Análisis Instrumental en Toxicología

Análisis Instrumental en Toxicología
Presentado por:
Paula Caicedo Rincón y Luz Dary Barrera
CONTENIDO
MÉTODOS ESPECTROMÉTRICOS 2. MÉTODOS DE SEPARACIÓN
➔ Espectrometría por absorción UV VIS.

➔ Espectrometría de absorción atómica. ➔ Cromatografía líquida.
➔ Espectrometría de masas ➔ Cromatografía de gases.
ANÁLISIS INSTRUMENTAL
Se basa en la utilización de instrumentos para

evaluar propiedades físico-químicas de un
material o muestra.
Se debe proporcionar un estímulo (energía

electromagnética, eléctrica, mecánica o nuclear) MÉTODOS ANALÍTICOS
que interactúe con el analito presente en el ➔ Métodos analíticos clásicos:
sistema en estudio y finalmente tener una - Gravimetría
respuesta o señal. - Volumetría
➔ Métodos instrumentales
(Skoog, Holler, & Crouch, 2008)

Propiedades Físicas y Químicas
utilizadas en los Métodos Instrumentales
Cambios en la
radiación
electromagnética
.
Propiedades
Eléctricas

Métodos Espectrométricos
Los métodos espectrométricos más utilizados se basan en la radiación electromagnética, que es un tipo
de energía que adopta varias formas (luz y calor radiante), y que se propaga en forma de ondas
transversales, pues su vibración es perpendicular a la dirección de su propagación.
Cuanto más corta sea la longitud de onda o mayor sea la frecuencia, la energía de la radiación es mayor.
E = energía
h = constante de Planck
v= frecuencia.
C= Velocidad de la luz.
1. ESPECTROFOTOMETRÍA UV-VIS
➔ Método instrumental que cuantifica la radiación electromagnética absorbida por una sustancia en la
zona UV visible del espectro, que se relaciona con la concentración del analito en solución.
➔ La región visible se extiende 380- 780 nm.
➔ Cuando la luz policromática atraviesa un objeto, el objeto absorbe ciertas longitudes de onda y
transmite otras.
➔ Si un compuesto (orgánico o inorgánico) no absorbe en la región UV o visible, se puede preparar
un derivado del mismo que sí absorba.
RELACIÓN ABSORBANCIA- TRANSMITANCIA
Po= Energía radiante incidente

P = Energía radiante transmitida

LEY DE LAMBERT-BEER
La concentración de una sustancia es

directamente proporcional a la cantidad de
energía radiante absorbida por la misma.
Condiciones
➔ El solvente utilizado debe tener una absorción mínima.

➔ Luz monocromática.
➔ Longitud de onda a la cual la absorción del analito en cuestión es máxima.
➔ Absorción óptimos en soluciones diluidas: permite medir absorbancias entre 0-1, ya
que en este rango se garantiza la linealidad.
ESPECTROFOTÓMETRO UV-VIS
➔ Fuente de radiación: Vis: Lámparas de Tungsteno. UV: Lámpara de deuterio

➔ Monocromador (Espejos y prismas) que selecciona la longitud de onda determinada.
➔ Recipiente que contenga la muestra: Vis: Plástico, vidrio o cuarzo. UV: Cuarzo
➔ Detector que convierte Convertir energía radiante en energía eléctrica, permitiendo la
detección y cuantificación del elemento analizado.
➔ Pantalla de visualización.
ESPECTROS DE ABSORCIÓN
AZUL DE METILENO PARABENOS
CURVA DE CALIBRACIÓN
“
Y = a + bx
Y= absorbancia
X= concentración
b= pendiente
a = intercepto con el eje Y
Christian, G. D. (2009).
2. ESPECTROMETRÍA ATÓMICA
Los átomos son la forma más sencilla y pura de la materia y no pueden
girar ni vibrar como lo hace una molécula, sólo se pueden efectuar
transiciones electrónicas dentro de ellos cuando se absorbe energía.
Los átomos son excitados térmicamente, ascendiendo a un nivel mayor de

energía electrónica y regresan a su estado fundamental al liberar energía.
Es posible medir la absorción o emisión de la radiación de los átomos.
➔ Espectrometría de emisión de flama: mide la cantidad de

radiación absorbida por átomos en estado excitado.
➔ Absorción atómica: mide la cantidad de radiación absorbida por

