Preinforme de Microbiologia

Escuela de Ciencias Agrícolas, Pecuarias y del Medio Ambiente
Microbiología Ambiental-358010A_224
UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA

ESCUELA DE CIENCIAS AGRÍCOLAS, PECUARIAS Y DEL MEDIO
AMBIENTE
MICROBIOLOGIA AMBIENTAL
100411_304
PREINFORME
PRESENTADO POR: YORMAN LEAL FERNANDEZ
CODIGO: 83235914
TUTORA DE LABORATORIO: LEIDY JOHANA DIAZ SANCHES
TUTOR VIRTUAL: JORGE ALEJANDRO RODRIGUEZ
GRUPO: 358010_46
NEIVA, SEPTIEMBRE, 2015

INTRODUCIÓN
Con el desarrollo de esta práctica vamos a reconocer cada una de las instalaciones de un laboratorio,
las normas de seguridad que debemos tener en cuenta una vez estemos dentro de él, los elementos
de protección personal y los códigos de seguridad que debemos seguir una vez hayamos ingresado
a sus instalaciones. Además uno de los objetivos de la UNAD al implementar estos procesos de
aprendizaje es lograr que nosotros como estudiantes tengamos unas bases sólidas referentes a todo
lo que tiene que ver con procedimientos fisicoquímicos, de ahí la necesidad de reconocer las
diferentes clases de microorganismos y los beneficios que estos pueden brindar al medio ambiente
y a los seres humanos. Por otra parte vamos a adquirir un conocimiento general sobre el cultivo de
estos seres microscópicos, los ambientes en los que pueden sobrevivir cada una de las diferentes
especies y la facilidad que tiene muchos de ellos para adaptarse a cambios bruscos en el ambiente.
 OBJETIVO GENERAL
Reconocer la importancia que tiene la fisicoquímica en el estudio del medio ambiente, sus diferentes
aplicaciones, beneficios y lograr un reconocimiento adecuado de los diferentes tipos de
microorganismos.
 OBJETIVOS ESPECIFICOS
Identificar las normas de seguridad dentro de un laboratorio.
Reconocer cada uno de los elementos de protección personal que debemos utilizar una vez
estemos dentro del laboratorio.
Reconocer cada uno de los materiales de un laboratorio y los usos que le podemos dar.
Identificar los distintos métodos de siembra de los microorganismos.
Reconocer las técnicas de tinción y los procedimientos para realizarlas.
Manejo y reconocimiento de los microscopios y el uso que le podemos dar

PRÁCTICA No. 1: RECONOCIMIENTO DEL LABORATORIO Y MATERIALES DE

MICROBIOLOGIA
Medidas para manejo Características debe

correcto y cuidados del LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA reunir el vidrio para
microscopio compuesto. la fabricación de
material
Ventajas y desventajas del

uso de materiales de vidrio y
de plástico, respectivamente
Pasos enfocar imágenes en un
microscopio compuesto
Microscopio óptico de Uso materiales, que se

campo y sus partes les da en el laboratorio
1. ¿Qué características debe reunir el vidrio utilizado para la fabricación del material de
cristalería para los laboratorios y por qué?
Rta: El vidrio se fabrica mediante la fusión de arena sílice con sales de sosa o potasa a una
temperatura de 1.0000c. El producto en ese estado líquido, se vierten diversos moldes de acuerdo
a los objetos que se requieran producir, debido a la propiedad de no cristalizarse cuando se enfría,
quedando como un cuerpo sólido, generalmente transparente. Como se sabe, este tipo de cristal es
muy vulnerable a los impactos mecánicos, exposiciones a elevadas temperaturas. Etc, lo que no
resulta apropiado para la fabricación de la cristalería de laboratorio la cual requiere del empleo de
otros componentes como el borosilicato de sodio y el aluminio, cuya aleación le confiere una alta
resistencia mecánica, térmica y química. La cristalería fabricada con estos componentes, se
identifica por estar rotulada con el nombre de “Pyrex” (pairex)
1. Explique brevemente las ventajas y desventajas del uso de materiales de vidrio y de

plástico, respectivamente, en los laboratorios de microbiología.
Rta:
 VIDRIO: VENTAJAS DEL USO DEL VIDRIO
 Se caracteriza porque tiene resistencia química ( Frente a ácidos, frente a bases)

