Medios Cultivo 2016 5 Oct
Medios Cultivo 2016 5 Oct
Medios Cultivo 2016 5 Oct
CULTIVO
REQUERIMIENTOS DE LOS
MEDIOS DE CULTIVO
Requerimientos energéticos y no energéticos
Salvo excepciones, las bacterias son cultivables en medios
artificiales de laboratorio de tal forma que el medio de cultivo le
proporciona los elementos necesarios para su crecimiento y
multiplicación. De acuerdo con esto, siempre se requerirá una
fuente de energía y una fuente no energética como son las sales,
factores de crecimiento, etc., que sin proporcionar energía son
necesarias para su desarrollo.
Los requerimientos energéticos son los nutrientes de ese medio
de cultivo, que va a ser utilizado por la bacteria para su
crecimiento. Van a ser fuentes de energía en un medio de cultivo,
al menos, una fuente de carbono y una fuente de nitrógeno, y
fuentes no energéticas pueden ser una fuente de fósforo,
determinados iones como el hierro, el potasio, el sodio, el zinc, el
magnesio, etc.
REQUERIMIENTOS ENERGETICOS
1. Fuentes de carbono
Existen también bacterias capaces de utilizar el
gas carbónico CO2 hecho que es característico de
las bacterias fotosintetizantes y quimiolitótrofas.
Otros microorganismos pueden crecer a expensas
del metano, benceno e, incluso, hidrocarburos
como fuente de energía: Ejemplo: Cladosporium.
Por último, existen especies como Pseudomonas,
que pueden utilizar como fuente de energía un
gran número de componentes hidrocarbonados
diferentes.
En general, conocer el tipo de azúcar utilizado por
cada bacteria es muy útil para su identificación
bioquímica y consiguiente clasificación taxonómica.
REQUERIMIENTOS ENERGETICOS
2. Fuente de nitrógeno
Es una fuente bastante menos energética que la fuente de carbono pero es
necesaria para el metabolismo microbiano, produciendo también energía.
Esta fuente de nitrógeno la van a formar las proteínas, péptidos o
aminoácidos. Pueden presentarse como proteínas completas, que sería el
caso de la gelatina cuya presencia sirve para determinar la actividad
proteolítica o gelatinasa del microorganismo problema, o incluso proteínas
aún más complejas, como es el caso de los extractos de carne, sales de
amonio, etc.
Es frecuente encontrar peptonas como fuente de nitrógeno que
corresponden a péptidos o polipéptidos dependiendo de su complejidad
pero en cualquier caso son también proteínas que están parcialmente
hidrolizadas, aunque no se las deba considerar como tal.
REQUERIMIENTOS ENERGETICOS
2. Fuente de nitrogeno
Existen muchos tipos de peptonas y son
excelentes fuentes de nitrógeno.
Entre las más frecuentes y conocidas se
encuentran los extractos de levadura que
son extractos hidrosolubles preparados a
partir de un lisado de levadura que se utiliza
en muchos medios de cultivo.
El bio-Thione, es una denominación
comercial correspondiente a una peptona
pépsica de carne empleada para la
preparación, por ejemplo, del medio líquido
Sabouraud.
Tiene una alto contenido de azufre y de ahí
que en los medios de cultivo que la
contengan se pueda utilizar para investigar
la producción de sulfuro de hidrógeno (SH2)
por parte de la bacteria problema.
REQUERIMIENTOS
ENERGETICOS
2. Fuente de nitrogeno
La caseina corresponde a una peptona
sometida al proceso de digestión ácida muy
utilizada en muchos medios de cultivo, sobre
todo, en forma de peptona tripsica de caseina;
por ejemplo: para estudiar la formación de
indol por parte de la bacteria debido al alto
contenido de triptófano que posee este tipo de
peptona.
También es utilizada para estudiar la reducción
de los nitratos e incluso para el cultivo de
algunos protozoos.
La peptona papaínica de soja, es una fuente de
nitrógeno especialmente para hongos y ciertos
gérmenes exigentes como en el caso de las
Neisserias.
Otra fuente de nitrógeno sería la utilización de
nitratos, nitrógeno orgánico, amoniaco, sales
de amonio, aminoácidos, etc.
REQUERIMIENTOS NO ENERGETICOS
4. Factores de Crecimiento
No todas las bacterias son capaces de crecer sobre medios donde se
encuentran cubiertas las necesidades elementales.
Existen bacterias que aún así no crecen en tales medios o, si lo hacen, es
muy lentamente. A este tipo de bacterias les hace falta además una serie de
componentes definidos que muchas bacterias no son capaces de fabricar por
sí solas para su crecimiento.
A este tipo de componentes se denomina factores de crecimiento y van a
corresponder a algún tipo de aminoácido de bacterias muy exigentes o
incluso vitaminas, bases púricas o pirimidinicas, etc.
Agar sangre enriquecido con metionina, ácido glutámico y ácido nicotínico
para el crecimiento de Xanthomonas.
AGAR CHOCOLATE
HAEMOPHYLLUS
El Agar Chocolate permite el desarrollo
de colonias húmedas, lisas y grises del
Haemophylus influenzae.
Este medio contiene hematina (factor
X) y está enriquecido con otros
cofactores, como el NAD (factor V),
que permite el desarrollo de este
microorganismo.
AGAR SANGRE
BORDETELLA
Agar Sangre enriquecido con
Glicerol - papa (Bordet Gengou)
para crecimiento de Bordetella
pertusis.
