Metodo Pseudomona2

DETERMINACIÓN DE PSEUDOMONA S.P.
Y
AERUGINOSA POR EL MÉTODO PRESENCIA
AUSENCIA No. XXXXXXX
Elaboró:
Gilma Taborda Bolivar

XXXXXXXXX
Aprobó:
XXXXXXXXXXXXX
XXXXXXXXXX
Página 1 de 7
TABLA DE CONTENIDO
1. 0 ALCANCE……………………………………………………………………………………………..3
2. 0 OBJETIVO...…………………………………………………………………………………………..3
3. 0 CONSIDERACIONES GENERALES……………………………………………………………….3
4. 0 EQUIPOS REACTIVOS Y MATERIALES...…………………………………………………….....3
 EQUIPOS…………………………………………………………………………………………….3
 MATERIALES……………………………………………………………………………………….3
 REACTIVOS……………………………………………………………………………………. 3 - 4
5.0 DESCRIPCIÓN DEL PROCEDIMIENTO………………………………………………………..4 - 5
 PRUEBA PRESUNTIVA PARA LA DETERMINACIÓN DE PRESENCIA AUSENCIA DE
PSEUDOMONA S.P…………………………………………………………………………………….5
 INTERPRETACIÓN DE LA LECTURA………………………………………………………….5
 REPORTE DE RESULTADOS………………………………………………………………..…..5
 PRUEBA CONFIRMATIVA PARA LA DETERMINACIÓN DE PRESENCIA AUSENCIA DE

PSEUDOMONA AERUGINOSA……………………………………………………………..5 - 6
 INTERPRETACIÓN DE LA LECTURA…………………………………………………………6
 REPORTE DE RESULTADOS………………………………………………………………….. 7
 ANEXOS…………………………………………………………………………………………….7
1.0 ALCANCE
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Este método aplica para la determinación de Pseudomona s.p y Aeruginosa en agua proveniente
de diferentes fuentes, agua en proceso de tratamiento, agua en proceso de envasado, Agua
potable envasada en sus diferentes subcategorías y agua de enjuague del proceso de limpieza e
higienización.
2.0 BJETIVO
Describir el procedimiento a seguir para facilitar la ejecución y asegurar la repetitividad de los analistas
del laboratorio de microbiología, en la aplicación de la técnica: Determinación de Pseudomona s.p. y
Aeruginosa por el método Presencia Ausencia
3.0 CONSIDERACIONES GENERALES
 La técnica consta de una prueba presuntiva para la determinación de Pseudomona s.p y

una prueba confirmativa para la determinación de Pseudomona Aeruginosa.
La prueba confirmativa se realiza cuando la prueba presuntiva es positiva.
 Para la preparación de medios de cultivo y reactivos se deben seguir los lineamientos de la

norma Composición y preparación de medios de cultivo y reactivos No. X X X X X
4.0 EQUIPOS MATERIALES Y REACTIVOS
 EQUIPOS
 Cabina de Flujo Laminar

 Estufa de incubación a 36°C ± 1°C.
 Lámpara de luz ultravioleta de XXXXXX, longitud de onda larga (350 nm)
 MATERIALES
- Pipetas bacteriológicas de 25 ml o 50 ml, o probeta con capacidad mínima de 50 ml estériles.

- Pipetas bacteriológicas de 10 ml o 25 ml, o probeta con capacidad mínima de 25 ml estériles.
- Probeta con capacidad mínima de 100 ml estériles
- Marcador Sharpie
- Paño Wypall
 REACTIVOS
 Frasco conteniendo 50 ml de caldo asparagina de doble concentración, estériles (para prueba

presuntiva), si la alícuota a analizar es de 50 ml.
 Frasco conteniendo 100 ml de caldo asparagina de doble concentración, estériles (para prueba
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presuntiva), si la alícuota a analizar es de 100 ml.
 Frascos conteniendo 25 ml de caldo acetamida, de doble concentración, estériles (para prueba
confirmativa)
 Frasco conteniendo alcohol al 96%
5.0 DESCRIPCIÓN DEL PROCEDIMIENTO.
 PRUEBA PRESUNTIVA PARA LA DETERMINACIÓN DE PRESENCIA AUSENCIA DE

