Universidad de San Carlos de Guatemala Facultad de Agronomía Instituto de Investigaciones Agronómicas

UNIVERSIDAD DE SAN CARLOS DE GUATEMALA
FACULTAD DE AGRONOMÍA
INSTITUTO DE INVESTIGACIONES AGRONÓMICAS
EFECTO DE LA 6-BENCILAMINOPURINA EN LA PROLIFERACIÓN DE

BROTES in vitro DE TRES VARIEDADES DE CAÑA DE AZÚCAR (Saccharum
officinarum L.)
MAK MÍLAN CRUZ SIC.
GUATEMALA, FEBRERO DEL AÑO 2004

FACULTAD DE AGRONOMÍA
INSTITUTO DE INVESTIGACIONES AGRONÓMICAS
EFECTO DE LA 6-BENCILAMINOPURINA EN LA PROLIFERACIÓN DE BROTES

in vitro DE TRES VARIEDADES DE CAÑA DE AZÚCAR (Saccharum officinarum
L.)
TESIS
PRESENTADA A LA HONORABLE JUNTA DIRECTIVA DE LA FACULTAD DE AGRONOMÍA

DE LA UNIVERSIDAD DE SAN CARLOS DE GUATEMALA
POR
MAK MÍLAN CRUZ SIC
En el acto de investidura como
INGENIERO AGRONÓMO
EN
SISTEMAS DE PRODUCCIÓN AGRÍCOLA
EN EL GRADO ACADÉMICO DE
LICENCIADO
GUATEMALA, FEBRERO DEL 2004

i
RECTOR MAGNÍFICO
Dr. M. V. LUIS ALFONSO LEAL MONTERROSO
JUNTA DIRECTIVA DE LA FACULTAD DE AGRONOMÍA
DECANO Dr. Ariel Abderraman Ortiz López

VOCAL PRIMERO Ing. Agr. Alfredo Itzep Manuel
VOCAL SEGUNDO Ing. Agr. Manuel de Jesús Martínez Ovalle
VOCAL TERCERO Ing Agr. Erberto Raúl Alfaro Ortiz
VOCAL CUARTO Br. Luis Antonio Raguay Pírique
VOCAL QUINTO Br. Juan Manuel Corea Ochoa
SECRETARIO Ing. Agr. Pedro Peláez Pérez
ii
Guatemala, febrero del 2004
Honorable Junta Directiva

Honorable Tribunal Examinador
Facultad de Agronomía
Universidad de San Carlos de Guatemala
Distinguidos miembros:
De conformidad con las normas establecidas por la Ley Orgánica de la Universidad de San
Carlos de Guatemala, tengo el honor de someter a vuestra consideración el trabajo de tesis
titulado:
EFECTO DE LA 6-BENCILAMINOPURINA EN LA PROLIFERACIÓN DE BROTES in vitro DE

TRES VARIEDADES DE CAÑA DE AZÚCAR (Saccharum officinarum L.)
Presentado como requisito previo a optar al titulo de Ingeniero Agrónomo en Sistemas de

Producción Agrícola, en el grado académico de Licenciado.
Esperando que la presente investigación llene los requisitos para su aprobación, me

suscribo de ustedes.
Atentamente,
Mak Mílan Cruz Sic

iii
ACTO QUE DEDICO
A:
DIOS Fuente eterna de sabiduría, que me ha dado la vida, la
paciencia necesaria, y las herramientas para que cumpla
otro de mis objetivos.
MIS PADRES Rosalio Cruz Gómez y

Josefina Sic.
Como muestra de agradecimiento, que éste triunfo sea la
recompensa a los múltiples esfuerzos y sacrificios. Gracias
por su presencia.
MIS HERMANOS Rosalio, Cenobia y en especial a Ely

Gracias por el apoyo incondicional a lo largo de la
culminación de mi carrera.
MI ESPOSA Delia Floridalma Xitumul

Por el apoyo incondicional y paciencia, en los momentos
más difíciles de la vida para alcanzar ésta meta.
MIS HIJAS Evelyn Andrea y Alexa Jimena

Regalos divinos, que mi triunfo sea un ejemplo a superar,
que Dios las bendiga.
MIS SOBRINOS Luis, Fernanda, Rosio, Steven, Yesenia y Adolfo.

Con cariño especial.
MI SUEGRA Concepción Melchor

Con aprecio y respeto.
MIS CUÑADOS (AS) Con aprecio, y agradecimiento especial a Rolando Xitumul.
MIS AMIGOS Y William Capriel, Jorge Mendoza, Henry Aj, Victor Suyén, Ana
COMPAÑEROS DE Melgar, Silvia García, Mauricio Rosales, Alfredo Cabrera,
TRABAJO Carlos Bolaños, Julio Peña, Arturo Salas, Gustavo Jacinto,
Alfonso Vásquez, Pedro Ampuria, Miriam de la Roca,
Rolando Aragón, Felipe Esquequé, Elsita Vásquez y en
especial a Esperanza de León.
Como recuerdo de las experiencias compartidas y muestra
de sincera amistad.
iv
TESIS QUE DEDICO
A:
GUATEMALA
ESCUELA NACIONAL URBANA PARA VARONES “RABINAL, BAJA VERAPAZ”.
INSTITUTO “ADOLFO V. HALL DEL NORTE” SAN PEDRO CARCHÁ, A.V.
UNIVERSIDAD DE SAN CARLOS DE GUATEMALA.
FACULTAD DE AGRONOMÍA.
LABORATORIO DE CULTIVO DE TEJIDOS DE LA SUBÁREA DE MANEJO Y

MEJORAMIENTO DE PLANTAS.
CENTRO GUATEMALTECO DE INVESTIGACIÓN Y CAPACITACIÓN DE LA CAÑA

DE AZÚCAR, “CENGICAÑA”.
v
AGRADECIMIENTOS
Quiero expresar mis agradecimientos a las personas que colaboraron de alguna y/o otra
manera, en el desarrollo de la presente investigación:
A:
MIS ASESORES
Ing. Agr. Msc. Domingo amador Pérez

Dr. Gregorio Soto (Q.E.P.D.)
Por su incondicional aporte para la realización y orientación de la presente

investigación.
ING. AGR. MARCO VINICIO FERNÁNDEZ
Por el apoyo y paciencia en la realización del Ejercicio Profesional Supervisado de

Agronomía (E.P.S.A.)
ING. AGR. ERIC ORTEGA
Por su acertada asesoría y consejos en el área estadística.
ING. AGR. FRANCISCO COSME
Por su amistad brindada durante la culminación de mi carrera.
LABORATORIO DE BIOTECNOLOGÍA VEGETAL DEL CENTRO GUATEMALTECO DE

INVESTIGACIÓN Y CAPACITACIÓN DE LA CAÑA DE AZÚCAR, “CENGICAÑA”
Por el apoyo brindado en la ejecución del E.P.S.A. y de la presente investigación.
EL PERSONAL TÉCNICO Y ADMINISTRATIVO DE CENGICAÑA
Fernando Hernández, Estuardo Catalán, Rony G., Venancio R., Ing. Agr. Werner
Ovalle y al Ing. Ovidio Pérez.
Por la amistad brindada y apoyo en la fase de campo y laboratorio.

vi
CONTENIDO
ÍNDICE PÁGINA
ÍNDICE DE CUADROS.............................................................................................................. viii

ÍNDICE DE FIGURAS................................................................................................................. ix
APÉNDICE................................................................................................................................. x
GLOSARIO DE ABREVIATURAS.............................................................................................. xi
RESUMEN.................................................................................................................................. xiii
1. INTRODUCCIÓN............................................................................................................. 01
2. DEFINICIÓN DEL PROBLEMA....................................................................................... 03
3. MARCO TEÓRICO.......................................................................................................... 05
3.1 Marco Conceptual............................................................................................................ 05
3.1.1 El cultivo de la caña de azúcar.............................................................................. 05
3.1.1.1 Clasificación taxonómica del Cultivo.......................................................... 06
3.1.1.2 Descripción general del cultivo................................................................... 06
A. Morfología................................................................................................... 06
3.1.2 Micropropagación.................................................................................................. 09
3.1.2.1 Aplicaciones del Cultivo de Tejidos............................................................ 09
3.1.2.2 Fases de la Micropropagación................................................................... 10
3.1.2.3 Factores que influyen en la Micropropagación........................................... 11
3.1.2.4 Oxidación.................................................................................................... 14
A. Antioxidantes.............................................................................................. 15
3.1.2.5 Desinfestación de materiales vegetales..................................................... 17
3.1.2.6 Condiciones de laboratorio......................................................................... 18
3.1.3 Reguladores de crecimiento.................................................................................. 19
3.1.3.1 Auxina......................................................................................................... 20
A. Función de las auxinas en la formación de las raíces................................ 21
B. Utilización de auxinas para estimular el Enraizamiento............................. 21
3.1.3.2 Citocinina.................................................................................................... 22
A. Concepto de Citocinina............................................................................... 22
B. Citocininas análogas sintéticas................................................................... 23
a. Bencilaminopurina...................................................................................... 24
C. Lugares de síntesis de las citocininas....................................................... 24
D. Mecanismo de acción................................................................................. 25
E. Efectos fisiológicos de las citocininas......................................................... 25
F. Interacción auxina-citocinina...................................................................... 26
3.1.4 Cultivo de tejidos en caña de azúcar................................................................ 27
3.1.4.1 Micropropagación....................................................................................... 28
3.1.4.2 Medios de cultivo en caña de azúcar......................................................... 29
3.1.4.3 Técnicas de cultivo de tejidos en caña de azúcar...................................... 29
3.2 Marco Referencial............................................................................................................ 31
3.2.1 Ubicación del área en estudio............................................................................... 31
3.2.2 Características generales de las variedades de caña de azúcar utilizadas
Para el ensayo....................................................................................................... 33
3.2.2.1 Variedad CP 722086.................................................................................. 33
3.2.2.2 Variedad SP 792233.................................................................................. 33
3.2.2.3 Variedad PR 872080.................................................................................. 34
4. OBJETIVOS.................................................................................................................... 35
vii
4.1 Objetivo General.............................................................................................................. 35

4.2 Objetivos Específicos....................................................................................................... 35
5. HIPÓTESIS...................................................................................................................... 36
6. METODOLOGÍA.............................................................................................................. 37
6.1 Localización del experimento.......................................................................................... 37
6.2 Material vegetal, equipo, cristalería, reactivos, insumos y medio de cultivo usados
para la realización del estudio......................................................................................... 37
6.2.1 Material vegetal experimental................................................................................ 37
6.2.2 Preparación de medios de cultivo......................................................................... 37
6.3 Fase experimental........................................................................................................... 41
6.3.1 FASE I.................................................................................................................. 41
6.3.2 FASE II................................................................................................................. 43
6.4 Diseño experimental....................................................................................................... 44
6.5 Modelo estadístico.......................................................................................................... 44
6.6 Descripción de los tratamientos...................................................................................... 45
6.7 Unidad experimental....................................................................................................... 45
6.8 Variables respuesta........................................................................................................ 46
6.8.1 Número de brotes................................................................................................. 46
6.8.2 Longitud de brotes................................................................................................ 46
6.8.3 Número de por brotes........................................................................................... 46
6.9 Análisis de la información................................................................................................ 46
7. DISCUSIÓN DE RESULTADOS...................................................................................... 48
7.1 FASE I, INICIAL: PRUEBA DE ANTIOXIDANTES.......................................................... 48
7.2 FASE II, DE MULTIPLICACIÓN: EVALUACIÓN DE TRATAMIENTOS DE BAP............ 49
7.2.1 Evaluación de tratamientos de BAP, a los 15 días después de la siembra en
tres variedades de caña de azúcar....................................................................... 50
7.2.1.1 Análisis de Número de Brotes a los 15 días después de la siembra en
tres variedades de caña de azúcar............................................................. 50
7.2.1.2 Variable longitud de brotes a los 15 días después de la siembra en tres
variedades de caña de azúcar.................................................................... 50
7.2.1.3 Variable número de hojas, a los 15 días después de la siembra, en tres
variedades de caña de azúcar................................................................... 56
7.2.2 Evaluación de tratamientos de BAP, a los 30 días después de la siembra en
tres variedades de caña de azúcar....................................................................... 60
7.2.2.1 Variable Número de Brotes, a los 30 días después de la siembra en
7.2.2.2 Variable longitud de brotes, a los 30 días después de la siembra, en
7.2.2.3 Variable número de hojas, a los 30 días después de la siembra en tres
variedades de caña de azúcar................................................................... 69
7.2.3 Análisis de variables en función del tiempo de tres variedades de caña de
azúcar.................................................................................................................. 73
7.2.3.1 Variable número de brotes a los 15 y 30 días de realizada la siembra..... 73
7.2.3.2 Variable longitud de brotes a los 15 y 30 días de realizada la siembra.... 75
7.2.3.3 Variable número de hojas a los 15 y 30 días de realizada la siembra..... 78
8. CONCLUSIONES........................................................................................................... 81
9. RECOMENDACIONES................................................................................................... 83
10. BIBLIOGRAFÍA............................................................................................................... 84
11. APÉNDICE...................................................................................................................... 88
viii
ÍNDICE DE CUADROS
Cuadro 1. Agrupación de componentes, cantidades y volúmenes para la preparación

de soluciones concentradas................................................................................. 38
Cuadro 2. Volumen de soluciones concentradas para la preparación de un litro de medio

de cultivo, para el establecimiento de los explantes in vitro................................. 40
Cuadro 3. Reguladores del crecimiento y niveles de BAP aplicados al medio de cultivo en

las tres variedades de caña de azúcar................................................................. 41
Cuadro 4. Factores y niveles que se evaluaron en el estudio.............................................. 45
Cuadro 5. Descripción de tratamientos................................................................................. 45
Cuadro 6. Tipo de transformación empleada en las variables de estudio en las tres

variedades de caña de azúcar, a los 15 y 30 días después de la siembra.......... 47
Cuadro 7. Análisis de varianza para la variable número de brotes, a los 15 días después
de la siembra {(con datos transformados, Y’ = √ (Y+1), CENGICAÑA 2003..... 50
Cuadro 8. Resumen de la prueba de Tukey (α=0.05), según el factor variedad, para la

variable número de brotes.................................................................................... 51
Cuadro 9. Resumen de la prueba de Tukey (α=0.05), según el factor nivel de BAP, para
la variable número de brotes................................................................................ 52
Cuadro 10. Análisis de varianza para la variable longitud de brotes, a los 15 días después
de la siembra {(con datos transformados, Y’ = Log (Y+1)}, CENGICAÑA 2003.. 53
Cuadro 11. Resumen de la prueba de Tukey (α=0.05), según la interacción variedad x BAP
para la variable longitud de brotes....................................................................... 54
Cuadro 12. Análisis de varianza para la variable número de hojas, a los 15 días después
de la siembra {(con datos transformados, Y’ = √ (Y+1)}, CENGICAÑA 2003..... 57
para la variable número de hojas......................................................................... 58
ix
de la siembra {(con datos transformados, Y’ = √ (Y+1)}, CENGICAÑA 2003... 61
Cuadro 15. Resumen de la prueba de Tukey (α=0.05), según la interacción variedad x

BAP, para la variable número de brotes, a los 30 días después de la siembra.... 62
de la siembra {(con datos transformados, Y’ = Log (Y+1)}, CENGICAÑA 2003.. 65
Cuadro 17. Resumen de la variable longitud de brotes según la interacción variedad x

BAP, a los 30 días después de la siembra........................................................... 67
Cuadro 18. Análisis de varianza para la variable número de hojas, a los 30 días después
de la siembra {(con datos transformados, Y’ = √ (Y+1)}, CENGICAÑA 2003..... 69
Cuadro 19. Resumen de la prueba de Tukey (α=0.05), según la interacción variedad x

BAP para la variable número de hojas, a los 30 días después de la siembra...... 71
ÍNDICE DE FIGURAS
Figura 1. Estructura molecular de la 6-Bencilaminopurina................................................... 24
Figura 2. Relativa concentración de auxinas-citocininas y los requerimientos típicos

para el crecimiento y morfogénesis....................................................................... 26
Figura 3. Estratificación de la zona cañera y localización del área de estudio..................... 32
Figura 4. Efecto de los tratamientos de BAP en el número de brotes, en la variedad

SP 792233 y característica de tamaño de sus brotes, a los 15 días después
de la siembra. CENGICAÑA, 2003. (1 = 0.00, 2 = 0.15, 3 = 0.30, 4 = 0.45,
5 = 0.60 y 6 = 0.75 mg/l de BAP).......................................................................... 51
Figura 5. Efecto de los tratamientos de BAP en la longitud de los brotes, en la variedad

PR 872080, a los 15 días después de la siembra. CENGICAÑA, 2003.
(1 = 0.00, 2 = 0.15, 3 = 0.30, 4 = 0.45, 5 = 0.60 y 6 = 0.75 mg/l de BAP)............. 55
x
Figura 6. Efecto de los tratamientos de BAP en la variedad CP 722086, se observa la

brotación, la longitud de los brotes y las hojas diferenciadas, a los 30 días
después de la siembra, CENGICAÑA, 2003. (1= 0.00 mg/l, 2 = 0.15 mg/l,
3 = 0.30 mg/l, 4 = 0.45 mg/l, 5 = 0.60 mg/l y 6 = 0.75 mg/l de BAP)..................... 64
Figura 7. Promedio de brotes a los 15 y 30 días después de la siembra, en tres

variedades de caña de azúcar, CENGICAÑA, 2003.......................................... 73
Figura 8. Efecto de la bencilaminopurina en la inducción de brotes en tres variedades

de caña de azúcar a los 15 y 30 días después de la siembra, CENGICAÑA,
2003....................................................................................................................... 75
Figura 9. Longitud brotes de tres variedades de caña de azúcar CP 722086, SP 792233

y PR 872080 a los 15 y 30 días después de la siembra, CENGICAÑA, 2003...... 76
Figura 10. Efecto de la bencilaminopurina en la longitud de brotes en tres variedades

de caña de azúcar a los 15 y 30 días después de la siembra, CENGICAÑA,
2003....................................................................................................................... 77
Figura 11. Número de hojas por brotes de tres variedades de caña de azúcar CP 722086,
SP 792233 y PR 872080 a los 15 y 30 días después de la siembra,
CENGICAÑA, 2003............................................................................................... 79
Figura 12. Efecto de la bencilaminopurina en el número de hojas por brotes en tres

variedades de caña de azúcar a los 15 y 30 días después de la siembra,
CENGICAÑA, 2003............................................................................................... 80
APÉNDICE
Cuadro. 20. A Equipo y cristalería usados para la realización del estudio........................ 88
Cuadro. 21. A Reactivos e insumos utilizados para la realización del cultivo in vitro
de tres variedades de caña de azúcar....................................................... 88
xi
GLOSARIO DE ABREVIATURAS
ABA Ácido abcísico

ADN Ácido desoxirribonucleico
AG3 Ácido giberélico
AIA Ácido indolacético
AIB Ácido indolbutírico
ANA Ácido naftalenacético
ATP Adenosin trifosfato
ARN Ácido ribonucleico
ARNt Ácido ribonucleico de transferencia
BAP Bencilaminopurina
CaCl2 · 2H20 Dicloruro de calcio dihidratado
CENGICAÑA Centro Guatemalteco de Investigación y Capacitación de
la Caña de Azúcar
ºC Grados centígrados
cc Centímetros cúbicos
cm2 Centímetros cuadrados
CoCl2 · 6H2O Dicloruro de cobalto hexahidratado
CP Canal Point
C.V. Coeficiente de variación
CuSO4 · 5H2O Sulfato de cobre pentahidratado
2,4-D Ácido 2,4 diclorofenoxiacético
DCA Diseño completamente al azar
DDT Citiotreitol
EDTA Ácido etilendinitrilo tetracético sal disodio, dihydratada
EtOH Etanol
ºF Grados fahrenheit
FeSO4 · 7H2O Sulfato de hierro heptahidratado
g/l Gramos por litro
Ha Hectárea
H3BO3 Ácido bórico
HCl Ácido clorhídrico
IGM Instituto Geográfico Militar
KH2PO4 Dihidrógeno fosfato de potasio
KI Yoduro de potasio
KNO3 Nitrato de potasio
KOH Hidróxido de potasio
Lx Lux
MARN Ácido ribonucleico mensajero
MgSO4 · 7H2O Sulfato de magnesio heptahidratado
Mg Miligramos
mg/l Miligramos por litro
Ml Mililitros
MM Micromolar
MnSO4 · 4H20 Sulfato de maganeso tetrahidratado
MS Medio de cultivo de Murashige y Skoog (1962)
Msnm Metros sobre el nivel del mar
xii
NaMoO4 · 2H2O Molibdato de sodio dihidratado

NaOH Hidróxido de sodio
NH4NO3 Nitrato de amonio
PCNB Pentacloro nitrobenceno
PH Potencial de hidrógeno
Ppm Partes por millón
PR Puerto Rico
PVP Polivinilpirrolidona
SP Saul Pablo
Ton/ha Tonelada por hectáreas
ug/ml Microgramo por mililitro
Ul Microlitros
v/v Volumen sobre volumen
W/m2 Watts por metro cuadrado
ZnSO4 · 7H2O Sulfato de zinc heptahidratado
% Por ciento
xiii
EFECTO DE LA 6-BENCILAMINOPURINA EN LA PROLIFERACIÓN DE BROTES in vitro DE

TRES VARIEDADES DE CAÑA DE AZÚCAR (Saccharum officinarum L.)
6-BENCILAMINOPURINE EFFECT ON BUDS in vitro PROLIFERATION OF THREE VARIETIES

OF SUGAR CANE (Saccharum officinarum L.)
RESUMEN
Con un área de 190,000 y potencial de 342,000 hectáreas, el cultivo de la caña de azúcar en

Guatemala aumenta cada vez más la expansión y la introducción de nuevas variedades con
carácter promisorio. En su proceso de industrialización genera 60,000 empleos directos y 250,000
de forma indirecta, en la zafra del 99/2000 representó el 4% del producto interno bruto y más del
20% de la producción agrícola. Éste incremento de áreas de cultivo y renovación de las ya
establecidas requiere el uso de tecnologías definidas.
Para el presente año, en el laboratorio de Biotecnología Vegetal del Centro Guatemalteco de

Investigación y Capacitación de la Caña de Azúcar (CENGICAÑA), se realizan estudios de
propagación de materiales promisorios que luego se distribuyen a las empresas productoras de
caña, las cuales utilizan el material vegetal como fuente de semilla básica para la siembra o
renovación de áreas de cultivo. Dentro del laboratorio se han identificado variedades de
importancia como la CP 722086, SP 792233 y PR 872080 que presentan la dificultad de baja
brotación al cultivo in vitro, el inconveniente es en la disminución en cantidad de plantas y en el
aumento del tiempo para la entrega a los ingenios.
En el presente trabajo se evaluaron tres variedades de caña de azúcar CP 722086, SP 792233 y

