Microbiologia Medios de Cultivos
Microbiologia Medios de Cultivos
Microbiologia Medios de Cultivos
CULTIVO
CONSTITUYENTES
DE
LOS
MEDIOS
DE
CULTIVO
BACTERIOLGICO
PH
Optimo cerca la neutralidad.
Existen bacterias que pueden crecer pH bajo Tiobacilos, otros pH
alcalinos pH8 Proteus, pH9 Vibrio.
En los medios de cultivo puede aparecer variaciones de pH
como consecuencia del metabolismo que se produce en la
degradacin de nutrientes y fermentacin glucosdica.
1. Fuente de azufre
Todos los microrganismos que utilizan en su metabolismo azufre
lo hacen mayoritariamente en forma de sulfatos, a veces en
forma de tiosulfatos y en otras ocasiones lo pueden obtener a
partir de algn aminocido, ejemplo: metionina, cisteina,
tiamina, etc.
Agar SIM
Agar TSI
Agar XLD
SIM
XLD
2. Fuente de fsforo
En general, las bacterias que utilizan el fsforo lo suelen hacer
en forma de fosfatos.
3. Iones metlicos
Son utilizados por las bacterias bajo la forma de iones a concentraciones muy
bajas. Por ej: el Sodio, el Potasio, Magnesio, Hierro,etc.
Tambin se encuentra otro tipo de iones metlicos a Cobalto, Molibdeno.
Estos iones son esenciales para el crecimiento microbiano y dependiendo de su
concentracin pueden inhibir el crecimiento de otros, como el caso del sodio que a
concentraciones altas inhibe el crecimiento de un tipo de microorganismo y facilita
el crecimiento de otros.
Agar Manitol Salado contienen 7.5% ClNa permite el crecimiento de
Staphylococus.
Agar Streptococus KF contiene 6.5% ClNa permite el crecimiento del
Enterococus.
4. Factores de Crecimiento
No todas las bacterias son capaces de crecer sobre medios donde se encuentran
cubiertas las necesidades elementales.
Existen bacterias que an as no crecen en tales medios o, si lo hacen, es muy
lentamente. A este tipo de bacterias les hace falta adems una serie de
componentes definidos que muchas bacterias no son capaces de fabricar por s
solas para su crecimiento.
A este tipo de componentes se denomina factores de crecimiento y van a
corresponder a algn tipo de aminocido de bacterias muy exigentes o incluso
vitaminas, bases pricas o pirimidinicas, etc.
Agar sangre enriquecido con metionina, cido glutmico y cido nicotnico para el
crecimiento de Xanthomonas.
5. Factores de Arranque
Son sustancias que van a permitir a la bacteria en estudio, salir de su fase de
latencia y comenzar su fase de crecimiento exponencial.
Son fundamentalmente fuentes de energa glucosa que es utilizado por las
bacterias.
Un factor de arranque puede ser una fuente no energtica como algn in que
estimule el crecimiento.
6. Factores Inhibidores
Son componentes que van a impedir el crecimiento de algn tipo de
microorganismo por bloqueo de sus procesos metablicos.
Los antibiticos son agentes inhibidores o destructores de la propia bacteria.
La azida sdica inhibe el crecimiento de los Gramnegativos.
Algunos colorantes : Eosina Azul de metileno impide el crecimiento bacteriano de
los Grampositivos.
Cristal Violeta impide el crecimiento de los Grampositivos.
Las sustancias inhibidoras son muy tiles para la identificacin y tipificacin de
pruebas bioqumicas de las bacterias.
Agar Mac Conkey :
Agar Eosina Azul de Metileno
Agar Salmonella Shigella
Agar Verde brillante
Por su origen
Naturales
Artificiales o Sintticos :
Por su consistencia:
Lquidos: soluciones acuosas, ejm. Caldos nutritivos)
Slidos : Son los medios lquidos ms agar agar: agr nutritivo y agr
sangre.