PSEUDOMONA S.P.
 Encienda la cabina de Flujo Laminar y la lámpara de luz ultravioleta 15 minutos antes de iniciar la
siembra.
 Verifique que el caldo asparagina se encuentre a temperatura ambiente; no presente signos de

contaminación como hilos mucosos o turbidez y que conserve las características originales de
aspecto y color.
 Marque cada uno de los frascos con el número que se le asignó a la muestra
 Homogenice la muestra a analizar mezclando el frasco o la bolsa que la contiene, 25 veces en el

menor tiempo posible, moviendo el antebrazo formando un ángulo de 30° o a lo largo de 30 cm.
 Transfiera bajo condiciones asépticas con pipeta o probeta estéril 50 ml o 100 ml de la muestra
según corresponda a la alícuota a analizar, a cada uno de los frascos conteniendo caldo asparagina,
formando con la pipeta un ángulo de 45° con el frasco. Cierre cada uno de los frascos.
 Agite suavemente invirtiendo cada uno de los frascos hasta garantizar una mezcla homogénea
del medio de cultivo y la alícuota a analizar.
 Realice una prueba control incubando un frasco conteniendo caldo asparagina, estéril.
 Incube los frascos inoculados y el control en la incubadora a 36°C  1°C, durante 48  3 horas.
 Pasado el tiempo de incubación retire los frascos de la incubadora
 Examine cada uno de los frascos inoculados con ayuda de la lámpara de luz ultravioleta de
longitud de onda larga (350 nm). Agite suavemente el frasco si es necesario.
 Si al cabo de las 48  3 horas se presentan dudas en la lectura incube nuevamente los frascos a
36°C  1°C, durante 24  3 horas.
 Determine el crecimiento de Pseudomona s.p. por la presencia de pigmento verde fluorescente en

cada uno de los frascos inoculados.
Nota. Si la prueba control presenta crecimiento, se debe descartar el análisis, determinar las causas
y registrar el problema. XXXXXXXX
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 INTERPRETACIÓN DE LA LECTURA
 La ausencia de una coloración verde fluorescente al cabo de 48 ± 3 horas constituye una

Prueba Presuntiva Negativa para Pseudomona s.p.
 La presencia de una coloración verde fluorescente al cabo de 48 ± 3 horas constituye una

Prueba Presuntiva Positiva para Pseudomona s.p.
 Los frascos que presenten una reacción positiva son utilizados en la prueba confirmativa para la
determinación de Pseudomona Aeruginosa.

 REPORTE DE RESULTADOS
 Si la prueba presuntiva es negativa, reporte como Pseudomona s.p: Ausencia en 50 ml

(Ausencia/50 ml) o Pseudomona s.p: Ausente en 100 ml (Ausencia/100ml), según corresponda a la
alícuota analizada.
 Si la prueba presuntiva es positiva, reporte como Pseudomona s.p: Presencia en 50 ml

(Presencia/50 ml) o Pseudomona s.p: Presente en 100 ml (Presente/100ml), según corresponda a la
alícuota analizada.
 Registrar el resultado en el formato Control microbiológico producto en proceso y producto terminado

F- LMB – 10
 PRUEBA CONFIRMATIVA PARA LA DETERMINACIÓN DE PRESENCIA AUSENCIA DE

PSEUDOMONA AERUGINOSA
 Verifique que el caldo acetamida se encuentren a temperatura ambiente; no presente signos de

contaminación como hilos mucosos o turbidez y que conserve las características originales de
aspecto y color.
 Recuerde que cada frasco con caldo asparagina positivo, necesita un frasco conteniendo 25 ml de
caldo acetamida de doble concentración.
 Marque el frasco con caldo acetamida con el número de la muestra asignado al caldo asparagina
positivo.
 Agite suavemente cada uno de los frascos con caldo asparagina positivo.
 Transfiera bajo condiciones asépticas 25 ml de caldo asparagina positivo, formando con la pipeta o
la probeta un ángulo de 45°.
 Inocule asépticamente en cada uno de los frascos correspondientes, que contienen caldo
acetamida, 25 ml de caldo asparagina positivo, formando con la pipeta o la probeta un ángulo de
45°.
 Agite suavemente cada uno de los frascos inoculados hasta garantizar una mezcla homogénea del
medio de cultivo y la alícuota a analizar.
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Nota. Recuerde que debe utilizar una pipeta o probeta estéril por cada frasco de caldo asparagina
positivo.
 Realice una prueba control incubando conjuntamente un frasco conteniendo caldo acetamida,
estéril.
 Incube los frascos conteniendo caldo acetamida inoculados y el control en la estufa de incubación a
36°C  1°C durante 48  3 horas.
 Pasado el tiempo de incubación retire los frascos y agite suavemente sin invertir cada uno de los
frascos inoculados.
 Determine el crecimiento de Pseudomona Aeruginosa por el cambio del color original del medio
de cultivo a un color púrpura.
 Si al cabo de las 48 3 horas se presentan dudas en la lectura se presentan dudas en la lectura