 Estabilidad
 Se caracteriza por su transparencia
 La mayoría de los utilizados son vidrios borosilicados, los cuales ofrecen gran
resistencia térmica ( vidrio pirex, quimax)
DESVENTAJAS DEL USO DEL VIDRIO
 No lo podemos someter a cambios bruscos de temperatura (se provocan tensiones que

pueden romper el cristal)
 Hay que colocar la estufa de secado o esterilización en frio, ir calentándolo después, y
cuando acabe el tiempo de secado dejar enfriar el material.
 No se debe aplicar fuerza sobre llaves, tapones de vidrio
 No se debe someter a variaciones bruscas de presión
 PLASTICO
Los materiales de plástico pueden ser de uso múltiple, los utensilios de plástico de laboratorio son
monómeros orgánicos polímero la rizada. Hay gran variedades de plásticos, van a tener distintas
propiedades físicas y químicas.
VENTAJAS
 Resistencia a la rotura
 Tiene un peso bajo
 Sus propiedades físicas y químicas, varían notablemente según su composición
 Más estabilidad frente a los ácidos excepto el ácido sulfúrico, ácido nítrico y perclorato
DESVENTAJAS
 No se puede calentar por encima de los 70°C

 Porosidad frente anhídrido carbónico del aire porque las disoluciones que permanecen
almacenadas por largo tiempo en estos recipientes se carbonatan
2. Describa, ilustre y clasifique los siguientes materiales, indicando el uso que se les da en el
laboratorio de microbiología (Sea breve, se le sugiere elaborar un cuadro).
NOMBRE DEL IMAGEN ESPECIFICACIONES DE USO

MATERIAL
Se utilizan esencialmente para colocar sobre su

Portaobjetos superficie pequeñas fracciones o volúmenes de
muestras, que serán sometidas o no a un proceso
de coloración, con la finalidad de ser observadas
a través del microscopio
Son empleadas para cubrir las muestras o

Cubreobjetos preparaciones que han sido colocadas
previamente sobre las láminas portaobjetos para
ser observadas al microscopio
Se utiliza en los laboratorios de Microbiología

Cajas de Petri principalmente para el cultivo de bacterias o
microorganismo para aislarlos e identificarlos y
así poder estudiarlos con mayor facilidad.
Miden con presión volúmenes variables de

Pipetas graduadas líquidos, Traspaso de líquidos en volúmenes
(terminales y no exactos.
terminales) Pipetas graduadas terminales: la última
graduación termina en graduación inferior.
Se Clasifica En Volumétrico.
Se utilizan para toma de pequeños inóculos de

Pipetas Pasteur cultivos, Traspaso de líquidos en volúmenes
pequeños
Se Clasifica En Volumétrico
El tubo de ensayo es un instrumento de

laboratorio que se utiliza principalmente como
Tubos de ensayo contenedor de líquidos y sólidos.
Los tubos de ensayo con tapón o falcón se
utilizan para almacenar temporalmente
sustancias o muestras (sólidos o líquidos),
especialmente para pruebas y ensayos
cualitativos.
- Matraces Fiolas: se utiliza para calentar

líquidos, con poca perdida de evaporación, hacer
Matraces (tipos) titulaciones y recristalizar un sólido.
-Matraz De Succión o kitazato: se utiliza para

filtraciones al vacío con bomba de succión.
-Matraces Aforados: Sirve para medir el

volumen especifico, se utiliza para preparar
soluciones.
Se Clasifica En Volumétrico
1.
Se empela para medir determinados volúmenes
de líquidos o soluciones en los casos en que no
se necesite mucha exactitud.
Probetas
2. - Probeta clase A : las de clase A son
producidas con más cuidado, se usan en
laboratorios de control de calidad y en
laboratorios de pruebas, se usan mucho en
validación de métodos analíticos
3. Probeta clase B: Son para uso escolar y
académico, pare mediciones en las que no se
requiere tanta precisión. Mayormente son de
plástico, su precio es bajo respecto a las probetas
clase A.
Se clasifica en Volumétrico
Se utiliza para evidenciar la producción de gas

Tubos de Durham de una bacteria al fermentar determinados
azucares
-Asa en argolla o anillos, no calibrada: sirve para la

Asas de siembra por estrías o inoculaciones en general.
inoculación (tipos) -Asa recta o en hilo: sirve para trasladar una sola
colonia a medios de identificación, o subcultivos
-Asa de planillo en anillo: calibrada para tomar
0.001ml, para uro- cultivo
-Asa Espatulada: para manipular colonias duras y
tomar muestras
-Asa de alambre grueso en “L”: para purificar
colonias de hongos y procedimientos especiales
Se emplea a diario para esterilizar los

instrumentos de siembra de micrón o platino,
Mecheros (tipos) mediante su exposición directa a la llama, que los
calentarán al rojo vivo en pocos segundos. Para
flamear la boca de los tubos de ensayo y otras
cristalerías estériles.
-Mechero Bunsen.
-Mechero Teclu
-Mechero Mecker
se utilizan a una temperatura de 37°C, para

