INTRODUCCION

Absorbancia.

El término frecuentemente es intercambiable con densidad óptica, si bien este último se

refiere a la absorbancia por unidad de longitud.

La medida de absorbancia se usa con frecuencia en química analítica y en bioquímica, ya

que la absorbancia es proporcional al paso óptico de la muestra y a la concentración de la
sustancia en ésta, en contraste con la transmitancia que varía exponencialmente con el
grosor y con la concentración.

Espectrofotometría
La espectrofotometría es la medición de la cantidad de energía radiante que absorbe o
transmite un sistema químico en función de la longitud de onda; es el método de análisis
óptico más usado en las investigaciones químicas y bioquímicas. El espectrofotómetro es
un instrumento que permite comparar la radiación absorbida o transmitida por una
solución que contiene una cantidad desconocida de soluto, y una que contiene una
cantidad conocida de la misma sustancia.

Principio de la Espectrofotometría
En la espectrofotometría se aprovecha la absorción de radiación electromagnética en la
zona del ultravioleta y visible del espectro. La muestra absorbe parte de la radiación
incidente en este espectro y promueve la transición del analito hacia un estado excitado,
transmitiendo un haz de menor energía radiante. En esta técnica se mide la cantidad de
luz absorbida como función de la longitud de onda utilizada. La absorción de las
radiaciones ultravioletas, visibles e infrarrojas depende de la estructura de las moléculas,
y es característica de cada sustancia química.
La espectrofotometría ultravioleta-visible utiliza haces de radiación. Del espectro
electromagnético, en el rango UV de 180 a 380 nm, y en el de la luz visible de 380 a 780
nm, por lo que es de gran utilidad para caracterizar los materiales en la región ultravioleta
y visible del espectro.

1
RESUMEN EJECUTIVO.

En el presente proyecto trata de conocer la concentración y el valor de absorbancia de la

clorofila, con diferentes cantidades de disoluciones entre la acetona y la clorofila.

Disolvemos la acetona y la clorofila, determinamos su concentración luego la llevamos al

espectrofotómetro.

Para determinar el valor de absorbancia utilizamos el espectrofotómetro, donde se

utilizaran las sustancias de la clorofila y la acetona.

La disolución estará compuesto por una cantidad de acetona y otra de clorofila, donde se
tendrá 5 tubos de ensayo con disoluciones de diferentes volúmenes entre las sustancias,
se las llevara al espectro fotómetro y se determinara el valor de la absorbancia con una
longitud de onda de 645nm, y como base blanca se tendrá un volumen de acetona puro
en tubo de ensayo.

Las 6 disoluciones tendrán diferente valor de absorbancia, esto nos ayudara a graficar el
vs de concentración (clorofila) y la absorbancia.

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 1. OBJETIVOS

OBJETIVO GENERAL

 Obtener el espectro de absorción de la clorofila y determinar a partir del

espectrofotómetro, para el estudio de cómo reducir el CO2

OBJETIVOS ESPECIFICOS

- Reconocer el adecuado funcionamiento del espectrofotómetro

- Analizar los datos obtenidos en las pruebas de precisión y exactitud.

- Comprender el funcionamiento del espectrofotómetro en calidad de tiempo.

- Estudiar el proceso de fotosíntesis para disminuir el impacto ambiental con

la reducción del CO2.

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 2. JUSTIFICACION

Debido a la contaminación del uso e industrialización del Gas Natural, se tiene la

necesidad implementar un proyecto para disminuir el impacto ambiental por uso del Gas
Natural mediante el estudio de la clorofila.

3. MARCO TEORICO

La espectrofotometría es la medición de la cantidad de energía radiante que absorbe o

transmite un sistema químico en función de la longitud de onda; es el método de análisis
óptico más usado en las investigaciones químicas y bioquímicas. El espectrofotómetro es
un instrumento que permite comparar la radiación absorbida o transmitida por una
solución que contiene una cantidad desconocida de soluto, y una que contiene una
cantidad conocida de la misma sustancia.
Ley de Lambert - Beer
La absorbancia de radiación electromagnética producida por una especie absorbente es
directamente proporcional a la trayectoria de la radiación a través de la solución y a la
concentración de la disolución muestra que produce la absorción.