PR 872080, las cuales se encuentran en el banco de germoplasma vegetal del Centro
Guatemalteco de Investigación y Capacitación de la Caña de Azúcar, dicho germoplasma sirvió
como fuente de material para la siembra en el laboratorio.
Se utilizó el medio de cultivo descrito por Murashige y Skoog (1962), como agente inductor la 6-
bencilaminopurina, es un regulador del crecimiento catalogado dentro del grupo de las citocininas,
considerada en varios estudios por ser un compuesto muy activo en la proliferación de brotes en
diversas especies vegetales. Se evaluó con 5 niveles a 0.15, 0.30, 0.45, 0.60 y 0.75 mg/l más un
testigo éste sin la aplicación de BAP. Cada tratamiento dentro del medio de cultivo fue
suplementado con 0.01 mg/l de ácido indolacético como auxina, 0.1 mg/l de cinetina y 150 mg/l de
xiv
ácido cítrico como antioxidante. El tipo de explante utilizado consistió en el ápice meristemático de
cada una de las variedades de caña de azúcar.
Para facilidades de manejo, el experimento se dividió en dos fases: Prueba de antioxidantes, en la

cual se evaluaron tres antioxidantes la l-cisteina, polivinylpirrolidona y el ácido cítrico en una sola
concentración 10 mg/l, 0.05 % y 150 mg/l. Siendo éste último el más adecuado el cual redujo
considerablemente el efecto de la oxidación en las variedades de caña de azúcar. La SP 792233
presentó la mayor oxidación, como de mediano efecto oxidativo la CP 722086 y la PR 872080 fue
la que presentó menor oxidación. En la Fase II, de multiplicación o evaluación de tratamientos de
BAP, se evaluó el efecto de la 6-bencilaminopurina en las tres variedades de caña de azúcar a los
15 y 30 días después de la siembra.
Se utilizó un diseño completamente al azar, bifactorial 3X6 en arreglo combinatorio con 10

repeticiones. Las variables de estudio consistieron en el número de brotes, longitud de brotes y
número de hojas. La información obtenida fue analizada por medio de SAS (Statistical Análisis
System versión 6.12.01), se hizo los análisis de varianza (ANDEVA) y prueba de separación de
medias Tukey al 5% para cada variable. Para el número de brotes y de hojas se hizo necesario la
trasformación de los datos con Y’ = √ (Y+1), y para la longitud de brotes se utilizó Y’ = Log (Y+1).
Se observó que la variedad PR 872080, presentó el mayor número de brotes a los 15 y 30 días
después de la siembra con 10.04 y 17.92 brotes por explante. Fue la que presentó la mayor
longitud de brotes, pero en la producción de hojas se determinó intermedia con 4.06 y 4.50
hojas/brote. La variedad SP 792233 con 5.49 y 13.93 brotes/explante fue intermedia, a la vez fue
la que presentó un tamaño de brote de 1.37 y 1.65 cm siendo el más pequeño de todo el estudio al
igual que en el número de hojas con 3.98 a 4.46. Con una menor respuesta en el número de
brotes la variedad CP 722086 con 5.83 y 9.79 pero intermedia en la longitud con 1.56 y 2.17
cm/brote, y con el mayor número de hojas diferenciadas del resto de variedades con 4.19 a 4.78
hojas/brote.
El nivel 0.75 mg/l de BAP, presentó el mayor número de brotes/explante a los 15 y 30 días con
8.95 y 20.43, pero a la vez con la aplicación de BAP en el medio de cultivo existió una disminución
en la longitud y en la diferenciación de hojas. El testigo (0.00 mg/l de BAP), fue constante 4.55 y
4.60 brotes/explante y con la mayor longitud en las tres variedades de caña.
1
1. INTRODUCCIÓN
El cultivo de la caña de azúcar en Guatemala, actualmente ocupa un área de 190,000

hectáreas (zafra 1999/2000) de un área potencial de 342,000 hectáreas (26). Por lo consiguiente,
en dicha región cañera en el año de 1,979 se sembraron 40 variedades, en la zafra 1992-93, 66
variedades y en la zafra 1995-96 en un área de 83,958 hectáreas se cultivaron 27 variedades (26).
La agroindustria de la caña se ha caracterizado por incrementar el área de cultivo. Razón por la
cual su industrialización provee alrededor de 60,000 empleos directos y aproximadamente 250,000
de forma indirecta, además en la zafra 1999/2000 representó el 4% del producto interno bruto
(PIB) y más del 20% de la producción agrícola, con un 23% del total de las divisas generadas por
los productos tradicionales, según datos del banco de Guatemala de enero a octubre del 2,001 el
azúcar aportó US$ 236.60 millones contribuyendo positivamente a la economía del país.
El incremento de áreas de cultivo y renovación de las ya establecidas con lleva el uso de

metodologías y técnicas definidas, por eso y a través de la riqueza de germoplasma de la caña de
azúcar, se ha logrado la selección de variedades que satisfagan las necesidades agrícolas e
industriales en un rango geográfico determinado y en diversas condiciones ambientales. La
rentabilidad económica que presenten las variedades depende del grado de resistencia al ataque
de microorganismos patógenos, su adaptabilidad a condiciones adversas, a sus altos rendimientos
en la producción de azúcar y características agronómicas deseables de cultivo.
Se contempló a las variedades CP 722086, SP 792233 y PR 872080 dentro de un

programa de propagación masiva de plántulas y para ello se recurrió al uso de tecnologías
modernas. El Cultivo de Tejidos Vegetales es una alternativa a esta inquietud, debido a que por
medio de esta técnica se puede obtener una propagación acelerada, a gran escala, en espacio y
tiempo reducidos para obtener plántulas en cualquier época del año, intercambio de germoplasma
de país a país, como también lo relevante la obtención de plantas libres de plagas y agentes
infecciosos, garantizando de tal manera la calidad y sanidad de los materiales de caña de azúcar.
La técnica permite la manipulación de plántulas con la finalidad de control, mejoramiento y
propagación en corto tiempo de las variedades para obtener semillas que garanticen una
adecuada producción del cultivo de la caña de azúcar.
2
Previo a lo anterior, se hizo necesario evaluar una metodología que permitió la propagación
adecuada de las tres variedades de caña de azúcar con el uso de dicha técnica de cultivo de
tejidos. En el presente trabajo, se evaluó el efecto que produce la 6-Bencilaminopurina en la
proliferación de brotes, en cinco niveles más un testigo en la variedad CP 722086, SP 792233 y
PR 872080, para lo cual se empleó un diseño estadístico completamente al azar, con seis
tratamientos y 10 repeticiones analizándose cada variedad por separado a los 15 y 30 días
después de la siembra.
Este estudio se realizó en las instalaciones del laboratorio de Cultivo de Tejidos del Centro
Guatemalteco de Investigación y Capacitación de la Caña de Azúcar (CENGICAÑA), ubicado en la
finca Camantulul, Santa Lucia Cotzumalguapa.
3
2. DEFINICIÓN DEL PROBLEMA
En la planicie costera del país, la agroindustria azucarera guatemalteca se ha desarrollado,

en la cual se produce el 99.5% del total de caña del país, incrementándose áreas nuevas de
cultivo y renovando otras ya establecidas con variedades que fueron seleccionadas en base a
características agronómicas deseables, con alto rendimiento de azúcar, resistencia a plagas y
agentes infecciosos y de importancia económica, entre estas variedades sobresalen la CP
722086, SP 792233 y PR 872080. La propagación de la caña de azúcar se realiza en forma
vegetativa por medio de esquejes, en paquetes de 110 yemas para 10 metros lineales de la cual
se obtiene una tasa de multiplicación de 1:10. Dicha tasa es baja y para obtener semilla se
requiere de un tiempo considerable. Otra practica de propagación es el uso de plántulas
provenientes de yemas extraídas, y como lo indica Viveros y Cassalett (1994) (46), esta técnica
posee una tasa de multiplicación de 1:140, haciéndola efectiva para establecer semilleros de caña
como una opción del método convencional, pero las tasas de multiplicación van a depender de la
variedad y el distanciamiento de siembra.
Estos dos tipos de propagación asexual de la caña de azúcar presentan el inconveniente

de diseminar agentes infecciosos y plagas a las nuevas plantaciones lo que repercute en elevar
los costos de producción para su control (28), otra de las limitantes es la baja tasa de
multiplicación para obtener semilla lo cual hace que el proceso de siembra sea lento.
El Centro Guatemalteco de Investigación y Capacitación de la Caña de Azúcar

(CENGICAÑA), realiza estudios para encontrar alternativas de solución a las limitantes de la
propagación tradicional. Se realizan evaluaciones a través del uso de la Biotecnología Vegetal,
como es la técnica del Cultivo de Tejidos con la finalidad de obtener plántulas de calidad
fitosanitarias, con una multiplicación masiva en menor tiempo y con características agronómicas
deseables. En estudios de micropropagación se ha establecido que las variedades CP 722086,
SP 792233 y PR 872080 presentan diferentes grados de dificultad y recalcitrantes en cuanto su
adaptación y multiplicación, la limitante de mayor envergadura es la baja proliferación de brotes
(macollamiento), lo cual repercute en la tasa de multiplicación de plántulas, y que por tal razón las
cantidades y tiempo de entrega de las mismas afecta a los diferentes ingenios azucareros que las
utilizan como semilleros básicos para siembra.
4
En micropropagación, se ha demostrado que el uso de reguladores del crecimiento en

particular las citocininas, inducen la proliferación de brotes, por tal razón se planteó la presente
investigación en la cual se evaluó el efecto de la Bencilaminopurina para determinar la inducción a
la mayor proliferación de brotes y así contribuir a una optimización de semillas de alta calidad y
libres de plagas y agentes infecciosos en las variedades CP 722086, SP 792233 y PR 872080.
5
3. MARCO TEÓRICO
3.1 Marco conceptual
3.1.1 El cultivo de la caña de azúcar
El ciclo de cultivo de la Caña de Azúcar usualmente comprende un período de 12 a 14

años; lo que presenta un largo período de tiempo antes que una nueva variedad pueda ser
comercialmente sembrada. La agroindustria del azúcar podría, en el futuro, afrontar serios
problemas de reducción en el rendimiento que provoca el deterioro de las variedades ya
existentes.
Este cultivo es propagado de manera general en forma vegetativa. La edad óptima de

multiplicación de semilla-estaca en este cultivo está alrededor de 8-10 meses de edad, pues en
este período se obtiene la mejor calidad de semilla para siembra, ya que los tallos maduros y
viejos son inapropiados por lo inactivo de sus yemas (25).
De acuerdo con Orozco, et al. (1995) (25), en Guatemala, la caña de azúcar se propaga
tradicionalmente por medio de esquejes, en paquetes de 110 yemas para 10 metros lineales; con
una tasa de multiplicación de 1:10. Actualmente está en práctica el uso de plántulas provenientes
de yemas extraídas, que de acuerdo con Viveros y Cassalett (1994) (46), reportan una proporción
de 1:140 como tasa de multiplicación. Esta tasa es baja si se pretende obtener suficiente semilla
de variedades promisorias para establecer pruebas de molienda (14). La multiplicación por el
método tradicional es relativamente bajo, además presenta riesgos de incremento de
enfermedades trasmitidas por medios mecánicos. Otro aspecto son las enfermedades
sistemáticas que están latentes frecuentemente en el material vegetal, por lo que al transportar
semillas-estacas infectadas, de un país a otro, pueden éstas ser llevadas a diferentes partes del
mundo, como lo es el intercambio de germoplasma vegetal.
Se estima que alrededor de 30,000-40,000 yemas vegetativas “estacas” de una

determinada variedad son necesarias para plantar una hectárea con el fin de realizar pruebas de
una nueva variedad y con la ayuda de la técnica de Cultivo de Tejidos estos problemas pueden ser
resueltos. De acuerdo con Barva, et. al. (3), en nueve meses y medio, es posible producir
suficiente material vegetal proveniente de un meristemo, como para plantar una hectárea, esto
6
usando propagación masiva por cultivo de tejidos. Comparado con los métodos convencionales,
donde si la semilla estaca posee tres a cuatro yemas y cada yema produce un tallo con
aproximadamente nueve yemas cada uno de estos producen aproximadamente 32 yemas a los
nueve meses.
Para desarrollar un sistema de micropropagación asexual en caña de azúcar, se deben

establecer los requerimientos nutricionales, hormonales además entenderse la producción de
fenoles de cada una de las variedades a micropropagar (3).
3.1.1.1 Clasificación taxonómica del Cultivo
Reino: Plantae
Subreino: Embryobionta
División: Magnoliophyta
Clase: Liliopsidae
Subclase: Commelinidae
Orden: Cyperales
Familia: Poaceae
Subfamilia: Chloridoidae
Género: Saccharum
Especie: S. officinarum (10).
3.1.1.2 Descripción general del cultivo
La distribución del cultivo de la caña de azúcar se encuentra generalmente en su mayoría en

las regiones tropicales del mundo.
A. Morfología
Orozco, et al. (25), menciona que Blackburn (1985), cita a Barber (1918) y Jeswiet (1925),
como los pioneros en la morfología de la caña de azúcar, luego en 1939, Artshcwager propuso el
primer descriptor botánico que en 1948, fue mejorado tomando encuenta las características
vegetativas de formas silvestres de Saccharum. Finalmente Artshcwager y Brandes en 1958, lo
completaron con estudios acerca del origen características y descripciones de clones
representativos de Saccharum officinarum.
7
a. El tallo
El tallo también conocido como una caña o culmo, está formado por los entrenudos que se
encuentran separados por los nudos. La expresión de las características del tallo depende de los
factores genéticos ambientales y la interacción de ambos. La capacidad de macollamiento y el
hábito de crecimiento del tallo dependen principalmente de factores genéticos (25).
i. Entrenudo
El diámetro, color, forma y longitud del entrenudo son características varietales, que
también pueden ser influenciados particularmente por la luz y disponibilidad de nitrógeno
(Purseglove, 1972) (33). El color del entrenudo el cual varia en su expresión y penetrancia;
genéticamente es debido a la presencia en antocianinas rojas y azules en células epidermales y
clorofila verde en tejidos más profundos. Cuando ambos están ausentes el color es amarillo. Este
carácter también puede ser modificado por efectos de la luz. Según Amaya, et. al. (1995) (2), la
longitud del entrenudo es influenciada en gran medida por las condiciones edafoclimáticas y por el
manejo agronómico. Blackburn (1985), citado por Purseglove, 1972 (33), indica que la longitud y
diámetro del entrenudo son afectados principalmente por los factores nutricionales, temperatura y
disponibilidad de agua. Por esta razón el tallo podría mostrar entrenudos cortos y delgados en el
tercio medio reflejando crecimiento retardado durante una época seca.
ii. Nudo
El nudo es la base de la vaina y lámina foliar en el cual se desarrollan además las yemas y
hojas, esta constituido por él anillo de crecimiento la banda de raíces, la cicatriz foliar, el nudo en
sí, la yema y el anillo ceroso. La banda o anillo ceroso es una capa que se observa en la parte
inferior del nudo sobre el entrenudo; su intensidad es un carácter varietal (33).
De las partes del tallo, a la yema se le asigna la mayor importancia por ser el origen de
nuevas plantas. Las partes más importantes de las yemas son las alas que se localizan a los lados
o en la parte superior, el poro germinativo el ápice en la parte superior el cual es una prolongación
de la estructura de la yema. La parte visible de la yema es una escama que en algunos clones
esta cubierta totalmente de pelos en otros solamente en las alas y pocas son libre de pelos.
Según Orozco, et al. (25), Jeswiet (1916), citado por Moore (1987), con base en esta
8
característica identifica 32 grupos de vellosidad localizados en la parte anterior y posterior de la

yema, los cuales son importantes en la descripción botánica.
La presencia ocasional de más de una yema en el nudo se reporta como una anormalidad
fisiológica. Las características como forma, tamaño, color y vellosidad de la yema pueden no diferir
dentro de una misma variedad. Se describen 8 diferentes modalidades en la forma de la yema las
cuales fueron agrupadas por Skinner (1972), en 3 formas: redonda, ovalada y puntuda. De
acuerdo con Artschwager y Brandes (1958), citado por Orozco, et al. (25), las formas ovaladas son
las más comunes, la localización de la yema y el desarrollo alcanzado por el ápice a nivel del anillo
de crecimiento es también un carácter clonal.
b. La hoja
Cada hoja consiste de dos partes: lámina foliar y vaina.
i. Lámina foliar
Las hojas están adheridas al tallo a través de la base de los nudos, alternamente en forma
dística al tallo, se reporta que el tamaño y forma de crecimiento de las hojas en la planta varían
considerablemente. La longitud y el ancho de lámina foliar dependen de las variedades; por lo que
se sugiere el ancho de la lámina foliar o la tasa del ancho y largo como un carácter más estable.
Por otro lado el crecimiento de las hojas esta determinado por el tamaño de la hoja en sí y la
dureza de la nervadura central. El color de las hojas es un carácter clonal que puede variar entre
verde claro a oscuro y es menos frecuente encontrar variedades con colores púrpura o verde
púrpura (25).
ii. Cuello
De acuerdo con Artschwager (1951), citado por Orozco., et al. (25), el cuello es la unión de
la lámina foliar y la vaina en sus extremos, y se encarga del movimiento de la lámina foliar. La
superficie exterior esta formada por dos áreas generalmente triangulares que difieren de la lámina
foliar en el color y estructura interna. Como regla la forma del cuello es un carácter clonal, aunque
pueden ocurrir variaciones en un mismo tallo y entre los dos cuellos de una misma hoja. Las
formas reconocidas del cuello son rectangulares deltoide y ligular.
9
iii. Vaina
La pubescencia o afate, generalmente mayor en la vaina, de la hoja que en la lámina foliar
al nivel de la lígula, es un carácter efectivo en la diferenciación clonal. La presencia de afate sobre
la superficie de la vaina en cantidad y longitud puede diferir conforme a la variedad. La lámina
foliar envejece juntamente con la vaina, como característica varietal estos pueden o no adherirse
al tallo, también se reporta que la intensidad con que se adhieren las vainas al tallo difiere con las
variedades (25).
3.1.2 Micropropagación
La aplicación de las técnicas de cultivo de tejidos a la regeneración y propagación comercial

de las plantas enteras, es un desarrollo más reciente que se ha convertido en una alternativa
importante de los métodos convencionales de propagación, en una amplia gama de especies de
plantas (16). Hartmann y Kester en su libro sobre Propagación de Plantas, parecen haber ganado
una amplia aceptación como término general para designar varias de las técnicas utilizadas en la
multiplicación in vitro.
Cuando se considera que la mayoría de las plantas que se propagan mediante el cultivo
aséptico, se originan generalmente en pequeños esquejes, se puede apreciar rápidamente que no
hay nada fundamentalmente nuevo acerca de la multiplicación de las plantas por medio del cultivo
de tejidos (16). La micropropagación, originalmente se definió como “Cualquier procedimiento
aséptico que comprenda la manipulación, en las plantas, órganos, tejidos o células que produzcan
poblaciones de plántulas y que permitan el desvío tanto del proceso sexual normal como de la
propagación vegetativa no aséptica que se practica convencionalmente (16).
3.1.2.1 Aplicaciones del Cultivo de Tejidos
Las aplicaciones del cultivo de tejidos son numerosas y diferentes. Las posibilidades en
agricultura podrían resumirse en los siguientes aspectos: Propagación de plantas, obtención de
plantas libres de patógenos, mejoramiento genético de los cultivos y conservación e intercambio
de germoplasma (24).
Se hace necesario recalcar que, para la aplicación en la agricultura, cualquier sistema de

cultivo in vitro debe de lograr como producto final la regeneración de plantas enteras.
10
3.1.2.2 Fases de la Micropropagación
Existen tres pasos importantes, que deben tomarse en cuenta en la micropropagación,

según lo propuesto por Murashige en 1974 (24).
A. Establecimiento o asepsia del Cultivo
En esta etapa es cuando se inoculan los explantes al medio de cultivo artificial, los cuales
pueden provocar la proliferación de microorganismos en donde pueden crecer y desarrollarse,
compitiendo con el cultivo, y a la vez destruyendo al explante, es por eso que es necesario que
todos los explantes deben estar debidamente limpios y desinfectados.
B. Multiplicación
En ésta etapa sucede la formación de nuevas células por división, o por aumento en
tamaño, está influenciada por las condiciones in vitro y la ganancia en peso seco da como
resultado la diferenciación de novo. También existe la capacidad del cultivo y de los medios
inductores para que puedan ser divididos y transferidos a nuevos medios de cultivos para seguir la
secuencia de su multiplicación (24).
C. Enraizamiento y transplante
Esta consiste en el endurecimiento del cultivo para que pueda adaptarse a las condiciones
fuera del laboratorio, para que sé de esta etapa, se debe trasladar el cultivo a otro medio
reduciendo en un 50% las sales inorgánicas como a la vez realizar cambios en el balance
hormonal, es decir, disminuir las citocininas y aumentar las auxinas, esto con la finalidad de que
exista una mayor proliferación de raíces para el sostenimiento de la planta. El período de
endurecimiento o aclimatación en la cual la planta deberá colocarse en condiciones normales para
su desarrollo total. Para lograr ésta fase se deberá lavar la planta y eliminar los restos del medio
de cultivo que pudiera quedar en las raíces y luego sembrarlas en suelo estéril, cubriéndolas con
bolsas plásticas a las cuales se le abrirán agujeros para aclimatarlas poco a poco a su nuevo
hábitat.
11
3.1.2.3 Factores que influyen en la Micropropagación
A. Medio de Cultivo
a. Agua
Los medios de cultivo de tejidos están constituidos en su mayor parte por agua; por lo tanto,
es necesario utilizar agua de intercambio iónico o agua destilada, ya que el agua natural incluye
algunas sustancias que pueden causar influencia negativa para el crecimiento de las plantas “in
vitro” (41).
b. Componentes Inorgánicos
Los componentes inorgánicos son importantes para el crecimiento de las plantas. Si
escasean estos elementos, aparecen los síntomas característicos correspondientes a la
deficiencia de cada elemento (41).
Nitrógeno
El nitrógeno es componente de aminoácidos (proteínas), vitaminas y ácidos nucleicos.
Mientras la planta está en crecimiento activo, necesita gran cantidad de nitrógeno. Este se
encuentra en forma de NH4NO3 y KNO3, y en cantidad adecuada según la especie de planta.
Existen varias influencias del nitrógeno, en concentraciones altas, promueve el
enraizamiento, mientras que, en concentraciones bajas, promueve el desarrollo de callo. Dos
fenómenos semejantes son causados mediante la función de NH4+ (36).
Fósforo
El fósforo es uno de los elementos necesarios para el metabolismo de las plantas.
Principalmente, es utilizado para sintetizar ATP como fuente de energía. Dentro de los medios de
cultivo, las plantas lo absorben en forma de PO4 3-.
Potasio
Existe relación entre el potasio iónico y la diferenciación de órganos.
Calcio
El Calcio es componente de la pared celular.
Magnesio
El magnesio es un componente importante de la molécula de clorofila.
12
Hierro
Para los vegetales, el hierro es importante, debido a que es un componente de la clorofila.
Normalmente se da en forma de quelato (Fe-EDTA) en los medios de cultivo, ya que en otra forma
se precipitaría (41).
Microelementos
Se adicionan manganeso (Mn), cobre (Cu), zinc (Zn), molibdeno (Mo) y boro (B) a los
medios de cultivo como microelementos.
c. Componentes Orgánicos
Vitaminas
Según la especie de planta, así se adiciona tiamina (vitamina B1), pyridoxina (vitamina B6)
y ácido nicotínico, generalmente para el cultivo de la caña de azúcar es indispensable agregar la
tiamina al medio de cultivo (29, 31,40).
Mio-inositol
Se sabe que el agua de coco incluye componentes que promueven la producción de células
u órganos, y la diferenciación de las mismas. El mio-inositol es uno de estos componentes.
Aminoácidos
Acerca de la función de los aminoácidos, se sabe que estos promueven la producción y
diferenciación de células y tejidos. Sin embargo, algunas veces pueden ocurrir inhibiciones en el
crecimiento de las vitroplantas cuando se adiciona uno solo al medio de cultivo. En tal caso, se
deben incluir combinaciones de varias clases para que actúen conjuntamente.
d. Componentes naturales
Los más utilizados son la pulpa de plátano, agua de coco, emulsión de pescado, jugo de
naranja, extracto de malta, hidrolizado proteico (caseína), jugo de tomate, extracto de levadura,
etc. En varios casos, éstos compuestos inducen diferenciación y la producción de células y tejidos
eficazmente. Sin embargo, debido a que son componentes muy complejos, no son productos
estables ni homogéneos, es mejor evitar su uso, sobre todo en trabajos de investigación (41,45).
13
e. Otros componentes
Fuente de Carbono
Originalmente, las plantas pueden producir azúcar como fuente de energía a través de la
fotosíntesis. Sin embargo, las vitroplantas casi no realizan fotosíntesis debido a la baja intensidad
de luz en la que se desarrollan y aunque lo hagan producirán muy poco azúcar. A causa de esto,
es necesario adicionar cierta cantidad de azúcar como fuente de energía. Por lo general esta
cantidad varia entre 1 y 3% de sucrosa o glucosa que se agrega al medio de cultivo.
f. Agentes gelificantes para solidificar el medio de cultivo
Agar
Como un gelificante del medio de cultivo, el agar se utiliza más que otros agentes. Sin
embargo, no se puede usar uno corriente como se ofrece en el mercado, ya que este es impuro y
puede inhibir el crecimiento de las vitroplantas. Por consiguiente, se debe utilizar uno con alto
grado de pureza. Normalmente, se adiciona entre 0.6 a 1% al medio de cultivo.
Phytagel
Es un gelificante que se aplica en porcentajes bajos que el agar, su precio en el mercado es
elevado, pero de mayor pureza.
g. pH (potencial del ion hidrógeno)

