.

Agron<xnfa Costarriamse 16(2): 177-185. 1992

EFECTO DE LA CIANAMIDA ffiDROGENADA EN LA SEMILLA DE CAFE (Coffea arabica) cv. CATURRA.II. INFLUENCIA SOBRE EL METABOLISMO GERMINATIVOI
Eric Guevara* Jorge Herrera* Ranu'ro Alizaga*

ABSTRACT Effect of hydrogen cynamide on coffee seed (Co//ea arabica) cv. Caturra. u. Influence on metabolic parameters of germination. The interaction of several immersion periods and doses of hydrogen cyanamide (HC), on its own and in combination with giberellic acid (AG3), was evaluated on coffee seeds with and without endosperm. Concentrations of HC of 0.0075 and 0.001 % (50% a.i.) and immersion periods of 5 and 20 min proved to be useful in promoting seed germination. The levels of CO2 in sealed flasks for one or more days showed gradual diminishing values of this gas during the fIrst 8 days. In the presence of HC, CO2 values were lower. Higher values were found after 10 days. In the case of seed stored for 5 months the lowest values were found after 10 and 12 days. These lowest values coincide with the end of the germination phase sensu stricto. The interaction of HC and AG3 promoted germination, specially after long immersion periods. The effect of HC and water on germination of coffee seeds, as well as their interaction with AG3' are discussed.

INTRODUCCION La investigaci6n realizada con semilla de cafe ha pe:rmitido comprender gran parte de log factores, principalmente mecanicos y fisicos, que afectan la germination de la misma (Bendana, 1962; Valia 1980). Sin embargo, la mayoria de estos experimentos se centraron principalmente en estudiar log posibles obstaculos a la germinacion, par 10 que, basta el momenta, el proceso de germinaci6n en si, ha sido poco caracterizado. Este comentario es igualmente valida para lag

1/

Recibido para su publicaci6n el 24 de setiernbrede

C I99I. In .. G S ill entro para vesugaclones en ranos y ern as, Univenidad de Costa Rica San Jose Costa Rica. Los

papa (Guevara y Herrera, 1989) y en mani

(Alizaga .. al., 1990) con niveles de CH bajos et . .. (.<0,25% l.a.) sugleren la poslbllldad de que el uso
de bajas concentraciones de esta sustancia tendrian un efecto estimulatorio en la activaci6n metab6lica de la semilla. El hecho de que embrio-

diferentes sustancias evaluadas, con las cuales se busca en general demostrar su efecto estimulatorio 0 inhibitorio sobre la germinacion final de las semillas. Herrera et aI. (1989) mostraron que la cianamida hidrogenada (CH) provoca, cuando se utiliza en altas concentraciones (>1% i.a.), una disminuci6n de la germinaci6n de la semilla de cafe. En dosis mas bajas (0,5-1 %), la presencia 0 ausencia del pergamino asi como la humedad de la semilla resultaron en modificaciones importantes de la respuesta a la CH, 10 que sugiere una posible relaci6n entre estos parametros. Par otra parte, observaciones hechas en

autoresson rniernbrosdel ~rograrnad'eapoyofmanciero a investigadores del Consejo Nacional de Investigacion.esCientificas y Tecnol6gicas(CONlCIT) de CostaRica.

.
178 AGRONOMIA COSTARRICENSE

Desaislados tempranamentepudieran desarrollarse aun con dosis de CH superioresal2% i.a. va en favor de esta hip6tesis (Herrera et al., 1990). Se evidencia asi que es necesarioun mejor conocimiento del metabolismo de la semilla, con el fin de tenet un mayor control del proceso germinativo, de especial importancia en plantas agricolas (Bendana, 1962; Osei-Bonsu et al., 1989). El objetivo del presentetrabajo foe caracterizar la expresi6nde varios parametros metadel bolismo de la semilla de cafe, en presencia de nivelesbajosde CH con el fm de ampliar el conocimiento soble los efectosde la sustancia soble la germinaci6n. MATERIALES Y METODOS Los experimentos realizaronen las instase laciones del Centro para Investigaciones en Granos y Semillas (CIGRAS) de la Universidad de CostaRica. Seutiliz6 semilla del cultivar "Caturra"procedentedel Centro para Investigaciones Cafe en (CICAFE). Esta foe secada bastaalcanzar40% de humedad y foe almacenadaa 20C durante el transcurso toda la investigaci6n. de Todos los experimentosse dispusieron en un disenoirrestricto al azar. Germinacion de semillas con y sin pergamino Experimento I. Se realizaron tratamientos de inmersi6n, tanto de semillas con y sin pergamino (endocarpo)pol 0, 5, 10 Y 15 min en soluciones de cianamida hidrogenada(CH2N2' CH), en concentracionesde 0, 0,01, 0,05, 0,1, 0,5 y 1% de la formulaci6n comercial (50% ia). Posterior a la inmersi6n, la semilla foe colocada sabre una bandejaentre 2 laminas de papel para germinaci6n 0 previamente humedecido, y en una camaraa 30C y 98% de humedadrelativa. En el casode la semilla sin pergamino,se evalu6 el porcentajede germinaci6n(radicula superiora 2 mm de longitud) a partir del quinto dia. Se realiz6 recuentos cada 48 h basta completar un periodo de 2 semanas. Se determin6 el peso de las plantulasa los 17,21 Y 28 dias despotsde iniciado el experimento. En el caso de las semillas con pergamino,la evaluaci6nse inici6 despotsde 7 dias. Se efectuaron determinaciones cada48