A=abc
•a = absortividad, (ε= absortividad molar)

Es una propiedad de la materia relacionada únicamente con la naturaleza de la misma.

a cuando la concentración está en mg/L

ε cuando la concentración está en mol/L

•b = Trayectoria de la radiación a través de la muestra (cm)

•c= concentración (mg/L ó mol/L)

Muchos compuestos absorben luz ultravioleta (UV) o visible (Vis). El diagrama de abajo muestra un
rayo de radiación monocromática de poder radiante P0, dirigido a la solución muestra. La absorción
ocurre y el rayo de radiación de salida tiene el poder radiante P.

•Un haz de radiación paralela de potencia P0

•Una capa de solución de b cm de espesor
•Una especie molecular de concentración c, que absorbe radiación.
•Como consecuencia de la absorción de radiación, la potencia del haz disminuye de P0 a P.

•Transmitancia (T)
Es la fracción de radiación incidente transmitida por la solución,T = P/P0, expresada en tanto por
uno.
•Absorbancia (A)
Es la fracción de radiación incidente absorbida por la solución, expresada como
A = -log T = -log (P/P0) = log (P0/P) = log 1/T

4
 •Si T se expresa en %,
T % = 100 P/P0
A = log100/T%= 2 -logT%.

Aplicaciones
Las aplicaciones principales son:

 Determinar la cantidad de concentración en una solución de algún compuesto

utilizando las fórmulas ya mencionadas;
 Ayudar en la determinación de estructuras moleculares;
 La identificación de unidades estructurales específicas, ya que estas tienen
distintos tipos de absorbancia (grupos funcionales o isomerías);
 Determinar constantes de disociación de indicadores ácido-base.

Tipos de espectrofotometría

 Espectrofotometría de absorción molecular VIS-UV. 13.

 Espectrofotometría de absorción molecular IR.15.
 Espectrofotometría de absorción y emisión atómica.
 Espectrofotometría con atomizadores electrotérmicos.
 Espectrofotometría de emisión con plasma.
 Espectrofotometría de fluorescencia molecular.

COMPONENTES DEL ESPECTROFOTÓMETRO

1. Fuente de luz: proporciona energía radiante en forma de luz visible o no visible.
·        Tipos de lámparas:
-Lámparas de filamento de tungsteno: se utilizan para longitudes de onda del espectro

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visible y el ultravioleta próximo. Son fuentes de un espectro continuo de energía radiante
entre 360-950 nm. Lámparas de filamentos de haluros de tungsteno: son de mayor
duración y emiten energía radiante de mayor intensidad.
Lámparas de Hidrógeno y Deuterio: producen un espectro continuo en la región
ultravioleta entre 220-360 nm.
Lámparas de vapores de Mercurio: Emiten un espectro discontinuo o espectro de líneas
que se utilizan para calibración de longitudes de onda, se emplean solo para
espectrofotómetros y cromatografía HPLC.
Precauciones:Las subidas y bajadas bruscas de tensión producen sufrimiento de la
lámpara y cambios en las lecturas de la Absorbancia.
  La lámpara tiene una vitalidad limitada y se debe vigilar para que funcione bien el
aparato

2. Rendija de entrada: tiene como función reducir al máximo la luz difusa y evitar que la
luz dispersa entre en el sistema de selección de longitud de onda.
3. Monocromadores. Pueden ser:
Prismas: son fragmentos con forma de cuña de un material que permite el paso de la luz.
Ej. De vidrio para trabajar en el espectro visible o cuarzo para trabajar en el ultravioleta
lejano.
Redes de difracción: son un gran número de líneas paralelas situadas a distancias iguales
entre sí y son hendiduras sobre un vidrio o una superficie metálica. Cada una de estas
hendiduras se comporta como un pequeño prisma.
4. Rendija de salida: tiene como función impedir que la luz difusa atraviese la cubeta de
la muestra, que provocaría desviaciones a la Ley de Beer
5. Cubeta: es el recipiente donde se coloca la muestra para la medición. Pueden ser de
distintos tipos y tamaños (cuadradas, rectangulares, redondas). Se obtienen mejores
resultados usando cubetas de bordes paralelos. Si se utilizan cubetas redondas se deben
marcar e introducir en el aparato siempre en la misma posición. Suelen estar fabricadas
en vidrio o en plástico.