Estufas realizar cultivos de bacterias, hongos, a una
Bacteriológicas temperatura igual a la del cuerpo humano
Sirve para la esterilización por el calor seco

Horno Pasteur
Funciona por las presiones que se dará a una

Autoclave mayor temperatura logrando su esterilización
como por ejemplo las conservas
Recipientes que se usan para conseguir una

Jarra de atmósfera libre de oxígeno para el cultivo de
Anaerobiosis microorganismos anaerobios
Aparato que aplica sobre los tubos una fuerza

. centrífuga lo que permite la separación de los
Centrífuga distintos componentes de la muestra mediante la
precipitación en el fondo del tubo de las partículas
en suspensión
Nefelómetro de Medir partículas suspendidas en un líquido. Esto

Mac Farland lo hace empleando una fotocelda colocada en un
ángulo de 90° con respecto a una fuente luminosa.
Membranas Se usa para que las bacterias no pueden pasar a

Millipore través de los agujeros pequeños
Cuenta colonias Es un instrumento utilizado para contar colonias

de bacterias o de otros microorganismos que
crecen en una placa de agar
4. Ilustre un microscopio óptico de campo claro con los nombres de todas las partes
5. Enliste detalladamente todas las medidas que se requiere tomar en cuenta para el manejo
correcto y cuidados del microscopio compuesto.
Rta: MANEJO DEL MICROSCOPIO COMPUESTO
 Colocar el objetivo de menor aumento en posición de empleo y bajar la platina

completamente. Si el microscopio se recogió correctamente en el uso anterior, ya debería
estar en esas condiciones.
 Colocar la preparación sobre la platina sujetándola con las pinzas metálicas.
 Comenzar la observación con el objetivo de 4x (ya está en posición) o colocar el de 10
aumentos (10x) si la preparación es de bacterias.
NORMAS BASICAS PARA EL CUIDADO DEL MICROSCOPIO COMPUESTO

 Para trasporta el microscopio se debe utilizar siempre las dos manos, sujetándolo por el
brazo con una mano y por el pie con la palma de la otra
 Una vez colocado el microscopio en n su sitio, no debe moverse hasta que finalice la
práctica, cuando se vaya a cambiar de observador se debe mover él y no el microscopio.
 Mover siempre suave y lentamente cualquier elemento del microscopio.
 Nunca poner los dedos en lentes del ocular ni del objeto. Si se enuncian dichas lentes se
limpiarán con un paño suave de algodón, sin utilizar ningún disolvente.
 No sacar de su sitio el ocular ni los objetivos, a no ser que vayan a ser sustituidos, en cuyo
caso la operación debe realizarse lo más rápidamente posible, para evitar la entrada de
polvo.
 Asegurarse de que el portaobjeto está bien seco cuando va a ser colocado sobre la platina
 Al enfocar sobre todo con los objetivos de mayor aumento, hay que evitar que el extremo
del objeto choque con la preparación. Para ello acercaremos el objetivo a la preparación
mirando lateralmente y luego, mirando ya a través del ocular, enfocamos alejando el
objetivo.
6. Enliste detalladamente todos los pasos que se requiere seguir para enfocar imágenes en
un microscopio compuesto.
Rta: ENFOQUE DE IMÁGENES EN UN MICROSCOPIO COMPUESTO
 Colocar el portaobjetos sobre la platina del microscopio

 Utilizar el objeto de menor aumento
 Deslizar el tubo del microscopio por medio del tornillo macrométrico, observando
lateralmente hasta que el objetivo quede cerca del portaobjetos
 Observar a través de los oculares subiendo lentamente el tubo del microscopio hasta
observar la preparación enfocada, no debe bajarse el tubo del microscopio mientras se está
observando, porque puede llegar a chocar el objetivo con el portaobjetos y ocasionar
desperfectos
 Afinar la imagen moviendo lentamente el tornillo micrométrico
 Si se desea mayor aumento, girar el revolver al objeto adecuado
 Si se utiliza el objeto de inmersión (100x) colocar sobre la preparación una gota de aceite
de inmersión y baja el tubo del microscopio hasta que la lente del objetivo toque a la gota,
observa y ajusta cuidadosamente después de su uso, limpiar el objetivo con un tejido suave(
papel seda.
7. Defina los siguientes términos en microscopía:
Límite De Resolución: El límite de resolución de un microscopio se define como la

distancia mínima a partir de la cual ya no es posible distinguir la separación entre dos
puntos.
Formula: LR = λC/NA
Dónde: λ: Longitud de onda de la luz en (𝜇𝑚)
C: Constante de proporcionalidad
NA: Abertura numérica
 Poder De Resolución: La resolución se define como el espacio de máxima aproximación