h pol un periodo de 4 semanas. ambos En tipos de semilla cada tratamiento const6 de 4 repeticiones 50 semillas. de Experimento II. En un segundo experimen se utiliz6 unicamente to semilla con pergamino. Las soluciones de CH empleadasfueron 0, 0,005, 0,0075, 0,01, 0,025, 0,05 y 0,1 de la formulaci6ncomercialantescitada,duranteperiodos de inmersi6nde 5, 10, 15 Y 20 min. La semillafoe colocadasoblepapelde genninaci6n,de la misma maneradescritaanteriormente.Se evalu6 el porcentajede semilla germinadaa los 7, 10, 13 Y 21 dias. La evoluci6n del peso seco de las plantulas foe evaluadaentre los 22 y 37 dias despotsde iniciado el experimento. En este caso cada tratamiento const6 de 4 repeticiones de 25 semillas cadauna. Experimento III. Igual que en el experimentaanterior,se utiliz6 unicamente semillascon pergamino.Las inmersionesfueron de 15 miD en solucionesde CH de 0,005 y 0,01% de la formulaci6n comercial,combinadas no con una solu0 ci6n de AG3 en una concentraci6n de 5 mg/L. Posteriormente, semilla foe sumergidapol pela riodos de o y 6 h en agua,despotsde 10coal foe puesta a germinar de acuerdo al procedimiento descritopreviamente,con la excepci6nde que la semilla no foe recubiertacon papel de germinaci6n. Se evalu6 la germinaci6n segunel metoda empleadoanteriormentey el peso seco se determin6 al finalizar el experimento.Cada tratamiento const6de 4 repeticiones 50 semillas. de Determinacion de los niveles de CO2 durante el procesode germinacion de la semilla con pergamino Se determin6el porcentajede CO2 liberado pol las semillas durantela germinaci6n.Se efectuaron2 experimentos: Experimento A. La semilla se coloc6 pol 15 miD en solucionesde CH de 0, 0,005,0,01 y 0,05% de la formulaci6n comercial. Posterior al tratamiento, las semillas fueron depositadasen erlenmeyers 250 ml, en el rondo de los coales de secolocaron2 capasde papelde germinaci6npreviamentehumedecido con aproximadamente ml 8 de agua.Los erlenemeyers fueron selladoshermeticamentea presi6n con taponesde corcho recubiertos con papel aluminio, para evitar perdidas de CO2entre mediciones. Las determinaciones de CO2 fueron hechascon un analizador de gases infrarrojo Riken modelo RI-550A. El material

GUEVARA el al.: Cianamidahidrogenada 1ast2nilla de cafe en

179

experimentalrue diviilido en 2 condicionespara efectuar2 tipos de mediciones:I) cada2 dias despues de iniciado el experimento,bastacompletar un periodo de 16 was; 2) a frascosque permanecieron sellados durante 4, 6, 8 y 10 dias. En ambos casas,una vez realizada la medici6n del gas,el fiasco rue nuevamente sellado.Ademas,al fmal del experimentose evalu6 el porcentajede germinaci6ny el pesosecode las plantulas. Experimento B. Se efectuaroninmersiones par 15 mill en solucionesde CH al 0, 0,005% y 0,01% de la formulacion comercial y de AG3 en una concentraci6nde 5 mg/L. Seguidamente, la semilla se sumergi6 par 0 y 6 b en agua, y se coloc6 en erlenmeyers 125 ml, segunel procede dimiento descrito en el experimentoanterior.Las mediciones se bicieron cada 2 was. Cada tratamiento const6 de 4 repeticionesde 25 semillas. Otrasmedicionesincluyeronel porcentajefinal de germinaci6n,asi como el pesode las plantulas. RESULTADOS Efecto de los tratamientos y los tiempos de inmersi6n sabre la germinaci6n Dosis altas de CU. La Figura 1 muestrala germinaciande semillasde cafe previamente despergaminadas.Se notan porcentajessemejantes entre el testigoy la dosis de 0,01% de CR. No se detectarondiferencias significativas de los tiempas de inmersi6n. Con dosis superioresal 0,01% de CH se observ6 un marcadoefecto inhibitorio