6. Detector. Puede ser de dos tipos:

Fotocélulas o células fotovoltaicas:
Es una lámina de Cobre sobre la que se extiende una capa de Selenio o de Óxido de
Cobre. A esto se le conoce como semiconductor. Sobre el semiconductor hay una capa

6
de metal transparente que sirve de electrodo. La luz incide sobre el Selenio y éste
desprende electrones, que pasan a la placa de Cobre originando una diferencia de
potencial por existir carga negativa sobre el Cobre y positiva sobre el Selenio. El conjunto
se conecta a un amperímetro que señala el paso de corriente.
Características: son resistentes; económicas; sensibles desde el ultravioleta hasta los
1.000 nm. De longitud de onda; no se requiere batería externa, ni vacío,...; la corriente
producida es directamente proporcional a la Energía que llega y tienen “efecto fatiga”, es
decir, que presentan una subida inicial de corriente, que luego decrece progresivamente
hasta el equilibrio. Por eso hay que esperar entre 30-60 segundos entre una lectura y otra.
Fototubos multiplicadores:
Un fototubo multiplicador es un tubo que contiene un cátodo que emite electrones de
forma proporcional a la Energía que incide sobre él. Tiene un ánodo que recoge los
electrones y la corriente se multiplica varias veces al chocar los electrones sobre
sucesivos ánodos que van teniendo un voltaje superior al precedente. La señal se
amplifica en cientos o miles de veces.
Características: el tiempo de respuesta es muy rápido, no tienen “efecto fatiga” tan altos
como la anterior y son muy sensibles.
7. Medidor: son sistemas de lectura de la Energía eléctrica que recoge el detector y que
puede ser lectura directa (se utiliza una célula fotovoltaica) o puede ser amplificadores de
señal como en el caso del fototubo multiplicador. Los actuales aparatos incorporan lectura
digital y cálculos automáticos de concentraciones con relación a las curvas de calibración.

LA CLOROFILA

Las clorofilas son una familia de pigmentos de color verde que se encuentran en

las cianobacterias y en todos aquellos organismos que contienen plastos en sus células,
lo que incluye a las plantas y a las diversas algas eucarióticas. La clorofila es una
biomolécula extremadamente importante, crítica en la fotosíntesis, proceso que permite a
las plantas y algas absorber energía a partir de la luz solar.

La clorofila fue descubierta en 1817 por los químicos franceses Pelletier (1788-1842)

y Caventou (1795-1877), que consiguieron aislarla de las hojas de las plantas. 2 Pelletier
introdujo los métodos, basados en la utilización de disolventes suaves, que permitieron
por primera vez aislar no solo la clorofila, sino sustancias de gran importancia
farmacológica como la cafeína, la colchicina o la quinina.

Las clorofilas son un grupo de pigmentos que se encuentran en aquellos

organismos eucariotas que poseen cloroplastos (plantas, algas) y en algunos procariotas:
bacterias que no poseen cloroplastos (cianobacterias, bacterias verdes y púrpuras), y

7
cuyos pigmentos se encuentran en sistemas de membrana internos: (vesículas,
lamelas, cromatóforos), pertenecientes a los dominios Eubacteria y Eucarya.

La estructura de las moléculas de clorofila tiene dos partes: un anillo de porfirina que

contiene magnesio y cuya función es absorber luz, y una cadena hidrófoba de fitol cuya
función es mantener la clorofila integrada en la membrana fotosintética.

Las clorofilas se encuentran en las membranas de los tilacoides, que en

las cianobacterias son invaginaciones de la membrana plasmática, y en los plastos de las
células eucarióticas son vesículas distribuidas por su interior. Las clorofilas aparecen
insertas en la membrana, a las que se anclan por la cadena lateral constituida por un
resto de fitol, asociadas a proteínas y otros pigmentos, con los que forman
los fotosistemas.