La concentración del ion hidrógeno produce un efecto en la absorción iónica, en los medios
de cultivo. La acidez y la alcalinidad extremas inhiben el crecimiento de las vitroplanta . Por
lo general, se estabiliza el pH apropiado entre 5.4 a 6.0 con HCl y NaOH o KOH, según la especie
de planta que se va a micropropagar (41).
h. Ambiente del cultivo

Las condiciones del ambiente influyen sobre varios aspectos del desarrollo de las
vitroplantas, sobre todo en la diferenciación de órganos y formación de embriones adventicios; por
lo tanto, es importante comprender las relaciones entre los factores del ambiente y su influencia
sobre las plantas de cultivo “in vitro” (41, 45). Entre los cuales mencionamos la temperatura, la
humedad relativa, el fotoperíodo, la intensidad lumínica, etc.
14
i. Contaminación
La contaminación provoca cuantiosas pérdidas en la micropropagación masiva y hace
ineficiente económicamente algunos procesos. La contaminación en cultivo de tejidos puede
originarse de dos fuentes:
Contaminación por microorganismos: Los contaminantes patógenos pueden ser externos o
internos. Los primeros llamados exógenos, se encuentran en todas partes. Las esporas de estos
organismos se mueven en las corrientes de aire, sobre partículas de polvo. Los microorganismos
internos, sistémicos o endógenos, son los que se encuentran en el interior del tejido del explante,
ya sea en espacios intercelulares o intracelulares.
Dentro de los microorganismos que se describen como contaminantes del cultivo de tejidos,
se incluyen virus, bacterias, hongos (16, 23, 41). Sandoval, 1987, citado por López Morales (18),
menciona que para obtener buenos resultados en la micropropagación, recomienda mantener
controlada la contaminación en un rango de 10-20%.
3.1.2.4 Oxidación
La oxidación es una reacción originada por un grupo de sustancias aromáticas, llamadas

fenoles que son derivados del benceno, las cuales son muy frecuentes en el reino vegetal en
forma de éteres y glucósidos, algunos son de olor agradable, pero otros al oxidarse provocan un
fenómeno en el que forman frecuentemente compuestos oscuros con propiedades antisépticas,
que como consecuencia pueden impedir en el cultivo in vitro el desarrollo del propio explante.
La oxidación de los cultivos in vitro es causada por la liberación de fenoles al medio de

cultivo, que reaccionan con él oxigeno del frasco y producen coloraciones rojas, amarillas y en
casos avanzados café oscuro. Éstos compuestos fenólicos son exudados por la herida del tejido
dentro del medio, a la vez son atrapados por el agar y acumulados formando un área negra
alrededor del explante, resultando en una inhibición del crecimiento (6, 9, 15).
Pocasangre, 1993, citado por López Morales (18), refiere que el color café característico de
la oxidación, llamado ennegrecimiento del explante, se debe a que las enzimas monofeloxidasa
(tirasinada y la polifenol oxidasa (catecoloxidasa) oxidan los fenoles dando como resultado
quinonas.
El fenómeno de la oxidación se observa normalmente en explantes viejos después de
cultivarlos durante un tiempo largo, formándose materia orgánica alrededor del explante y el medio
15
de cultivo se torna café oscuro. Algunas especies tienen una tendencia de oxidación desde el
inicio del cultivo, ocurriendo necrosis o inhibición del crecimiento. La toxicidad por oxidación se
cree que ocurre a través del algún complejo químico de fenol orgánico metabólico (15, 23).
Sandoval, 1987, citado por López Morales (18), indica que las principales fuentes de
oxidación son el tipo de material que se utilice, ya que incluso dentro de una misma especie
existen distintos grados de oxidación, y otra, es una defectuosa Desinfestación superficial del
material que es transferido al laboratorio.
A. Antioxidantes
Muller L. & A. Krikorian (1985), citados por Cambara (6), indican que los antioxidantes son
sustancias que se usan durante la preparación de los explantes o que se adicionan al medio para
evitar o reducir la oxidación de ciertos compuesto, especialmente derivados de fenoles ó
polifenoles, que pueden afectar el desarrollo de los explantes.
Lee, citado por López Morales (18), hace las siguientes propuestas para impedir el
ennegrecimiento de los explantes:
• Utilizar Polivinilpirrolidona (PVP).
• Modificando el potencial redox, a través de agentes reductores o con menor disponibilidad de
oxígeno.
• Inactivando las enzimas fenolasas.
• El control más efectivo, son los subcultivos frecuentes y la eliminación de tejidos que se
encuentran casi muertos y por lo general se localizan en la base de los brotes.
Ken Okabe (23), sugiere los siguientes pasos para evitar el fenómeno de la oxidación:
a. Aplicar absorbente de materia orgánica metabólica

Carbón activo: Es común de aplicar al medio porque el mismo no es tóxico. Teóricamente se le
puede aplicar en cualquier cantidad. Esta sustancia tiene la propiedad de absorber cualquier
compuesto químico pero inhibe el funcionamiento de las fitohormonas. Por esta razón,
normalmente se aplica dentro del rango de 0.6 a 10.0 g/l aplicándose antes de calibrar el pH, ya
que lo aumenta.
Polivinylpirrolidona (PVP): La absorción de esta sustancia química es más limitada, debido a
tanto complejo de fenol. La polyvinilpirrolidona tiene varios tamaños moleculares y se disuelve bien
16
en alcohol etílico, sin embargo, algunas veces inhibe el crecimiento. Además no se disuelve en el
medio y no es común en el mercado. Generalmente se aplica en el rango de 0.1 a 1%.
b. Aplicar inhibidor de oxidación

Acido ascórbico (vitamina C) Esta vitamina inhibe la oxidación. Actúa reduciendo el complejo
fenólico. Generalmente, se mezcla con varias vitaminas. Algunas veces se reduce la velocidad
del crecimiento por mayor funcionamiento de antioxidación. Normalmente se aplica en el rango de
0.2 a 10 mg/l.
Hidroxiquinolina (8HQ hemisulfatado). Este reactivo inhibe eficientemente la oxidación por
fenoles. Tiene características establecidas y una toxicidad leve. Sin embargo, algunas veces
reacciona con iones de metal y causa precipitaciones de complejos metálicos. Se aplica en el
rango de 10 a 100 mg/l.
L-cisteina. Es un aminoácido que es utilizado como un antioxidante en el cultivo de la caña. En
una solución neutral o poco básico o alcalino se oxida a cistina por medio del aire, con una
solución ácida no se oxida tal fácilmente. Se disuelve en agua, ácido acético, es insoluble en éter,
acetona, benceno, carbón bisulfido (19, 20).
Según Cambara (6), se puede utilizar otros antioxidantes para prevenir la oxidación:
Acido cítrico: Es un ácido trícarboxilico muy común en plantas, especialmente frutos; es usado
como antioxidante en la preparación de explantes y medios, es una de los compuestos claves del
ciclo de Krebs (Ciclo de los ácidos).
Reactivo de Cleland: Es utilizado para retardar la oxidación, especialmente de grupos _SH:
reduce disulfidos cuantitativamente, es sinónimo de Citiotreitol o DTT.
Ovalle, 1996 (29), afirma que es posible utilizar antioxidantes químicos pero no todos son
efectivos, por ejemplo, el ácido ascórbico es conveniente utilizarlo por períodos cortos, porque
muy rápidamente se vuelve un oxidante fuerte; o sumergir los explantes en soluciones de cisteina
HCl.
3.1.2.5 Desinfestación de materiales vegetales

Según Ken Okabe (23), algunos materiales están cubiertos alrededor del meristemo por
resinas donde no es efectivo el desinfectante. En estos casos solo se puede aislar un meristemo
17
hasta que se obtenga alguno que no este contaminado. Se puede modificar la forma de
Desinfestación para que mejore la tasa de sobrevivencia como agregar:
Alcohol al 70% (30 segundos) más hipoclorito de sodio al 1% (10 minutos) ó hipoclorito de sodio al
3% más Tween 20 (5 minutos) y finalmente se enjuaga tres veces con agua esterilizada durante 5
minutos cada vez, ó
Alcohol al 70% (30 segundos) más 25 ppm de PCNB (Pentacloronitrobenceno) más 500 ppm de
penicilina G (30 minutos) luego hipoclorito de sodio al 3% más Tween 20 (5 minutos), y pro último
enjuague tres veces con agua esterilizada (5 minutos cada vez).
En lugar de hipoclorito de sodio al 3% se puede cambiar a hipoclorito de calcio al 7%. No es

necesario utilizar siempre hipoclorito de sodio. El postratamiento de éstos materiales se puede
hacer de la siguiente manera (Tanaka, et al. 1980) (23):
Soluc. descontaminación (postrat.) mg/l Microorganismo/controla

1) Ampicilina 500 Bacterias gram (+), Erwinia spp.,
agrobacterium spp. y Pseudomonas spp.
2) Benomyl WP 50 p/p% 10 Cercospora spp, Verticillum spp, Fusarium
spp. y Botritys.
3) RTU PCNB (Pentacloronitrobenceno) 25 Rhizoctonia spp, sclerotinia spp.
4) Rifampicilina 10 Bacterias gram (+), Xhantomonas spp.
Erwinia spp., y Pseudomonas spp. Gram (-).
Clavibacter spp, Streptomyces spp.
5) TBZ (Thiabendazole 45%) 100 Rhizoctonia spp., Pennicillun spp., Oidium
spp.
6) Vancomycin 50 Bacterias gram (+), Erwinia spp.,
Pseudomonas spp. y Micoplasmas (37).
Se disuelve alternativamente los elementos en ocho ml de alcohol al 99% en un beaker

esterilizado y se agregan 992 ml de agua esterilizada. Los elementos que no se disuelven se
deben agitar suficientemente. El uso de esta solución es la siguiente:
Alcohol al 70% (30 segundos) hipoclorito de sodio al 1%* Tween 20 (10 minutos) se enjuagua con
agua esterilizada (tres veces, cinco minutos) más la solución para descontaminación (30 minutos),
18
se agrega 1 ml en la superficie del medio conjuntamente con el tejido, cultivándose 10 días bajo
oscuridad.
3.1.2.6 Condiciones de laboratorio
Perea (1988) (30), reporta que los factores físicos de los laboratorios deben tener en
cuenta: la temperatura y la luz. El grado higrométrico del aire no tiene mucha importancia puesto
que las plantas cultivadas en medio cerrado “in vitro” se encuentran en una atmósfera
naturalmente saturada. El cuarto de cultivo debe ser climatizado con temperatura estable y con
estantes sobre los cuales se coloca los cultivos que deberán ser sometidos a fotoperíodos para un
buen desarrollo.
A. Temperatura: la caña de azúcar por ser una planta tropical se establece entre un rango de
25-30°C. Para el cultivo in vitro, es necesario programar la temperatura de acuerdo con los
períodos de luz y oscuridad o constante. De igual manera se debe establecer la temperatura con
las exigencias de la planta, climas cálidos o fríos.
Otro de los factores interesantes, es la temperatura mantenida en los recipientes cerrados, la cual
es superior a la del cuarto climatizado con luz.
B. Iluminación: la luz es requerida para la fotosíntesis de los explantes verdes cultivados in

vitro. Además la luz es indispensable para regular ciertos procesos morfológicos, considerándose
tres factores importantes:
a. Fotoperíodo: las plantas requieren un fotoperíodo constante según sus necesidades
fisiológicas; por lo tanto, se debe mantener un tiempo apropiado para cada especie de planta.
Normalmente, las vitroplantas se colocan por 12 horas bajo iluminación, y luego el mismo tiempo
bajo oscuridad durante un día.
b. Intensidad lumínica: bajo iluminación suficiente, las plantas crecen fuertes, con poca altura
pero con hojas bien desarrolladas. Mientras tanto, con poca iluminación, crecen débiles, con hojas
pequeñas y anormales (23). Sin embargo, no se recomienda una iluminación excesiva, puesto que
emite mucho calor, lo cual es negativo para el crecimiento de las plantas. Normalmente, lo mejor
es una iluminación entre 1,000 a 3,000 lux, según la especie vegetal.
c. Longitud de onda de luz: influye en la división celular y la diferenciación de órganos (23).
En micropropagación la calidad del expectro de luz parece influenciar los procesos
19
morfogenéticos. Selbert (1978) considera que sobre callos de tabaco las radiaciones azules y
violetas inducen la formación de brotes mientras que las radiaciones rojas inducen la rizogénesis.
Generalmente las fuentes de luz utilizadas consisten en tubos fluorescentes caracterizados por
sus curvas de emisión espectral.
C. Aireación: normalmente las plantas producen oxígeno a través de la asimilación de bióxido

de carbono y realizan la fotosíntesis; las vitroplantas, debido a las condiciones en que se
encuentran, no realizan eficientemente este proceso (23). Además, hay posibilidades de que se
forme el gas etileno que inhibe la diferenciación y promueva la callosidad. Por consiguiente, es
necesario que se mantenga oxígeno, lo cual se puede lograr sin cerrar herméticamente los
recipientes de cultivo (41).
D. Procesos defectuosos en el laboratorio: López (18), indica que si algún procedimiento

es realizado defectuosamente es probable que incida en consecuencias negativas en el cultivo de
tejidos, como puede ser el caso de.
¾ Fallas en la esterilización del medio de cultivo e instrumentos de disección.
¾ Fallas en la Desinfestación superficial aplicada al material vegetal a trabajar.
¾ Fallas de condiciones asépticas de la cámara de transferencia.
¾ Fallas de refrigeración y/o ventilación en el cuarto de incubación.
E. Vitrificación: la vitrificación es un fenómeno fisiológico que puede causar serios daños en

la fase de multiplicación, consiste en el aumento del potencial hídrico de las células que causa el
enverdecimiento de los tejidos y los vuelve quebradizos. Este desorden, afecta la fotosíntesis y el
intercambio de gases por las hojas y más tarde impide el establecimiento ex vitro de plantas
micropropagadas (18).
3.1.3 Reguladores de crecimiento
Se reconoce actualmente que la mayor parte de la actividad fisiológica de las plantas, está
regulada por un complejo de sustancias químicas llamadas hormonas (13). Este término fue
acuñado por los especialistas en fisiología animal y a partir de allí han surgido confusiones
considerables en cuanto a la terminología de las sustancias de crecimiento (45).
Los reguladores de las plantas se definen como compuestos orgánicos, que en pequeñas
20
cantidades, fomentan, inhiben o modifican de alguna manera cualquier proceso fisiológico vegetal.
Las hormonas de las plantas o fitohormonas, son reguladores producidos por las mismas plantas,
que en bajas concentraciones, regulan los procesos fisiológicos de aquellas y por lo general se
desplazan de un lugar de producción a un sitio de acción (45).
Las hormonas del crecimiento se definen como “sustancias que siendo producidas en una
parte de un organismo son transferidas a otra y en ésta influencian un proceso fisiológico
específico”.
En realidad es muy difícil definir el término hormona vegetal con toda precisión. Muchas
sustancias del tipo hormonal pueden actuar en su lugar de síntesis, actúan al parecer de modo no
específico o actúan a nivel genético como inductores o represores. A menudo se prefiere el
término fitorregulador, refiriéndose a compuestos naturales o sintéticos que inducen respuestas en
el crecimiento, desarrollo o metabolismo (5).
Para Hartman (16) las auxinas y citocininas son las más importantes para regular el
crecimiento y la morfogénesis en el tejido de las plantas y en el cultivo de órganos, para ellas,
reguladores sintéticos han sido descubiertos con una actividad biológica que iguala o excede la de
las sustancias de crecimiento equivalentes. No hay alternativas químicas para las giberelinas
naturales, las cuales son extraídas de hongos cultivados y se utilizan como reguladores exógenos.
Para Bidwell (5), las hormonas son por definición, compuestos orgánicos sintetizados por
las plantas superiores, que influyen sobre el crecimiento y desarrollo, que actúan generalmente en
áreas diferentes a donde son producidas y se encuentran presentes y activas en muy pequeñas
cantidades.
El término hormona ha sido reservado para ciertos compuestos naturales que ocurren en
las plantas como reguladores del crecimiento. Aunque el ácido naftalenacético (ANA), el ácido 2,4-
Diclorofenoxiacetico (2,4-D) y la Kinetina son reguladores del crecimiento las cuales no son
considerados como hormonas.
3.1.3.1 Auxina
Thiman (39), define a las auxinas como sustancias orgánicas que promueven el crecimiento
(aumento en volumen), a lo largo de eje longitudinal, en concentraciones aproximadas de 10-3
21
Molar. Todos los compuestos que tienen actividad auxínica poseen hidrógeno y oxígeno en
proporciones y disposiciones diferentes y algunos de ellos contienen, además, nitrógeno y cloro;
tienen estructuras simples, pero la mayoría son complejos (47).
Las auxinas son sustancias que participan en la elongación y división celular. Las
concentraciones recomendadas son de 0.1 a 10 mg/l. Dentro de las auxinas más utilizadas están
el ácido indolacético (AIA), el ácido indolbutiríco (AIB), el ácido naftalenacético (ANA) y el 2,4
diclorofenoxiacético (2,4-D), siendo el AIA una auxina natural (13,18).
Por lo general, en la preparación de un medio de cultivo se utiliza solamente un tipo de

auxina ya que puede provocar la llamada habituación de los tejidos in vitro en la cual no se
estimula el crecimiento de las plantas a las aplicaciones exógenas de éstas (18).
A. Función de las auxinas en la formación de las raíces
Se debe distinguir claramente entre el efecto de las auxinas sobre la formación de las raíces
y su efecto sobre el alargamiento radicular. En general las concentraciones requeridas para el
primero de éstos procesos son mucho mayores que para el segundo.
Un efecto importante de la auxina, que también implica división de células, es el de
provocar la iniciación de raíces laterales y adventicias en la raíz y en el brote. Este efecto tiende a
correlacionar el grado de ramificación del sistema radical con el grado de desarrollo de yemas de
brote. Más aún, debido al transporte polar hacia abajo, la auxina tiende a acumularse justamente
arriba de cualquier sitio dañado en el tallo o en el sistema radical. Esta acumulación estimula la
iniciación de raíces adventicias en el lugar dañado, con lo que promueve la regeneración de las
raíces perdidas y aumenta las probabilidades de supervivencia de las partes aéreas de una planta
después que haya sufrido una lesión abajo o al nivel del suelo (13).
B. Utilización de auxinas para estimular el Enraizamiento
Uno de los mejores estimuladores del enraizamiento es la auxina AIB, tiene una actividad
auxínica débil y los sistemas de enzimas destructores de auxinas, la destruyen en forma
relativamente lenta. Un producto químico persistente resulta muy eficaz como estimulante de las
raíces. Debido a que el AIB se desplaza muy poco, se retiene cerca del sitio de aplicación. Los
reguladores del crecimiento que se desplazan con facilidad pueden causar efectos indeseables de
22
crecimiento en la planta propagada.