entre dos puntos en el que aún se pueden observar claramente como dos entidades
independientes, es decir, es la distancia entre dos entidades estructurales de un objeto en
la cual todavía se pueden observar como estructuras separadas en la imagen amplificada.
0,61𝜆
𝑃𝑅 =
𝑛 𝑆𝑒𝑛 𝜃
0,61: Constantes
𝜆 : Longitud de onda de la luz usada
𝑛 : Índice de refracción del medio
𝑆𝑒𝑛 𝜃 : seno del ángulo 𝜃
 Poder De Amplificación: Es la capacidad de un microscopio para aumentar la imagen.
La amplificación de un microscopio es el producto de número de aumento del objetivo por los

del ocular. Aumento útil: X1000 a x2000
Altura de la iamgen
Aumento Lateral: Altura del objeto
8. diferencias y ventajas que usted considera más importantes entre estos y el microscopio
óptico cuando se trabaja en un laboratorio de microbiología.
TIPOS DE MICROSCOPIO ELECTRONICOS:
Microscopio Electrónico De Transmisión (MET cortes muy finos. Una parte de los electrones
son absorbidos o rebotan por el objeto y otros lo atraviesan formando una imagen aumentada del
objeto en cuestión. Las muestras no deben ser mayores de un par de miles de angstroms (1 angstrom
es igual a 0.0000000001 metros) se ha de colocar una placa fotográfica detrás del objeto para
registrar la imagen aumentada. Cabe de destacar que este tipo de microscopios pueden aumentar
un objeto hasta un millón de veces.
Microscopio electrónico de barrido (MEB): En este no es necesario que el espécimen se

encuentre en capas de observarlo. El MEB explora la superficie de la imagen punto por punto, y
recorre la muestra con un haz muy concentrado de electrones. Estos pueden provocar la aparición
de electrones secundarios, que posteriormente serán recogidos por un dispositivo situado a los lados
del objeto en cuestión. Cada punto leído de la muestra corresponde a un pixel, de forma de cuantos
más electrones haya, mayor será el brillo del pixel en el monitor. A medida que haz de electrones
barre la muestra, se presentan la imagen de esta en el monitor. Los MEB pueden llegar a ampliar
una imagen una 200.000 veces.
DIFERENCIAS Y VENTAGAS:
 Para el estudio de las estructuras internas de las células es esencial un microscopio MET.
 En el MET se utilizan electrones en lugar de rayos de luz, y la función de las lentes la
realizan electromagnetos, operándose en todo momento a alto vacío.
 Cuando sólo se pretende estudiar las estructuras externas de una muestra, no son necesarios
cortes ultra finos, pudiéndose realizar la observación directa en MET, después de aplicar
una tinción negativa. También se puede usar el MEB.
 Todos los microscopios electrónicos tienen cámaras incorporadas que permiten fotografiar
las muestras denominándose microfotografías electrónicas.
MICROSCOPIO OPTICO: Se usa para aumentar el tamaño de la imagen aparente de los objetos,
lo cual permite observar los detalles estructurales de los microorganismos.
El microscopio óptico normal que se usa para observar bacterias y otros organismos celulares es
un microscopio compuesto, el cual está provisto de una fuente luminosa, una lente condensadora
de luz que la dirige hacia el objeto a observar y dos juegos de lentes que ayudan a la amplificación
de la imagen.
9. ¿Cuál es la utilidad del asa recta y redonda?

 ASA RECTA: Sirve para trasladar una sola colonia a medios de identificación, o sub-
cultivo.
 ASA REDONDA: Sirve para la siembra por estrías e inoculaciones.
10. ¿Qué se entiende por resiembra o pase bacteriano?
Rta: Resiembra se le llama al proceso donde se pasa una colonia de alguna bacteria que haya
crecido en algún medio a otra caja de Petri que contenga ya sea lo mismo que el medio en el que
creció anteriormente, esto se hace para continuar su reproducción con nuevos elementos que le
sirven para su crecimiento, ya que como todo organismo para crecer y multiplicarse requiere de
nutrientes y si están por mucho tiempo se acaba estos elementos por lo que es necesario hacer este
proceso, sobre todo si requiere su conservación.
MATERIALES Y MÉTODOS
MATERIALES EQUIPOS
Vidriería Membranas Millipore
Portaobjetos Cuenta colonias
Cubreobjetos Nefelómetro de Mac Farland

Pipetas graduadas Estufas bacteriológicas
Pipetas Pasteur Baño bacteriológico
Tubos de ensayo Horno Pasteur
Matraces Autoclave
Probetas Jarra de anaerobiosis
Tubos de Durham Centrífuga
Asas de inoculación Nefelómetro de Mac Farland
Mecheros
Jarra de anaerobiosis
RESULTADOS ESPERADOS
 Reconocer el material a trabajar en el laboratorio de microbiologí

