ellas son:

MATADO EN VIDRIO DE RELOJ: Se coloca en un vidrio de reloj una alícuota de la suspensión nemátodos-
agua y enseguida se expone durante 12 segundos a la flama de una lámpara de alcohol. Después se
observan al microscopio de disección para verificar su muerte.
 - 24 -

MATADO EN MASA: Se pone a calentar agua en un vaso de precipitado de 500 ml., cuando alcance una
temperatura de 60 ºC se retira de la flama y se introduce durante 34 minutos el recipiente (tubo de
ensayo) que contiene 10 cc. de agua con nemátodos. También se puede matar dejando hervir el agua
introduciendo el tubo de ensayo durante un minuto.

FIJACIÓN: Una vez que los nemátodos han sido matados, se deja enfriar el agua con nemátodos y se le
agrega el fijador (FA. 4:10) en una porción de 1:1.

Fijador FA. 4:10

Formol al 40%.................... 10 CC.
Acido glacial acético............10 CC.
Agua destilada.....................10 CC.

Nota: Con este fijador los nemátodos rara vez se distorsionan, pero tienden a tornarse café y la parte
posterior del estilete de los Tylenchidos se vuelven transparentes después de unos cuantos días.

PESCA DE NEMÁTODOS: Después de la extracción, matado y fijación de los nemátodos, es necesario que
sean trasladados a un portaobjetos con una gota de agua para observarlos, estudiar sus características e
identificación bajo el microscopio biológico. El traslado se hace siempre de uno en uno con la ayuda de
una varita de bambú con la punta bien adelgazada. La técnica para pescar nematodos es la siguiente:

1.- En el centro de un portaobjetos se deposita una gota de agua.

2.- Se coloca una alícuota de la suspensión agua-nemátodos matados y fijados en un vidrio de reloj y se
observan bajo el microscopio estereoscópico.
3.- Se localiza un nematodo en el fondo del vidrio de reloj y con la ayuda de la varita de bambú se lleva
al nematodo hacia la superficie lentamente y una vez en la superficie, se saca rápidamente y se coloca
en la gota de agua del portaobjetos.
4.- Nuevamente se busca otro nemátodos y se sigue el mismo procedimiento hasta trasladar por lo
menos 5 nemátodos al portaobjetos.
5.- Se coloca un cubreobjetos a la gota de agua con nemátodos. Enseguida se observa al microscopio
biológico.
6.- Se estudian las características de cada nematodo para su identificación y su posterior cuantificación.

Tomado de: PACHECO, A. J. (2000). Manual de prácticas de laboratorio de Nematología. Juan José Ríos,
Sin; México. 20 pp.
 - 25 -

THORNE, G. (1961). Principles of nematology, Mc. Graw-Hill book Co, New York, Estados Unidos. 553 pp.

Diagramas muestreo de nematodos en lavoratorio

1.2 IDENTIFICACIÓN DE GÉNEROS DE NEMÁTODOS FITOPARÁSITOS

Los nemátodos fitoparásitos abarcan un gran número de géneros y especies de gran importancia
agrícola. El conocimiento de la sintomatología, morfología, biología y control es de interés fundamental
para el parasitólogo.

El control de los nemátodos fitoparásitos, se basa en una identificación correcta del nematodo en
cuestión, de ahí que sea importante conocer las características morfológicas más importantes de los
principales géneros de estos patógenos.
 - 26 -

MATERIAL REQUERIDO

EQUIPO
Microscopio biológico
MATERIAL
Suelo con nemátodos
Montajes permanentes
Portaobjetos

desarrollo de la práctica

1.- Elaborar montajes a partir de material vegetal enfermo o suelo procesado, los montajes se harán
siguiendo la metodología descrita anteriormente.

2.- Usando los montajes permanentes disponibles en el laboratorio, observar al microscopio biológico
los especímenes, con los objetivos 10x y 40x.

3.- Dibujar cada espécimen cuidadosamente, resaltando las características más importantes: forma,
tamaño, tipo de estilete, tipo de esófago, unión del bulbo basal con el intestino, posición de la vulva,
tipo de cola, características del sistema reproductor de la hembra, etc.

4.- estudiar los resultados y compararlos con las características distintivas de cada uno de los géneros de
los cuales tenemos previo registro para poder identificar el género del nematodo que se está estudiando
 - 27 -

IV. CUANTIFICACION DE NEMATOD0S

Para realizar una cuantificación, o conteo de nematodos en laboratorio, es necesario preparar una
solución homogenizada de una muestra extraída en campo la cual puede ser de suelo, raíz o tejido aéreo;
posteriormente se extrae una sub muestra de la cual se realizar conteo de nematos.

Para la elección del conteo se aplica el volumen seleccionado de solución en ml sobre una placa
nematicida que esta subdividida en pequeñas cuadriculas, se realiza conteo de la cantidad total de
nematodos que están dentro de las cuadriculas haciendo uno de un microscopio óptico en este conteo
se toma en cuenta la identificación de machos, hembras, jóvenes y huevos para poder hacer una media
de la población de cada uno, con los resultados del conteo se puede aproximar la población de nematodos
que pueden estar invadiendo un medio de cultivo.
 - 28 -

V. CONCLUSIONES

Las diferentes técnicas utilizadas para la extracción, identificación y conteo de nematodos fitopatogenos
son fundamentales para obtener datos veraces cuando se realiza un muestreo, estos muestreos van
enfocados para obtener datos de población y genero de nematos que podrían estar afectando nuestros
cultivos; es por ello que es muy importante realizar estos muestreos puesto que es muy importante
conocer el género y población de nematos que esta afectando nuestro cultivo, además si se trata de un
namatodo fitopatogeno o fitoparasito.

En el laboratorio es muy importante realizar las pruebas de identificación y extracción tomando en cuenta
la jerarquía de los procedimientos y con el cuidado requerido para evitar contaminar la muestra, así
mismo los procedimientos de centrifugación y conteo para obtener datos fiables del muestreo.
 - 29 -

BIBLIOGRAGIA

https://es.scribd.com/document/81250294/Nematodos-Fitopatogenos

https://www.anacafe.org

PACHECO, A. J. (2000). Manual de prácticas de laboratorio de Nematología. Juan José Ríos, Sin; México.
20 pp.

. (2002). Manual de prácticas de Micología. Juan José Ríos, Sin; México. 35 pp.