Otra auxina utilizada en la promoción de raíces es el ANA, este compuesto es más tóxico
que el AIB y debe evitarse las concentraciones excesivas por el peligro de provocar daños a las
plantas.
El AIB y el ANA resultan más efectivos en la inducción del enraizamiento que el AIA. El AIA
es muy inestable en las plantas y se descompone rápidamente en soluciones no esterilizadas, aun
cuando permanece activo en soluciones estériles durante varios meses. Los rayos fuertes del sol
pueden destruir en 15 minutos una solución de 10 ppm de AIA. Las amidas de AIB y ANA son
también agentes muy efectivos del enraizamiento. La forma amida del AIB es menos tóxica que el
ANA y por tanto, puede utilizarse con mayor seguridad. El AIB produce un sistema de raíces
fuertes y fibrosas, mientras que los ácidos fenoxiacéticos a menudo producen un sistema de
raíces atrofiado y maltoso, compuesto de raíces dobladas y gruesas. Las sustancias promotoras
del enraizamiento son a menudo más eficaces cuando se utilizan en combinación (45).
Las auxinas mas frecuentemente incorporadas a los medios para inducir enraizamiento son
AIA (0.05-10 mg/l), ANA (0.05-1 mg/l), ó AIB (0.5-3 mg/l). Estos componentes pueden algunas
veces ser tratados como alternativas, pero frecuentemente la formación de raíz es mucho mejor
con una que con otra. El ANA por ejemplo, es superior al AIA y AIB para el enraizamiento de
brotes de Olivo (17).
3.1.3.2 Citocinina
A. Concepto de Citocinina
Las citocininas son potentes factores del crecimiento para la diferenciación y son sustancias
que regulan la división celular (4). Haberlandt (1913) encontró que los tejidos floemáticos difundían
una o unas sustancias capaces de inducir la división celular de tejido parenquimatoso de patata.
Skoog observó que en segmentos de tallo de Nicotiana spp., que incluía corteza, vasos y médula
no crecían en un medio simple y necesitaba añadirle una auxina para que hubiera alargamiento y
proliferación de la médula, por otra parte, si se colocaba esta aislada y añadía auxina se
observaba alargamiento de las células sin división de las mismas, pero cuando la médula se ponía
en contacto con el tejido vascular, podía observarse de nuevo división celular (4).
23
El primer compuesto con las propiedades de la citocinina que se logró identificar fue la
cinetina, aunque fue aislada a partir del DNA del esperma del arenque, ya que no se encuentra en
forma natural en las plantas (4). La cual es considerada la primera citocinina que se descubrió y
aislada por Skoog en Winscon. El DNA fue purificado en estado cristalino, una sustancia activa
que fue identificada como 6-(furfurilamino)-purina y que se conoce con el nombre de Kinetina (9,
4,15).
Miller (1961) aisló una sustancia a partir de granos inmaduros de maíz que demostró poseer
alta actividad sobre el proceso de división celular y que denominó como zeatina. Al año siguiente
describió que se trataba de un derivado de la adenina N6 substituido (9).
La semejanza entre la estructuras de zeatina y Kinetina, así como de otras sustancia con
actividad sobre la división celular, que se encuentra sin modificar en la naturaleza, tales como 6-
(metilamino)-purina, 6-(dimetilamino)-purina o 6-(β² -isopentenilamino)-purina, ha hecho que todos
estos compuestos se agrupen en una nueva categoría hormonal que recibe el nombre genético de
citocininas (13).
B. Citocininas análogas sintéticas
Las citocininas naturales como la zeatina, el 2ip (isopenteniladenina) y la dimetil-

aminopurina, son usadas en la investigación, aunque no se emplean rutinariamente en los
laboratorios comerciales por su costo, por fortuna, varios químicos análogos de las citocininas
naturales, aparte de la cinetina, se ha preparado y probado que son altamente activos como las
citocininas, están sustituidos por los derivados de 6-adenina, algunos otros compuestos
estructuralmente poseen actividad citocinínica, como por ejemplo 4-alkylaminopteridinas y 6-
bencilaminopurina y son reportados más activos que la cinetina (17, 41).
Entre la mayoría de citocininas sintéticas usadas en micropropagación están:
¾ Kinetina 6-furfurilaminopurina.
¾ BAP 6-bencilaminopurina o
¾ BA benciladenina.
24
Otras citocininas sintéticas (10):
¾ PBA 6-(bencilamino)-9-(2-tetrahydropyranyl)-9H-purina o
¾ SD 8339 N-benzyl-9-(2-tetrahydropyranyl)-adenina.
a. Bencilaminopurina
Dentro de las citocininas el BAP (6-bencilaminopurina), se utiliza actualmente más que la

Kinetina y la Zeatina, debido a que es un compuesto muy activo y se encuentra disponible
fácilmente a un precio razonable. Particularmente es efectiva en promover la morfogénesis, tiene
su punto óptimo en cuanto a la concentración más utilizada de 0.1 a 2.0 mg/l. Siendo su peso
molecular de 225.26 g/mol, su fórmula química C12N11N5, el grado de pureza es de 99.9% y en la
figura 1 se presenta su estructura molecular (15, 20, 32, 41).
N CH2
N N
N
N
Figura 1. Estructura molecular de la 6-Bencilaminopurina.
C. Lugares de síntesis de las Citocininas
Ocurre en hojas jóvenes, y también en la zona meristemática, en semillas en germinación,

flores y frutos. Los lugares donde más se les encuentra con abundancia, son los meristemos de
raíz.
Las citocininas son producidas en las raíces, se sintetizan principalmente en los ápices
radiculares y son transportados por el xilema al tallo y resto de la planta, aunque también se
conducen a través del floema, este transporte puede ser de tanto de órgano a órgano como de
raíz a tallo o viceversa (4, 9).
25
Según Pocasangre (32), altas concentraciones de citocininas (0.5-10 mg/l) inhiben o

retrasan la formación de raíces, previenen el crecimiento de éstas y promueven el efecto de las
auxinas en la iniciación de las raíces. Por tal razón, las citocininas son omitidas en la fase de
enraizamiento de la micropropagación. Al utilizar seis miligramos por litro de BAP en
micropropagación de plátano, observó la muerte de los explantes por una intoxicación por exceso
de hormona (29). Esta intoxicación se puede dar, porque las citocininas, aceleran la síntesis de
ADN, es decir, al aplicar una dosis demasiado alta, hay una desmesurada aceleración de su
metabolismo por lo que la célula ya no es capaz de sintetizarla.
D. Mecanismo de acción
La citocinina promueve la acumulación, incluso la entrada de Ca a la célula, este va

asociado a una proteína denominada Calmodulina. Dicho compuesto promueve la síntesis de
proteínas.
Según Evans, et al. (1983), citado por Roca, (34), considera que el modo de acción de las
citocininas es a través de la síntesis de proteínas específicas para el desencadenamiento de la
mitosis. Dentro de la misma la Kinetina ha recibido mucha atención como una sustancia
estimuladora de la división celular, no se ha demostrado que esté presente como un compuesto
natural y generalmente se reconoce como un artefacto.
La forma de acción de las citocininas en la planta es incierta. Parecen estar implicadas en el

metabolismo del azúcar. La cinetina como la bencilaminopurina inducen a la aparición de nuevas
clases de proteínas en las raíces intactas.
E. Efectos fisiológicos de las citocininas
Las citocininas se adicionan al medio para promover la división celular y diferenciación de

yemas y brotes adventicios de callos y órganos, promueven la embriogénesis somática, inhiben la
formación de raíces. El éxito del tratamiento con citocininas, induce el crecimiento de muchos y
pequeños brotes de cada explante, después de cuatro a seis semanas. La formación de brotes
adventicios, ya sea directa del explante o indirectamente a través de la formación de callo, es
regulado por la interacción entre auxinas y citocininas (18).
26
Las citocininas son, típicamente las hormonas de la división celular activando el proceso
directamente (como efecto de la activación metabólica), a comparación de las otras hormonas que
lo hacen de forma indirecta. Además determinan la dominancia apical en interacción con las
auxinas. Los fenómenos estimulados con las citocininas son característicos de las plantas y tejidos
jóvenes, por lo que parecen ser “factores de juvenilidad”, por lo que la deficiencia provoca
senescencia.
F. Interacción auxina-citocinina
La formación de brotes inducida en callos, usualmente se utiliza niveles bajos de auxinas y

elevados en citocininas en el medio de crecimiento. Se han descubierto, aspectos de
diferenciación celular y organogénesis en cultivo de tejidos y órganos, controlados por una
interacción entre concentraciones de auxinas y citocininas. El balance entre los dos tipos de
reguladores que es usualmente requerido para iniciar el crecimiento de diferenciación en cultivo de
tejidos, se muestra en la siguiente figura:
AUXINA CITOCININA
EFECTO DE AUXINA + CITOCININA
ALTO BAJO
Formación de raíces.
Iniciación de callos en monocotiledóneas.
Primer estado embriogénesis (globular)

Formación de raíces adventicias en callo.
Inicio de callo en dicotiledóneas.
Formación de brotes adventicios.
Proliferación de brotes axilares

En cultivo de brotes
BAJO ALTO
Figura 2. Relativa concentración de auxinas-citocininas y los requerimientos típicos para el crecimiento y

morfogénesis.
Las proporciones de auxinas y citocininas no siempre producen el resultado típico descrito

anteriormente, por ejemplo:
27
¾ La proliferación de brotes axilares en algunas especies es muy prometedora con la

presencia de una auxina y citocinina.
¾ Para tejidos en monocotiledóneas frecuentemente se induce a la formación de callos por
cultivo, con altos niveles de auxina, las citocininas no son esenciales.
¾ La organogénesis en monocotiledóneas es frecuentemente prometedora por la
transferencia del cultivo a un medio sin auxina, o por la concentración reducida de una alta
actividad auxinica, semejante al 2,4-D o reemplazar el 2,4-D por otra auxina (15).
3.1.4 Cultivo de tejidos en caña de azúcar
En caña de azúcar se han realizado varios trabajos de mejoramiento genético con la técnica
del cultivo in vitro y esta especie es ideal para este objetivo; pero a medida que se aumentan los
subcultivos, se pierden cromosomas los cuales de 82 en promedio en la R0, descienden a 30 en la
R8; la R2 es recomendado como la mejor para la regeneración (31).
Estudios en los cuales se evalúa la variabilidad producida por los cultivos es un poco
contradictoria (31). Feldemann (1984) analizó de 10 a 16 sistemas enzimáticos en plantas
obtenidas de callos de 13 variedades concluyendo que la caña de azúcar es una planta estable en
los cultivos in vitro, los cambios producidos se deben al rejuvenecimiento y a la sanidad de las
plantas regeneradas.
Se ha encontrado que la inestabilidad en los cultivos in vitro esta influenciado por los
genotipos y las auxinas, como también señalan que se deben de seleccionar los genotipos que se
sometan a esta técnica según la estabilidad de su cariotipo (31).
Nickell, (1961), citado por Hurtado (17), inicio en Hawaii los primeros trabajos de
investigación, con esta especie, utilizando la metodología de cultivo de tejidos; ésta técnica
actualmente complementa al sistema tradicional de selección; permite manipular genéticamente
los materiales aptos para seleccionar, a partir de poblaciones celulares con el propósito de obtener
cultivares con características fenotipicas deseables.
Los primeros cultivos asépticos de caña de azúcar se elaboraron con el medio White al
que se le agregó agua de coco y ácido 2,4-diclorofenoxiacético (19). En 1964 Nickell desarrolló la
técnica del cultivo de tejidos en la caña de azúcar obteniendo masas callosas a partir de trozos de
parénquima (44).
28
De acuerdo a lo expuesto por A. Dookum, et al. (14), el cultivo in vitro de la caña de azúcar
ha ganado importancia en muchos países productores de este cultivo, a la vez esta siendo
adoptado para la micropropagación de esta especie como una de sus técnicas más importantes.
Hendre (1983), citado por Cambara, (6), indica que en la India se ha demostrado que es
posible producir alrededor de 260,000 plantas provenientes de un solo meristemo apical en un
período de 4 meses y aproximadamente 200,000 plantulas podrían ser enraizadas a partir de ese
explante en dos meses más. Este número podría ser suficiente para plantar 10 hectáreas de
prueba en el campo.
En Hawaii, Comstock (1988), ha reportado que alrededor de 20,000 plantulas podrían ser
multiplicadas semanalmente a partir de plantas regeneradas de puntas de brotes conteniendo el
meristema apical (14).
La propagación in vitro ha sido ampliamente utilizada, no solamente por la rápida

producción de material para plantar nuevas variedades, si no para obtener material limpio. Otros
investigadores citados por Dookun & Autrey (1995) (14), sugieren que es el método indicado para
obtener material limpio, conservar recursos genéticos in vitro y él más seguro y preferido para el
intercambio de variedades entre países, debido a que posee un mínimo riesgo de trasladar las
enfermedades.
3.1.4.1 Micropropagación
El coeficiente de multiplicación de la caña de azúcar es bajo y por ello la micropropagación

in vitro de este cultivo es útil. Esta técnica se aplica en los bancos de germoplasma, en el
intercambio de material genético, en la producción de plántulas para seleccionar, en la producción
comercial de semillas, y en saneamiento de clones para eliminar Ustilago sp., el mosaico y la
enfermedad del retoño achaparrado (Lee, 1986) (31).
En la micropropagación se emplean meristemas apicales axilares, aunque se prefieren los

primeros porque están libres de contaminación y presentan menos problemas con la fenolización
(31). La contribución más importante de la micropropagación en los programas de mejoramiento
genético es manipular en forma masiva un genotipo seleccionado, conservando las características
agronómicas del mismo, en donde la posibilidad de límite de producción es considerablemente
más elevada que por los métodos convencionales.
29
El método de propagación in vitro tiene un efecto positivo en la producción rápida de caña

de azúcar, por lo que puede ser una alternativa para los métodos tradicionales. Se ha demostrado
que las variedades micropropagadas son de mejores características agroproductivas que las
sembradas agámicamente, principalmente en el número de tallos y el volumen de caña
aprovechable. Además sé a demostrado que el tiempo seleccionado y multiplicando una nueva
variedad de caña puede ser reducido a siete años usando la propagación clonal; es decir la mitad
del tiempo que emplean los métodos tradicionales (31).
En general las etapas metodológicas que comprende la micropropagación de la caña de

azúcar son las propuestas por Murashige:
¾ Etapa de establecimiento, asepsia del cultivo (Iniciación).
¾ Inducción de la brotación, multiplicación de propágulos.
¾ Enraizamiento y desarrollo de plántulas.
3.1.4.2 Medios de cultivo en caña de azúcar
En base a lo expuesto por Dookun, et al. (1995) (14), el medio más utilizado para las etapas
metodológicas de iniciación, brotación y regeneración, consiste en las sales de Murashige &
Skoog (1962) con ligeras modificaciones en macroelementos, vitaminas y fitohormonas también
con algunas mejoras actuales como: el uso de medio líquido para la etapa de iniciación más un
antioxidante para reducir la fenolización, como Polivinilpyrrolidone (PVP) o ácido cítrico, a la vez
mencionada Lee (1987) y Nagai (1988) citados por Nand L. (22), el carbón activado se puede
agregar al medio sólido en la etapa de iniciación. El pH del medio debe estar comprendido entre
5.6-5.8; la esterilización se ejecuta a 110°C por un espacio de tiempo de 15 minutos a 15
libras/pulgadas² equivalente a 1.2 atmósferas/cm² de presión.
3.1.4.3 Técnicas de cultivo de tejidos en caña de azúcar
De acuerdo con Muller, citado por Cambara, (6), él término cultivo de tejidos es usado
frecuentemente como generalización para describir cualquier tipo de cultivo aséptico de células,
tejidos, órganos, protoplastos, etc. Manteniendo los explantes por más de un día en un medio
artificial.
30
Los principales tipos de cultivos de tejidos son:
¾ Cultivo de células individuales o agregados celulares.

¾ Cultivo de tejidos, callo, explantes, punta de brotes.
¾ Cultivos de órganos.
¾ Cultivos de embriones.
¾ Cultivos de polen y anteras.
A. Cultivo de brote apical
La utilización de brotes apicales como explantes para el cultivo in vitro, reducen

considerablemente el grado de contaminación; existe el inconveniente con la oxidación durante la
fase de iniciación. Para contrarrestar dicho efecto se han investigado varias concentraciones de
antioxidantes como la Polivinilpilorridona (PVP), combinaciones de ácido cítrico-ácido ascórbico y
carbón activo, para determinar la eficiencia en reducir los tejidos oxidados por la producción de
fenoles y de esta forma incrementar la eficiencia en la regeneración de plántulas completas (14).
B. Cultivo de Células
Barba y Nickel (1969), (6), demostraron que la producción de plantas de caña de azúcar
procedentes de cultivo de tejidos es posible. Se puede decir que las técnicas abarcan la formación
de callo y la posterior diferenciación de tejidos.
Según Artschwager, (1925), citado por Pérez Ponce, (31), para el cultivo de la caña de
azúcar se emplea cualquier parte de la planta: el meristema subapical, desde el primero hasta el
octavo internudo, las hojas jóvenes aún enrolladas, la inflorescencia antes de emerger, los
meristemas apicales del tallo y de la raíz, y el parénquima medular. La inflorescencia sin emerger
es la mejor, por su alta capacidad de regeneración, la cual no es recomendada en mejoramiento
por su baja variabilidad.
Es recomendable las hojas jóvenes tomadas de tallos jóvenes que tengan un rápido y
vigoroso crecimiento, Los meristemas subapicales no son recomendables por que se contaminan
y por que sufren fenolización. Explantes de la hoja -1 extraídos asépticamente son los más
adecuados para un rápido crecimiento de los callos (31).
31
Alexander en 1973, citado por Méndez Salas, (19), señaló que existían diferencias en la
capacidad regenerativa de los callos, mismas que atribuyó a variaciones, en el número
cromosómico de las células de la caña de azúcar.
Medio de cultivo: Según Pérez Ponce, (31), la formación de callos en la caña de azúcar es
relativamente fácil. Se han empleado los siguientes medios de cultivo con buenos resultados:
Heinz y Mee (1969), Murashige y Skoog (1962), White (1963), Heinz et al. (1977) y Liu (1983).
Para la formación del callo, el 2,4-diclorofenoxiacético es la única auxina que debe de
manejarse, según la variedad, y la dosis administrada oscila entre 2 y 5 mg/litro (31).
A. Inducción de enraizamiento
Para el enraizamiento de las plántulas se han propuesto diversos métodos para su

mejoramiento como: los tratamientos con bajas temperaturas, la poda de las hojas, el burbujeo
constante en los medios líquidos. El método más eficiente y práctico, el uso de medios de cultivo
capaces de asegurar el enraizamiento.
En los medios de cultivo un alto contenido de sacarosa provoca un bajo porcentaje de
supervivencia in vitro, causado probablemente del elevado valor osmótico de estos medios. Para
la inducción del enraizamiento in vitro en plantas de 3 a 5 cm de altura se recomienda siempre
contenidos de sacarosa de 4% a 5% (p/v). Cuando no se agrega agua de coco, se obtiene un
mejor desarrollo radicular y mayor longitud de las raíces de las plántulas, Maretzaki y Hisaki (1980)
proponen un medio que contenga de 7% a 9% de sacarosa y la mitad de la concentración de las
sales de MS.
La inducción del enraizamiento de las plantas es más difícil a causa de las concentraciones
de citocinina (en especial, de 6-bencilaminopurina) en medios de cultivo que provocan el
ahijamiento (31).
3.2 Marco Referencial
3.2.1 Ubicación del área en estudio
El estudio se realizó en la estación experimental de CENGICAÑA, ubicada en la finca

Camantulul, Santa Lucia Cotzumalguapa, específicamente en el área de Biotecnología Vegetal. Se
encuentra a una distancia de 92.5 km de la ciudad de Guatemala por medio de la carretera CA-1 y
a 34 km del departamento de Escuintla. Se localiza en el centro de la zona cañera de Guatemala;
32
las coordenadas 14°19’30’’ latitud norte y longitud 91°03’ 03’’ Oeste, a una altura sobre el nivel del
mar de 280 metros (IGM 1985) (8).
En ese laboratorio de área de Biotecnología Vegetal, se realiza generalmente la

micropropagación de caña de azúcar a través del laboratorio de Cultivo de Tejidos Vegetales, el
mismo tiene las condiciones y requerimientos adecuados para la realización de investigaciones
relacionadas con el cultivo in vitro.
La zona cañera que comprende a la finca Camantulul y al área de estudio se encuentra

ubicada en tres estratos o zonas altitudinales según la figura 3.
Estratificación de la zona cañera

ESTRATIFICACIÓN DE LAy ZONA
ubicación del área
CAÑERA.
de estudio
300 msnm
ESTRATO ALTO
DEPARTAMENTO DE ESCUINTLA
100 msnm
ESTRATO MEDIO
)
CENGICAÑA
ESTRATO BAJO
MAPA
ZONA DE LADE
CAÑERA ZONA
GUATEMALA
CA ÑERA DE GU ATEMALA
SIN ESCALA
OCEÁNO PACÍFICO
Figura 3. Estratificación de la zona cañera y localización del área de estudio.

33
3.2.2 Características generales de las variedades de caña de azúcar utilizadas para el

ensayo
3.2.2.1 Variedad CP 722086
La variedad Canal Point. 722086 tiene tallos de color amarillo verdoso, posee vigor y es de
buen cierre de calle. Su crecimiento es erecto y no posee afate. Es suave para el corte y además
desbajera bien. Tiene muy buen retoño, es resistente al carbón y tolerante al mosaico. En lo que
respecta a su madurez es altamente floreadora (más del 90%) lo que implica que es una variedad
temprana.
Posee nudo obconoidal, anillo de crecimiento prominente y yemas de forma redonda con
poro germinativo central (forma de globo). La lígula al nivel del último cuello es de forma creciente
con centro ancho. Esta variedad se reconoce a cierta distancia durante la etapa de su crecimiento
por un color verde claro rojizo presente sobre la vaina de las hojas.
En el ámbito comercial ha destacado por sus altos tonelajes en el campo y elevada

producción de azúcar en fábrica. En la zafra 91-92 presentó un rendimiento de 166.39 toneladas
de caña/ha y de 207 lbs/azúcar/ton/caña para producir la cantidad de 1.443 ton.azúcar/ha/mes.
(CENGICAÑA).
3.2.2.2 Variedad SP 792233
La SP 792233 es una variedad de alta capacidad de macollamiento y posee follaje

abundante de un color verde oscuro cuyas láminas son decumbentes que permiten cierre de
calles. El hábito de crecimiento de la variedad es ligeramente inclinada y no presenta ningún tipo
de deshoje natural. La floración es considerada escasa y se tiene que sembrar antes del mes de
marzo, después de esta fecha aún en la zona alta de la zona cañera de Guatemala (>300 msnm)
la variedad no florece.
El entrenudo es curvado ligeramente en zig-zag con abundante cera en la banda cerosa y a

lo largo del entrenudo. El nudo tiene forma ligeramente de un cono y el anillo de crecimiento
semiancho presenta protuberancia intermedia. El nudo en el lado de la yema mide 12 mm y en el
34
lado opuesto de la yema 10 mm. La yema de protuberancia respecto al anillo de crecimiento y la

cicatriz foliar es una característica de esta variedad. La vaina es verde claro con escasa serosidad
y afate y se adhiere parcialmente al tallo.
La aurícula es de dos tipos en la misma lámina foliar, una calcariforme y la transicional

ascendente con presencia de vellos en el margen. La forma de la lígula es deltoide con rombo (25,
27).
3.2.2.3 Variedad PR 872080
Esta variedad a la edad de 9 meses se distingue por su follaje abundante cuyas hojas
superiores se muestran en forma de espada, un grupo intermedio es decumbente y las hojas
bajeras caídas. La floración es nula, los tallos crecen erectos y muestran un regular deshoje
natural. La forma del entrenudo es cilíndrico ligeramente en zig-zag con abundante cera en la
banda cerosa y a lo largo del entrenudo. El canal de la yema es casi superficial que abarca 1/4 del
mismo.
El nudo tiene forma de un cilindro y el anillo de crecimiento semiancho presenta

protuberancia lisa al tacto. El nudo en el lado de la yema mide 10 mm y en el lado opuesto 6 mm.
La yema ligeramente prominente es ovalada con punta corta, en cuya base se localiza adherida a
la cicatriz foliar y ligeramente sobrepasa el anillo de crecimiento.
La vaina de la variedad PR 872080, es verde claro con poca cera sin presencia de afate. En
la lámina foliar de las aurículas es lanceolada larga y la otra transicional ascendente, ambas se
localizan siempre sobre el mismo lado. El último cuello visible es verde claro cuya superficie es lisa
y velluda en el borde, la lígula de su patrón es creciente lineal (25, 27).
35
4. OBJETIVOS
4.1 Objetivo General
4.1.1 Establecer un método para la obtención de brotes de caña de azúcar in vitro de las
variedades CP 722086, SP 792233 y PR 872080.
4.2 Objetivos específicos
4.2.1 Establecer la respuesta de la de 6-Bencilaminopurina en el nivel más adecuado que

induzca la mayor proliferación de brotes en la fase de multiplicación, para cada una de las
variedades.
4.2.2 Determinar el nivel de 6-Bencilaminopurina, que provoque la inducción de la mayor longitud

de brotes en la variedad CP 722086, SP 792233 y PR 872080.
4.2.3 Determinar el nivel de 6-Bencilaminopurina, que estimule a la mayor diferenciación de hojas

por brote para cada una de las variedades.
36
5. HIPÓTESIS
5.1 Existe por lo menos un nivel de 6-Bencilaminopurina que induzca a la mayor proliferación
de brotes, para cada una de las variedades en la fase de multiplicación.
5.2 Al menos un nivel de 6-Bencilaminopurina induce a la mayor longitud de brotes, para cada
una de las variedades de caña de azúcar.
5.3 Existe por lo menos un nivel de 6-Bencilaminopurina que induzca mayor diferenciación de
hojas por brote para cada variedad.
37
6. METODOLOGÍA
6.1 Localización del experimento
La presente investigación se realizó en el laboratorio de Cultivo de Tejidos Vegetales del

