REACCIONES DE IDENTIFICACIÓN DE LOS CUERPOS CETONICOS

Arce Velasco Lina Camila, Oime Montenegro Jeyson Camilo

Fecha de la práctica: 27/02/2020; Fecha de Entrega: 12/03/2020

Graphical Abstract

OBJETIVO GENERAL
Identificar la presencia de cuerpos cetónicos en orina recién emitida realizando pruebas cualitativas

1. SECCION EXPERIMENTAL

1.1 REACTIVOS
Muestra de orina, P-nitrofenilhidrina saturada en ácido acético (C6H6N4O4,15%), Nitroprusiato de sodio
(Na2[Fe(CN)5NO,10%),Hidróxido de sodio (NaOH,10%), Hidróxido de sodio (NaOH, 20%) , Acetona
(C3H6O), solución saturada de yodo/yoduro (I2/KI), cloruro férrico (10%), Resorcinol (20%), ácido
acético glacial (CH₃COOH), Ácido sulfúrico concentrado (H2SO4 conc).
1.2 EQUIPOS
Balanza analítica (OHAUS), Lámpara de luz ultravioleta (UVP, UVGL-15 compact, UV Lamp)

2. DATOS Y RESULTADOS
Tabla 1. Resultados obtenidos en las diferentes pruebas cualitativas realizadas para la muestra de
orina

Prueba Griebel y Weiss (+)

(-)
Prueba de Legal

(-)
Prueba Gerhardt

(+)
Prueba Lieben

Prueba de Arreguine (+)

* Al ser cualitativas las pruebas, se determina el resultado por el color generado. Los resultados de
cada una de las pruebas se observan en las imágenes donde M=muestra B=Blanco P=Patrón
3. DISCUSION DE RESULTADOS
Los cuerpos cetónicos son: el ácido acetoacetico, el ácido B-hidroxibutirico y la acetona. Los cuerpos
cetónicos, además de ser componentes importantes del metabolismo normal de los animales
superiores, adquieren especial importancia en dos circunstancias principales: la inanición y la diabetes
severa. En ambas condiciones el organismo se ve obligado a subsistir utilizando las grasas. En la
inanición, porque las reservas de carbohidratos se agotan; en la diabetes porque los tejidos, el
muscular, sobre todo, no pueden utilizar los carbohidratos (glucosa), debe subsistir a base de lípidos.
El hígado utiliza una cantidad exagerada de grasa y produce también una cantidad exagerada de
cuerpos cetónicos, superior a la capacidad de oxidarlos que tiene todo el organismo. Como resultado,
se acumulan cantidades variables de ellos, lo cual recibe el nombre de cetosis. [1] Existen límites
normales de cetonas en la orina, para el ácido acético hasta 2 mg/dl. En la práctica se realizó la
identificación de cuerpos cetónicos por medio de pruebas cualitativas de una muestra de orina en
ayunas, donde la persona la noche anterior, consumió una comida alta en grasas (pollo frito, papas
fritas), posterior a esto, la toma de muestra se tomó a las 5:30 am en ayuno para proceder a realizar
las diferentes pruebas cualitativas.
Prueba de Griebel y Weiss

Esta reacción se da por acción de la 2,4-dinitrofenilhidrazina en medio acido, y la reacción es la

O H+ HNN NO2

+ O2N NHNH2
C

NO2
Acetona 2,4-P-nitrofenilhidracina 2,4-P-nitrofenilhidracina de la acetona

Figura 1. Reacción de la acetona con P-nitrofenilhidrazina

Se observó la formación de dos tipos de cristales: puntiagudos con forma larga y alargada (acetona) y
cristales como agujas curveadas (acetaldehído). Algunos cristales de color amarillo-naranja se logran
observar bajo el microscopio (Tabla 1), con lo cual, se comprueba la presencia de acetona y de
acetaldehído en la orina, debido a que presentan las características ya mencionadas.