Cada fotosistema contiene alrededor de 200 moléculas de clorofila, además de pigmentos

auxiliares, con los que constituye la llamada antena. La antena está formada por
conjuntos ordenados de moléculas de clorofila, otros pigmentos y proteínas, que se
llaman complejos colectores de la Luz. Sólo una molécula de clorofila a en cada
fotosistema convierte propiamente la energía radiante (luz) en energía química, cuando
recibe un fotón con energía suficiente desde las moléculas de la antena, que se la van
pasando.

Las clorofilas tienen típicamente dos tipos de absorción en el espectro visible, uno en el
entorno de la luz azul (400-500 nm de longitud de onda), y otro en la zona roja del
espectro (600-700 nm); sin embargo reflejan la parte media del espectro, la más nutrida y
correspondiente al color verde (500-600 nm). Esta es la razón por la que las clorofilas
tienen color verde y se lo confieren a los organismos, o a aquellos tejidos, que tienen
cloroplastos activos en sus células, así como a los paisajes que forman.

EXTRACCIÓN DE CLOROFILA.

Este pigmento de color verde intenso puede ser extraído y usado como colorante natural
para comidas orgánicas dando color verde a platos tales como el sushi, risotto, pastas,
etc. Es muy importante en la nutrición pues funciona como antioxidante y muchos niños
se niegan a comer vegetales, por lo tanto esta también es una buena forma de hacerles
comer clorofila.

La clorofila es insoluble en agua, pero soluble en solventes polares como el alcohol y

en lípidos. Esta propiedad de insolubilidad en agua es la que permite que los vegetales no
pierdan el color durante el lavado. Por otra parte la solubilidad en alcohol es la que
permite la fabricación del licor de menta. La solubilidad en grasas es la que permite
saborizar un aceite o bien tener el color del aceite de oliva prensado.

La clorofila está asociada a proteínas y como estas coagulan desde los 60ºC, es posible
coagular la clorofila asociada junto con ellas por medio de un tratamiento térmico por

8
encima de esa temperatura.

La clorofila también se degrada a altas temperaturas, superando los 68ºC se comienza a

pardear y perder el color verde intenso pasando a un color grisáceo.

Como vemos hay varios procesos de extracción de clorofila. Teniendo en cuenta los
conceptos teóricos enunciados en los párrafos anteriores, utilizaremos un método de
extracción por temperatura en medio acuoso.

El proceso comienza con triturar vegetales como espinaca, acelga, berro etc. y ponerlos
en agua fría. En este caso usé hojas de espinaca con sus correspondientes tallos, para
esta operación se puede machacar en un mortero, picar con cuchillo, procesar o licuar
con un poco de agua.

Seguidamente colamos el licuado, luego llevamos el líquido colado a un recipiente

entre 63ºC y 68ºC, esperamos unos minutos y veremos que el pigmento comienza a
separarse y flotar en la superficie del agua:

Controlar la temperatura que no pase de 65ºC regulando el fuego, a efectos de no

degradar la clorofila.

Después que se haya alcanzado la temperatura de 63ºC veremos que comienza a

separarse la clorofila y flotará en la superficie del líquido, ahora simplemente se debe
recoger con una cuchara.

Al terminar el proceso tendremos la clorofila obtenida con un color verde intenso, puede
tener algo de espuma, que se puede quitar con la cuchara.

4. MARCO METODOLOGICO

Esta práctica nos permitirá realizar una curva de valoración, para nuestra determinación
vamos a utilizar unas pastillas de clorofila que contiene 760 mg por cada gramo de
muestra,

- Procedemos a moler la muestra de la clorofila en un mortero con su pistilo a lo

más mínimo que se pueda.
- Luego vamos a pesar en una balanza analítica la muestra, pesamos 5 gr.
- Registramos el peso de la muestra que aproximadamente pesamos 5.0294gr.
- Las pastillas de clorofila tienen una base necesitamos hacer una extracción del
analito, lo cual colocamos las pastillas de clorofila molidas en un vaso precipitado y
las disolvemos con acetona.
- Posteriormente ya que hemos disuelto la pastilla con acetona, la vamos a verter a
nuestro matraz aforado.
- Enseguida procedemos a aforar la mezcla.
- Luego homogenizamos la mezcla.