soble la germinaci6n, al punta que las semillas tratadascon !as dosis de 0,5% y 1% no germinaroo del todo, par 10 cual no se incluyeron en la figura. Con las concentraciones 0,05% y 0,1% de se detect6 un marcadoatraso en la germinaci6n, especial mentecon la segunda dosis.El tiempo de inmersion caus6efectos significativos, observandose una mayor germinaci6ncon tiempos de 15 min. AI evaluarel pesosecode las plantas(Figura 2) se nota que esta tendenciase mantiene,siendo una vez mas el factor de inmersioncritico cuando las dosisde CH utilizada son superiores 0,01%. al No se incluyen los resultadosobtenidosen semillas con pergamino debido a que se obtuvo una germinaci6n sumamenteerratica y escasa, debidoa factoresdesconocidos. Dosisbajas de CU. Con baseen los resultadosobtenidosen semillasdespergaminadas prose cedi6a estudiarel efectode nivelesde CH inferiores a los aplicados, como tiemposde inmersi6n asi mayoresen semillascon pergamino.En la Figura 3 se nota una germinacionmas lenta en presencia de CH, puesapenas obtuvo un 80% de germinase cion despues 20 was, en comparaci6n los 5 de con was que dur6 en ausencia pergamino(casodel del testigo).La presencia CH estimula ligeramente de la germinaci6ncuando los niveles aplicadosfueroo de 0,0075% 0 superiores.Este estimulo rue observadoa partir de los 7 dias. Despuesde 20 was el efectodel tiempode inmersi6ninicial sabre el % de germinaci6n deja de seTaparente.Con excepci6nde la concentracion 0,005% de CH, al no se notaron diferencias significativas sabre la

100

0.' 10 1.5

i ,. ~ ~ .. .!
2'

..

~I..
0

~ g 1.3
~ 1.2

1.1 . ,...,.,," ,..., O.M."".'~"'" ,...,.". ,.,", 0 ra.

COM."".."'"

Fig. 1.

Efecto de concentraciones perfodosde inmersi6n y en cianamidahidrogenada(50% i.a.) sobre1agerminacioo de semillasdCc cafe sin pelgamino.

Fig. 2.

Efecto de perfodosde imnersi6n en so1uciones de diferente concentracioode cianamidahidrogenada (50% i.a.) sabree1pesosecode p1antu1as cafe. de

180

AGRONOMIA COSTARRICENSE

germinaci6n entre los demas niveles aplicados. Nuevamente, la evoluci6n del peso seco de las ptantulas(Figura 4), muestraun comportamiento similar con respectoal observadoen la germinaci6n. Aunque estadisticamente fueron diferenno tes, se pudo notal un ligero incremento en la materiasecaal utilizar niveles de CH comprendidos entre 0,0075% y 0,01%. POTel contrario, semillas tratadascon dosis de 0,005% tienden a mostrarel menor peso seco.Es interesantebarer notal que el incrementode pesoentre los 22 y 29 dial; foe bajo, mientras que el aumentofoe muy fuerte a partir de los 33 dias. Con baseen los resultados obtenidosseprocedi6 a evaluar en experimentos posterioresconcentraciones CH comprendidas de entre 0,005%y 0,01% y su interacci6ncon el AG3' asi como periodos prolongados de inmersi6n en agua. Al emplearCH (FiguraSa)seobserv6un efectodetrimental del periodo de inmersi6n prolongada en aguaposterioral tratamiento, pueslleg6 a obtenerselinicamente 49% de las semiUas germinadas despuesde 34 dial;.Tantoel testigocomoe1tratamiento al 0,005% de CH en semillas sumergidas pol periodos prolongadosmostraron un considerable ab"aso la germinaci6n.En ausencia proceso en del de inmersi6n los valores de germinaci6n fueron superiores 90% en ese mismo periodo. En preal senciade CH+AG3,el efectodel periodode inmersi6n foe menospronunciado(Figura 5b), ~ro las diferenciasfueron mayorescon res~to a la concenb"aci6n CH empleada. de Con la combinaci6n de AG3+CHal 0,01% seobtuvoporcentajes mayo-

res de germinaci6na los 14 y 18 dial;, alcanzado valoressuperiores 80% despues los 22 dial;. al de La inmersi6nprolongada aguaretard6la germien naci6n cuando se us6 AG3 conjuntamente con 0,005% de CH. Empleado solo, el AG3 produjo una velocidad de germinaci6n menor.Excepci6n hechadel tratamientode AG3+CH al 0,005% sin imbibici6n posterior,la germinaci6nde todos los tratamientosfoe superior al 80%, sin observarse diferencias significativasentreellos. Evolucion de la produccion de CO2 durante el procesode germinacion y crecimiento La Figura 6 muestra la evoluci6n de los niveles de CO2 determinados semillastratadas en con diferentesconcentraciones CH. En todos de los casossepuedeobservaruna tendencia similar, una fuerte disminuci6n de los niveles de CO2 enb"e dia 4 y el 8, despues 10coal su concenel de b"aci6nse incrementa nuevamente.La Figura 7 muestra1aevo1uci6n los nive1es CO2 cuande de do los frascos permanecieron se11adospOT periodoscomprendidosentre 2 y 10 dias. Puede notarseque, al igual que en e1casode 10sfrascos abiertosregularmente, nivel de CO2en los frasel cos seUados alcanzasu ponto masbajo el dia 8. La germinaci6ndel testigo Cue relativamente uniforme independientemente tiert)pob"ansdel currido antesde la aperturadel frasco (Figura 8). La aparici6nde la radicula se observ6en los frascas 8 dias despues iniciado el experimento. de Con los nivelesde 0,005 y 0,01% de CH, los niveles mas altos de germinaci6nse alcanzaron a