incube nuevamente los frascos en la estufa de incubación a 36°C  1°C durante 24 3 horas.
 INTERPRETACIÓN DE LA LECTURA.
 La ausencia de una coloración púrpura al cabo de 48 ± 3 horas constituye una Prueba confirmativa
Negativa para Pseudomona aeruginosa.
 La presencia de una coloración púrpura al cabo de 48 ± 3 horas constituye una Prueba

confirmativa Positiva para Pseudomona aeruginosa
 Si el frasco control con caldo acetamida es positivo o no conserva su aspecto original, se debe
descartar el análisis, determinar las causas y registrar el problema. XXXXXXX
 REPORTE DE RESULTADOS.
 Si la prueba confirmativa es negativa, reporte como Pseudomona Aeruginosa: Ausencia en 50 ml

(Ausencia/50 ml) o Pseudomona Aeruginosa: Ausente en 100 ml (Ausencia/100ml), según
corresponda a la alícuota analizada.
 Si la prueba confirmativa es positiva, reporte como Pseudomona Aeruginosa: Presencia en 50 ml

(Presencia/50 ml) o Pseudomona Aeruginosa: Presencia en 100 ml (Presencia/100ml), según
corresponda a la alícuota analizada.
 Registrar el resultado en el formato Control microbiológico producto en proceso y producto

terminado F- LMB – 10
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Gilma Taborda Bolivar

 PRUEBA CONFIRMATIVA PARA LA DETERMINACIÓN DE PRESENCIA AUSENCIA DE

3.0 CONSIDERACIONES GENERALES

 La técnica consta de una prueba presuntiva para la determinación de Pseudomona s.p y

La prueba confirmativa se realiza cuando la prueba presuntiva es positiva.

 Para la preparación de medios de cultivo y reactivos se deben seguir los lineamientos de la

4.0 EQUIPOS MATERIALES Y REACTIVOS

 Cabina de Flujo Laminar

- Pipetas bacteriológicas de 25 ml o 50 ml, o probeta con capacidad mínima de 50 ml estériles.

 Frasco conteniendo 50 ml de caldo asparagina de doble concentración, estériles (para prueba

5.0 DESCRIPCIÓN DEL PROCEDIMIENTO.

 PRUEBA PRESUNTIVA PARA LA DETERMINACIÓN DE PRESENCIA AUSENCIA DE

 Verifique que el caldo asparagina se encuentre a temperatura ambiente; no presente signos de

 Homogenice la muestra a analizar mezclando el frasco o la bolsa que la contiene, 25 veces en el

 Pasado el tiempo de incubación retire los frascos de la incubadora

 Determine el crecimiento de Pseudomona s.p. por la presencia de pigmento verde fluorescente en

 La ausencia de una coloración verde fluorescente al cabo de 48 ± 3 horas constituye una

 La presencia de una coloración verde fluorescente al cabo de 48 ± 3 horas constituye una

 Si la prueba presuntiva es negativa, reporte como Pseudomona s.p: Ausencia en 50 ml

 Si la prueba presuntiva es positiva, reporte como Pseudomona s.p: Presencia en 50 ml

 Registrar el resultado en el formato Control microbiológico producto en proceso y producto terminado

 PRUEBA CONFIRMATIVA PARA LA DETERMINACIÓN DE PRESENCIA AUSENCIA DE

 Verifique que el caldo acetamida se encuentren a temperatura ambiente; no presente signos de

 Si al cabo de las 48 3 horas se presentan dudas en la lectura se presentan dudas en la lectura

 La presencia de una coloración púrpura al cabo de 48 ± 3 horas constituye una Prueba

 Si la prueba confirmativa es negativa, reporte como Pseudomona Aeruginosa: Ausencia en 50 ml

 Si la prueba confirmativa es positiva, reporte como Pseudomona Aeruginosa: Presencia en 50 ml

 Registrar el resultado en el formato Control microbiológico producto en proceso y producto

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