Centro de Experimentación de Camantulul, CENGICAÑA. El laboratorio esta implementado con
instalaciones, equipo y condiciones ambientales adecuadas que llevaron a cabo las diferentes
actividades en que consistió el trabajo de la micropropagación de las variedades de caña de
azúcar.
6.2 Material vegetal, equipo, cristalería, reactivos, insumos y medio de cultivo usados
para la realización del estudio
6.2.1 Material vegetal experimental
El material vegetal a evaluar en la investigación consistió en las variedades de caña de

azúcar: CP 722086, SP 792233 y PR 872080, las cuales se localizaron y colectaron en los campos
de cultivos y germoplasma del centro de experimentación de CENGICAÑA. El equipo y cristalería
usado consistió de lo disponible dentro del laboratorio de biotecnología vegetal (Apéndice 20 A).
Para los reactivos e insumos se uso lo descrito por Murashige y Skoog y los estudios previos
realizados por Cruz, (12) (Apéndice 21 A).
6.2.2 Preparación de medios de cultivo
6.2.2.1 Medio de cultivo
Prácticamente en las dos etapas de la propagación in vitro (iniciación y multiplicación) de la

caña de azúcar, se utilizó el medio nutritivo basal descrito por Murashige y Skoog denominado
comúnmente MS (1962), el cual ha sido modificado para el cultivo de la caña de azúcar tal como
se describe en el cuadro 2, variando únicamente las concentraciones de reguladores de
crecimiento y antioxidantes. Dicho medio es considerado apropiado para el cultivo de la caña, y
además de ser utilizado para una diversidad de cultivos, el cual es el más completo
nutricionalmente (1, 6, 19, 21).
38
6.2.2.2 Elaboración de soluciones concentradas
Para la elaboración de las soluciones concentradas los componentes del medio de cultivo
MS, se agruparon de la siguiente forma: Macroelementos, microelementos, quelatos de hierro,
vitaminas y reguladores del crecimiento. Se utilizó agua destilada-esterilizada, los recipientes de
vidrio color ambar fueron esterilizados a calor seco los cuales se emplearon para guardar dichas
soluciones. La finalidad de agrupar los ingredientes en forma de soluciones concentradas es que
permite reducir pasos en la preparación del medio de cultivo y evitar precipitación de algunos
reactivos. Los volúmenes a preparar dependieron de las concentraciones de las soluciones las
cuales fueron a 10X, 100X, 1000X y 5000X.
Cuadro 1. Agrupación de componentes, cantidades y volúmenes para la preparación de

soluciones concentradas.
CANTIDAD DE REACTIVO A AGREGAR

# Sol. COMPONENTES/REACTIVOS PARA EL VOLUMEN DESEADO
500 ml 200 ml 100 ml
Macronutrientes 10 X
NH4NO3 8.25 grs.
1 KNO3 9.5 grs.
MgSO4 ⋅ 7H2O 1.85 grs.
KH2PO4 0.85 grs.
Micronutriente “A” 1000 X
H3BO3 0.62 grs
2 MnSO4 ⋅ 4H2O 2.23 grs
ZnSO4 ⋅ 7H2O 0.86 grs.
Na2Mo4 ⋅ 2H2O 0.025 grs.
Micronutriente “B” 5000 X
3 CuSO4 ⋅ 5H2O 0.0125 grs.
CoCl2 ⋅ 6H2O 0.0125 grs.
4 KI 1000 X 0.083 grs.
5 Ca Cl2. ⋅ 2H2O 10 X 2.2 grs.
Solución de Hierro 100 X
6 C10H14N2Na2O8 ⋅ 2H2O 0.746 grs.
FeSO4 ⋅ 7H2O 0.556 grs
7 Myo-inositol 100 X 1.00 grs
8 Vitaminas 1000 X
C12H18Cl2N4OS. ⋅ H2O 0.01 grs
9 Reguladores del crecimiento
9.1 C10H9NO2 250 ppm 0.0253 grs.
9.2 C12H11N5 250 ppm 0.0253 grs.
9.3 C10H9N5O 250 ppm 0.0253 grs.
39
Para la preparación de cada una de las soluciones concentradas del MS y reguladores del
crecimiento, se procedió de la siguiente manera (cuadro 1): se realizó con la mayor asepsia
posible, a los recipientes de solución (beaker) se les agregó agua destilada-esterilizada a un tercio
de su capacidad, para luego agregar los diferentes componentes previamente pesados los cuales
se mantuvieron en constante agitación.
Para el caso de la solución de hierro (solución 6), fue necesario calentar (40°C) cada
reactivo por separado en un beaker de 250 ml de capacidad con 50 ml de agua destilada-
esterilizada, para luego realizar la mezcla y aforar a 200 ml. La mayoría de los componentes de los
medios básicos son solubles en agua, los reguladores del crecimiento se diluyen en pequeños
volúmenes de bases como NaOH, KOH, ácidos como el HCl y alcohol etílico. Cada solución se
almacenó en recipientes identificados en la refrigeradora a una temperatura de 2-5°C (1, 20, 31).
6.2.2.3 Elaboración de los medios de cultivo
A. Medios de cultivo para el establecimiento de explantes de tres variedades de caña
Se tomó como base la preparación de un litro de medio, para lo cual se procedió de la

siguiente manera: en un beaker con capacidad de un litro, con un volumen de 500 ml de agua
destilada se mezclaron las soluciones concentradas del MS con sus respectivos componentes de
reactivos y reguladores del crecimiento, en el orden que se indica en el cuadro 2, utilizando
también una fuente de carbohidratos como la sucrosa a concentración de 3% y antioxidantes para
luego aforar con agua destilada hasta completar un litro.
Para la homogenización de los agregados fue necesario el uso de una barra magnética y
una estufa-agitador. Se ajustó el pH a 5.7-5.8 con NaOH y HCl al 1.0 y 0.1N, luego se agregó agar
como gelificante a 0.8%, seguidamente se disolvió dentro del medio para lo cual fue necesario el
uso de un microondas.
El medio de cultivo se distribuyó en tubos de ensayo de 150X25 mm, con 15 ml del mismo.
Se utilizó medios líquidos y sólidos, para el caso del primero fue necesario el uso de puentes de
papel filtro que sirvió de soporte al explante (15). Para la esterilización, ésta consistió en el uso de
autoclave durante 20 minutos, a una presión de 1.05 kg/cm² y a una temperatura de 121 °C.
40
Cuadro 2. Volumen de soluciones concentradas para la preparación de un litro de medio de

cultivo Murashige & Skoog (1962), para el establecimiento de los explantes in vitro.
ETAPA Para un litro de medio de

# Sol. COMPONENTES [ ]
MICROPROPAGACIÓN cultivo (ml)
1 Macronutrientes 10 X 100
2 Micronutriente “A” 1000 X 1
3 Micronutriente “B” 5000 X 200*
4 KI 1000 X 1
5 Ca Cl2 · 2H2O 10 X 100
6 Hierro 100 X 10
7 Myo-inositol 100 X 10
Iniciación o
establecimiento 8 Tiamina (0.1mg/l) 1000 X 1
9 AIA (0.5 mg/l) 250 ppm 2
10 AG3 (0.5 mg/l) 250 ppm 2
11 BAP(tratamientos)** 250 ppm 2.4
12 Cinetina (0.5 mg/l) 250 ppm 2
14 Ácido cítrico 150 ppm 0.15 grs
13 Sucrosa 3% 30 grs
15 PH 5.7-5.8
16 AIA (0.01 mg/l) 250 ppm 40*
Multiplicación o
17 BAP (tratamientos) 250 ppm **
evaluación de
tratamientos de BAP 18 Cinetina (0.1 mg/l) 250 ppm 400*
19 Ácido cítrico 150 mg/l 0.15 grs
* Volumen agregado en microlitos. 1ul = 0.001 ml.
** Diferentes Niveles de BAP.
B. Medios de cultivo para la etapa de multiplicación o evaluación de tratamientos de

BAP
Los medios de cultivo empleados para esta etapa, las sales de MS no variaron en lo
absoluto al igual que la sucrosa y el pH, la única variante fue la disminución de la auxina (AIA) y la
cinetina, el uso del GA3 no fue necesario (cuadro 2), la aplicación de ácido cítrico como
antioxidante fue imprescindible, seguidamente se aplicó los niveles de BAP para su evaluación
(Cuadro 3). El medio de cultivo fue líquido, el cual se depositó en recipientes de vidrio de 200 ml
de capacidad, aproximadamente 25 ml de medio.
41
Cuadro 3. Reguladores del crecimiento y niveles de BAP aplicados al medio de cultivo en las
tres variedades de caña de azúcar.
REGULADORES DEL CRECIMIENTO

MEDIO BASAL CONCENTRACIONES (mg/l)
AIA (mg/l) CINETINA (mg/l) BAP (mg/l)
0.00 0.01/0.10/0.00
0.15 0.01/0.10/0.15
0.30 0.01/0.10/0.30
MS 0.01 0.10
0.45 0.01/0.10/0.45
0.60 0.01/0.10/0.60
0.75 0.01/0.10/0.75
MS = Medio de cultivo de Murashige y Skoog (1962) (21).
6.3 Fase experimental
Con fines de un manejo adecuado de la investigación y debido al grado de dificultad que

presentó la micropropagación de la caña de azúcar, el estudio se desarrolló en dos fases las
cuales fueron: La fase de iniciación o el establecimiento de los explantes, básicamente consistió
en adaptar los materiales vegetales de las tres variedades al cultivo in vitro, en la fase de
multiplicación se utilizaron los explantes provenientes de la anterior fase, previo a una selección de
los brotes, para luego evaluar los niveles de 6-bencilaminopurina.
6.3.1 FASE I
En esta fase se realizó una serie de pruebas preliminares, con la finalidad de prevenir la
oxidación, la contaminación por microorganismos y sobrevivencia de los explantes: una de ellas
consistió en evaluar antibióticos y antioxidantes previo al establecimiento de los explantes al
cultivo de tejidos, utilizándose la metodología descrita por Cruz (12), para lo cual se utilizó la
combinación de ácido cítrico (0.4%) y ácido ascórbico (0.2%) como antioxidantes y Sulfato de
estreptomicina y oxitetraciclina (Agrimicyn WP 16.5%) a 0.15%, methyl-1-(butylcarbamoyl)-2-
benzimidazolecarbamato (Benomyl WP 50%) a 0.1% y cloranfenicol sulfato a 500 ppm como
antibióticos (0.4/0.2/0.15/0.1/500).
Para el control del oscurecimiento oxidativo en explantes de las tres variedades de caña de
azúcar se evaluó el efecto de antioxidantes, según estudios realizados por Cruz (12), utilizándose
el ácido cítrico en el medio de cultivo a 150 mg/l previo a la evaluación realizada con l-cisteína (10
42
mg/l) y polivinylpirrolidona (P.V.P.) (0.05%). La finalidad de esta fase, fue la de propagar el

suficiente material vegetal para su utilización en la fase II.
Se sembraron ápices meristemáticos de las variedades CP 722086, SP 792233 y PR

872080. Se utilizó el medio descrito en el cuadro 2, para el establecimiento de los explantes de las
variedades al cultivo in vitro.
6.3.1.1 Colecta del material vegetal
El material vegetal se colectó de las plantaciones y del banco de germoplasma de caña de

azúcar de las variedades en estudio. Se seleccionaron los materiales que presentaron un buen
estado fisiológico libre de enfermedades y de plagas. La parte de la planta empleada consistió del
ápice meristemático, para lo cual se cortó de 20-30 cm de la parte apical de la planta, utilizándose
una navaja previamente desinfectada en una solución de methyl-1-(butylcarbamoyl)-2-
benzimidazolecarbamato Benomyl WP 50% (0.1%), los trozos de material vegetal se sumergieron
en una solución de funguicidas-bactericidas, que luego se trasladaron al área de laboratorio, pero
antes del ingreso al mismo se eliminó la mayor parte de la envoltura vegetal que se encontraba
sucia y con algún daño superficial (1, 11, 12).
6.3.1.2 Desinfestación del material vegetal
Dentro del laboratorio se procedió a eliminar hojas superficiales y se dejó cogollos o

punteros de un tamaño de 3-5 cms, los cuales se colocaron en una solución de fungicida-
bactericida (benomyl WP 50% + agrimycin WP 16.5%) y antioxidantes para disminuir la
contaminación y prevenir tempranamente el ennegrecimiento de los explantes, los cuales se
incubaron por 24 horas a una temperatura de 5 ºC (12).
Luego el material se introdujo a una solución de alcohol etílico al 70% durante 2 minutos.
Los cogollos se transfirieron a una solución de hipoclorito de sodio al 2% durante 5 minutos, a esta
solución se le agregó 2 gotas de Polyoxyethylenesorbitan monolaurate (tween 20) y luego se agitó
con una pinza esterilizada para uniformizar el proceso de desinfestación, este reactivo actúa como
surfactante para que el proceso sea más eficiente (1, 20).
Se realizaron 3 lavados al material vegetal con agua destilada-estéril, utilizándose

43
recipientes esterilizados para tal actividad dentro de la cámara de flujo laminar. Luego el material
vegetal se introdujo en una solución de ácido cítrico a 100 ppm, esterilizado.
6.3.1.3 Disección y extracción del explante
Utilizando cajas de petri esterilizadas, pinzas y bisturíes y con 3-5 ml de ácido cítrico a 150
ppm, se procedió a la disección del explante para lo cual se eliminó las envolturas más profundas
que recubre y protegen al ápice meristemático, luego se procedió a la extracción del explante
(ápice meristemático) con dos primordios foliares, el cual consistió de un tamaño de 3-5 mm.
6.3.1.4 Siembra
Para la fase I, los explantes se sembraron en medio MS sólido, la colocación de los mismos
fue de forma invertida, es decir con la parte de crecimiento (ápice) sumergida en el medio de
cultivo. Se utilizaron tubos de ensayo de 150X25 mm, con 15 ml de medio. El tamaño del explante
fue de 3-5 mm, con dos primordios foliares (31). Luego se transfirieron los cultivos al cuarto de
incubación, se colocaron a 26±2 °C y en total oscuridad por un período de 8 días.
En el transcurso de 1 a 1½ semanas los explantes se transfirieron a medios líquidos

utilizando puentes de papel filtro como soporte para el explante, con los mismos componentes que
el medio sólido, incubándose bajo las mismas condiciones, pero con un fotoperíodo de 16 horas
luz y 8 de oscuridad, utilizando luz de gas neón controlada de aproximadamente 1000 lux y
agitación constante (12, 31).
En un lapso de tiempo los explantes produjeron brotes para lo cual fue necesario la
transferencia y división de macollas a nuevos medios. Se procedió a multiplicar los explantes de
las variedades de caña SP 792233, PR 872080 y CP 722086, con la finalidad de obtener un brote
de un tamaño de 3 cm de longitud y un grosor de 2-3 mm, para lo cual se requirió 800 a 900
cultivos y de 150 a 180 días.
6.3.2 FASE II
En dicha fase se evaluó el efecto de los niveles de BAP, el tipo de explante proveniente de
la fase I, fue seleccionado e inoculado en los diferentes niveles del regulador de crecimiento, con
44
la finalidad de encontrar la respuesta de acuerdo a las variables en estudio, dicha fase consistió de
un brote como explante y 30 días en incubación.
6.3.2.1 Siembra
Para la inoculación de los explantes en esta fase, se utilizó el medio descrito en la Cuadro 2
con sus respectivos niveles de BAP, más la aplicación de ácido naftalenacético a 0.01 mg/l como
auxina y una citocinina (cinetina a 0.1 mg/l), a la vez se utilizó el antioxidante ácido cítrico a razón
de 150 ppm en cada uno de ellos (12).
Los cultivos fueron transferidos al cuarto de incubación, el cual con una temperatura de 26
±2°C y luz de gas neón color blanca controlada de 1000 lux aproximadamente, fotoperíodo de 16
horas de luz y 8 de oscuridad, proporcionó las condiciones adecuados para la evaluación del
BAP, durante 180 días y 30 días más que duro esta segunda fase para hacer un total de 210 días
que duraron las dos fase de la micropropagación y la investigación respectiva de las variedades de
caña de azúcar CP 722086, SP 792233 y PR 872080.
6.4 Diseño experimental
Se utilizó un diseño completamente al azar, bifactorial 3 x 6, en arreglo combinatorio. Con 5

niveles de BAP más un testigo absoluto, siendo un total de 6 tratamientos y se evaluaron 3
variedades de caña de azúcar, para el caso del número de repeticiones éste fue de 10.
6.5 Modelo estadístico
Yijk = µ + Ai + Bj + ABij + Eijk
Donde:
Yijk = Variable de respuesta en la ijk-ésima unidad experimental.
µ = Efecto de la media general.
Ai = Efecto del i-ésima variedad.
Bj = Efecto de la j-ésimo nivel de BAP.
ABij = Efecto de la interacción de la i-ésima variedad, j-ésimo nivel de BAP.
Eijk = Error experimental asociado a la ijk-ésima unidad experimental.
45
6.6 Descripción de los tratamientos
Los factores a considerar en el estudio fueron las variedades de caña de azúcar: CP

722086, SP 792233 y PR 872080 y el regulador de crecimiento BAP con sus respectivos niveles
(Cuadro 4 y 5).
Cuadro 4. Factores y niveles que se evaluaron en el estudio.
FACTORES NIVELES
A1 A2 A3
A Variedades
CP 722086 SP 792233 PR 872080
B1 B2 B3 B4 B5 B6
B BAP (mg/l)
0.00 0.15 0.30 0.45 0.60 0.75
Cuadro 5. Descripción de los tratamientos.
TRATAMIENTOS
Descripción
# Código
Variedad X mg/l BAP
1 A1B1 CP 722086 X 0.00
2 A1B2 CP 722086 X 0.15
3 A1B3 CP 722086 X 0.30
4 A1B4 CP 722086 X 0.45
5 A1B5 CP 722086 X 0.60
6 A1B6 CP 722086 X 0.75
7 A2B1 SP 792233 X 0.00
8 A2B2 SP 792233 X 0.15
9 A2B3 SP 792233 X 0.30
10 A2B4 SP 792233 X 0.45
11 A2B5 SP 792233 X 0.60
12 A2B6 SP 792233 X 0.75
13 A3B1 PR 872080 X 0.00
14 A3B2 PR 872080 X 0.15
15 A3B3 PR 872080 X 0.30
16 A3B4 PR 872080 X 0.45
17 A3B5 PR 872080 X 0.60
18 A3B6 PR 872080 X 0.75
6.7 Unidad experimental
La unidad experimental fue constituida por un recipiente de vidrio resistente al proceso de

esterilización cor autoclave, con una capacidad de 200 ml y dimensiones de 105 x 50 mm, al cual
46
se le agregaron 25 ml de medio de cultivo MS líquido y su respectivo nivel de regulador del

crecimiento -bencilaminopurina- más 0.01 mg/l de AIA, 0.1 mg/l de Cinetina y 150 ppm de ácido
cítrico. El explante consistió de un brote de 3.00 cm de largo proveniente de los cultivos
establecidos, multiplicados y seleccionados de la fase I.
El total de unidades experimentales fue de 180 unidades, producto de las 3 variedades (CP
722086, SP 792233 y PR 872080), 5 niveles de BAP, más 1 testigo (0.00 mg/l de BAP) y 10
repeticiones.
6.8 Variables Respuesta
6.8.1 Número de brotes por explante
Para determinar la respuesta de los explantes a los diferentes niveles del regulador del
crecimiento BAP, se registró el número de brotes adventicios inducidos por explante, a los 15 y 30
días de realizada la siembra. Para la toma de datos fue necesario extraer la macolla (conjuntos de
brotes) de los recipientes de vidrio para cuantificarlos.
6.8.2 Longitud de brotes
Para establecer los cambios en el crecimiento de los brotes se registró la longitud de los
mismos, ésta se tomó de la base al ápice de cada brote reportándose en cm. La variable se
registró a los 15 y 30 días después de la siembra. Extraída la macolla de los recipientes se
procedió a separar cada brote para medir su longitud utilizándose una regla graduada en cm.
6.8.3 Número de hojas por brote
Para determinar la dinámica del crecimiento de los brotes se realizó el conteo del número
de hojas de los mismos por separado. Para la toma de datos ésta se realizó a los 15 y 30 días de
realizada la siembra.
6.9 Análisis de la información

El experimento se analizó de manera factorial, las tres variedades de caña de azúcar y los
niveles de BAP se investigaron de forma simultánea, ambos factores se probaron en todas las
combinaciones posibles en un arreglo factorial.
47
Para una adecuada interpretación de la información al realizar los ANDEVA, se verificó los
supuestos de la normalidad de los errores experimentales, la independencia de error y la
homogeneidad de varianzas. Para el caso de la normalidad se utilizó la prueba de Shapiro & Wilk
(normalidad de residuos), el cual es un método gráfico en donde se ploteó RES*PRES en el
programa estadístico SAS (Statistical Análisis System) y para la independencia de error, no se
efectuó prueba alguna debido a que la aleatorización al momento de manejar el experimento se
realizó de manera correcta.
Se determinó que los datos analizados no cumplieron con algunas de las suposiciones
(distribución asimétrica, correlación positiva entre las medias y las varianzas de los tratamientos),
por tal razón se procedió a la transformación de los datos originales de las variables como se
describe en el cuadro 6. El uso de esta medida correctiva fue para validar el ANDEVA e
incrementar la precisión para poder medir las diferencias entre las medias de los tratamientos y de
tal manera se generó conclusiones y recomendaciones más reales.
Cuadro 6. Tipo de transformación empleada en las variables de estudio en las tres variedades
de caña de azúcar, a los 15 y 30 días después de la siembra.
TIPO DE TRANSFORMACIÓN EMPLEADA