Se observa colonias en “gotas de
mercurio” brillantes es fácil de
apreciar.
AGAR SANGRE
FLAVOBACTERIUM
Agar sangre enriquecido con
nitrógeno suplementario y vitaminas
del complejo B para el crecimiento
del Flavobacterium.
REQUERIMIENTOS NO ENERGETICOS
DE LOS MEDIOS DE CULTIVO
5. Factores de Arranque
Son sustancias que van a permitir
a la bacteria en estudio, salir de su
fase de latencia y comenzar su
fase de crecimiento exponencial.
Son fundamentalmente fuentes de
energía ”glucosa” que es utilizado
por las bacterias.
Un factor de arranque puede ser
una fuente no energética como
algún ión que estimule el
crecimiento.
REQUERIMIENTOS NO ENERGETICOS
DE LOS MEDIOS DE CULTIVO
6. Factores Inhibidores
Son componentes que van a impedir el crecimiento de algún tipo de
microorganismo por bloqueo de sus procesos metabólicos.
Los antibióticos son agentes inhibidores o destructores de la propia bacteria.
La azida sódica inhibe el crecimiento de los Gramnegativos.
Algunos colorantes : Eosina Azul de metileno impide el crecimiento
bacteriano de los Grampositivos.
Cristal Violeta impide el crecimiento de los Grampositivos.
Las sustancias inhibidoras son muy útiles para la identificación y tipificación
de pruebas bioquímicas de las bacterias.
Agar Mac Conkey :
Agar Eosina Azul de Metileno
Agar Salmonella Shigella
Agar Verde brillante
AGAR MAC CONKEY
TIPO DE COLONIAS
Superficie de agar Mac Conkey con desarrollo de colonias a las 24 horas.
Se observa colonia rojas fermentadoras de lactosa, el color rojo se debe a
que el microorganismo produce grandes cantidades de ácido mixtos.
Se observa colonias no fermentadoras de lactosa, son colonias pequeñas y
transparentes.
AGAR EOSINA AZUL DE METILENO
4. SEGÚN SU PRESENTACIÓN
MEDIOS DE CULTIVO
SEGÚN SU CONSISTENCIA
1. Medios sólidos.
2. Medios líquidos.
3. Medios semisólidos
POR SU CONSISTENCIA
1. MEDIOS SOLIDOS.
Corresponden a aquellos medios donde la proporción en agar está
siempre por encima del 1.5% (12 a 20 g/litro medio) . Koch utilizó,
en 1881, por primera vez la gelatina para obtener un medio sólido;
posteriormente un alumno suyo, Hesse, utilizaría en su lugar agar.
En la actualidad, para la solidificación de los medios es el agar el
utilizado, ya que la gelatina presenta el inconveniente de fundir a
unos 24ºC, además existen en bacteriología numerosas bacterias
gelatinasa positiva que destruirían tal medio.
La importancia, pues, de los medios sólidos es muy grande, ya que
nos permite el aislamiento, purificación y visualización de su
crecimiento en colonias, así como su posible identificación a través
de medios específicos y diferenciales de caracteres sólidos,
elaboración de antibiogramas, etc.
LOWENSTEIN JENSSEN
MYCOBACTERIUM
15 G 1000 ML
1.5 100 ML 1.5%
POR SU CONSISTENCIA
1. MEDIOS SOLIDOS.
Agar Sangre, observar la morfología de las colonias y el tipo de
hemolisis.
Agar Mac Conkey, los diferentes tipo de colonias de acuerdo al
consumo de lactosa.
Agar Mueller Hinton, prueba de susceptibilidad a los
antimicrobianos.
AGAR SANGRE
HEMOLISIS
Los Streptococus se clasifican en
base a su propiedades hemoliticas en
agar sangre.
La hemolisis parcial de los eritrocitos
da como un resultado un color
verdoso del medio sólido que rodea
las colonias (alfa-hemolisis).
Los que producen hemolisinas que
lisan los eritrocitos, produce un
aclaramiento del medio que rodea las
colonias (beta-hemolisis).
AGAR SANGRE
ANTIBIOGRAMA
Se basa en la difusión del
antibiótico sobre el agar, y
determinar la sensibilidad
(formación de halo alrededor
del antibiótico) y/o
resistencia (crecimiento
alrededor del antibiótico).
POR SU CONSISTENCIA
2. MEDIOS LIQUIDOS.
Corresponden a los que también se denominan caldos, no contienen
agar y su composición, además de agua suele contener al menos
una fuente de carbono, sales minerales, y, en algunas ocasiones
según las características del medio, factores de crecimiento,
vitaminas, peptonas, ciertos aminoácidos, etc. Son de gran utilidad
para la realización de recuentos bacteriológicos por turbidimetría,
especialmente útil en levaduras, para la realización de inóculos, para
obtener productos metabolitos primarios o secundarios, creados por
los propios microorganismos como, por ejemplo, antibióticos, ácidos
lácticos, etc.
Caldo MRVP, para investigar la ruta utilizada en la degradación de
glucosa
Caldo Peptona, para investigar la producción de Indol.
Caldo Lactosado, para investigar la formación de ácido y gas
INDOL
3. MEDIOS SEMISÓLIDOS.
Son medios intermedios entre los medios líquidos y los sólidos
donde su proporción en agar suele ser inferior al 0.5% pero siempre
suelen presentar una cierta cantidad que le proporcione una
consistencia semisólida.