100

8.5

-,

-::~-~-~-,

00

8..

~ 8.J

] ;E:
~
E

.8

i .
a

8.1

8.1

,,~m," '"',' 5101S10 , 101520181528 , 51015201",

0.."""0"'" 0.0 0.005 0.0075 0.01 0.025

510152
0.05

120 Dr..

'__mto ,.", C'M""".'

Draa

Fig. 3.

Efecto de la inleraccioo mtle dosisbajasde cianamida hidrogenada(50'70 i.a.) y periodosde inmersi6n sobrela germinacioode sernillasde cafe con pergarnino.

Fig. 4.

Efecto de la interacci6nentre dosis bajasde cianamida hidrogenada(50'70 i.a.) y periodos de inmersioo sobreel pesosecode plantulasde cafe provementesde semilla con pergamino.

GUEVARA et al.: Cianamidahidrogenada la semillade cafe en

181

.00

..
-0

80

-;
"-

'0 40
2

l~

0 CR-O'
.{

-+- 0 CR-"

~ E

-- 0,00' .0' CR e- 0,00' CR."

--0," CR."

0,0' CR.O'

..

&

0'" u

--

2' DIu

34

'00

80

~
~ ~ E '.. co

'0
4

[
26 34

6 DI..

10

Fig. 7.

~I"'"

Evoluci6n de los niveles de CO2liberados durante la genninaci6n de semillas de cafe tratadas con
varias dosis Evaluaciones de cianamida hidrogenada hechas en frascos abiertos (CH2H~. s610 en la fecha indicada.

AG,-0 CR-O' -+- AG,-0 CR-"

AG,-0,00' CR.O' -&- AG,-0,00' CR-O' -- AG,-0,0' CR.O' AG,.0,0' CR."

10

DI.. Fig. 5. Efecto de dos reguladores metab61icos y de la

inmersi6nen agua(Oh,at) posterioral tratamiento, sobrela genninaci6nde semilla de cafe almacenada por 10 meses.A. Cianamidahidrogenada (CH). B. Cianamida hidrogenada mas acido giberelico (AG3 5 mg/L).

~,

~ ! ~

0.005

0.0'

0.5

ConcentreclOn de CH,N. (%)

Fig. 8. ...

Efecto de la interacci6n entre el dia de apertura de los frascosy la dosis de cianamida hidrogenada sob~ la germinaci6n de semilias de cafe con

;N

pergammo.

.2
Fig.6.

,.

dIu

10

de CH, AG3 Y periodosdede los niveles de CO2' Y 6 h soble Ia evoluci6n inmersi6nen aguade 0
Durante todo el periodo evaluado se observ6 una menor liberaci6n de CO2 en semilIas almacenadas pol periodos largos (10 meses) en comparaci6n con periodos cortos (5 meses). Tanto el tratamiento testigo como el tratamiento con AG3 presentaron su mayor disminuci6n en Ia producci6n de CO2 a los 8 dfas (Figura 9a), similar a 10observado en Ia Figura 6. Las mayores diferencias en la producci6n de CO2 entre las semillas almacenadas pOT5 Y 10

Evoluci6n losnivele5 CO2liberado semide de por lias de cafetratadas varias coo coocentraciooes de cianamida hidrogenada i.a.) (50%

los 6 dfas. Hubo disminuci6n en los dfas anteriores y posteriores. Con niveles de CH at 0,5%, la germinaci6n decreci6 con forme se prolong6 el tiempo de sellado del fiasco. La Figura 9 (a,b) muestra el efecto producido pol la interacci6n entre bajas concentraciones

182

AGRONOMIA COSTARRICENSE

A~.~...