VARIABLE
Nombre Ecuación
Número de brotes Raíz cuadrada Y’ = √ (Y+1)
Longitud de brotes Logarítmica Y’ = Log (Y+1)
Número de hojas Raíz cuadrada Y’ = √ (Y+1)
A los datos trasformados se les realizó el análisis de varianza para cada variable de
respuesta, y una prueba de Tukey al 5% de significancia aquí los datos de las medias fueron
reconvertidas a la escala original, para determinar el mejor tratamiento. La utilidad de las
separación de medias, fue para seleccionar el o los tratamientos que dieron significancia al
análisis de varianza en base a la comparación de las medias de los tratamientos. Para dicho
ensayo, se necesitaba una severidad alta por tal razón la prueba de Tukey al 5%, detectó
deferencias entre medias altas, para declarar diferencias significativas entre los tratamientos.
48
7. DISCUSIÓN DE RESULTADOS
Esta investigación se realizó en dos fases: la primera consistió en una etapa inicial o el
establecimiento de explantes, y la etapa de multiplicación en donde se evaluó el efecto de la 6-
bencilaminopurina, en las tres variedades de caña de azúcar siendo estas: CP 722086, PR
872080 y SP 792233.
7.1 FASE I, INICIAL: PRUEBA DE ANTIOXIDANTES
Para el establecimiento de material in vitro de caña de azúcar se realizaron ensayos

preliminares, se evaluaron antioxidantes como Ácido Cítrico, L-cisteina y Polivinyilpirrolidona
(P.V.P), a una concentración de 150 mg/l, 10 mg/l y 0.05%. Para determinar el antioxidante
adecuado en las variedades de caña de azúcar se requirió de 90 días, e iniciándose a la vez su
adaptación in vitro; y de 150 a 180 días aproximadamente para obtener el explante adecuado, el
cual fue seleccionado con un tamaño de 3 cm de longitud y con una vigorosidad tomando en
cuenta al color y grosor de 2-3 mm.
El cultivo de la caña de azúcar, presentó dificultad para su propagación al cultivo de tejidos,

debido a la alta oxidación. Villalobos, (44), menciona que el problema de la oxidación fenólica se
debe a la alta tasa de respiración del tejido, provocada por la liberación de energía para realizar
actividades de la planta mediante la oxidación de algunos compuestos de carbono; lo cual induce
en la producción de compuestos fenólicos en la herida del tejido. En el medio (sólido) los
exudados producidos, son atrapados acumulándose hasta formar un área negra alrededor del
explante. De esta manera se interfiere en la absorción de nutrientes y se inhibe el crecimiento,
que por lo tanto la adaptación de los explantes en la etapa de iniciación se tornó difícil.
En el establecimiento de la variedades de caña de azúcar se observó un exudado naranja-

oscuro a café-oscuro que se difundió en el medio de cultivo que fue perjudicial para el desarrollo
de los ápices meristemáticos los cuales se necrosaron y murieron. George, (14), Villalobos, (44),
indican que este proceso está influido por enzimas monofenol oxidasa (tirosinasa) y la polifenol
oxidasa (catecol oxidasa), convirtiendo los fenoles liberados en la herida a quinonas. Por lo
anterior las variedades en estudio: CP 722086, PR 872080 y SP 792233, la fase inicial o
establecimiento fue determinante. Pérez Ponce, (31), en el estudio realizado con Saccharum
49
officinarum menciona que dicho cultivo es recalcitrante al establecimiento in vitro. Por otra parte
CENGICAÑA, menciona específicamente que la CP 722086 y PR 872080 no se han podido
propagar, debido a la presencia de oxidación que provoca prematuramente la muerte del explante,
dificultando su reproducción clonal a nivel de cultivo de tejidos.
La variedad que presentó mayor oxidación fue SP 792233, la CP 722086 con una oxidación
intermedia y la PR 872080 en menor porcentaje, por tal razón el uso de antioxidantes fue de suma
importancia, tanto en la fase de iniciación como en la fase de multiplicación, resultando el mejor
tratamiento para este caso el ácido cítrico a 150 mg/l para ambas variedades de caña de azúcar.
Lo anterior coincide con lo reportado por Cruz, (11), quien indica que el ácido cítrico a una
concentración de 150 ppm redujo considerablemente el efecto de la oxidación en las variedades
PR 872080, CP 722086 y SP 792233 siendo ésta última la de mayor oxidación al cultivo in vitro.
7.2 FASE II, DE MULTIPLICACIÓN: EVALUACIÓN DE TRATAMIENTOS DE BAP
En esta fase, se utilizó como explante brotes provenientes de la fase inicial, los cuales se
seleccionaron de una manera estándar en cuanto a tamaño y vigorosidad para la realización de la
evaluación de los tratamientos de 6-bencilaminopurina, esto en base a las variables de estudio en
las tres variedades.
Cabe mencionar que para la evaluación de las dosificaciones de BAP, fue necesario incluir
en el medio de cultivo (MS) ácido cítrico a una concentración de 150 mg/l, más una auxina (ácido
indolacético a 0.01 mg/l), suplementado con cinetina a razón de 0.1 mg/l. Pérez Ponce, (31),
mencionan que al suplementar en el medio de cultivo una auxina y cinetina con BAP existe un
efecto de sinergismo en la cual la estimulación de la brotación se incrementa; al respecto
coinciden Shurkla (36) y Suavaire (38) en donde indican que la combinación de cinetina y BAP son
importantes para la multiplicación de brotes y la incorporación de AIA al medio de cultivo produce
mayor longitud de los mismos en el cultivo de la caña.
Para la evaluación de los tratamientos y conocer la respuesta de los explantes de las

variedades de caña de azúcar, fue necesario la realización de dos etapas: una de ellas a los 15 y
a los 30 días después de realizada la siembra.
50
7.2.1 Evaluación de tratamientos de BAP, a los 15 días después de la siembra en tres

variedades de caña de azúcar
7.2.1.1 Análisis de Número de Brotes a los 15 días después de la siembra en tres

Cómo se indica en el cuadro 7, el análisis de varianza para la variable de respuesta número

de brotes, los factores: variedad y BAP es significativo, caso contrario al factor de la interacción
variedad x BAP, en la cual no existió significancia debido a que el Pr>F=0.3816 es mayor al 5% de
significancia. Además la variable número de brotes presentó un coeficiente de variación de
22.50%, en el cual los datos se establecen en un rango aceptable.
de la siembra {(con datos transformados, Y’ = √ (Y+1), CENGICAÑA 2003.
Fuente de Grados de Suma de Cuadrados

Valor de F Pr > F
variación libertad cuadrados medios
Variedad 2 25.07122952 12.53561476 35.48 0.0001 *
BAP 5 13.81216171 2.76243234 7.82 0.0001 *
Variedad x BAP 10 3.81074386 0.38107439 1.08 0.3816 NS
Error 162 57.23741394 0.35331737
Total 179 99.93154902
C.V. = 22.50%
* Diferencia significativa (5%)

NS No significativo (> 5%)
A. Número de Brotes según la variedad, en tres variedades de caña de azúcar
Con la utilización de la prueba de medias Tukey al 5%, se determinó que la variedad de

caña de azúcar PR 872080, con una media estadística de 10.04, produjo la mayor cantidad de
brotes en los diferentes niveles de BAP evaluados, las variedades CP 722086 y SP 792233 se
consideran estadísticamente iguales con 5.83 y 5.49 brotes/explante (Cuadro 8).
51
Cuadro 8. Resumen de la prueba de Tukey (α=0.05), según el factor variedad, para la

variable número de brotes.
Media número de
Variedad Agrupación de Tukey al 5% *
brotes
PR 872080 10.04 A
CP 722086 5.83 B
SP 792233 5.49 B
* No existe diferencia significativa en medias con la misma letra.
La variedad con el mayor número de brotes para los diferentes niveles de BAP, después de
los 15 días de la siembra fue la PR 872080, por tal razón se considera que la respuesta a la
aplicación de BAP al medio de cultivo produce un efecto inductor de brotes considerablemente alto
en las condiciones in vitro, sin descartar las variedades CP 722086 y SP 792233 en las cuales
dicho efecto inductor fue igual estadísticamente, pero menor en relación a la primera variedad. La
característica de la CP 722086, se evidencia en la baja proliferación y recalcitrante al cultivo in
vitro por efectos de la alta producción de compuestos fenólicos en la etapa de multiplicación. La
SP 792233 produjo un tamaño de brote sumamente pequeño por lo que poco se diferenciaron,
dificultando hasta cierto punto su cuantificación (Figura 4).
6 5 4 3 2 1
Figura 4. Efecto de los tratamientos de BAP en el número de brotes, en la variedad SP 792233 y característica
de tamaño de sus brotes, a los 15 días después de la siembra. CENGICAÑA, 2003. (1 = 0.00, 2 = 0.15,
3 = 0.30, 4 = 0.45, 5 = 0.60 y 6 = 0.75 mg/l de BAP)
52
B. Número de Brotes según el nivel de BAP, en tres variedades de caña de azúcar
De acuerdo a la prueba de Tukey al 5% (Cuadro 9), para el factor nivel de BAP, el nivel con
0.75 mg/l, presentó el mayor número de brotes. Estadísticamente los niveles 0.45, 0.30, 0.60 y
0.15 mg/l de BAP produjeron similar cantidad de brotes en las variedades de caña de azúcar en
estudio.
Cuadro 9. Resumen de la prueba de Tukey (α=0.05), según el factor nivel de BAP, para la
variable número de brotes.
Nivel de BAP Media número de

Agrupación de Tukey al 5%
(mg/l) brotes
0.75 8.95 A
0.45 8.19 A B
0.30 7.26 A B
0.60 7.22 A B
0.15 6.15 B C
0.00 4.55 C
Por otra parte el nivel que presentó la menor media en la brotación fue el tratamiento 0.00
mg/l siendo el testigo, sin aplicación de BAP al medio de cultivo, por tal razón no se observó
estimulación a la inducción de brotes en los explantes para el cultivo in vitro de la caña de azúcar,
como lo demuestra la media de 4.55 brotes.
7.2.1.2 Variable longitud de brotes a los 15 días después de la siembra en tres

El análisis de varianza para la variable de respuesta longitud de brotes (Cuadro 10), mostró
diferencia significativa para los factores: variedad, BAP y la interacción variedad x BAP. El
coeficiente de variación fue el 10.05%, el cual indica que el manejo del experimento para esta
variable fue adecuado.
53
de la siembra {(con datos transformados, Y’ = Log (Y+1)}, CENGICAÑA 2003.

Valor de F Pr > F
Variedad 2 1.42631030 0.71315515 44.69 0.0001 *
BAP 5 0.51112000 0.10222400 6.41 0.0001 *
Variedad x BAP 10 0.47953240 0.04795324 3.01 0.0017 *
Error 162 2.58489329 0.01595613
Total 179 5.00185599
C.V. = 10.05%
A. Variable longitud de brotes según la interacción variedad x BAP, a los 15 días

después de la siembra en tres variedades de caña de azúcar
La prueba de Tukey correspondiente a la interacción variedad x BAP (Cuadro 11) muestra

que los tratamientos PR 872080x0.00 mg/l, SP 792233x0.00 mg/l, PR 872080x0.45 mg/l y PR
872080x0.60 mg/l, produjeron la mayor longitud de brotes de las variedades de caña de azúcar.
Los tratamientos PR 872080x0.15 mg/l, PR 872080x0.30 mg/l, PR 872080x0.75 mg/l, CP
722086x0.00 mg/l, SP 792233x0.15 mg/l, CP 722086x0.30 mg/l, SP 792233x0.75 mg/l, CP
722086x0.15 mg/l, CP 722086x0.45 mg/l, CP 722086x0.60 mg/l, SP 792233x0.60 mg/l, SP
792233x0.30 mg/l y CP 722086x0.75 mg/l, produjeron similar longitud de brotes; el tratamiento SP
792233x0.45 mg/l fue el presentó la menor media 1.20 cms, y por lo consiguiente la menor
longitud de brotes de todo el estudio.
En la variedad PR 872080 y SP 792233, sin la aplicación de BAP (0.00 mg/l) que

corresponde al testigo se produjo la mayor longitud de brotes, al igual que los niveles 0.45 y 0.60
mg/l de BAP para el caso de la variedad PR 872080.
54
para la variable longitud de brotes.
Tratamiento Media longitud de

Variedad mg/l BAP brotes (cm)
PR 872080 0.00 2.62 A
SP 792233 0.00 2.58 A
PR 872080 0.45 2.58 A
PR 872080 0.60 2.57 A
PR 872080 0.15 2.31 A B
PR 872080 0.30 2.25 A B C
PR 872080 0.75 2.20 A B C
CP 722086 0.00 1.91 A B C D
SP 792233 0.15 1.86 A B C D
CP 722086 0.30 1.78 A B C D E
SP 792233 0.75 1.50 B C D E
CP 722086 0.15 1.47 C D E
CP 722086 0.45 1.45 C D E
CP 722086 0.60 1.40 D E
SP 792233 0.60 1.40 D E
SP 792233 0.30 1.35 D E
CP 722086 0.75 1.34 D E
SP 792233 0.45 1.20 E
a. Descripción de la variedad según la interacción variedad x BAP para la variable

longitud de brotes, a los 15 días después de la siembra, en tres variedades de caña
de azúcar
i. Variedad PR 872080, según la interacción variedad x BAP a los 15 días después de la

siembra, en tres variedades de caña de azúcar
Según el análisis estadístico de la prueba de medias de el cuadro 11, se observa para el

caso de esta variedad en el nivel 0.00 mg/l (testigo) sin la aplicación de BAP y los niveles 0.45 y
0.60 mg/l de BAP produjeron igual longitud de brotes, por tal razón al aplicar o no el regulador de
crecimiento al medio de cultivo, estadísticamente se tiene el mismo efecto en dicha variable.
En relación a los tratamientos evaluados 0.15, 0.30 y 0.75 mg/l de BAP, estadísticamente
son considerados intermedios para el caso de la longitud de los brotes. Con la aplicación del
regulador BAP y al elevar los niveles existe una disminución en la longitud de brotes, como se
evidencia en los niveles anteriormente descritos. Por tal razón, la longitud es afectada
55
negativamente por las citocininas, por que al existir mayor formación de brotes la longitud es
menor, como se evidencia en el nivel con 0.75 mg/l de BAP.
6 5 4 3 2 1
Figura 5. Efecto de los tratamientos de BAP en la longitud de los brotes, en la variedad PR 872080, a los 15
días después de la siembra. CENGICAÑA, 2003. (1 = 0.00, 2 = 0.15, 3 = 0.30, 4 = 0.45, 5 = 0.60 y 6 =
0.75 mg/l de BAP)
ii. Variedad SP 792233, según la interacción variedad x BAP a los 15 días después de la
En el cuadro 11, se observa tres diferentes agrupaciones, para el caso de la SP 792233,

en donde el tratamiento con 0.00 mg/l de BAP, produjo una mayor longitud de brotes para dicha
variedad, éste sin la aplicación de BAP al medio de cultivo (testigo), y con media de 2.58 cm/brote.
Para el caso de los tratamientos con los niveles 0.15, 0.75, 0.60 y 0.30 mg/l de BAP,
estadísticamente son considerados iguales para la longitud de los brotes evaluados, según se
indica en las medias 1.86, 1.50, 1.40 y 1.35 cm/brote.
Se considera al tratamiento con un nivel de 0.45 mg/l de BAP, el cual se determinó como el
de menor respuesta a esta variable, y en base a su media de 1.20, siendo la más baja en el
experimento.
56
iii. Variedad CP 722086, según la interacción variedad x BAP a los 15 días después de la
De acuerdo a la prueba de Tukey, la interacción variedad x BAP, aplicada a los datos

obtenidos (Cuadro 11) de la variedad de caña de azúcar CP 722086, la longitud de brotes
disminuyó en relación al aplicar o no aplicar el regulador de crecimiento BAP al medio de cultivo, lo
cual estadísticamente lo indican los tratamientos con los niveles 0.00, 0.30, 0.15, 0.45, 0.60 y 0.75
mg/l de BAP. Con estos datos y según la prueba de medias son considerados estadísticamente
intermedios para la variable longitud de brotes, a los 15 días después de la siembra del presente
experimento. Pero, al analizar detenidamente el comportamiento de los tratamientos, observamos
que, con niveles del regulador del crecimiento BAP altos, influyó en el poco crecimiento en
longitud de los brotes.
Podemos observar que el nivel 0.00 mg/l de BAP, con una media estadística de 1.91 la
longitud de brotes fue mayor, esto comparado con el nivel con una dosis de 0.75 mg/l de BAP en
el cual se evidencia la disminución de dicha variable.
La bencilaminopurina induce a la proliferación de brotes en una diversidad de cultivos, en

particular la caña de azúcar, por lo que su efecto fue evidente en la disminución de la longitud de
brotes en la variedad CP 722086, observándose en los niveles 0.15, 0.30, 0.45, 0.6 y 0.75 mg/l de
BAP del presente estudio. George, (14), indica que las citocininas reducen la dominancia apical en
brotes de las plantas, fortaleciendo el crecimiento de los brotes laterales, menciona a la vez que
cuando el porcentaje de citocinina es alto, existe la proliferación de brotes pequeños y disminuye
considerablemente la elongación.
7.2.1.3 Variable número de hojas, a los 15 días después de la siembra, en tres

Según el análisis de varianza (Cuadro 12), existieron diferencias estadísticas significativas

entre los factores variedad y BAP, al igual que la interacción variedad x BAP. La variable número
de hojas presentó un coeficiente de variación de 4.10%, a los 15 días después de la siembra,
estadísticamente se presentó homogeneidad en los datos para dicha variable.
57
Podemos observar que para las tres variedades de caña de azúcar: PR 872080, CP 722086 y SP
792233 el número de hojas fue constante en un rango de 4.07 a 5.02 hojas por brote.
Cuadro 12. Análisis de varianza para la variable número de hojas, a los 15 días después de
la siembra {(con datos transformados, Y’ = √(Y+1)}, CENGICAÑA 2003.

Valor de F Pr > F
Variedad 2 0.19157760 0.09578880 12.44 0.0001 *
BAP 5 0.14174900 0.02834980 3.68 0.0035 *
Variedad x BAP 10 0.52918482 0.05291848 6.87 0.0001 *
Error 162 1.24695678 0.00769726
Total 179 2.10946820
C.V. = 4.10%
A. Variable número de hojas según la interacción variedad x BAP
Por medio de la prueba de Tukey (Cuadro 13), se agrupó a las variedades PR 872080, SP
792233 y CP 722086 en base al número de hojas, éstas a los 15 días después de la siembra, las
cuales presentaron diferencia en los niveles del regulador de crecimiento BAP. En el primero, el
tratamiento en donde la variedad PR 872080 en el testigo (0.00 mg/l de BAP) produjo 5.02
hojas/brote.
En una segunda agrupación existe la combinación de varios tratamientos de las tres

variedades por tal razón fue relevante la discusión de cada una por separado, esto basado en el
análisis de la prueba de Tukey, y a la vez como una tercera agrupación produciendo la PR 872080
el menor número de hojas (4.07), en el nivel más alto de BAP con 0.75 mg/l.
a. Descripción de las variedades según la interacción variedad x BAP para la variable

número de hojas, a los 15 días después de la siembra
i. Variedad PR 872080, según la interacción variedad x BAP, para la variable número de

hojas a los 15 días después de la siembra, en tres variedades de caña de azúcar
Según la prueba de Tukey al 5% (Cuadro 13), ésta variedad en el tratamiento 0.00 mg/l,
produjo mayor número de hojas, según indica la media 5.02 hojas/brote, cuyo valor es el más alto
58
del resto de tratamiento evaluados, por tal razón ese mismo nivel, es considerado hasta cierto
punto como el de mayor diferenciación de hojas para esta variable. Caso contrario, se indica con
el tratamiento en donde el nivel con 0.75 mg/l de BAP, siendo la concentración más alta indujo
menor número de hojas, y a la vez se fundamenta con la media 4.07 hojas/brote. Por tal razón al
existir mayor concentración BAP en el medio de cultivo, la diferenciación de hojas se reduce y por
lo tanto la cantidad de las mismas.
para la variable número de hojas.
Tratamiento Media número de

Variedad mg/l BAP hojas
PR 872080 0.00 5.02 A
CP 722086 0.75 4.94 A B
CP 722086 0.45 4.91 A B
PR 872080 0.15 4.90 A B
CP 722086 0.60 4.86 A B
SP 792233 0.15 4.73 A B C
SP 792233 0.30 4.71 A B C D
CP 722086 0.00 4.71 A B C D
CP 722086 0.30 4.62 A B C D E
CP 722086 0.15 4.61 A B C D E
PR 872080 0.30 4.58 A B C D E
SP 792233 0.45 4.58 A B C D E
SP 792233 0.60 4.37 B C D E
PR 872080 0.45 4.26 C D E
SP 792233 0.00 4.20 C D E
SP 792233 0.75 4.19 C D E
PR 872080 0.60 4.16 D E
PR 872080 0.75 4.07 E
Los tratamientos 0.15, 0.30, 0.45 y 0.60 mg/l de BAP, con las medias 4.90, 4.58, 4.26 y
4.16 hojas/brote, se consideran iguales en cuanto a la cantidad de hojas formadas.
Estadísticamente estos tratamientos producen un número de hojas de una magnitud intermedia
para dicha variedad, en la fase de multiplicación o evaluación de los tratamientos de BAP, a los 15
días después de la siembra.
59
ii. Variedad SP 792233, según la interacción variedad x BAP, para la variable número de
hojas a los 15 días después de la siembra, en tres variedades de caña de azúcar
Para la variedad SP 792233, al utilizar la prueba de medias de Tukey, y como se indica en

el cuadro 13, los tratamientos 0.15, 0.30, 0.45, 0.60, 0.00 y 0.75 mg/l de BAP, con las medias
4.73, 4.71, 4.58, 4.37, 4.20 y 4.19 hojas/brote, fueron estadísticamente iguales e intermedias en
toda la fase que duró el experimento a los 15 días después de la siembra a la variable número de
hojas.
Al analizar el tratamiento de 0.15 mg/l de BAP el cual fue alto en número de hojas 4.73
hojas/brote según la media, al compararlo con el tratamiento de 0.75 mg/l de BAP el cual produjo
4.19 hojas/brote, siendo para este caso el de menor diferenciación para dicha variable. De lo
anterior se deduce que al elevar los niveles de BAP, se induce a un incremento de brotes, que por
lo tanto la diferenciación de hojas se reduce, tal como lo indicó el análisis estadístico.
Dicha variedad de caña de azúcar, produjo la menor cantidad de hojas en un rango

aproximado de 4.73 a 4.19 hojas/brote, lo mismo se debe a que el tamaño de sus brotes es
sumamente pequeño como se observa en la figura 4, que por tal razón la diferenciación de hojas
se reduce dificultando la toma de datos, como se puede observa en los tratamientos 0.45, 0.60 y
0.75 mg/l de BAP de la misma.
iii. Variedad CP 722086, según la interacción variedad x BAP a los 15 días después de la
Para el caso de la variedad de caña de azúcar CP 722086, los tratamientos evaluados 0.75,
0.45, 0.60, 0.00, 0.30 y 0.15 mg/l de BAP, estadísticamente son iguales, y a la vez de intermedia
producción en cuanto al número de hojas en el experimento, a los 15 días después de la siembra,
según lo indicó la prueba de medias de Tukey con 5% de significancia (Cuadro 13).
Podemos indicar que el tratamiento 0.75 mg/l de BAP, es el que tiene la media más alta con
4.94 hojas/brote para dicha variedad de caña de azúcar, y por lo tanto el nivel de BAP más alto.
Por tal razón el incremento del regulador de crecimiento BAP en el medio de cultivo, indujo a una
mayor producción de hojas para esta variedad, contrario, a los tratamientos evaluados para dicha
60
variable en las variedades PR 872080 y SP 792233, en donde los niveles elevados produjeron
menor número de hojas/brote, lo cual se debió a la poca diferenciación de hojas en los brotes.
Para un caso muy particular, como es la variedad CP 722086, al existir más proliferación de
brotes, el número de hojas tiende a incrementar, por lo tanto los niveles de bencilaminopurina
como el 0.75, 0.45 y 0.60 mg/l de BAP, producen mayor división celular en el explante y por ende
la inducción de la brotación es estimulada, es decir que al existir más brotes se incrementa el
número de hojas por unidad experimental, lo cual se confirma con las medias estadísticas 4.94,
4.91 y 4.86 hojas/brote del presente experimento.
7.2.2 Evaluación de tratamientos de BAP, a los 30 días después de la siembra en tres

Para realizar la cuantificación de datos de las variables (número de brotes, longitud de

brotes y número de hojas/brote) de estudio en las variedades CP 722086, SP 792233 y PR
872080, y conocer la respuesta de los explantes a los diferentes tratamientos de
bencilaminopurina, se hizo necesario la evaluación de una segunda etapa, la cual se definió a los
30 días después de la siembra; se utilizó como explante un brote proveniente de la fase inicial, con
un tamaño de 3 cms y grosor de 2-3 mm. El medio de cultivo se suplementó con la aplicación de
los tratamientos de BAP, más cinetina a razón de 0.1ppm y ácido indolacético (AIA) a 0.01 ppm
como auxina y 150 ppm de ácido cítrico como antioxidante.
En la misma fase de multiplicación, los explantes desarrollaron su máximo potencial de

brotación lateral, lo cual dependió del nivel de BAP y del tiempo que permanecieron en el medio
de cultivo. Con la finalidad de evaluar la bencilaminopurina en el presente estudio, se observó el
comportamiento del explante en las tres variedades de caña de azúcar al final de los 30 días
después de realizada la siembra.
7.2.2.1 Variable Número de Brotes, a los 30 días después de la siembra en tres variedades
de caña de azúcar
Para el caso de esta variable, después de los 30 días de realizada la siembra, los
resultados obtenidos en el análisis de varianza, se puede observar que existe diferencia
significativa para los factores: variedad y BAP, al igual que la interacción variedad x BAP, debido a
61
que el Pr>F=0.0031 es menor al 5% de significancia (Cuadro 14), por lo que se procedió a realizar
la prueba de Tukey (Cuadro 15) a la interacción variedad x BAP, siendo para éste caso el factor
de interés.
Con lo referente al coeficiente de variación que fue 22.96%, se puede indicar que la
variable número de brotes presentó heterogeneidad como era de esperarse en cada uno de sus
valores de las tres variedades de caña de azúcar, el rango para ésta variable va de 4.32 a 24.90
brotes, a los 30 días después de la siembra.
de la siembra {(con datos transformados, Y’ = √ (Y+1)}, CENGICAÑA 2003.