Prueba de Legal
La prueba es característica en la determinación de acetona y acetoacetato, pero es importante resaltar
que no es específica para estos compuestos, ya que arrojan resultados positivos para otro tipo de
compuestos cetónicos. La reacción consiste en la generación de una coloración purpura por acción del
nitropusiato de sodio. Mediante este método es posible detectar acetoacetato tan poco como 5 mg/dl
en orina. No reacciona con acetona a menos que la glicina este presente o β-hidroxibutírato [2]. Dado
que estos dos compuestos se derivan de acetoacetato, su presencia puede suponer si la prueba de
cetonas es positiva. El resultado obtenido fue negativo, que indica la no presencia de ninguno de los
grupos cetónicos mencionados o que debido a que el acetoacetato se convierte en acetona, este no es
detectado. Además, las condiciones de ayuno no son consideradas extremas, debido a que la noche
anterior la persona consumió alta en grasa.
 O CH3

O CH
-2 -4
N
O N
N C C N O
2NaOH N C C N
+ 2Na+ Fe 4Na+ + H2O
H3C CH3 Fe
N C C C N
N C C C N
Acetona
N
N
Nitroprusiato de sodio
Figura 2. Reacción de acetona con legal
Prueba de Gerhardt color, indica la presencia de ácido diacetico, si
Se basa en la reacción de cloruro férrico con hay color esta se debe a otra sustancia
ácido diacetico que da un color rojo vino. Este (Lippman, 1957)
procedimiento no permite detectar acetona ni
ácido β-hidroxibutirico, además de esto es una Prueba de Lieben
prueba poco sensible ya que solo permite Cuando el yodo y el hidróxido de sodio se usan
detectar niveles de unos 25-50 mg/dl de ácido como reactivos, una reacción positiva
diacetico, teniendo en cuenta lo anteriormente produce yodoformo . El yodoformo (CHI3), es
expresado se puede decir que la prueba fue una sustancia de color amarillo pálido. Debido a
negativa la alta masa molar de los tres átomos de yodo,
es sólido a temperatura ambiente.
Es insoluble en agua y tiene
un olor antiséptico . Un precipitado visible de
este compuesto es de color amarillo[3]. En la
tabla 1 se observa el precipitado de la reacción
de patrón con la solución saturada de yodo,
para la muestra dio un resultado positivo. La
Figura 3. Reacción de Gerhardt reacción se expresa de la siguiente forma:
En esta reacción, otras sustancias también dan
coloración (salicilatos, aminopirina, melanina y
ácido fenilpirúvico). Se puede corroborar,
calentando la muestra final a 15 min, si no hay Figura 3. Reacción de Lieben

Prueba de Arreguine
Esta prueba funciona para acetoacetato, en la cual se forma un compuesto de condensación de
acetoacetato con resorcinol en un medio fuertemente deshidratante. En la tabla 1 se observa una
intensa fluorescencia azul bajo luz UV, indicativo de que la prueba es positiva. Se comprueba la
presencia de este cuerpo cetónico.

Con respecto a la dieta ingerida en alto contenido de grasas, esta se suele definir como dieta
cetogénica, donde la proporción de glúcidos que se ingieren es mucho menor. Esta dieta produce
estado de acidosis orgánica, ya que la fuente principal de energía se ha limitado. A un tiempo de 16
horas de ayuno, es donde se refleja el uso de cuerpos cetónicos para la obtención de energía.[4]

4. CONCLUSIONES
Con los resultados obtenidos mediante las pruebas cualitativas, se puede relacionar la dieta
consumida la última noche (alta en grasa) con la presencia de cuerpos cetónicos en la orina. La dieta
es pobre en carbohidratos, por lo que habrá una disminución del glucógeno hepático y además, se
opta por el uso de grasas de reserva, originándose una sobreproducción de ácidos grasos y de los
cuerpos cetónicos. Esto se refleja en tres de las pruebas realizadas que dieron un resultado positivo,
indicando síntesis de cuerpos cetónicos frente a estas condiciones de dieta y ayuno.
5. REFERENCIAS
[1]. Peña y colaboradores. Bioquímica. Segunda Edición. Editorial Limusa ,S.A.Mexico ,D.F, 2004, Pág 291,292
[2]. Roth HJ, Surborg KH. On the mechanism and specificity of Legal's test, Arch Pharm Ber Dtsch Pharm Ges,
sep 1968; 301(9):686-95.
[3] Universidad de Michigan, Archivos de medicina, cirugia y especialidades, Volumen 27, 1927. Pág 420
[4] Vergés. M, Grasas buenas: cuida tu salud con la nutrición evolutiva, Ed AMAT, 2017, Barcelona. Sección 11.