 Definir cada término y las características que debemos conocer como las de los equipos a
utilizar.
PRACTICA N°2: MÉTODOS DE SIEMBRA
INTRODUCCIÓN
INTRODUCCION DE LA PRACTICA
MENTEFACTO
Medios de
MÉTODOS DE SIEMBRA
cultivo
Aislamiento de
microorganismos
Recuperación
Mantenimiento
Tenerse cuidado con las técnicas de
siembra microbiana para evitar en
lo posible la contaminación
MATERIALES Y MÉTODOS
MATERIALES EQUIPOS
Muestra contaminada con

microorganismos
Agar nutritivo en caja de Petri Incubadora
Asa redonda
Gradilla
Mechero
Incubadora mechero
Vinipel
Marcador de vidrio
REACTIVOA A UTILIZAR
REACTIVO FÓRMULA CONCENTRACIÓN

Agua peptonada H2O 0,1% estéril
caldo nutritivo
Agar nutritivo semisólido
PROCEDIMIENTO
 Desinfectar el área de trabajo, prender el mechero y preparar el material de trabajo.

 Coger parte de la muestra y colocarla en el tubo de ensayo que contiene el agua
peptonada.
HOMOGENIZAR
 Dejar 20 – 30 minutos en incubación los tubos.

 Realizar un diagrama de aislamiento de colonias, en un círculo de papel (8 cm) para
ponerlo debajo de la caja de Petri.
 Finalizado el tiempo de incubación tomar el asa redonda y esterilizarla por calor hasta
que está esté roja, dejar enfriar cerca al mechero.
 Abrir el tubo con la muestra y tomar una asada.
 Cerrar el tubo y colocarlo en la gradilla. Teniendo cuidado de que el asa no toque
nada y de no pasarla por encima del mechero, pero siempre estar cerca de este
 Abrir la caja de Petri y seguir el esquema para el aislamiento.
Terminado la siembra, marcar las cajas en el borde de la base de la caja y envolverla
en papel Vinipel
Los hongos son microorganismos eucarióticos con condiciones de crecimiento especiales e

interés ambiental, pueden ser utilizados a nivel de industria
MATERIALES
Cajas de Petri con agar PDA
Agujas de disección, jeringas de insulina o asa recta.
Hongos de cualquier género con crecimiento no mayor a 15 días antes de la
práctica ( en caja de Petri)
PROCEDIMIENTO
 Tome con la aguja de disección o asa un cuadro de la colonia fúngica de no más de 5

mm de diámetro, intente tomar de los extremos de la colonia, cuidadosamente
coloque el cuadro en la caja de Petri con agar PDA en el centro de la misma, incubar
a 25°.
TABLA DE DATOS
MEDIOS DE CULTIVO
Caldo Nutritivo
Agar Nutritivo Semisólido
RESULTADOS ESPERADOS
 Tener una buena precaución al ahora de manejar la técnica para que la muestra no se
nos contamine.
 El día 4 para ver los resultados esperamos que haya crecido hongo y no se halla
contaminado.
PRACTICA N°3 TECNICAS DE TINCIÓN

INTRODUCCIÓN
MENTEFACTO
TECNICAS DE TINCION
Seque fijación de
Coloración simple Agua destilada
color
Cubrir la
Enfriar lamina
suspensión
Observar en el
microscopio
,
MATERIALES Y METODOS
MATERIALES EQUIPOS
Láminas Alcohol cetona
Laminillas Fucsina básica o safranina
Agua destilada estéril Tinta china
Asas bacteriológicas redonda y asa recta Microscopio óptico Microscopio
Mechero Colonias aisladas de bacterias