Son útiles para ciertas pruebas bioquímicas como por ejemplo, la
prueba de oxidación- fermentación, que permiter conocer el tipo de
metabolismo oxidativo o fermentativo de la bacteria problema.
Agar O-F Hugh Leiffson
Agar SIM, estudiar movilidad, Producción de H2S, Indol.
Agar MIO, estudiar movilidad, Producción de Indol y Ornitina.
SIM
2. Medios ya preparados:
A. Sólidos en placa petri.
B. Sólidos en tubo.
B.1. Inclinado
B.2. Semi-inclinado (pico de flauta)
C. Líquidos en tubo.
D. Semisólidos en tubo.
E. De doble fase en frasco o tubo.
POR SU PRESENTACION
1. MEDIOS DESHIDRATADOS
Son medios que se comercializan tal
cual y una vez en el laboratorio deben
ser preparados adicionando la cantidad
de agua correspondiente en condiciones
totalmente asépticas o una vez
preparados en estas condiciones lo
esterilizaríamos en el autoclave. Su
composición es muy variable y puede
ser de tipo básico o más complejo.
POR SU PRESENTACION
2. MEDIOS YA PREPARADOS
Son medios que han sido elaborados por las casas comerciales
presentando un determinado control de calidad y características
específicas adecuadas a cada tipo de cultivo. Este tipo de medios
pueden presentarse en forma de placas, en tubo, como formas
sólidas, en frascos, como medios semisólidos o líquidos, en sistemas
de doble fase, etc.
POR SU PRESENTACION
A. Medios enriquecidos
Son medios a los cuales, como su nombre indica, se les añade
ademas de los componentes básicos, uno o varios elementos, como
por ejemplo caseína soja, triptófano, etc., que facilitan el
crecimiento de algún tipo de microorganismo generalmente
exigentes, lo que nos permite aislar el microorganismo que
buscamos.
POR SU USO O UTILIZACIÓN
B. Medios selectivos
Son medios en cuya composición presentan algún componente o
componentes que van a impedir el crecimiento de algún tipo
bacteriano, estableciendo con ello una selección en el tipo de
microorganismo que sí puede crecer; por ejemplo, el medio Rothe
se caracteriza porque en su composición aparece azida sódica
confiriendo al medio propiedades selectivas ya que tal componente
va impedir el crecimiento de todas las bacterias Gramnegativas,
permitiendo el crecimiento de algunas Grampositivas como
Streptococus faecalis.
Medio Salmonella Shigella, contiene en su composición sales
biliares, citrato de sodio y el verde brillante que inhibe a la flora
Grampositiva y los hacen con el grupo coliforme.
POR SU USO O UTILIZACIÓN
C. Medios diferenciales
Corresponden a aquellos medios que presentan las mismas
propiedades que los medios selectivos, es decir, tienen
componentes que inhiben el crecimiento de algunas bacterias y, lo
que es más característico de este medio, presentan sustancias que
al ser utilizadas, o no, por las bacterias que van a crecer en dicho
medio, dan una información suplementaria y específica, es decir,
diferencial; por ejemplo:
El medio Levine (EMB) es te medio presenta en su composición
eosina y azul de metileno que inhibe el crecimiento de los
Grampositivos y algunas Gramnegativas, facilitando el crecimineto
de la enterobacterias, que según utilicen o no la lactosa darán lugar
a una coloración característica para cada tipo de microorganismo.
Los medios diferenciales suelen ser también selectivos y se usan con
fines de aislamiento e identificación.
POR SU USO O UTILIZACIÓN
2. MEDIOS PARA CRECIMIENTO EN GENERAL
Son medios ya sea en forma liquida o sólida que sirven para el
cultivo de la mayor parte de las bacterias. Su composición va a
corresponder a una fuente de carbono, una fuente de nitrógeno,
sales y agua. Dentro de los medios generales más empleados
tendríamos el caldo común, que está compuesto por extracto de
carne, peptona, glucosa, cloruro de sódico y agua.
POR SU USO O UTILIZACIÓN
3. MEDIOS PARA IDENTIFICACIÓN
Son medios que pueden tener las mismas características que los
diferenciales tanto, nos van a servir para identificar el crecimineto y
características de algún tipo de microorganismo.
También podría corresponder a medios generales más o menos
enriquecidos conalgún componente como, por ejemplo, peptona,
urea, glucosa, etc., hecho que nos va a servir para visualizar el tipo
de metabolismo microbiano, por ejemplo:
El caldo peptonado para saber si el microorganismo es indol +.
El medio urea para la ureasa +.
El caldo glucosado para saber la fermentación de la glucosa.
Este tipo de pruebas permite clasificar taxonomicamente el
microorganismo.
MRVP (CALDO GLUCOSADO)
1. Medios naturales.
2. Medios semisintéticos.
3. Medios sintéticos.
4. Medios complejos.
POR SU COMPOSICIÓN QUE
PRESENTAN
1. MEDIOS NATURALES
Son aquellos cuyos componentes orgánicos e inorgánicos se
encuentran en la naturaleza, se suelen preparar
artesanalmente y, en general, pueden estar constituidos por
ciertos tejidos, líquidos orgánicos, etc., por ejemplo: la leche,
que constituye un medio natural de conservación y cultivo
favorable para numerosas bacterias. Se suele utilizar en forma
de leche simple descremada, leche tornasolada y leche con
azul de metileno. Otros medios naturales son el huevo entero,
clara o la yema, o incluso la patata, que es ampliamente
utilizada en bacteriología para el aislamiento de muchos
hongos.