'.5

M.~ -

!iI'!'~;':C'

12 drag, d~spues de 10 cu~l aument6 ~n fo~a brusca, reglstrandose a partIr de log 14 dlas, mve-

,
2.5

leg comparables log de semillas de mellor edad a

..
~N

(Figura 9a).Conel usade AG3la producci6n de CO2alcanz6su punta mas bajo a log 10 drag,

8. 1.
1 o.
02 4 , . 10 12 14 If
DIu

:: ::J~HC-H'_~'~:"' registrados ] C~ posteriormente estos2 tiltien

--- .. CH.0 If

--

mientrasque con CH, a log 8 dias. Los nivelesde

: ~~:.J~H.~~ lag semillasque fuerontinicamente inmersas en

M_,f
!
..1

mas tratamientos interlaces obtenidos son a log en

aguapar 6 h (Figura 9b), con diferenciasde basta 1% de CO2.

~,

"It
"'1'

,j

DISCUSION -_Ob

~
SN
1

~~

~
-e-

O~C

o~ CH 6h

0.5

'

0.01~CH- 6b
AG,

Efecto de la CH y el AGJ Este estudiomuestracon claridad (a>O,O5) que dosis alias de CH (mayoresde 0,1%) inhiben la germinaci6nde lag semillasde cafe.

0
1 4 6 . 10 Diu 11 14 If 11

-.-

- 6b

Estoconfirmalog experimentos realizados previamente (Herreraet at., 1989),con dosis

. FIg. 9.

. . . ft:-. Efec~o clanamlda de!a hidrogenada. y del ~CH)

acldo glberehco (AG3) sabrela evoluclOD CO2 de en semillasde cafe almacenadas 6 y 10 meses. por

. su~nores al 1% Y corroborael alto grado de sensibilidad de la semillade estaespecie la CR. a Par el contrario que dosis comprendidas
entre

'.. 0,0075% 0,01 sean y % estlmulatonas la de

B. Efecto delperlodo inmersion y 6 h) sabre de (0 laevolucion CO2. de meses se observaron en log primeros 2 drag (Figura 9a) debido a que periodos mayores de almacenamiento mostraronuna mellor liberaci6n initial. En general,los nivelesde CO2durantelos primeros 8 dias mostraronuna disminuci6n progresiva,que volvi6 a aumentar partir del decimo a dia. En ese momenta la producci6n de CO2 se increment6rapidamente,aunqueel aumentoCue menor en lag semillas almacenadasdurante 10 meses.Las semillas tratadascon AG3 mostraron un comportamiento similar al testigo, mientras que con el empleode CH al 0,01% el incremento de CO2 se retard6. Par 10 tanto, existen diferencias marcadas con respectoa la edad de la semilla; en el casode un almacenamiento 10 meses, de el mellor pica de production de CO2 se produjo a log 12 drag,0 sea4 dias mas tarde que en el caso de semilla almacenada 5 meses. par Con inmersi6n prolongada de 6 h (Figura 9b), la disminucionde los nivelesde CO2 muestra variaciones en funci6n del tratamiento quimico empleado. Asi, el CO2 producido par el tratamiento testigo disminuy6 gradual mente bastalog

germinaci6n podria explicarse par el hecho de que durantela Case initial de imbibici6n no existe una cantidadsuficientede oxigeno, par 10que la respiraci6n es de tipo anaer6bica (Bewley y Black, 1982; Simon, 1984). Bajo estascondiciones,la actividadmetab61ica depende gran parte en de la activaci6ninitial de lagenzimasasi como de la hidr61isis de lag reservas (Mayer, 1977). La actividad mitocondrial es muy baja, mientrasque las enzimasglicoliticas son funcionalesdesdeel initio de la imbibici6n. Se ha considerado que la CH activa la via de lag pentosasfosfato, 10 cual ~rmite un aumentodel metabolismoinitial de la semilla (Amberger,1986).Mayer (1977) considera que la via de las pentosasfosfato compile par el sustrato respiratorio disponible, existiendo entoncesuna relaci6n entre ambos.La evoluci6n del CO2 liberado (Figura 8) parececoncordarcon estahip6tesis,ya que en presenciade CH la Ii beration initial es mellor queen el testigo. EI hechode que dosis muy bajas (0,005%) tenganun efectoaparentemente inhibitorio parece sugerirque estaconcentrationes insuficientepara parler estimular el metabolismo.Otro factor que puedecontribuir con ~te hechoes la rapida metabolizacion de este producto (menos de 2 dias) (Goldbach et at., 1988), con 10 cual dosis muy

GUEVARA et al.: Cianamida hidrogenada 1asernillade cafe en

183

bajasno sostendrian metabolismo el tiempo el POT necesario parauna acci6nefectiva del compuesto. La interacci6n entre CH y AG3 tiene un efecto estimuladoren la germinaci6n,con el cual se obtiene un 80% de plantulas 7 a 10 dias mas rapidamenteque el testigo 0 con la AG3 sola. A pesar de que el crecimiento se ve retardadoPOT log inhibidores de la respiraci6n (Come, 1987), log resultados obtenidossugierenque la combinaci6n de ambassustancias promueveel crecimiento y a la vez favoreceuna utilizaci6n maseficiente de lag reservasenergeticas. Resultados comparabIesfueron obtenidosPOT Herrera et al. (1990) en tuberculosde papa.