para observación de bacterias
Azul de metileno Guantes de látex
Cristal violeta
Lugol
REACTIVOA A UTILIZAR
Azul metileno Fucsina básica o Sanabria
Cristal violeta Tinta china
Lugol
Alcohol cetona
PROCEDIMIENTO
Coloración simple
 En una lámina portaobjetos limpia, colocar una gota del agua destilada estéril
(trabajo con muestra sólida) o una gota del cultivo bacteriano (trabajo con muestra
liquida) sobre la misma y con ayuda del asa redonda estéril extender la gota de
suspensión a un área no superior a dos centímetros cuadrados.
 Dejar que la preparación se seque al aire. Fijar con calor, pasando tres veces
seguidas a través de la llama del mechero
 Dejar enfriar la lámina. Lo anterior se conoce como la realización de un frotis y se
hace para coloraciones donde la muestra debe ser fijada y luego si iniciar las
coloraciones respectivas.
 Colocar la preparación sobre una rejilla encima del vertedero.
 Cubrir la suspensión con algún colorante dado por el profesor, así:
-Cristal violeta: 1 minuto
-Azul de metileno: 5 minutos
-Fucsina: 1 minuto
 Terminado el tiempo de coloración según el colorante empleado, eliminar el
colorante lavando con agua suavemente.
 Dejar secar y colocar la preparación en la platina del microscopio y observar con el
objetivo de menor aumento inicialmente hasta llegar al objetivo de 100X,
Coloración compuesta
 Realizar un frotis de la muestra seleccionada
 Colocar en la rejilla para coloración y cubrir el frotis con cristal violeta esperando
que transcurra 1 minuto. Lavar con agua el colorante.
 El segundo colorante es el Lugol, el cual se deja por 1 minuto sobre el frotis
 Realizar la decoloración con la mezcla alcohol-acetona, por 25 segundos.
Lavar Inmediatamente con agua.
 Finalmente adicionar el colorante de contraste, fucsina o safranina, por 30
segundos. Lavar con agua.
 Escurrir el exceso de agua, dejar secar y montar al microscopio para hacer las
observaciones respectivas.
Resultados esperados
 Conocer las reacciones observadas con la aplicación de las tinciones de GRAM

 Observar los diferentes microorganismos por medio de las muchas tinciones.
PRACTICA N°4: OBSERVACIÓN MICROSCÓPICA DE HONGOS
INTRODUCCIÓN
MENTEFACTO
Colocar en el centro de la
lámina portaobjeto una gota de
azul de lactofenol.
OBSERVACION
MICROSCOPICA
Finalizado este tiempo montar al

microscópico y observar en 10X
Luego tomar con el asa
y 40X.
micológica previamente estéril
parte del hongo y re suspenderlo
en la gota del colorante. Colocar luego una laminilla
encima de esta preparación y
esperar 3 minutos.
MATERIALES Y METODOS
MATERIALES
Cultivo de hongos Azul de lactofenol
Láminas portaobjetos Microscopio
Laminillas
PROCEDIMIENTO
 Colocar en el centro de la lámina portaobjeto una gota de azul de lactofenol, luego tomar
con el asa micológica previamente estéril parte del hongo y resuspenderlo en la gota del
colorante.
 Colocar luego una laminilla encima de esta preparación y esperar 3 minutos. Finalizado
este tiempo montar al microscopio y observar en 10X y 40X.
DIBUJAR LAS SIGUIENTES CARACTERÍSTICAS EN EL CUADRO QUE

CORRESPOND
Hifa septada
Hifa Cenocítica
Artroconidios
Conidios
PRACTICA N°5: CONTROL DEL CRECIMIENTO BACTERIANO
INTRODUCCIÓN
MENTEFACTO
CRECIMIENTO BACTERIANO
.ACCION DE LA ACCION DE LA ACCION DE LA

ACCION DEL PH
TEMPERATURA PRESION LUZ
OSMOTICA ULTRAVIOLETA
Suspender una colonia del Dividir la base de las cajas Dividir la base de las
microorganismo en el caldo en dos cuadrantes con el cajas en dos cuadrantes
nutritivo y dejarlo por media marcador de vidrio y con Dividir la base de las con el marcador de vidrio
hora. el asa redonda cajas en dos y con el asa redonda
cuadrantes con el
marcador de vidrio y
con el asa redonda Sembrar por estrías en un
Luego tomar 0.1 mL del Sembrar por estrías en un cuadrante el
medio y sembrarlo sobre el cuadrante el microorganismo microorganismo Gram-
medio sólido del agar Gram-negativo y en el otro el negativo y en el otro el
nutritivo. Gram positivó. Gram positivó.
Sembrar por estrías en
un cuadrante el
Llevar las dos cajas de Petri e microorganismo
Seguidamente tapar la
incubarlas a 37oC Realizar este procedimiento Gram-negativo y en el mitad de la caja con papel
con todos los medios de otro el Gram positivó. de aluminio y coloca sobre
diferentes pH. la otra parte de la caja la
luz ultravioleta por 5 o 10
minutos
MATERIALES Y EQUIPOS
MATERIALES EQUIPOS
Pipetas estériles de 1 y 2 mL Estufa
Vaso de precipitado de 500 mL Incubadora
CULTIVOS
Cultivo de un microorganismo Gram - Cultivo de un microorganismo Gram -
positivo negativo.
Caldo nutritivo Medio de cultivo nutritivo en cajas de Petri
Medio de cultivo nutritivo en cajas de Petri Medio de cultivo nutritivo en cajas de Petri
con diferentes concentraciones de NaCl. con diferentes pH’s.
PROCEDIMIENTO
ACCIÓN DE LA TEMPERATURA: Suspender una colonia del microorganismo seleccionado