9
 - Vertemos un parte de la mezcla en vaso precipitado.
- Luego con una pipeta vertemos la mezcla en 5 tubos para el espectro, que ira
variando en sus volúmenes:
TUBO 1: 1 ml de la mezcla
TUBO 2: 3ml de la mezcla
TUBO 3: 5ml de la mezcla
TUBO 4: 7mlde la mezcla
TUBO 5: 9mlde la mezcla
- En un tubo de espectro llenamos una sustancia de acetona de 10ml que servirá
como blanco.
- Ahora a cada tubo completamos a 10ml con acetona para tener la misma cantidad
de muestra.
- Pasamos al equipo de espectrofotometría y colocamos el valor de la longitud de
onda, para la clorofila la longitud de onda es 645nm.
- Como primer tubo colocamos es el tubo que contiene la acetona puro y luego el
equipo se ajustará a 0.
- Vamos colocando los tubos uno en uno, le damos medición al equipo, luego nos
dará los valores de la absorbancia de cada uno, lo registramos.
- En el último tubo de 9ml de la mezcla con 1ml de acetona, nos dio un valor
superior a los 3.5, este valor no se toma en cuenta lo que quiere decir que la
disolución esta fuera del intervalo del equipo.

5. PROCESAMIENTO DE ANALISIS DE DATOS

por regla de tres determinamos:

760mg-----------100g
X -----------------5g
38 mg mg
250 ml
=0.152
ml ( )
Según la siguiente formula hallaremos la concentración de las diferentes disoluciones:

V1N1
N 2=
V2

Para tubo 1 N 1=0.152 ( mgml ) V =( 1 ml ) V =10 ( ml )

1 2

N 2=
1 ( ml )∗0.152 ( mg
ml )
10 ( ml )

10
N 2=0.0152 ( mgml )
Para tubo 2 N 1=0.152 ( mgml ) V =( 3 ml ) V =10 ( ml)
1 2

N 2=
3 ( ml )∗0.152 ( mgml )
10 ( ml )

N 2=0.0456 ( mg
ml )

Para tubo 3 N 1=0.152 ( mgml ) V =( 5 ml ) V =10( ml)

1 2

N 2=
5 ( ml )∗0.152 ( mgml )
10 ( ml )

N 2=0.076 ( mgml )

Para tubo 4 N 1=0.152 ( mgml ) V =( 7 ml ) V =10 ( ml)

1 2

N 2=
7 ( ml )∗0.152 ( mgml )
10 ( ml )

N 2=0.1064 ( mgml )

Para tubo 5 N 1=0.152 ( mgml ) V =( 9 ml ) V =10 ( ml)

1 2

N 2=
9 ( ml )∗0.152 ( mgml )
10 ( ml )

11
N 2=0.1368 ( mg
ml )

6. RESULTADOS ESPERADOS.

Los resultados fueron buenos, se puede ver en la grafica que la concentracion no varia
mucho y la absorbancia tiene un movimiento lineal lo que quiere decir que los datos
obtenidos son aceptables.
f(x) = 0
R² = 0 Gráfico Absorbancia y Concentración
12

10

6 N° DE CLOROFILA ACETONA
CONCENTRACION ABSORCION
TUBO (ml) (ml)
4 TUBO 1 1 9 0,0152 0,572
TUBO 2 3 7 0,0456 1,832
2
TUBO 3 5 5 0,076 2,843
0 TUBO 4 7 3 0,1064 3,305
0 2 4 6 8 10 12
TUBO 5 9 1 0,1368 3,5

12
 7. IMPACTO

Con el estudio de la clorofila y el proceso de la fotosíntesis se quiere ayudar a mitigar

algunos de los efectos adversos producidos por el consumo de combustibles como es el
gas natural.

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

- Extracción de la clorofila:

http://esolercocina.blogspot.com/2013/06/extraccion-de-clorofila.html

Consultado en 07 de octubre de 2016.

- Que es la clorofila:

https://es.wikipedia.org/wiki/Clorofila

Consultado en 07 de octubre de 2016.

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ANEXOS

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