Valor de F Pr > F
Variedad 2 32.83316451 16.41658226 24.01 0.0001 *
BAP 5 106.10997328 21.22199466 31.04 0.0001 *
Variedad x BAP 10 19.22841201 1.92284120 2.81 0.0031 *
Error 162 110.74460742 0.68360869
Total 179 268.91615722
C.V. = 22.96%
* Diferencias significativas (5%)
A. Variable número de brotes/explante, según la interacción variedad x BAP, a los 30

días después de la siembra en tres variedades de caña de azúcar
De acuerdo a la prueba de Tukey, existe la separación en tres grupos de los tratamientos

aplicados, presentando en el primer grupo a los tratamientos SP 792233x0.75 mg/l, PR
872080x0.75 mg/l y PR 872080x0.60 los cuales mostraron el mayor número de brotes/explante en
dos de las tres variedades de caña en estudio. Siendo SP 792233 y PR 872080, con los niveles de
0.75 y 0.60 mg/l de BAP y con 24.90, 23.70 y 23.20 brotes/explante similares estadísticamente,
(cuadro 15).
Como un segundo grupo aparecen los tratamientos PR 872080x0.30 mg/l, SP 792233x0.60

mg/l, PR 872080x0.45 mg/l, SP 792233x0.45 mg/l, PR 872080x0.15 mg/l, CP 722086x0.75 mg/l,
CP 722086x0.60 mg/l, CP 722086x0.30 mg/l, CP 722086x0.45 mg/l, SP 792233x0.15 mg/l, SP
792233x0.30 mg/l, CP 722086x0.15 mg/l y PR 872080x0.00 mg/l de BAP, sin ninguna diferencia
62
estadísticamente significativa con lo que respecta al número de brotes, aquí las tres variedades de
caña de azúcar SP 792233, PR 872080 y CP 722086 estadisticamente tienen en mismo efecto en
algunos de los niveles de BAP aplicados al medio de cultivo.
Por último los tratamientos SP 792233x0.00 mg/l y CP 722086x0.00 mg/l de BAP que
presentaron las menores medias y por lo consiguiente la menor cantidad de brotes, lo cual se
debe a que son los tratamientos sin aplicación alguna de BAP en el medio de cultivo.
Cuadro 15. Resumen de la prueba de Tukey (α=0.05), según la interacción variedad x BAP,
para la variable número de brotes, a los 30 días después de la siembra.

Variedad mg/l BAP brotes
SP 792233 0.75 24.90 A
PR 872080 0.75 23.70 A
PR 872080 0.60 23.20 A B
PR 872080 0.30 19.90 A B C
SP 792233 0.60 19.60 A B C
PR 872080 0.45 19.30 A B C
SP 792233 0.45 17.50 A B C D
PR 872080 0.15 16.40 A B C D E
CP 722086 0.75 12.70 B C D E
CP 722086 0.60 12.20 C D E F
CP 722086 0.30 11.11 C D E F G
CP 722086 0.45 10.44 C D E F G
SP 792233 0.15 9.15 D E F G
SP 792233 0.30 8.01 E F G
CP 722086 0.15 7.97 E F G
PR 872080 0.00 5.00 F G
SP 792233 0.00 4.40 G
CP 722086 0.00 4.32 G
a. Descripción de las variedades según la interacción variedad x BAP para la variable

número de brotes, a los 30 días después de la siembra
i. Variedad PR 872080, según la interacción variedad x BAP para la variable número de

brotes, a los 30 días después de la siembra
De acuerdo al análisis realizado (Cuadro 15), los tratamientos 0.75 mg/l y 0.60 mg/l de BAP
con una media de 23.70 y 23.20 brotes por explantes indican que son los mejores, por lo tanto,
63
con fines de propagación in vitro se puede utilizar cualquiera de los dos. Tienen igual efecto para
dicha variedad, pero económicamente el tratamiento 0.60 mg/l de BAP se considera adecuado
para la micropropagación.
Para el caso de los tratamientos 0.30 mg/l, 0.45 mg/l, 0.15 mg/l y 0.00 mg/l de BAP, con las
medias 19.90, 19.30, 16.40, 5.00 brotes/explante, produjeron una cantidad similar de brotes por
explante, pero bajo con respeto a uno de los mejores tratamientos (0.60 mg/l de BAP).
Analizando detalladamente el comportamiento de los tratamientos en este rango estadístico

de 5.00 a 19.90 brotes/explante, observamos que el nivel que produce más brotes es el 0.45 mg/l
de BAP y en caso contrario el tratamiento testigo sin la aplicación de BAP fue bajo con respecto a
esta variable a los 30 días después de la siembra. Pérez Ponce, (31), al evaluar la
micropropagación de caña de azúcar obtuvo hasta 10.94 brotes/planta, en el nivel más alto de
BAP a razón de 0.30 mg/l a las cuatro semanas en un medio MS más cinetina. Esto coincide con
lo recomendado por Sauvaire y Vasil (38, 43), que al añadir al medio de cultivo la citocinina “BAP“
a razón de 0.10 mg/l e incrementar la dosis a 0.624 mg/l se obtenía el mayor número de brotes
siempre en combinación con una auxina.
ii. Variedad SP 792233, según la interacción variedad x BAP para la variable número de
Por medio de la prueba de Tukey (Cuadro 15), el tratamiento con el nivel de 0.75 mg/l de
BAP fue el que produjo mayor número de brotes por explante y constituye el mejor. Dicha prueba
mostró diferencia en los diferentes niveles de BAP con respecto a ésta variable en la variedad SP
792233 a los 30 días de realizada la siembra. Se observa que el mejor tratamiento se obtuvo con
una media de 24.90 brotes/explante en el nivel 0.75 mg/l, con 20.50 brotes/explante más que el
testigo, éste sin la aplicación de BAP al medio de cultivo el cual se considera como el de menor
inducción a la brotación.
El análisis permitió la agrupación de los tratamientos, en los cuales se puede ver la

diferencia significativa entre el mejor de los tratamientos como es el caso del nivel con 0.75 mg/l y
entre un segundo grupo los tratamientos con los niveles de 0.60, 0.45, 0.15 y 0.30 mg/l de BAP y
medias de 19.60, 17.50, 9.15 y 8.01 brotes/explante, y por último con una mínima respuesta, el
tratamiento testigo, esto basado en la ausencia del inductor de la brotación.
64
La SP 792233 produjo un tamaño de brote sumamente pequeño y frágil en el nivel de 0.75

mg/l de BAP lo cual se considera una característica muy particular, pero al continuar con la fase de
enraizamiento para realizar la aclimatación de los explantes, se corre el riesgo de una baja
sobrevivencia, esto debido a la alta brotación que se obtuvo con el nivel 0.75 mg/l BAP, los cuales
no son adecuados para iniciar una tercera fase de micropropagación.
iii. Variedad CP 722086, según la interacción variedad x BAP para la variable número de
Con lo que respecta a esta variedad, la proliferación de brotes fue intermedia sobre la base
de ésta segunda etapa, a pesar de duplicar el tiempo de permanencia en el medio de cultivo (30
días en total), y fue baja con respecto a las variedades PR 872080 y SP 792233, como a la vez
comparando el efecto del mismo tratamiento de BAP a una concentración de 0.75 mg/l, en donde
éstas variedades indujeron el doble de brotación que la CP 722086 lo cual se evidencia en las
medias que aparecen en el cuadro 15.
3 2 1
4
5
6
Figura 6. Efecto de los tratamientos de BAP en la variedad CP 722086, se observa la brotación, la longitud de
los brotes y las hojas diferenciadas, a los 30 días después de la siembra, CENGICAÑA, 2003. (1=
0.00 mg/l, 2 = 0.15 mg/l, 3 = 0.30 mg/l, 4 = 0.45 mg/l, 5 = 0.60 mg/l y 6 = 0.75 mg/l de BAP)
65
Analizando los tratamientos de dicha variedad el nivel 0.75 mg/l, fue el que más indujo a la
brotación con una media de 12.70 brotes/explante y el menor para éste caso el nivel 0.15 mg/l,
pero dichos tratamientos son considerados iguales agrupadamente en cuanto a esta variable
(Cuadro 15). Con respecto al tratamiento 0.00 mg/l de BAP, fue el menos adecuado en la
inducción de brotes con una media de 4.32, la cual es la más baja de todo el experimento.
7.2.2.2 Variable longitud de brotes, a los 30 días después de la siembra, en tres

En el análisis de varianza para la variable longitud de brotes, a los 30 días después de la

siembra de las variedades en estudio, los factores variedad y BAP, y a la vez la interacción
variedad x BAP fue significativo al ANDEVA, debido a que los valores de Pr>F=0.0001 y
Pr>F=0.0005 de los factores son menores al 5% de significancia (Cuadro 16).
de la siembra {(con datos transformados, Y’ = Log (Y+1)}, CENGICAÑA 2003.

Valor de F Pr > F
Variedad 2 2.81408408 1.40704204 104.49 0.0001 *
BAP 5 1.78678403 0.35735681 26.54 0.0001 *
Variedad x BAP 10 0.45535220 0.04553522 3.38 0.0005 *
Error 162 2.18147720 0.01346591
Total 179 7.23769752
C.V. = 9.06%
Se hace relevante el análisis y la discusión de la interacción variedad x BAP, lo cual se

debe a que este factor interactúa con cada una de las variedades y los diferentes niveles de BAP.
Además el coeficiente de variación para dicha variable fue de 9.06%, lo cual estadísticamente se
considera aceptable debido a que los datos se comportaron de una manera homogénea
indistintamente de la variedad de caña de azúcar.
66
A. Variable longitud de brotes según la interacción variedad x BAP, a los 30 días

después de la siembra, en tres variedades de caña de azúcar
Por medio de la prueba de Tukey al 5% aplicada a los datos, se puede observar que la
misma nos agrupa en tres distintos grupos de longitudes, siendo el tratamiento 0.00 mg/l de BAP
con la mayor longitud de brotes de las tres variedades de caña en estudio, los cuales
corresponden a las variedades PR 872080 y CP 722086. En ambas variedades los tratamientos
testigo sin la aplicación de BAP, estadísticamente tienen una media de 4.36 y 3.12 cms/brote.
Como un segundo grupo integrado por los tratamientos PR 872080x0.15 mg/l, PR

872080x0.30 mg/l, PR 872080x0.45 mg/l, CP 722086x0.15 mg/l, PR 872080x0.60 mg/l, PR
872080x0.75 mg/l, SP 792233x0.00 mg/l, CP 722086x0.60 mg/l, CP 722086x0.45 mg/l, SP
792233x0.30 mg/l, CP 722086x0.75 mg/l, CP 722086x0.30 mg/l y SP 792233x0.15 mg/l de BAP,
con las medias estadísticas 2.50, 2.35, 2.35, 2.21, 2.17, 2.11, 2.10, 2.05, 1.97, 1.84, 1.83, 1.82,
1.34 cm/brote, produjeron la misma longitud de brotes, por lo que estadísticamente se consideran
iguales. Para el caso de los tratamientos con los resultados más bajos destaca la variedad SP
792233 en donde los niveles de BAP 0.45 mg/l, 0.60 mg/l y 0.75 mg/l produjeron la menor longitud
de brotes, como se evidencia en el cuadro 17.
a. Descripción de las variedades según la interacción variedad x BAP, para la variable

longitud de brotes, a los 30 días después de la siembra
i. Variedad PR 872080, según la interacción variedad x BAP, para la variable longitud

de brotes, a los 30 días después de la siembra
En lo referente a esta variable (Cuadro 17), se indica que el tratamiento 0.00 mg/l, sin la
aplicación del regulador de crecimiento BAP, produjo una de las medias más altas, 4.36 cm/brote
de todo el experimento a los 30 días después de la siembra, mientras que con longitudes
intermedias los tratamientos 0.15 mg/l, 0.30 mg/l, 0.45 mg/l, 0.60 mg/l y 0.75 mg/l de BAP y las
medias 2.50, 2.35, 2.35, 2.17 y 2.11 cm/brote las cuales nos indican la forma proporcional y
descendente de la longitud de los brotes de la variedad PR 872080, en este caso se hace notorio
el efecto de los niveles de BAP en dicha variable.
67
Cuadro 17. Resumen de la variable longitud de brotes según la interacción variedad x

BAP, a los 30 días después de la siembra.
Tratamiento Media longitud de
Variedad Mg/l BAP brotes (cm)
PR 872080 0.00 4.36 A
CP 722086 0.00 3.12 A B
PR 872080 0.15 2.50 B C
PR 872080 0.30 2.35 B C
PR 872080 0.45 2.35 B C
CP 722086 0.15 2.21 B C
PR 872080 0.60 2.17 B C
PR 872080 0.75 2.11 B C
SP 792233 0.00 2.10 B C
CP 722086 0.60 2.05 C
CP 722086 0.45 1.97 C D
SP 792233 0.30 1.84 C D
CP 722086 0.75 1.83 C D
CP 722086 0.30 1.82 C D
SP 792233 0.15 1.34 D E
SP 792233 0.45 1.10 E
SP 792233 0.60 0.92 E
SP 792233 0.75 0.90 E
El efecto de los niveles de BAP en la PR 872080, fue notorio, es decir que la misma es muy
sensible a los cambios de nivel de BAP, de todo el experimento. Presentó con 0.75 mg/l de BAP
una de las medias más altas en la producción de brotes y disminuyendo en el tratamiento testigo,
lo anterior confirma que el testigo sin la aplicación de BAP produjo mayor diferenciación de hojas y
que al existir BAP en el medio de cultivo esta disminuye debido a la proliferación de brotes, ya
que a mayor brotación menor diferenciación de hojas.
ii. Variedad SP 792233, según la interacción variedad x BAP, para la variable longitud
En el cuadro 17, se presenta la prueba de medias según Tukey al 5% de significancia para

dicha variedad de caña de azúcar, se observa que la longitud de brotes disminuye
significativamente con respecto a las variedades PR 872080 y CP 722086, como se indica en los
tratamientos 0.00 mg/l, 0.30 mg/l y 0.15 mg/l de BAP, los cuales la magnitud de sus medias 2.10,
1.84 y 1.34 cm/brote se redujo a una intermedia longitud en todo el estudio, esto a los 30 días
después de la siembra y a la vez se consideran estadísticamente igual.
68
Dicha variedad presenta una tendencia definida a disminuir la longitud en los tratamientos
0.45 mg/l, 0.60 mg/l y 0.75 mg/l de BAP, los cuales presentan las medias de 1.10, 0.92 y 0.90
cm/brote. Es relevante mencionar el efecto que produce el BAP en la longitud de brotes, debido a
que los niveles más altos de regulador disminuye la longitud. Podemos indicar que la
característica que presentó esta variedad en el transcurso del estudio fue de producir brotes
sumamente pequeños, delgados y aglomerados, lo cual se evidenció en la mayor proliferación de
brotes del resto de variedades y como también de producir una longitud no adecuada para la
etapa de enraizamiento (figura 4).
La longitud de brotes, es una variable que no presenta relevancia dentro del estudio en la
fase de multiplicación, ya que se puede mejorar en las siguientes fases de subcultivo, esto se
logra reduciendo el nivel de BAP a manera de disminuir la inducción multiplicativa y de tal manera
obtener mayor desarrollo de los brotes.
iii. Variedad CP 722086, según la interacción variedad x BAP, para la variable longitud
La prueba de Tukey realizada a los datos obtenidos de la variedad CP 722086 (Cuadro 17),
agrupa los resultados en dos los cuales estadísticamente difieren entre sí. En el primer
agrupamiento se determinó que el tratamiento sin la aplicación del BAP presentó la media más
alta la cual fue de 3.12 cm/brote, a los 30 días después de la siembra. Como era de esperarse, sin
la aplicación del regulador de crecimiento, la longitud de los escasos brotes fue alta, y como una
segunda agrupación se concentran los tratamientos 0.15 mg/l, 0.60 mg/l, 0.45 mg/l, 0.75 mg/l y
0.30 mg/l de BAP, los cuales se ubican entre una intermedia longitud, según lo indican las medias
2.21, 2.05, 1.97, 1.83 y 1.82 cm/brote, en dichos tratamientos existió la disminución del largo de
los brotes en todo el experimento, por tal razón cuando los niveles de BAP fueron altos existió un
incremento en la brotación, pero se redujo la longitud.
Con fines de una multiplicación masiva esta variable es poco relevante, lo que interesa es
una mayor brotación ya que se incrementaría la tasa de multiplicación para dicha variedad de
caña de azúcar y esto se logra con altos niveles de BAP en el medio de cultivo. En la presente
investigación se evidenció la escasa respuesta que presentó dicha variedad a los tratamientos con
BAP en la proliferación de brotes. Para la longitud de brotes en el tratamiento testigo se obtuvo un
69
tipo de brote sumamente vigoroso, alto y adecuado para la etapa de enraizamiento y posterior
aclimatación, con estas características se garantiza la sobrevivencia en invernadero.
7.2.2.3 Variable número de hojas, a los 30 días después de la siembra en tres variedades
de caña de azúcar
Como se indica en el cuadro 18, el análisis de varianza para la variable de respuesta

número de hojas, determinó diferencia significativa entre los factores variedad y en la interacción
variedad x BAP. El factor BAP fue no significativo. Para la realización de la discusión de los
resultados de la variable número de hojas fue relevante el análisis de la interacción variedad x
BAP, debido a que el mismo es menor al grado de significancia, y a la vez que se detectó efectos
diferenciales de los niveles de BAP sobre las variedades.
Cuadro 18. Análisis de varianza para la variable número de hojas, a los 30 días después de
la siembra {(con datos transformados, Y’ = √ (Y+1)}, CENGICAÑA 2003.

Valor de F Pr > F
Variedad 2 0.09749716 0.04874858 9.72 0.0001 *
BAP 5 0.03986643 0.00797329 1.59 0.1658 NS
Variedad x BAP 10 0.43589722 0.04358972 8.69 0.0001 *
Error 162 0.81259715 0.00501603
Total 179 1.38585795
C.V. = 3.51%
NS No significativo (> 5%)
El coeficiente de variación que presentó esta variable a los 30 días después de la siembra
fue 3.51%, estadísticamente indica homogeneidad en los datos obtenidos por lo que se considera
un manejo adecuado del estudio, además podemos decir que para la variable número de hojas en
las tres variedades de caña de azúcar fue constante en un rango de 3.60 a 4.60 hojas por brote.
A. Variable número de hojas según la interacción variedad x BAP, a los 30 días después
de la siembra en tres variedades de caña de azúcar
Con el uso de la prueba de Tukey y como lo indica el cuadro 19, se determinó para la
variable número de hojas de cada una de las variedades de caña de azúcar, el mayor número de
70
hojas por brotes, destacándose los tratamientos SP 792233x0.75mg/l, PR 872080x0.00 mg/l y CP

722086x0.45 mg/l de BAP, con las medias las cuales presentan similar cantidad de hojas por
brote: 4.60, 4.30 y 4.30/explante.
Se presenta una agrupación más con los tratamientos PR 872080x0.30 mg/l, CP

722086x0.60 mg/l, CP 722086x0.00 mg/l, CP 722086x0.30 mg/l, CP 722086x0.15 mg/l, CP
722086x0.75 mg/l, PR 872080x0.15 mg/l, PR 872080x0.45 mg/l, SP 792233x0.15 mg/l, PR
872080x0.60 mg/l, SP 792233x0.45 mg/l, SP 792233x0.30 mg/l, SP 792233x0.60 mg/l y PR
872080x0.75 mg/l de BAP, estadísticamente produjeron igual o similar número de hojas en las tres
variedades en estudio, como a la vez se consideran de intermedia producción en el número de
hojas. Para el caso del tratamiento SP 792233x0.00 mg/l de BAP, produjo el menor número de
hojas a los 30 días después de la siembra, estadísticamente es considerado el menos adecuado
para la propagación masiva, presentando una media estadística de 3.60 hojas/brote.
a. Descripción de las variedades según la interacción variedad x BAP, para la variable

número de hojas, a los 30 días después de la siembra
i. Variedad PR 872080, según la interacción variedad x BAP, para la variable número de

hojas, a los 30 días después de la siembra
Según la prueba de Tukey al 5% de significancia realizada a los datos obtenidos de la

variable número de hojas (Cuadro 19), se evidencia una media de 4.30 hojas/brote sin la
aplicación de BAP al medio de cultivo. Con la aplicación de la citocinina BAP y con sus diferentes
niveles la diferenciación de hojas fue baja, lo cual se observa en los tratamientos con 0.30 mg/l,
0.15 mg/l, 0.45 mg/l, 0.60 mg/l y 0.75 mg/l de BAP, que estadísticamente, se ubican en un rango
intermedio y se consideran iguales en base a las medias de 4.25, 4.04, 3.97, 3.93 y 3.85
hojas/brote en la fase de multiplicación.
Se hace notorio el efecto que presenta el BAP en el número de hojas en la variedad PR

872080, como se indica estadísticamente y a la vez se observa en la figura 5, en donde la
diferenciación de hojas es levemente limitada dificultando a simple vista su cuantificación. El nivel
de 0.75 mg/l de regulador es el que más brotación produjo, con una intermedia longitud de brotes
2.11 cms/brote y menor número de hojas. Al analizar el comportamiento de dicho nivel de BAP
71
vemos una respuesta adecuada para dividir las macollas y a la vez incrementar la tasa de
multiplicación en dicha variedad de caña de azúcar.
para la variable número de hojas, a los 30 días después de la siembra.