POR SU COMPOSICIÓN QUE
PRESENTAN
2. MEDIOS SEMISINTETICOS
Son medios donde parte de su composición
corresponde a extractos naturales como levadura,
malta, patata, sangre, leche, etc., a los que se
añaden constituyentes sintéticos o químicamente
definidos para el crecimiento bacteriano.
POR SU COMPOSICIÓN QUE
PRESENTAN
3. MEDIOS SINTETICOS
Corresponden a estructuras sintéticas más o menos puras y
químicamente definidas, que están o pueden estar disueltas en agua
destilada en proporciones determinadas de forma que se obtenga
una solución adecuada para permitir el crecimiento de
microorganismo que se desee.
Son los más utilizados en bacteriología. Se Usa para aislamiento,
identificación, crecimiento, mantenimiento, etc. Siempre deberán
contener en su composición los siguientes elementos:
Una fuente de Carbono o azúcar.
Una fuente de nitrógeno en forma inorgánica como iones NO-3, NH+4,
o en forma orgánica, como peptona, aminoácidos, aminas, etc.
Compuestos minerales, y entre ellos, oligoelementos.
Factores de crecimiento.
Todo medio sintético puede presentar una complejidad muy variable
de elementos según el germen que se pretenda cultivar y estudiar.
POR SU COMPOSICIÓN QUE
PRESENTAN
4. MEDIOS COMPLEJOS
Son los primeros que se utilizaron en bacteriología, aunque en la
actualidad su uso está más restringido. Sin embargo, en
parasitología y virología se utilizan habitualmente. Se preparan de
forma compleja a partir de tejidos animales y más raramente de
vegetales. Su composición no está exactamente definida como
sucede en los medios sintéticos, es decir, no es rigurosamente
constante, y sus materias primas suelen ser carne de músculo, de
hígado, de corazón, clara o yema de huevo, azúcares, peptonas,
etc.
Medio de Lowenstein Jenssen.
Infusión cerebro corazón (BHI)
MEDIO LOWENSTEIN JENSSEN
1. COMPOSICION
Fosfato monopotásico 4.0 g
Sulfato de magnesio 0.4 g
Citrato de magnesio 1.0 g
Asparragina 6.0 g
Glicerol 20.0 g
Agua destilada 1000 ml
2. PREPARACION
Disolver los ingredientes y hervir durante 2 horas.
Luego añadir 50 g de almidón de papa.
Cascar 5 huevos en condiciones asépticas en un
matraz y con ayuda de perlas de vidrio.
Agregar 50 ml de verde malaquita en solución al 2%
Distribuir en condiciones asépticas en tubos con tapa
de rosca y dejar solidificar.
3. FINALIDAD
Permitir el crecimiento del Mycobacterium.
INFUSION CEREBRO CORAZON
1. COMPOSICION
Infusión cerebro de ternera 20.0 g
Infusión corazón de res 25.0 g
Peptonas 10.0 g
Fosfato disódico 2.5 g
Glucosa 2.0 g
Cloruro de sodio 5.0 g
Agua destilada 1000 ml
2. FINALIDAD
Permite el crecimiento de microorganismos considerados muy dificiles
de cultivar, en él los gérmenes mantienen su virulencia , antigenicidad
y otras características serológicas.
TAREA
Complementar las fichas de cada medio
de cultivo
AGAR NUTRITIVO
1. COMPOSICION
Peptona 17.0 g
Extracto de carne 3.0 g
Cloruro de sodio 5.0 g
Agar - Agar 12.5 g
Agua destilada 1000 ml
B. Requerimiento no energético
F. Según su presentación
AGAR SANGRE
1. COMPOSICION
Infusión de musculo de corazón 37 g
Peptona 10 g
Cloruro de sodio 5g
Agar Agar 15 g
Agua destilada 1000 ml
2. DESCRIPCION DEL MEDIO
A. Requerimiento energético:
B. Requerimiento no energético
C. Según su proporción en agua
D. Según su uso o utilización
E. Según la composición que presenta
F. Según su presentación
g. POSIBLES REACCIONES
h. Ejemplo de microorganismo con cada reaccion
AGAR
SANGRE
AGAR CHOCOLATE
1. COMPOSICION
Infusión de musculo de corazón 370 g
Peptona 10 g
Cloruro de sodio 5g
Agar Agar 15 g
Agua destilada 1000 ml
2. DESCRIPCION DEL MEDIO
A. Requerimiento energético:
B. Requerimiento no energético
F. Según su presentación
AGAR MAC CONKEY
1. COMPOSICION
Peptona de caseina 17.0 g Rojo neutro 0.03 g
Peptona de carne 3.0 g Cristal violeta 0.001 g
Lactosa 10.0 g Agar - Agar 12.5 g
Sales biliares 1.5 g Agua destilada 1000 ml
Cloruro de sodio 5.0 g
B. Requerimiento no energético
F. Según su presentación
AGAR MAC CONKEY
TIPO DE COLONIAS
Superficie de agar Mac Conkey con desarrollo de colonias a las 24 horas.
Se observa colonia rojas fermentadoras de lactosa, el color rojo se debe a
que el microorganismo produce grandes cantidades de ácido mixtos.
Se observa colonias no fermentadoras de lactosa, son colonias pequeñas y
transparentes.