átomos en estado fundamental.
2. ESPECTROMETRÍA DE
ABSORCIÓN ATÓMICA (AAS)
➔ El principio de la AAS obedece la ley de

Lambert-Beer, donde la absorbancia es
directamente proporcional a la longitud de
trayectoria en la flama* y a la concentración de
vapor atómico en ella, es decir a la concentración
del analito en la solución que se aspira.
➔ Aplicación: Cuantificar metales y minerales en

muestras ambientales (agua, suelo), alimentos,
medicamentos y fluidos.
ESPECTROFOTOMETRÍA DE ABSORCIÓN ATÓMICA (AAS)
La solución de la muestra se aspira a través de un capilar.

La muestra se divide y es nebulizada (se fracciona en átomos),
donde las gotas más grandes del aerosol que se produce se
condensan y drenan de la cámara y las restantes se mezclan con los
gases de combustión (aire y acetileno) y entran a la flama.

ESPECTROFOTOMETRÍA DE ABSORCIÓN ATÓMICA (AAS)
Entre los electrodos se aplica un alto voltaje que causa la ionización de los
átomos del gas en el ánodo. Estos iones positivos son acelerados hacia el
cátodo negativo, y cuando lo bombardean hacen que algo del metal se
desprenda y se evapore.
El metal vaporizado se excita a niveles electrónicos más altos. Cuando los

electrones regresan al estado fundamental emiten las líneas características
de ese elemento metálico, las cuales atraviesan la flama y pueden ser
absorbidas por el elemento que se analiza.
Christian, G. D. (2009).
ESPECTROFOTÓMETRO DE ABSORCIÓN ATÓMICA
ENTRADA DE COMBUSTIBLE
- ARGÓN
- AIRE
- ACETILENO
- NITRÓGENO
- OXIDO NITROSO)
Horno de grafito:
Generador de hidruros:
Incrementa los límites de detección.
Detecta concentraciones hasta 1000 veces inferiores
que las detectables con llama. Solo se aplica a los elementos que forman hidruros
volátiles en condiciones normales, o que con un adecuado
Permite determinar trazas de elementos en suelos, agente reductor liberan el metal, el cual es volátil a
aguas, alimentos, fluidos, ej: plomo en sangre. temperatura ambiente.
Arsénico, antimonio, estaño, selenio, bismuto y mercurio.
Proceso de pirólisis: secar y calcinar la muestra
Los hidruros volátiles se generan al añadir a la muestra a un
2.100°C pequeño volumen de una disolución acuosa 1% de
borohidruro de sodio y HCl.
LÍMITES DE DETECCIÓN DE
DIFERENTES ELEMENTOS
(PPB: ug/L)
GENERADOR DE HIDRUROS
HORNO DE GRAFITO
CROMATOGRAFÍA
Corresponde a la separación
de componentes de una
muestra al distribuirse entre
dos fases: una estacionaria
y otra móvil.
Inventada y denominada así

por Mikhail Tswett a inicios
del siglo XX. Chroma: “color”
graphein: “escribir”
CROMATOGRAFÍA
● Adsorción
● Reparto
● Tamaño molecular
● Cambio Iónico
CROMATOGRAFÍA DE GASES
Es una técnica donde la muestra se volatiliza

y luego es inyectada en la cabeza de la
columna cromatográfica donde el eluyente
es un gas y la fase estacionaria es un líquido
no volátil.
TIPOS
● Cromatografía gas-sólido (de adsorción)
● Cromatografía gas-líquido (de partición)
CROMATOGRAFÍA DE GASES

CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA O HPLC
Es una forma de cromatografía de columna que

bombea la muestra o analito en un solvente (fase
móvil) a alta presión a través de una columna con
material cromatográfico (fase estacionaria).
Es la técnica analítica de separación más

ampliamente utilizada por: su fácil adaptación a
las determinaciones cuantitativas exactas, su
idoneidad para automatizarla, su capacidad para
separar especies no volátiles o termolábiles, etc.
CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA O HPLC
Solvente: Deben ser puros y estar

desgasificados para evitar la formación de
burbujas.
Sistema de inyección: tienen la capacidad
de inyectar muestras en el cromatógrafo de
líquidos a partir de frascos que están en un
carrusel o desde placas microtituladoras.
Columnas: Generalmente hechas de acero
inoxidable pero también se pueden encontrar
como vidrio resistente.
Detectores: Los más utilizados son
refractómetros y detectores UV.