El efecto negativo de la inmersi6n rue parcialmentereducido con niveles de 0,01% de CH (Figura 5), pues estaactiva la via de las pentosas fosfato, que es funcional desdelog momentosiniciales del procesode germinaci6n(Simon, 1984; Mayer, 1977). La presenciade CH permite a la semilla atravesarlag rasesde imbibici6n y respiraci6n y alcanzarla rasede crecimiento,momento en que, con la perforaci6ndel pergamino,el flujo de oxigeno bacia la semilla es mayor (Mayer, 1977). La total ausencia de germinaci6n de la semilla con pergamino (con excepci6n de lag semillas tratadas con CH) en el primer experimento podria explicarse a traves de la hip6tesis Funci6n del agua anterior,ya que lagbandejas, presentar conal una La CH activa la rapida hidr61isis de lag dici6n de alta humedaden forma continua, manreservasde la semilla (Guevaray Herrera, 1989), tienenel pergaminosaturadode aguay causanun sin embargo,en ausencia una hidrataci6nadede deficit de oxigenoa la semilla,POT que el meta10 cuada causariaun efecto detrimental, que puede bolismo anaer6bicoen la misma se prolonga, 10 llevar a la muerte del e~bri6n (Villalobos et al., cual inhibe la germinaci6n (Simon, 1984). De 1991).Esto puedeexplicar que tiempos de imbipermanecer estacondici6npOT varios dias, seprobici6n de 15 y 20 mill mejorenla capacidadgerduciria la muertede la semilla. minativa de semillastratadascon concentraciones El efecto de la AG3 sobre la inmersi6n es altas de CH (0,05 y 0,1%). En presencia perdel diferente. Bishnoi y Krishnamoorthy (1990) ban gamino, dosis de CH de 0,05% no presentaron el observado bajo condicionesde inmersi6nproque efecto inhibitorio observado en ausencia del longada, la nodulaci6n de la soya no es severamismo. Al respecto Simon (1984) observ6 en menteafectada con la aplicaci6nex6gena AG3' de arveja que la remoci6n de la testaprovocabauna pues la nodulaci6n misma aporta a la soya la fuerte entradade aguaen la semilla en log primedosis necesariade este regulador, cuya sintesis ros estadiosdel periodo de imbibici6n, mientras end6gena ve inhibida bajo esascondiciones. se En que la presenciade la misma retarda considera- el casodel cafe es probableque el aporteex6geno blemente la entrada de liquido a la semilla, aun cubra parcialmente lag necesidades embri6n, del POT varias horas.Ello refuerzala funci6n del per10que Ie permite desarrollarse normalmentebasta gamino como una barreraa la penetraci6n susde perforar el pergamino,con 10 cual el suministro tancias y al intercambio gaseoso(Come, 1975; de oxigeno deja de seTlimitante y se inicia el Mayer, 1977). metabolismo normal de la plantula. En log ensayos que se efectu6inmersion en El uso combinadode CH y de AG3 resulta de la semilla en agua posterior al tratamiento,es en un efecto aditivo, que promueveuna alta gerprobableque la disponibilidadde oxigenose viera minaci6ncomo seobserv6en lagFiguras5a y 5b. reducida. Esto puededeberse acl1rnulo etanol, al de lactato y etil-B-D-glucosa dentro de la semilla Efecto en la respiraci6n (Simon, 1984),log cualesafectanel metabolismo La disminuci6ndel consumode oxigenoen normal.En ausencia pergamino, flujo de agua presencia niveles altos de CH estarelacionada de el de y oxigenobaciala semillano tienerestricciones. El con la activaci6n de la respiraci6n anaer6bica pergaminoactuariaentonces como una barreraini(Mayer, 1977).Esteefectopuedeobservarse log en cial a la entradade oxigenoen forma libre, 10que nivelesde C~ producidodurantelog primerodias. bajo ciertascondiciones podriaafectarla viabilidad Las curvas de CO2 obtenidas permiten de la semilla. POT otra parte,no puededescartarse caracterizarla germinaci6nde la semilla de cafe que estaenvolturapuedatambienactuarcomo una en 3 rases: barrerafisica a la emergencia la radicula,como de aUna primera rase que cubre aproximadarue demostrado Valio (1980). POT mente log primeros 4 dias, en donde se

184

AGRONOMIA COSTARRICENSE

b-

c-

observauna fuerte liberaci6n de CO2. Esta rasecorresponde procesoinicial de imbial bici6n (Come, 1983). La segunda raseva desdelog 4 bastalog 10 dias, en dondese produceuna fuerte disminuci6n de la liberaci6n de CO2 por parte de ill semilla, con un ponto mfnimo entre log 8 y 10 was. Con baseen observaciones visualeg, estarasecorresponde la germinaci6n, a que se caracteriza ser un procesoenderpor g6nico (Bewley y Black, 1982; Carvalho y Nakagawa,1983). La tercera rase se inicia entre log 10 y 12 dIas; a partir de aqui, el nivel de CO2 producido por lag semillas aumentaconstantemente, como consecuencia crecimiento del propiamentedicho y ya no del procesode germinacion.