AGAR MAC CONKEY
AGAR EOSINA AZUL DE METILENO
1. COMPOSICION
Peptona de caseina 10.0g Eosina amarilla 0.3 g
Lactosa 5 Azul de metileno 0.065
Sacarosa 5 Agar-agar 13.5
Fosfato dipotásico 2 Agua destilada 1000 ml
B. Requerimiento no energético
F. Según su presentación
Agar Eosina Azul de
Metileno (EMB) de Levine
Los colorantes de Eosina y azul de
metileno inhiben a las bacterias
Grampositivas y a las Gramnegativas
exigentes. También se combinan
precipitando a pH ácido, actuando como
indicadores de producción de ácidos.
Los fermentadores fuertes de lactosa:
Escherichia coli, producen colonias color
negro verdoso con brillo metálico. El
brillo metálico indica una fuerte
producción de ácido con una caída de pH
a 4.5 o menos.
Los productores débiles de ácidos,
producen colonias violeta, Klebsiella,
Enterobacter, Serratia, Hafnia.
Los no fermentadores de lactosa, forman
colonias incoloras. Salmonella,
Shigella, Proteus..
Agar Eosina Azul de
Metileno (EMB) de Levine
AGAR SALMONELLA SHIGELLA
1. COMPOSICION
Extracto de carne 5.0 g Citrato de fierro amoniacal 1.0 g
Proteosa peptona 5 Verde brillante 0.0003
Lactosa 10 Rojo neutro 0.025
Bilis de buey 8.5 Agar-agar 13
Citrato de sodio 8.5 Agua destilada 1000 ml
Tiosulfato de sodio 8.5
B. Requerimiento no energético
F. Según su presentación
Agar Salmonella Shigella
El agar SS es un medio altamente selectivo, que inhibe el desarrollo de la mayoría de los coliformes y
permite el crecimiento de Salmonella y Shigella.
La alta concentración de sales biliares y citrato de sodio inhibe a todas las bacterias Grampositivas y
muchas Gramnegativas, incluyendo a los coliformes.
La lactosa es el único carbohidrato y el rojo neutro detecta la producción de ácido.
El tiosulfato de sodio es una fuente de S, permitiendo la detección del H2S por el precipitado negro
formado con el citrato férrico.
Colonias incoloras, son no fermentadores de lactosa y H2S (-), Salmonella y Shigella.
Las Colonias fermentadoras de lactosa se colorean de rojo, Escherichia coli.
Colonias incoloras con centro negro, son no fermentadores de lactosa y H2S (+), Proteus, Salmonella.
Agar Salmonella Shigella
AGAR VERDE BRILLANTE
1. COMPOSICION
Extracto de levadura 3.0 g Rojo fenol 0.08 g
Peptona o polipeptona 10.0 g Verde brillante 0.0125 g
Lactosa 10.0 g Agar - Agar 20.0 g
Sacarosa 10.0 g Agua destilada 1000 ml
Cloruro de sodio 5.0 g
B. Requerimiento no energético
F. Según su presentación
AGAR VERDE BRILLANTE
Medio de enriquecimiento altamente selectivo para el aislamiento de Salmonella
spp., excepto S. typhi y S. paratyphi, a partir de muestras clínicas, alimentos, y
otros materiales de importancia sanitaria.
No se recomienda para el aislamiento de Shigella spp.
Es de un valor excepcional cuando se investiga un gran número de muestras de
heces o alimentos, por su alta capacidad de diferenciación de las colonias
sospechosas.
Fundamento
La pluripeptona y el extracto de levadura, constituyen la fuente de nitrógeno.
Vitaminas y minerales.
La lactosa y la sacarosa son los hidratos de carbono fermentables,
El rojo fenol es el indicador de pH, que vira al amarillo cuando hay producción
de ácido a partir de la fermentación de azúcares
El cloruro de sodio mantiene el balance osmótico
El verde brillante actúa como agente selectivo.
Agar Hektoen Enterico
Fórmula (en gramos por litro) Instrucciones
Proteosa peptona 12.0
Extracto de levadura 3.0
Sales biliares 9.0
Lactosa 12.0 Suspender 76 g del medio deshidratado en
Sacarosa 12.0 un litro de agua destilada. Dejar reposar
Salicina 2.0 de 10 a 15 minutos. Calentar y hervir
Cloruro de sodio 5.0 hasta lograr una disolución completa. NO
Tiosulfato de sodio 5.0 ESTERILIZAR EN AUTOCLAVE. Enfriar a
Citrato de hierro y amonio 1.5 45°C y distribuir en cajas de Petri.
Agar 14.0
Azul de bromotimol 0.065
Fucsina ácida 0.1
pH final: 7.5 ± 0.2
Agar Hektoen Enterico
Fundamento
El medio de cultivo contiene
Sales biliares que inhiben el desarrollo de la flora acompañante
2 sistemas indicadores: (i) azul de bromotimol y fucsina ácida como indicadores de
la fermentación de carbohidratos,
Citrato de hierro como un indicador de la formación de SH2 a partir del tiosulfato.
Microorganismos Colonias
Shigella Verdes, elevadas, húmedas
FUNDAMENTO
La degradación de los carbohidratos (xilosa, lactosa y sacarosa) produce
ácido, haciendo virar el indicador (rojo fenol) de rojo a amarillo.
La xilosa es fermentada por todas las enterobacterias con excepción de la
Shigella
La lisina se incluye para aumentar la diferenciación de la Salmonella, sin la
lisina la Salmonella fermentaria la xilosa produciendo la acidificación del
medio y no se pueden diferenciar de otras especies no patógenas.