Semislidos: Son los medios que se hallan en un estado entre los
dos primeros, ejm, estudios de motilidad.
Por su objetivo
Medios de transporte:Cary-Blayr, Hajna, Stuard.
Medio de enriquecimiento
Medios de aislamiento
Medios de identificacin
Medios especializados
MEDIOS LIQUIDOS.
Corresponden a los que tambin se denominan caldos, no contienen
agar y su composicin, adems de agua suele contener al menos
una fuente de carbono, sales minerales, y, en algunas ocasiones
segn las caractersticas del medio, factores de crecimiento,
vitaminas, peptonas, ciertos aminocidos, etc. Son de gran utilidad
para la realizacin de recuentos bacteriolgicos por turbidimetra,
especialmente til en levaduras, para la realizacin de inculos,
para obtener productos metabolitos primarios o secundarios,
creados por los propios microorganismos como, por ejemplo,
antibiticos, cidos lcticos, etc.
Caldo MRVP, para investigar la ruta utilizada en la degradacin de
glucosa
Caldo Peptona, para investigar la produccin de Indol.
Caldo Lactosado, para investigar la formacin de cido y gas
MEDIO LIQUIDO
INFUSION CEREBRO CORAZON
2. FINALIDAD
MEDIOS SOLIDOS.
Corresponden a aquellos medios donde la proporcin en agar est siempre
por encima del 15% . Koch utiliz, en 1881, por primera vez la gelatina para
obtener un medio slido; posteriormente un alumno suyo, Hesse, utilizara
en su lugar agar. En la actualidad, para la solidificacin de los medios es el
agar el utilizado, ya que la gelatina presenta el inconveniente de fundir a
unos 24C, adems existen en bacteriologa numerosas bacterias
gelatinasa positiva que destruiran tal medio.
La importancia, pues, de los medios slidos es muy grande, ya que nos
permite el aislamiento, purificacin y visualizacin de su crecimiento en
colonias, as como su posible identificacin a travs de medios especficos y
diferenciales de caracteres slidos, elaboracin de antibiogramas, etc.
Agar Sangre, observar la morfologa de las colonias y el tipo de hemolisis.
para diferenciar estreptococos.
Agar Mac Conkey, los diferentes tipo de colonias de acuerdo al consumo de
lactosa.
Agar Mueller Hinton, prueba de susceptibilidad a los antimicrobianos.
AGAR SANGRE
Para diferenciar Streptococcus
MEDIOS SEMISLIDOS.
Son medios intermedios entre los medios lquidos y los slidos
donde su proporcin en agar suele ser inferrior al 5% pero
siempre suelen presentar una cierta cantidad que le proporcione
una consistencia semislida.
Son tiles para ciertas pruebas bioqumicas como por ejemplo,
la prueba de oxidacin- fermentacin, que permiter conocer el
tipo de metabolismo oxidativo o fermentativo de la bacteria
problema.
Agar O-F Hugh Leiffson
Agar SIM, estudiar movilidad, Produccin de H 2S, Indol.
Agar MIO, estudiar movilidad, Produccin de Indol y Ornitina.
AGAR SIM
Sirve para comprobar la formacin de hidrgeno sulfurado, indol y la
motilidad de entero-bacterias. La motilidad se demuestra por turbidez
en el medio y la motilidad por crecimiento slo en el canal de picadura.
La formacin de hidrgeno sulfurado se demuestra por ennegrecimiento
de todo el medio, o slo en el canal de picadura. Y el indol se lee
agregando a el reactivo Kovacs se torna rojo prpura en el borde
superior.
POR SU OBJETIVO
Medios
enriquecidos:
Sirve para multiplicar bacterias, se utilizan para cultivar cualquier
muestra.
Pueden
o
no
llevar
inhibidores,
ejm.