en el caldo nutritivo y dejarlo por media hora para un desarrollo de los microorganismos en el
medio de cultivo. Luego tomar 0.1 mL del medio y sembrarlo sobre el medio sólido del agar
nutritivo. Llevar el caldo nutritivo donde se inoculo el microorganismo a la estufa y ponerlo a
ebullición por el tiempo dado por el profesor y sembrar como al inicio. Llevar las dos cajas de Petri
e incubarlas a 37oC.
ACCION DEL PH: Dividir la base de las cajas en dos cuadrantes con el marcador de vidrio y con
el asa redonda sembrar por estrías en un cuadrante el microorganismo Gram-negativo y en el otro
el Gram positivó.
Realizar este procedimiento con todos los medios de diferentes pH.
ACCIÓN DE LA PRESIÓN OSMÓTICA: Dividir la base de las cajas en dos cuadrantes con el
marcador de vidrio y con el asa redonda sembrar por estrías en un cuadrante el microorganismo
Gram-negativo y en el otro el Gram positivó.
ACCIÓN DE LA LUZ ULTRAVIOLETA: Dividir la base de las cajas en dos cuadrantes con el
marcador de vidrio y con el asa redonda sembrar por estrías en un cuadrante el microorganismo
Gram-negativo y en el otro el Gram positivó.
Seguidamente tapar la mitad de la caja con papel de aluminio y colocar sobre la otra parte de la
caja la luz ultravioleta por 5 y/o 10 minutos, tapar la caja y llevar a incubar.
PRACTICA N° 6: RECUENTO DE UNIDADES FORMADORAS DE

COLONIAS-UFC.
INTRODUCCIÓN
Hacer diluciones
de la muestra
líquida de
RECUENTRO DE
Sembrar en
profundidad por Siempre se Se deben Sacar de la
duplicado 1 mL informan dos contar las incubadora y
de cada una de números cajas cuyo realizar el
enteros y el número de
colonias esté
Una vez
solidificado el
Adicionar de 15
agar, se
– 20 mL del
vierten las
agar nutritivo a Mezclar
Dejar
inmediatamente el
solidificar,
inóculo con el
adicionar una
medio, con
capa sellante de
movimientos
5 mL sobre la
circulares de la placa
MATERIALES EQUIPOS
2 cajas de Petri estériles Incubadora a 35°C
4 tubos de ensayo con agua peptonada al 0.1% Contador de colonias

estériles
4 Pipetas de 1 mL o una pipeta automática (100 – Balanza
1000 μL)
1 frasco de dilución con 90 mL de agua peptonada al
0.1%
50 mL de agar nutritivo previamente preparado y
atemperado a 45 - 48°C
Marcador de vidrio
PROCEDIMIENTO
 Hacer diluciones de la muestra líquida de acuerdo al tipo de producto.

 Si es una muestra contaminada deben realizarse diluciones altas
 En muestras procesadas se hacen diluciones bajas
 Sembrar en profundidad por duplicado 1 mL de cada una de las diluciones seleccionadas

 Adicionar de 15 – 20 mL del agar nutritivo a la temperatura adecuada
 Mezclar inmediatamente el inóculo con el medio, con movimientos circulares de la placa a
favor y en contra de las manecillas del reloj, como en ángulo recto. Debe evitarse que el
medio impregne la tapa.
 Dejar solidificar, adicionar una capa sellante de 5 mL sobre la caja y dejar solidificar
nuevamente.
 Una vez solidificado el agar, se vierten las placas e introducen en la incubadora (35°C
durante 72 horas)
 Sacar de la incubadora y realizar el recuento
 Lectura: se deben contar las cajas cuyo número de colonias esté comprendido entre 30 y
300 UFC. Es conveniente ir marcando las colonias para evitar volver a contarlas. Hallar la
media.
El número contado se multiplica por el factor de dilución y los resultados se expresarán en

unidades formadoras de colonia (UFC) por mL o g, dependiendo del tipo de alimento de
partida.
 Siempre se informan dos números enteros y el resto en exponente
PRACTICA N° 7: APLICACIONES DE MICROBIOLOGÍA AMBIENTAL
INTRODUCCIÓN
Diagnostica e
implementa nuevas
alternativas para el
desarrollo agrícola
APLICACIONES DE MICROBIOLOGIA
Ámbito de la control de calidad en