Como la cantidad de este carbohidrato es limitada, una vez que lo
consumen, comienzan a utilizar la lisina produciendo la alcalinización del
medio; se evidencia porque el rojo fenol nuevamente vira a un color rojo.
En el caso de los coliformes lisina positiva, para prevenir la alcalización del
medio por la utilización de la lisina, se incorpora en el medio un exceso de
lactosa y sacarosa.
AGAR XLD
El medio detectar la producción de H2S, a través del sistema indicador tiosufalto de sodio y citrato férrico
amonio. Cuando el microorganismo produce H2S se observan colonias con el centro negro.
El desoxicolato de sodio es utilizado como un inhibidor de los microorganismos Gram positivos
Las colonias típicas de la Salmonella son de color rojo con el centro negro debido a la producción de H2S.
Mientras que las de E. coli son grandes, amarillas con o sin precipitado de bilis.
Las colonias sospechosas de Shigella sobre el agar XLD son transparentes y parecen rojas por el color del
medio. Este género bacteriano al no fermentar la xilosa, la lactosa, ni la sacarosa, no da lugar a que el rojo
fenol vire a amarillo. Como estos microorganismos tampoco tienen la capacidad de alcalinizar el medio por
la descarboxilación de la lisina, no se produce color rojo púrpura alrededor de las colonias.
Agar Cetrimide
Fórmula (en gramos por litro) Instrucciones
B. Requerimiento no energético
F. Según su presentación
AGAR TCBS
Las colonias amarillas, se
deben a la utilización del citrato
y a la formación de ácido por la
utilización de la sacarosa del
medio.
Vibrio Cholerae.
V. Algynolyticus
V. Cincinatiensis
V.fluvialis
V. Furnisii
V. metsnichnikovii
1. COMPOSICION
Extracto de carne 1.0 g Agua destilada 1000 ml
D-Manitol 10 g Agar agar 15 g
Peptona 10.0 Rojo fenol 0.025 g
Cloruro de sodio 75 g
2. DESCRIPCION DEL MEDIO
A. Requerimiento energético:
B. Requerimiento no energético
F. Según su presentación
CALDO PEPTONA
1. COMPOSICION
Peptona 10.0 g
Cloruro de sodio 9 g
Agua destilada 1000 ml
B. Requerimiento no energético
F. Según su presentación
INTRODUCCION:
INDOL
El indol, un bencilpirrol, es uno de los productos de degradación
metabólica del aminoácido triptofáno. Las bacterias que poseen la
enzima triptofanasa son capaces de hidrolizar y desaminar el
triptofáno con producción de indol, ácido pirúvico y amoniaco.
La prueba de indol esta basada en la formación de un complejo rojo
cuando el indol reacciona con el grupo del p-
dimetilaminobenzaldehido. Este es el principio activo del reactivo de
Kovac y Erlich. Debe emplearse un medio rico en triptofáno.
COMPOSICION:
REACTIVO DE KOVAC
Alcohol amílico o isoamílico puro 150 ml
p-dimetilaminobenzaldehido 10 g
HCl concentrado 50 ml
TECNICA:
Inocular el caldo peptonado e incubar a 37ºC por 24 horas. Luego
añadir 5 gotas del reactivo por la pared del tubo.
INTERPRETACION:
Positivo: El desarrollo de un color rojo fucsia en la interfase del
reactivo y el caldo, indica la presencia del indol.
AGAR CITRATO SIMMONS
1. COMPOSICION
Citrato de sodio 2.0 g Azul de bromotimol 0.08 g
Fosfato monoamónico 1.0 g Fosfato dipotásico 1.0 g
Cloruro de sodio 5.0 g Agar - Agar 12.5 g
Sulfato de magnesio 0.2 g Agua destilada 1000 ml
B. Requerimiento no energético
F. Según su presentación
Citrato de Simmons C.S.
INTRODUCCION
El citrato de sodio es una sal del ácido cítrico, un
compuesto simple que constituye uno de los
metabolitos del ciclo de Krebs . Algunas bacterias
pueden obtener energía por vía distinta de la de
fermentación de hidratos de carbono, utilizando
citrato como única fuente de carbono. La
determinación de esta característica importante para
la identificación de muchas enterobacterias.
TECNICA
Tomar una colonia bien aislada de la superficie de un
medio e inocular en una sola ,estría en el pico del
agro citrato e incubar a 37ºC por 24 - 48 horas.
INTERPRETACION
El desarrollo de un color azul intenso en 24 a 48
horas indica una prueba positiva y revela que el
organismo en estudio ha sido capaz de utilizar el
citrato contenido en el medio, con la formación de
productos alcalinos.
AGAR SIM
1. COMPOSICION
Peptona de caseina 20.0 g
Peptona de carne 6.6 g
Tiosulfato de sodio 0.2 g
Citrato hierro(III) amonio 0.2 g
Agar - agar 3.0 g
Agua destilada 1000 ml
B. Requerimiento no energético
F. Según su presentación
Agar S.I.M.
Este medio de cultivo permite comprobar la formación de sulfuro, la producción de
indol y observar la movilidad.
PRODUCCION DE H2S
Se evidencia la formación de ácido sulfihidrico por la formación de un precipitado negro.
Esto se logra mediante las siguientes etapas:
Liberación de sulfuro a partir del tiosulfato por acción enzimática de la bacteria.