La inmersi6n inicial prolongadade la semilla (6 h) afect6considerablemente germinaci6n, la con un atrasode 2 a 4 was, 10que evidenci6que el factor limitante era la disponibilidad de oxigeno, como ha sido observado en otras semillas (Come, 1983).La edadde la semilla afect6considerablementeeste proceso, especialmenteen la primera rase,en la que se observ6una menoractividad inicial en lag semillas mas viejas. Esto puede atribuirse a una perdida de vigor e indica una cierta degradacion la maquinariaenzimatide ca de la semilla (Tissaoui, 1975; Vertucci, 1989) que seria responsable de que la germinaci6n sensustricto seretrase. La evoluci6ndel COz liberadopor la semilla sometidaa un periodo de inmersion prolongado, pero tratadacon AG3' foe similar a la observada en el testigo.Esto concuerda con log resultados obteDidos por Bishnoi y Krishnamoorthy (1990), ya queen estecasoel AG3 exogeno estimul6el proceso germinativoa pesarde que la inmersionpor 6 h reduceel suministrode oxigeno. Para dosis de CH inferiores a 0,5%, lag semillas contenidas en frascos hermeticamente selladospor mas de 6 dias presentaronuna disminuci6n de su germinaci6n, mientras que con dosis de 0,5% estadisminuci6n se observ6desde log 2 dias. Niveles altos de CO2 (mas de 4%) ban sido considerados como inhibidores de la germinaci6n (Bewley; Black, 1982). En lag condicioDesde este experimentoeste valor s610se obtuvo con niveles de 0,5% de CH y en frascosselladog por 4 dias (Figura 8). Conforme avanz6 el

tiempo de exposici6na esteproducto,aument6el efecto inhibitorio en forma general y especialmentecon dosisaltasde CH, aunqueno se volvieroo a registrar valores de CO2 tan altos. Esto puedeindicar que semillas como el cafe resultan mas sensibles la presenciaprolongadade cantia dadesimportantes CO2. de Las observacionesanteriores refuerzan la hip6tesis de que la CH favorece la hidr61isisde lag reservasde la semilla, aun sin habersetermiDado el proceso de imbibici6n y germinaci6n sensu stricto. Esta degradaci6n de lag reservas coincide con el menor peso secode lag plantulas (Herrera et al., 1989) y seria responsable del mayor acumulode CO2 en el frasco,cuandoeste permanecesellado por varios dias, favoreciendo la inhibici6n de la germinacion. No debedescartarse, embargo,la posibisin lidad de que partedel gaspuedahaberse escapado de log frascl;)s y que esa mejor germinaci6n (observada log 6 dias) corresponda momento a al en que el nivel de CO2 dentro de log frascosdisminuyera, permitiendo el inicio del proceso de germinaci6n. Los resultados obtenidosevidencianel efecto de la CH sobreel metabolismode la semilla de cafe. La caracterizaci6nde log niveles de CO2 permiti6 comprendermejor la acci6n de la CH sobreel procesogerminativo.Asimismo, se POgO de manifiestola importanciaque tiene el pergamino en el intercambiogaseoso liquido de la semiy lla. Ademas,lag respuestas obtenidas,indican que el suministrode aguaa la semilla antesy despues de un tratamientoquimico tiene mochaimportancia en la germinacionde lag mismas. Este factor, no contemplado basta el momentoen el cafe, seraobjeto de un estudiomas detallado,con el fin de comprender mejor log procesosde germinaci6nen estaespecie. RESUMEN Se evaluo el efecto de la interaccion entre periodos de inmersi6n y dosis de cianamida hidrogenada (CH) sola 0 en combinaci6n con acido giberelico (AG3), sobre la germinacionde semillasde cafe.Concentraciones CH de 0,075 de y 0,001 (50% ill) estimularonla germinaci6nde % lag semillas.El periodode inmersionprevio (entre 5 y 20 miD) mostr6 un marcadoefecto sobre la accionde la sustancia. nivel de CO2 en frascos El

GUEVARA et al.: Cianarnida hidrogenada la s~ en 1\

de cafe

185

presencia CH la disminuci6n este enlos de de gas frasc f Lo . I d CO

sellados par uno 0 mas dias se redujo gradualmente durante los primeros 8 dias. Ademas, en

COME, 1975. D. ROle l'eau,del'oxigene dela tanpCrade et turedans gennination. La genninati~dessan'!nla III
ces.Ed. by R. Otaussat;y: ~ Deunff. Pans,GauthierVl1lars. pp. 26-44.