ingeniería ambiental y abonos orgánicos y
la industria. suelos por número más
probable (NMP)
MATERIALES EQUIPOS
frascos con solución salina 0.85% o agua peptonada al 0.1% (90 ml)
tubos tapa rosca con 9 ml de solución salina o agua peptonada al
0.1%
15 tubos tapa rosca con 9 ml de caldo de cultivo lbt (lauryl tryptose
broth) Lámpara U.V
15 campanas durham para observar producción de gas (dentro de
los
tubos de lbt)
15 tubos trapa rosca con 9 ml de caldo de cultivo lmx (fluorocult)
para cultivo de e. coli
reactivo de kovacs Incubadora
pipetas de vidrio de 1 ml
muestra de abono orgánico (los estudiantes deberán llevar la
muestra,
puede ser abono orgánico comercial, lombricompost, humus etc)
REACTIVOS A UTILIZAR
REACTIVO FÓRMULA CONCENTRACIÓN

solución salina SSN 90 ml
PROCEDIMIENTO
 Pesar 10 gramos de la muestra, mezclarla con los 90 ml de solución salina o agua peptonada.
 Realizar diluciones seriadas hasta 10-3.
 Marcar los tubos de LBT y LMX en 3 series de 5, es decir 5 tubos marcados como 10-1, 5
tubos marcados como 10-2, 5 tubos marcados como 10-3.
 A partir de las diluciones sembrar 1 ml de cada dilución en los tubos con los dos medios.
Recuerden que por cada dilución deben inocular 5 tubos de medio.
 Incubar a 37° por 24 horas
 Realizar la lectura, la cual se realiza contando el número de tubos positivos, para el caso de
coliformes fecales (LBT) se presenta turbidez y presencia de gas en las campanas durham,
sino se presentan los dos fenómenos se tomarán como negativos)
 Por ejemplo en la dilución 10-1 se presentaron 3 tubos positivos, en la dilución 10-2 1 tubo
positivo, en la dilución 10-3 0 tubos positivos, obteniéndose una combinación de 310, con
ese número se dirigen a la tabla de Numero más probable según la EPA-1680 2006.
DETECCIÓN DE PSEUDOMONAS EN SUELOS:
MATERIALES
Frascos con 90 ml de solución salina al 0.85% o agua peptonada al 0.1%
Tubos tapa rosca para diluciones con 9 ml de solución salina al 0.85% o agua peptonada al
0.1%
Cajas de Petri con agar King b o cetrimide
Rastrillos de vidrio
Pipetas de vidrio de 1 ml
Suelo procedente del algún sitio de derrame de petróleo o que estpé impactado por derivados
del petróleo (suelos de cultivos donde se ha fumigado) o cualquier suelo.
Lámpara de luz UV
PROCEDIMIENTO
 Pesar 10 g de la muestra y mezclarlos con los 90 ml de solución diluyente, agitar bien y

realizar diluciones seriadas hasta 10-6.
 Sembrar 0.1 ml de las diluciones 102, 10-4, 106 en superficie por duplicado, proceder a
hacer siembra masiva con los rastrillos cuidando que no se rompa el agar, incubar a 30
grados por 4 días.
 Posterior a la incubación con ayuda de la lámpara observar las colonias con fluorescencia
o pigmentación azul verdosa, realizar el recuento de la dilución que contenga entre 30 y
300 colonias.
 Realizar los cálculos de la siguiente manera, por ejemplo, en la dilución 10-6 se contaron
48 colonias, ese valor se multiplica por el factor de dilución, por el factor de corrección así:
 48(número de colonias contadas x106(factor de dilución) x10(factor de corrección, es un
número constante)=48x108UFC/g (UFC hace referencia a unidades formadoras de colonia)
INDICADORES DE CONTAMINACION DE AGUAS POTABLES
MATERIALES
Equipo de filtración por membrana (equipo millipore de plástico)
Membrana de nitrocelulosa de 0.45 micrometros para filtacion.
Jeringa (para hacer vacío)
Cajas de Petri con agar Cromocult para coliformes

PROCEDIMIENTO
 Tomar 100 ml de agua de la llave, la cual se inoculará con una asada de cultivo de E. coli,
agitar muy bien.
 Colocar la muestra en la parte superior de la campana de filtración y con la ayuda de la
jeringa realizar el vacío para permitir el paso del agua de un lado al otro.
 Con unas pinzas estériles retirar la membrana y colocarla sobre el agar cromocult, la parte
de la cuadrícula debe ir mirando hacia arriba.
 Incubar por 24 horas a 37° c y observar el número de colonias con las características típicas
de E. coli y coliformes totales (consultar la coloración en este medio, se encuentra por
internet)

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TUTOR VIRTUAL: JORGE ALEJANDRO RODRIGUEZ

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