Acoplamiento del sulfuro (S-2) con el ion hidrogeno (H+) para formar gas H2S.
Detección del gas H2S mediante sales de metales pesados como hierro, logrando la forma
de sulfuro del hierro, que es un precipitado negro.
Agar S.I.M.
MOVILIDAD
Los medios para detectar movilidad contienen concentraciones de agar de
0.4% o menos. A mayor concentración del gel es demasiado firme como para
permitir la diseminación de los organismos.
La Motilidad se pone de manifiesto por la turbidez difusa del medio de cultivo
alrededor del canal de la picadura.
La no motilidad se caracteriza por el crecimiento producido exclusivamente a
lo largo de dicho canal.
Agar S.I.M.
INDOL
Después de agregar unas gotas del reactivo
de kovacs, si aparece un color rojo-cereza
dela capa del reactivo indica la presencia de
Indol.
Agar S.I.M.
Este medio de cultivo permite comprobar la formación de sulfuro, la producción de
indol y observar la movilidad.
PRODUCCION DE H2S
Se evidencia la formación de ácido
sulfihidrico por la formación de un
precipitado negro. Esto se logra mediante
las siguientes etapas:
Liberación de sulfuro a partir del tiosulfato
por acción enzimática de la bacteria.
Acoplamiento del sulfuro (S-2) con el ion
hidrogeno (H+) para formar gas H2S.
Detección del gas H2S mediante sales de
metales pesados como hierro, logrando la
forma de sulfuro del hierro, que es un
precipitado negro.
AGAR UREA
1. FUNDAMENTO
B. Requerimiento no energético
F. Según su presentación
Rojo de Metilo R.M.
INTRODUCCION
El rojo de metilo es un indicador de pH con un intervalo entre 6.0 (amarillo)
y 4.4. (rojo). El pH al cual el rojo de metilo detecta ácido es
considerablemente menor que el de otros indicadore. A fin de provocar un
cambio de color, el organismo en estudio debe producir grandes cantidades
de ácido a partir del sustrato hidrocarbonado que emplea.
La prueba del R.M. detecta la producción de ácido y requiere de organismos
positivos que produzcan ácidos fuertes (láctico, fórmico, acético) a partir de
glucosa, por la vía de la fermentación ácida mixta.
COMPOSICION
CALDO MRVP: ROJO DE METILO (Indicador)
Rojo de metilo 0.1 g
Etanol al 95% 300 ml
Agua destilada 200 ml.
TECNICA
Inocular el caldo MRVP e Incubar a 37ºC por 24 horas, agregar 5 gotas del
reactivo rojo de metilo.
INTERPRETACION
Positivo: El desarrollo de un color rojo en el medio indica que la producción
de ácido es suficiente como para bajar el pH a 4.4.
Voges Proskauer V.P.
INTRODUCCION
El ácido pirúvico, componente formado en la degradación
fermentativa de la glucosa, es metabolizado a través de varias vías,
de acuerdo con los sistemas enzimáticos que poseen las diferentes
bacterias. Una vía produce acetoína (acetilmetilcarbinol), un
subproducto de reacción neutra de la vía Butilenglicol. Los organismos
que producen acetoína como principal subproducto del metabolismo
de la glucosa y forman cantidades menores de ácidos mixtos. En
presencia de oxígeno atmosférico e KOH al 40% , la acetoina se
convierte en diacetilo y el alfa naftol actúa como catalizador para
revelar un complejo de color rojo.
COMPOSICION
ALFA-NAFTOL KOH
Alfa naftol 5g KOH 40 g
Alcohol etílico absoluto 100 ml Agua 100 ml
TECNICA
Inocular caldo MRVP incubar 37ºC / 24 horas. Luego añadir alfa naftol
e KOH al 40%. agitar el tubo y dejarlo en reposo por l0 minutos.
INTERPRETACION
Positivo: desarrollo de un color rojo a los l0 minutos, revelando la
presencia de diacetilo, producto de oxidación de la acetoína.
TRIPLE AZUCAR HIERRO
T.S.I.
A. INTRODUCCION
La configuración del medio en pico de flauta (Pico y Fondo)
determina la existencia de 2 compartimientos La porción
inclinada, expuesta al oxígeno atmosférico es aerobia.
- La porción inferior llamada fondo esta protegida del aire y
es relativamente anaerobia.
La porción expuesta al oxigeno (INCLINADA), tiende a
tornarse alcalina por la descarboxilación oxidativa de
proteínas, y se desarrolla un pH alcalino y se vuelve rojo.
En el fondo del tubo donde no hay oxígeno , la degradación
proteica es mínima y se pueden detectar incluso pequeñas
cantidades de ácido por la aparición de un color amarillo.
INTERPRETACION
K/K: Microorganismo no fermentador
Son incapaces de producir ácido por fermentación de la
glucosa o lactosa, no hay cambio en el medio.
TRIPLE AZUCAR HIERRO
T.S.I.
INTERPRETACION
K/K: Microorganismo no fermentador
Son incapaces de producir ácido por fermentación de la
glucosa o lactosa, no hay cambio en el medio.
INTERPRETACION:
Lactosa:
Glucosa:
CO2 ó Gas:
H2S:
TRIPLE AZUCAR HIERRO
T.S.I.
SIMBOLO:
INTERPRETACION:
Lactosa:
Glucosa:
CO2 ó Gas:
H2S:
TRIPLE AZUCAR HIERRO
T.S.I.