TIPOS DE CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA O
HPLC
Según el solvente Según el analito
Cromatografía de fase normal: La Cromatografía exclusión molecular:

fase estacionaria es polar y fase móvil separa las partículas de la muestra en
no polar como: n-hexano, cloruro de función de su tamaño.
metileno o cloroformo. Cromatografía de intercambio
iónico: las moléculas cargadas de
Cromatografía de fase inversa: Fase analito compiten con los iones de la
estacionaria relativamente no polar y fase móvil por los sitios de unión de la
la fase móvil es polar que puede ser: fase estacionaria.
metanol, acetonitrilo, agua, etc.
CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA DE ALTA RESOLUCIÓN
HPLC
ESPECTROMETRÍA DE MASAS
1) Atomización Los espectrómetros de masas distinguen la masa

2) Conversión de una fracción significativa de de los isótopos.
los átomos en un flujo de iones (Cationes).
3) Separación de los iones formados con base La mayoría de los iones presenta una sola carga,
en su relación m /z. por lo cual el término relación masa-carga se puede
4) Conteo del número de iones de cada tipo o acortar y utilizar el término más apropiado de masa.
medición de la corriente iónica producida
cuando los iones formados a partir de la
muestra inciden en un detector adecuado.
ESPECTRÓMETRO DE MASAS
Sistema de entrada: introduce una cantidad muy
pequeña de muestra en la fuente de iones.
Fuente de iones: los componentes de la muestra se

transforman en iones gaseosos gracias al bombardeo
con electrones, fotones, iones o moléculas.
Analizador de masas: ocurre la dispersión de iones

según la relación m/z.
Transductor: convierte el haz de iones en una señal

eléctrica que pueda ser procesada, observada y
almacenada en un computador.
Los espectrómetros de masas requieren un sistema de

vacío para mantener una presión baja y así conservar
iones y electrones libres.
CROMATOGRAMA Y
ESPECTROGRAMA DE MASAS
HPLC
MS/MS
SISTEMA HPLC/ MS
BIBLIOGRAFÍA
Christian, G. D. (2009). Química Analítica (6aed.). McGraw-Hill.
Skoog, D., Holler, J., & Crouch, S. (2008). Principios de análisis de

Instrumental (6a ed.). Cengage Learning.

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MÉTODOS ESPECTROMÉTRICOS 2. MÉTODOS DE SEPARACIÓN

➔ Espectrometría por absorción UV VIS.

Se basa en la utilización de instrumentos para

Se debe proporcionar un estímulo (energía

(Skoog, Holler, & Crouch, 2008)

(Skoog, Holler, & Crouch, 2008)

Po= Energía radiante incidente

(Skoog, Holler, & Crouch, 2008)

La concentración de una sustancia es

➔ El solvente utilizado debe tener una absorción mínima.

➔ Fuente de radiación: Vis: Lámparas de Tungsteno. UV: Lámpara de deuterio

Los átomos son excitados térmicamente, ascendiendo a un nivel mayor de

Es posible medir la absorción o emisión de la radiación de los átomos.

➔ Espectrometría de emisión de flama: mide la cantidad de

➔ Absorción atómica: mide la cantidad de radiación absorbida por

➔ El principio de la AAS obedece la ley de

➔ Aplicación: Cuantificar metales y minerales en

La solución de la muestra se aspira a través de un capilar.

(Skoog, Holler, & Crouch, 2008)

El metal vaporizado se excita a niveles electrónicos más altos. Cuando los

Inventada y denominada así

Es una técnica donde la muestra se volatiliza

(Skoog, Holler, & Crouch, 2008)

Es una forma de cromatografía de columna que

Es la técnica analítica de separación más

Solvente: Deben ser puros y estar

(Skoog, Holler, & Crouch, 2008)

Cromatografía de fase normal: La Cromatografía exclusión molecular:

1) Atomización Los espectrómetros de masas distinguen la masa

Fuente de iones: los componentes de la muestra se

Analizador de masas: ocurre la dispersión de iones

Transductor: convierte el haz de iones en una señal

Los espectrómetros de masas requieren un sistema de

Christian, G. D. (2009). Química Analítica (6aed.). McGraw-Hill.

Skoog, D., Holler, J., & Crouch, S. (2008). Principios de análisis de

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