os ue mayor. s rnve es e 2 aDmeDian despues 10 dias.En el casode semilla almacede Dadapar 5 meses,se obtuvo los valoresmenores de C~ entre 10 y 12 dias, que coincideDcon el fi d I d . .6 . La

GOLDBACH, mALER,Ot.; WUNSCH, AMBERH.; A.; GER, 1988. A. Deaxnposition14C-labelled of cyanamid~ in Vitia vinifera cuttings.Iournal Plant
Alyslology 133:299-303.

m e proceso e germlnacln sensu strIctO.

interacci6n de la CH con el AG3 result6 estirnulatoria del proceso germinativo, especialmente cuando se usaron 109periodos de inmersi6n mas prolongados. Se discute el efecto de la CH y del la . .6 d I . agua en germmacl n e a semilla de cafe, asi como su interacci6n con el AG3. LITERATURA CITADA
ALIZAGA, R.; GUEVARA, E.; HERRERA, I. 1990. Efecto de algunostratamientosqufmicos sooreel perfodo de reposo del man{ (Arachis hypogea). Agronomfa Costarricense 16(1):29-36. AMBERGER, A. 1984. Uptake and metabolismof hydrogen cyanamidein plants. III Proceedings IxId dormancy of in grapevines:potential and practical usesof hydrogen cyanamide on grapevines. Ed. by P.I. Weaver; 1.0. Ioh.fison.and A.S. Wicke. U.C. Davis, University of CalifOffil&,pp. 5-10. BENDANA, F.E. 1962. The physiology of coffee seeds.ll. Factors retarding gennination, parchment. Turrialba 14:76-79.
BEWLEY, I.D.; BLACK, M. 1982. Physiology and bioche-

HERRERA, Al..1ZAGA, GUEVARA, 1990. I.; R.; E. Efecto de la ciaoamida hidrogenad. del .cido giberelico y soI>re.reposo lostuberculos, desarrollo la proel de el y dUCCl~de papa(S~/alllUll tuberoslUn). Agronomfa Costarrlcense 15(1-2).29-35. HERRERA, GUEVARA, BARBOZA, 1989. I.; E.; R. Efecto de la cianamid.hidrogenada la semillade cafe en
(Coffeaarabica L) cv. Caturra.I. Influencia en la ger-

minacioo. Turrialba 39(3):287-292.

MAYER, A. 1977. Metabolic control of gennination. III The physiology and biochemistry of seed dormancy and germination. Ed. by A.A. Khan. Holland, Elsevier/NorthHolland Biomedical Press. 357- 384. p. OSEI-BONSU, K.; AMPOFO, S.T.; AMOAH, F.M. 1989. Coffee seed gennination. ll. Effect of some pretreatmentson coffee (Coffea callephora) seedgennination. Cafe,Cacao,The 23(4): 223-238. SIMON, E.W. 1984.Early eventsin germination.III Seedphysiology.v.2. Germinationand reservemooili7ation. Ed. by M. David. pp. 77-115. SOLOMOS, T. 1977. Cyanide resistantrespiration in higher plants. Annual Review of Plant Physiology 28:279297.

mistry of seeds. 2ed. Berlin, Springer-Verlag, v. 2 BISHNOI N.R.; KRISHNAMOORmy, H.N. 1990.Effect of waterlogging and giberellic acid on nodulation and nitrogen fixation on peanut. Plant Physiol. and Biochan. 28(5):663-666. CARVALHO, N.M.; NAKAGAWA, I. 1983.Sementes; ciencia, tecnologfae produ~ao.2 ed., Campinas,Funda~o Cargill. 429 p. 6 COME, D. 1987. Germinationet dormancedes sanences.11I Devel~ent desvegetaux;aspects theoriqueset synthetiques. Ed. by H. ~ Guyader. Paris, Masson. pp. 103-118. 1\ COME, D. 1983. Germination. III Croissanceet developpement; physiologie vegetate.ll. Collection methodes. Ed pour P.Mallik. Paris,Hermann.pp. 129-226.

TISSAOUI, T. 1975. ~ metabolismede la gennination des sanences.III La gennination des semences. poor Ed. R. Otaussat; y: ~ Deunff. Paris. Gauthier-Vl1lars. p. 65-80. VAUO, I.F.M. 1980.Inhibition of germinationof coffee seeds (Coffeaarabica L. cv. Mundo Novo) by the endocarp. Ioumal of SeedTechnology5(1):32-39.

VERTUCCI, C. 1989.The kinetics of seedimbibitioo: controlling factors and relevanceto seedling vigor. III Seed moisture. Ed. by Ph.C. Stanwood, and M.B. McDonald, Madison, Wisconsin,Crop ScienceSociety ofAmerlca.93-115. VILLALOBOS, R.; HERRERA, I.; GUEVARA, E. 1991. Germinaci6nde semilla de pejibaye (Bactris gassipaes). II. Ruptura del reposo. Agronomfa Costarricense
16(1): 69-76.