SIMBOLO:
INTERPRETACION:
Lactosa:
Glucosa:
CO2 ó Gas:
H2S:
TRIPLE AZUCAR HIERRO
T.S.I.
SIMBOLO:
INTERPRETACION:
Lactosa:
Glucosa:
CO2 ó Gas:
H2S:
AGAR LIA
1. COMPOSICION
Peptona 3.0 g Tiosulfato de sodio 0.04 g
Extracto de levadura 3.0 g Púrpura de bromocresol 0.02g
Dextrosa 1.0 g Agar - Agar 15.0 g
Lisina 10.0 g Agua destilada 1000 ml
Citrato amonio férrico 0.5g
B. Requerimiento no energético
F. Según su presentación
LISINA HIERRO AGAR
LIA
SIMBOLO:
INTERPRETACION:
DESCARBOXILACION
DESAMINACION
LISINA
H2S
LISINA HIERRO AGAR
LIA
SIMBOLO:
INTERPRETACION:
DESCARBOXILACION
DESAMINACION
LISINA
H2S
AGAR LIA
1. COMPOSICION
Peptona 3.0 g Tiosulfato de sodio 0.04 g
Extracto de levadura 3.0 g Púrpura de bromocresol 0.02g
Dextrosa 1.0 g Agar - Agar 15.0 g
Lisina 10.0 g Agua destilada 1000 ml
Citrato amonio férrico 0.5g
B. Requerimiento no energético
F. Según su presentación
LISINA HIERRO AGAR
LIA
k/k
Microorganismo:
Lisina (+)
Descarboxilacion (+)
Desaminacion (-)
LISINA HIERRO AGAR
LIA
R/A
Microorganismo:
Lisina (-)
Descarboxilacion (-)
Desaminacion (+)
LISINA HIERRO AGAR
LIA
k/A
Microorganismo:
Lisina (-)
Descarboxilacion (-)
Desaminacion (-)
LISINA HIERRO AGAR
LIA
SIMBOLO:
INTERPRETACION:
DESCARBOXILACION
DESAMINACION
LISINA
H2S
LISINA HIERRO AGAR
LIA
SIMBOLO:
INTERPRETACION:
DESCARBOXILACION
DESAMINACION
LISINA
H2S
Medio OF Hugh-Leiffson
FÓRMULA (en gramos por litro)
Tripteína............................................2.0 .
Cloruro de sodio.........5.0.
Fosfato dipotásico..........0.30.
Azul de bromotimol..................0.03.
Agar..................................2.50.
pH final: 7.1 ± 0.2
Medio OF Hugh-Leiffson
Interpretación de los resultados
El uso del hidrato de carbono, ya sea por
fermentación u oxidación, produce acidez
en el medio, con el consecuente viraje del
color verde al amarillo.
Microorganismos oxidativos del hidrato de
carbono en estudio: producen una
reacción ácida solo en el tubo “abierto”.
Presentan poco o nulo desarrollo y
ausencia de producción de ácido en el
tubo “cerrado”.
Se debe informar: producción de ácido
(A), ácido con gas (AG), alcalino (K) o sin
cambio (-).
Medio OF Hugh-Leiffson
Interpretación de los resultados
Microorganismos fermentadores
del hidrato de carbono en
estudio: producen una reacción
ácida en ambos tipos de tubos.
Medio OF Hugh-Leiffson
Interpretación de los resultados
Microorganismos que no utilizan el
hidrato de carbono en estudio: no
producen cambios ninguno de los 2
tubos, los cuales permanecen verdes.
I.M.V.I.C.
INDOL
ROJO DE METILO
VOGES PROSKAUER
CITRATO DE SIMMONS
I.M.V.I.C.
Cuando se realizan estas cuatro pruebas simultáneamente, constituyen las
clasicas reacciones IMVIC.
Indol: la formación de Indol a partir del triptófano se indica por un color
rojo después del agregado del reactivo Kovacs.
Rojo de Metilo: la aparición de un color rojo en el tuno con caldo MRVP,
después de agregar unas gotas del reactivo rojo de metilo indica un
descenso del pH a 4.4 o menos, indicativo de la presencia de fuertes
fermentadores productores de ácidos mixtos.
Voges Proskauer: la aparición de un color rojo en el tubo con caldo
MRVP, después de agregar alfa-naftol e KOH al 40%, indica la presencia de
acetoína producida a partir del piruvato por la vía del butilenglicol.
Citrato de Simmons: el viraje del indicador azul de bromotimol a un color
azul alcalino indican que el microorganismo puede utilizar el citrato de sodio
como única fuente de carbono.
I.M.V.I.C.
Indol:
Rojo de Metilo:
Voges Proskauer:
Citrato de Simmons:
Microorganismo:
I.M.V.I.C.
Indol:
Rojo de Metilo:
Voges Proskauer:
Citrato de Simmons:
Microorganismo
INFUSION CEREBRO CORAZON (BHI)
1. COMPOSICION
Infusión cerebro de ternera 20.0 g Fosfato disódico 2.5 g
Infusión corazón de res 25.0 g Glucosa 2.0 g
Peptonas 10.0 g Agua destilada 1000 ml
Cloruro de sodio 5.0 g
B. Requerimiento no energético
F. Según su presentación
AGAR SABAURAUD
1. COMPOSICION
Peptona 10.0 g
Dextrosa 40.0 g
Agar - Agar 12.5 g
Agua destilada 1000 ml
B. Requerimiento no energético
F. Según su presentación