Agar sangre: Contiene Agar TSA enriquecido con 5% al 10% de
sangre de carnero desfibrinada. El Agar debe estar a 45 C cuando
se
aade
sangre.
En este medio se desarrollan todas las bacterias hetertrofas y se
aprecia
la
hemlisis
alfa
y
beta
Agar chocolate: Consiste en un medio de Agar Sangre de lo que
ha sido llevado a 80C en un bao de agua por 5 minutos,
producindose as la ruptura de los eritrocitos que aportan nuevos
factores para el crecimiento bacteriano. El factor X (o hemina
termoestable) y el factor V (o fopiririna termolabil).
HEMOLISIS
Los Streptococus se clasifican en base a
su propiedades hemoliticas en agar
sangre.
La hemolisis parcial de los eritrocitos da
como un resultado un color verdoso del
medio slido que rodea las colonias
(alfa-hemolisis).
Los que producen hemolisinas que lisan
los eritrocitos, produce un aclaramiento
del medio que rodea las colonias (betahemolisis).
MEDIOS ENRIQUECIDOS
AGAR SANGRE
Cultivo mixto que demuestra la
presencia
de
dos
tipos
de
microorganismos:
Un morfotipo de colonias grandes
blancas, brillantes y con bordes
irregulares pertenecientes a bacilos
gramnegativos.
El otro morfotipo presenta colonias
blancas, pequeas, enteras, tipicas de
un microorganismo grampositivo.
MEDIOS ENRIQUECIDOS
AGAR SANGRE
Cultivo mixto que demuestra la
presencia
de
dos
tipos
de
microorganismos:
Un tipo de colonias grandes, blancas
pertenecientes a Staphyloccous.
El otro tipo de colonias puntiforme
pertenecientes a Streptococus.
MEDIO ENRIQUECIDO
AGAR CHOCOLATE
Se utiliza Agar nutritivo
esterilizado
y
licuado
y
cuando est a 60 u 80 se
aade sangre desfribrinada.
Para
islamiento
de
gonococos,
Meningococos
y
Staphilococcus
MEDIO ENRIQUECIDO
INFUSION CEREBRO CORAZON
2. FINALIDAD
POR SU OBJETIVO
Medios de aislamiento:Son medios muy diversos pero con la
particularidad comn de poder obtener a partir de ellos colonias
aisladas. Estos, segn sea su composicin, se pueden a su vez
dividir en:
(enterobacterias)
Medianamente selectivos: Agar SS para Salmonela y Shigellas
Altamente selectivos: Agar. Chapman y Manitol Salado, sulfito
bismuto agar y verde brillante (salmonelas),
POCO SELECTIVOS
AGAR MAC CONKEY
POCO SELECTIVOS
AGAR EOSINA AZUL DE METILENO
MEDIOS ESPECIALES
LOWENSTEIN JENSSEN
3. FINALIDAD
Permitir el crecimiento del Mycobacterium.
POR SU OBJETIVO
AGAR SIM
Sirve para comprobar la formacin de hidrgeno sulfurado, indol y la
motilidad de entero-bacterias. La motilidad se demuestra por turbidez
en el medio y la motilidad por crecimiento slo en el canal de picadura.
La formacin de hidrgeno sulfurado se demuestra por ennegrecimiento
de todo el medio, o slo en el canal de picadura. Y el indol se lee
agregando a el reactivo Kovacs se torna rojo prpura en el borde
superior.
SIM
INDOL
AGAR UREA
El tubo de la derecha demuestra un
color rojo, lo que indica una
reaccin positiva.
El tubo de la izquierda no presenta
viraje de color
1. MEDIOS DESHIDRATADOS
Son medios que se comercializan tal cual y una vez en el
laboratorio deben ser preparados adicionando la cantidad de
agua correspondiente en condiciones totalmente aspticas o
una vez preparados lo esterilizaramos en el autoclave. Su
composicin es muy variable y puede ser de tipo bsico o
ms complejo.