Variedad mg/l BAP hojas
SP 792233 0.75 4.60 A
PR 872080 0.00 4.30 A B
CP 722086 0.45 4.30 A B
PR 872080 0.30 4.25 A B C
CP 722086 0.60 4.24 A B C
CP 722086 0.00 4.22 A B C
CP 722086 0.30 4.15 B C
CP 722086 0.15 4.13 B C
CP 722086 0.75 4.12 B C
PR 872080 0.15 4.04 B C
PR 872080 0.45 3.97 B C
SP 792233 0.15 3.96 B C
PR 872080 0.60 3.93 B C D
SP 792233 0.45 3.92 B C D
SP 792233 0.30 3.92 B C D
SP 792233 0.60 3.86 C D
PR 872080 0.75 3.85 C D
SP 792233 0.00 3.60 D
ii. Variedad SP 792233, según la interacción variedad x BAP, para la variable número de
La prueba de Tukey (Cuadro 19) realizada a los datos de la variedad SP 792233 se

determinó que presentó el mayor número de hojas en todo el experimento a los 30 días después
de la siembra, en el tratamiento con 0.75 mg/l de BAP, y con una media de 4.60 cm/brote, el cual
produjo una mayor estimulación a la diferenciación e incremento de dicha variable. Al contrario al
tratamiento sin el regulador de crecimiento BAP, se redujo considerablemente el número de hojas,
con la media de 3.60 cm/brote, la cual es baja de las tres variedades de caña de azúcar en
estudio.
A nivel intermedio y sin diferenciación alguna los tratamientos 0.15 mg/l, 0.45 mg/l, 0.30
mg/l y 0.60 mg/l de BAP, con las medias de 3.96, 3.92, 3.92 y 3.86 cm/brote, estadísticamente
72
tienen igual cantidad de hojas por brote, pero menor al nivel con 0.75 mg/l de BAP y mayor al
testigo.
Al analizar el comportamiento de dicha variedad en el nivel de BAP más alto 0.75 mg/l,
indujo a un mayor número de brotes al igual que el número de hojas en todo el experimento, pero
en la longitud de brotes se redujo considerablemente, siendo el que menor respuesta obtuvo.
Podemos observar que esta variedad tiene una característica de brotes sumamente particular,
produce brotes delgados, frágiles y en cantidad pero definidos en cuanto a hojas y tallos.
iii. Variedad CP 722086, según la interacción variedad x BAP, para la variable número de
Se determinó por medio de la prueba de Tukey al 5% de significancia (Cuadro 19), para la

variable número de hojas, 30 días después de la siembra dos agrupaciones: en el primero se
identificó al tratamiento con 0.45 mg/l de BAP presentando la media estadística más alta de 4.30
hojas/brote en la variedad CP 722086.
En una segunda agrupación se ubican los tratamientos 0.60 mg/l, 0.00 mg/l, 0.30 mg/l, 0.15
mg/l y 0.75 mg/l de BAP, los cuales estadísticamente tienen igual cantidad de hojas por brote,
pero el tratamiento con 0.75 mg/l, siendo el más alto redujo la diferenciación de hojas, el cual
presenta una media de 4.12 hojas/brote en relación al tratamiento 0.45 mg/l que presentó la media
más alta de 4.30 hojas/brote.
El comportamiento de la CP 722086 a los diferentes niveles de BAP fue evidente, podemos

indicar que el nivel con 0.75 mg/l, para la variable número de brotes produjo 12.70 brotes/explante,
siendo la media más alta para dicha variedad, pero en las variables longitud y número de hojas,
presentó las medias más bajas de todo el experimento a los 30 días después de realizada la
siembra. Pero dicho nivel de BAP disminuyó la longitud como el número de hojas, esto en relación
al tiempo que permaneció el explante en el medio de cultivo (30 días), pero se presentó el
inconveniente de agotamiento del medio lo cual se debió a la proliferación de brotes.
73
7.2.3 Análisis de variables en función del tiempo de tres variedades de caña de azúcar
7.2.3.1 Variable número de brotes a los 15 y 30 días de realizada la siembra
A. Número de brotes/explante por variedad
Se observa en la figura 7, que la variedad CP 722086 produjo 5.83 brotes como promedio
por explante a los 15 días después de la siembra, pero 15 días más existió un leve incremento de
3.96 brotes/explante, es relevante mencionar que la brotación para dicha variedad se incrementa
mientras más tiempo permanece el explante en el medio de cultivo, pero se presenta el
inconveniente de agotamiento del medio de cultivo, el cual se debe a la competencia por el mismo
y el espacio, como a la vez por la liberación de compuestos fenólicos que afectan de tal manera la
brotación que incide en la estimulación e inducción de brotes como se muestra en la figura 6. Con
9.79 brotes por explante, a los 30 días, la CP 722086 produjo la brotación más baja de las tres
variedades en el presente estudio.
Número de brotes por variedad en relación al tiempo

17.92
18
13.93
15
Promedio de Brotes
12
9.79 10.04
9
5.83 5.49
6
0
CP 722086 SP 792233 PR 872080
VARIEDADES
15 días 30 días
Figura 7. Promedio de brotes a los 15 y 30 días después de la siembra, en tres variedades de caña de
azúcar, CENGICAÑA, 2003.
74
Con 5.49 brotes promedio por explante a los 15 días después de la siembra y 13.93 brotes
a los 30 días, la variedad de caña de azúcar SP 792233, produjo un incremento de 8.44 brotes
promedio en un lapso de 15 días, por tal razón ésta variedad se considera la de mayor producción
de brotes en el tiempo de permanencia en el medio de cultivo. Pero sin embargo, y como se
muestra en la figura 7, existe una producción intermedia de brotes a los 30 días, pero a los 15
días, la misma fue baja, con respecto a las dos variedades en estudio.
En la variedad PR 872080, la brotación fue de 10.04 brotes promedio por explante a los 15
días de realizada la siembra, para luego cuantificar 17.92 brotes promedio por explante sembrado
a los 30 días. Con esta cantidad de brotes producidos se considera a dicha variedad como
adecuada para la adaptación y multiplicación al cultivo in vitro. Como se observa en la figura 5, en
la cual la calidad de los brotes y en donde la oxidación de los mismos es nula la cual la hacen
satisfactoria para la tasa de multiplicación y posteriores fases de la micropropagación.
A la vez la misma PR 872080, en la figura 7, se muestra gráficamente la producción de

brotes a los 15 días como a los 30 días, en donde se evidencia que en cada lapso de tiempo
existió mayor promedio de brotes con respecto a la CP 722086 y SP 792233.
B. Número de brotes/explante en función del efecto del nivel de BAP
En la figura 7, puede observarse el comportamiento que tuvo cada uno de los niveles de
BAP para esta variable, destacándose el nivel con una dosis de 0.75 mg/l, el cual presentó la
mayor inducción a brotación en las tres variedades de caña de azúcar, a los 15 y 30 días después
de la siembra. Con un promedio de 8.95 y 20.43 brotes/explante en los dos períodos, el nivel 0.75
mg/l de BAP se considera el mejor tratamiento para la fase de multiplicación de la caña de azúcar.
Cada 15 días se dio un incremento de 11.48 brotes/explante como promedio, el cual fue el
más alto del resto de tratamientos evaluados (Figura 8).
Los niveles con 0.30 y 0.60 mg/l de BAP, estadísticamente no difieren en el número de
brotes al igual que con 0.45 mg/l, pero podemos observar en la figura 8 que el nivel con 0.60 mg/l,
disminuyó el número de brotes, esto a los 15 días después de realizada la siembra. Sin embargo,
a los 30 días incrementó la brotación a 18.33, en base a esto podemos indicar que a más tiempo
75
de exposición de los explantes al medio de cultivo se incrementa el número de brotes, como se

comprueba en los diferentes niveles de BAP del presente estudio.
Efecto del BAP en la inducción de Brotes en tres variedades de

caña
25
20.43
20 18.33
Promedio de brotes
15.75
15 13.01
11.17
10
4.6 8.19 8.95

5 7.26 7.22
6.15
4.55
0
0.00 0.15 0.30 0.45 0.60 0.75
NIVELES DE BAP (mg/l)

15 días 30 días
Figura 8. Efecto de la bencilaminopurina en la inducción de brotes en tres variedades de caña de azúcar

a los 15 y 30 días después de la siembra, CENGICAÑA, 2003.
El tratamiento testigo, sin el regulador de crecimiento en el medio de cultivo,

estadísticamente no difiere en el tiempo ya que a los 15 como a los 30 días de realizada la
siembra, el promedio se mantuvo constante de 4.55 a 4.60 brotes/explante.
7.2.3.2 Variable longitud de brotes a los 15 y 30 días de realizada la siembra
A. Longitud de brotes por variedad
El comportamiento de cada una de las variedades de caña de azúcar para la variable

longitud de brotes en función del tiempo, observamos que la SP 792233 mostró una reducción
ligera en la longitud de sus brotes a los 30 días de realizada la siembra con 1.37 cms/brote, pero
sin embargo a los 15 días la longitud fue de 1.65 cms/brote, por tal razón se considera como la de
menor longitud de brotes en todo el estudio, esta reducción se debió a un incremento en la
76
brotación (figura 9) en los diferentes niveles de BAP, aunado a la vez a la característica que
presenta dicha variedad en los brotes los cuales son de tamaño pequeño y delgados (figura 4).
Longitud de Brotes por variedad de caña de azúcar en

relación al tiempo
3.0
2.64
2.5
2.42
2.17
Longitud (cm)
2.0
1.65
1.56
1.5
1.37
1.0
0.5
0.0
C P 722086 SP 792233 P R 872080
VARIEDADES
15 días 30 días
Figura 9. Longitud de brotes de tres variedades de caña de azúcar CP 722086, SP 792233 y PR 872880 a
los 15 y 30 días después de la siembra, CENGICAÑA, 2003.
La variedad CP 722086 a los 15 días presentó una longitud de 1.56 cm/brotes siendo la
menor de todo el experimento, pero a los 30 días después de realizada la siembra los brotes
alcanzaron una longitud de 2.17 cm, la cual estadísticamente se considera como la segunda mejor
variedad en cuanto a longitud de brotes de todo el estudio.
Como lo muestra la figura 9, la variedad PR 872080 presenta la mayor longitud de brotes

que la CP 722086 y SP 792233. Esta misma variedad a los 15 días presentó un promedio de 2.42
cm/brote y existió un ligero aumento a los 30 días el cual fue de 2.64 cm/brote.
B. Longitud de brotes en función del efecto del nivel de BAP
En la figura 10, se observa el efecto de los niveles de BAP en la variable longitud de brotes
en tres variedades de caña de azúcar, en donde el tratamiento testigo sin BAP (0.00 mg/l) a los 15
como a los 30 días de realizada la siembra, presentó la mayor longitud de brotes (2.37 y 3.19
77
cm/brote). Se considera una altura adecuada para la micropropagación en las fases de

enraizamiento y aclimatación de plántulas, pero dicho nivel no es adecuado para propiciar una
multiplicación masiva de la caña de azúcar.
Efecto del BAP en la longitud de brotes en función del tiempo
3.50 3 .1 9
3.00
Longitud de brotes (cm)
2 .3 7
2.50
2 .0 2 2 .0 0
1 .8 8 1 .8 1
2.00 1 .7 9 1 .7 4 1 .7 9 1 .7 1 1 .6 8 1 .6 1
1.50
1.00
0.50
0.00
0.00 0.15 0.3 0.45 0.6 0.75
NIVELES DE BAP (mg/l)

15 días 30 días
Figura 10. Efecto de la bencilaminopurina en la longitud de brotes en tres variedades de caña de azúcar a
los 15 y 30 días después de la siembra, CENGICAÑA, 2003.
En la grafica también se observa una disminución de la variable longitud de brotes a los 15

y 30 días después de la siembra en los diferentes niveles de BAP aplicados al medio de cultivo.
Para el caso del nivel con 0.75 mg/l de BAP la longitud de brotes mostró entre 1.68 y 1.61
cm/brote a los 15 y 30 días, respectivamente. Con este rango de longitud se presenta el
inconveniente de producir brotes susceptibles a una alta mortandad en las posteriores fases de
cultivo de tejidos, ya que para las mismas se requiere de brotes vigorosos lo cual va relacionado
con la altura.
Este problema se puede superar realizando subcultivos y reduciendo la concentración de

BAP a manera disminuir la inducción de brotes para obtener mayor desarrollo.
78
Algo de resaltar en el tratamiento con 0.60 mg/l de BAP, este produjo similar longitud de
brotes que el de 0.30 mg/l de BAP, lo cual se debe a que dicho nivel redujo su efecto en la
brotación a los 15 días después de realizada la siembra ya que al existir mayor brotes la longitud
de los mismos disminuyó. En base a lo anterior, se puede decir que la longitud de brotes esta
relacionado en la cantidad de brotes que se obtenga de cada variedad de caña de azúcar.
7.2.3.3 Variable número de hojas a los 15 y 30 días de realizada la siembra
A. Número de hojas/brote por variedad
Se puede observar el comportamiento de las tres variedades de caña azúcar en relación al

número de hojas por brote (Figura 11), la CP 722086 estadísticamente produjo el mayor número
de hojas de todo el experimento a los 15 y 30 días después de la siembra. Gráficamente se
observa una disminución de 4.78 a 4.19 hojas/brote a los 30 días, lo cual se debe aun leve
incremento en el número de brotes (Figura 7), razón por la cual la diferenciación de hojas es
afectada por el regulador de crecimiento y el tiempo de permanencia del explante en el medio de
cultivo, se indica a la vez que a mayor exposición del material vegetal a los tratamientos se
estimula la brotación, dificultando hasta cierto punto la cuantificación de hojas.
La variedad SP 792233 presentó en los dos períodos de tiempo el menor número de

hojas/brote del resto de variedades, se observa una disminución de 4.46 a 3.98 hojas/brote a los
30 días de realizada la siembra.
Estadísticamente la variedad PR 872080, se agrupa en un rango intermedio en cuanto a

dicha variable, a los 15 días de la siembra produjo 4.50 hojas/brote la cual fue mayor a la variedad
SP 792233 pero menor a la CP 722086. A los 30 días disminuyó la capacidad de diferenciación
foliar a 4.06 hojas/brote pero los rangos con respecto a las otras variedades fue constante, lo cual
se debió a un aumento en el número de brotes por unidad.
79
Número de hojas por variedad en función del tiempo
4.78
5.0 4.46 4.50
4.19 4.06
4.5 3.98
Número Hojas/brote
4.0
3.5
3.0
2.5
2.0
1.5
1.0
0.5
0.0
CP 722086 SP 792233 P R 872080
VARIEDADES
15 días 30 días
Figura 11. Número de hojas por brote de tres variedades de caña de azúcar CP 722086, SP 792233 y PR
872880 a los 15 y 30 días después de la siembra, CENGICAÑA, 2003.
El rango establecido estadísticamente para la producción de hojas en las tres variedades de

caña de azúcar va de 4.06 a 4.78 hojas/brote, al final de los 30 días que duró el estudio.
B. Número de hojas/brote en función del efecto del BAP
En la figura 12, se observa el efecto de los diferentes niveles de BAP y el testigo en las tres
variedades de caña de azúcar. En donde el tratamiento testigo sin regulador de crecimiento tiene
un promedio de 4.64 hojas/brote al igual que nivel con 0.30 mg/l de BAP.
El nivel con 0.15 mg/l produjo el mayor número de hojas del resto de tratamientos con 4.75
hojas/brote. Los niveles con 0.45, 0.60 y 0.75 mg/l de BAP muestran una tendencia a la
disminución del número de hojas/brote. Siendo éste último, con un promedio de 4.40 hojas/brote el
de menor respuesta a los 15 días después de la siembra.
80
Efecto del BAP en el número de hojas en función del tiempo
4.8 4.75
4.64 4.64
4.58
4.6
4.46
Número hojas/brote
4.40
4.4
4.19
4.2 4.11
4.04 4.04 4.06
4.01
4.0
3.8
3.6
0.00 0.15 0.30 0.45 0.60 0.75
NIVELES DE BAP (m g/l)

15 días 30 días
Figura 12. Efecto de la bencilaminopurina en el número de hojas por brotes en tres variedades de caña de
azúcar a los 15 y 30 días después de la siembra.
A los 30 días después de la siembra se observa una disminución evidente en el número de

hojas. Se identificó al nivel con 0.75 mg/l de BAP el cual produjo el mayor numero de hojas/brote
(4.19).
El nivel, sin regulador de crecimiento BAP (testigo) y con 0.15 mg/l de BAP, produjeron
similar numero de hojas con 4.04 hojas/brote, ambos en la inducción de brotes se consideran de
respuesta baja, los cuales para fines de multiplicación masiva no son adecuados.
81
8. CONCLUSIONES
1. El genotipo es un factor que ejerce influencia en la brotación, y en la longitud de las

variedades de caña de azúcar, en donde se evidencia a la variedad SP 792233 con una
longitud y diferenciación de hojas menor a PR 872080 y CP 722080, y a esta última con
una escasa respuesta a la brotación en todo el estudio, podemos decir que las variables de
respuesta mostraron un comportamiento diferente en cada una de las variedades.
2. El uso de ácido indolacético a 0.01 mg/l como auxina y cinetina a 0.1 mg/l combinados con
la 6-bencilaminopurina, provocan un efecto de sinergismo que estimulan la brotación en las
variedades de caña de azúcar estudiadas, además para evitar el ennegrecimiento de los
explantes el uso de ácido cítrico a 150 ppm como antioxidante en las fase de iniciación y
multiplicación se hace necesario.
4. La variedad de caña de azúcar PR 872080, presentó el mayor número de brotes a los 15 y

30 días después de la siembra con 10.04 y 17.92 brotes por explante, seguida de la SP
792233 a los 15 días 5.49 brotes/explante, a los 30 días después de la siembra 13.93
brotes/explante y con una menor respuesta a la inducción de la brotación la variedad CP
722086 con 5.83 y 9.79 brotes/explante.
5. El nivel 0.75 mg/l de BAP, presentó el promedio más alto a los 15 y 30 días después de la
siembra, con 8.95 y 20.43 brotes/explante, comparado con el nivel 0.00 mg/l el promedio
fue constante 4.55 y 4.60 brotes/explante en los dos períodos del estudio en las tres
variedades de caña.
6. En lo referente a la longitud de brotes la variedad PR 872080 presentó en los dos períodos

un promedio de 2.42 y 2.64 cm/brote, estadísticamente se consideró la más alta de todo el
estudio, como una segunda mejor altura la presenta la CP 722086 con 1.56 y 2.17 cm/brote,
mientras que la SP 792233 con 1.37 y 1.65 cm/brote.
82
7. La longitud de brotes esta relacionada con la brotación que presentan las variedades. El
nivel 0.00 mg/l de BAP siendo el testigo que presentó la mayor longitud con 2.37 y 3.19
cm/brote a los 15 y 30 días respectivamente, mientras que con la aplicación de BAP en el
medio de cultivo existió una disminución en la longitud, pero la brotación se incrementó.
8. La variedad CP 722086 con un promedio de 4.19 a 4.78 hojas/brote fue la que presentó el
mayor número de hojas diferenciadas, como una segunda mejor producción de hojas la PR
872080 con 4.06 y 4.50 hojas/brote y la SP 792233 con 4.46 a 3.98 hojas/brote siendo la
que presentó el menor número de hojas a los 15 y 30 días después de la siembra.
9. A los 15 días después de la siembra se diferenció el mayor número de hojas en cada nivel
de BAP, pero conforme la concentración se incrementó el número de hojas/brote se redujo.
El nivel 0.15 mg/l BAP produjo la mayor diferenciación de hojas con 4.75 hojas/brote, pero a
los 30 días la misma fue menor, además el nivel con 0.60 mg/l BAP con 4.01 hojas/brote fue
el que produjo la menor diferenciación.
83
9. RECOMENDACIONES
1. Suplementar al medio de cultivo ácido indolacético a 0.01 y cinetina a 0.1 mg/l con 6-
bencilaminopurina más ácido cítrico a razón de 150 ppm como antioxidante, para se
induzca a un mayor efecto en la brotación y control en la oxidación de los explantes
2. Utilizar 0.75 mg/l de BAP en la variedad PR 872080 para obtener un proceso satisfactorio
de una multiplicación masiva.
3. Para la multiplicación masiva de brotes de la SP 792233, se recomienda utilizar 0.75 mg/l

de BAP, pero en las siguientes fases de la micropropagación como el enraizamiento y
posterior aclimatación, se sugiere reducir la concentración del BAP con la finalidad de
obtener un tamaño de brote adecuado.
4. Con fines de multiplicación masiva se recomienda el uso de 0.75 mg/l de BAP en la

variedad CP 722086 y continuar con estudios para establecer el procedimiento adecuado
para obtener la proliferación de brotes y una propagación satisfactoria a través de cultivo de
tejidos.
5. Se sugiere continuar con investigaciones sobre posibles efectos adversos que pueda
causar el uso del BAP al final de cada subcultivo, en las tres variedades de caña de azúcar,
en particular si se emplean niveles de 6-bencilaminopurina altos a los evaluados en el
presente estudio.
84
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sugar mil. Zimbabwe, African Sugar Technologist Association. p. 127-132.
88
11. APÉNDICE
Cuadro. 20. A Equipo y cristalería usados para la realización del estudio.
Instrumentos Equipo Cristalería

¾ Mechero de alcohol, para flamear ¾ Una unidad de cámara ¾ Beaker.
instrumentos. de flujo laminar. ¾ Erlenmeyer.
¾ Pipetas. ¾ Autoclave. ¾ Tubos de ensayo.
¾ Pinzas grandes y pequeñas. ¾ Balanza analítica. ¾ Balones aforados.
¾ Agujas de disección. ¾ Estufa-Agitador. ¾ Recipientes para guardar soluciones
¾ Tijeras. ¾ Agitadores magnéticos. concentradas.
¾ Espátulas. ¾ Refrigeradora. ¾ Recipientes con capacidad de 200
¾ Mangos para bisturís. ¾ Potenciómetro. ml, para medios de cultivo.
¾ Hojas de bisturís. ¾ Microondas. ¾ Pipetas graduadas.
¾ Pizetas ¾ Horno de esterilización en ¾ Cajas de petrí esterilizadas.
¾ Recipientes de plásticos. seco. ¾ Recipientes de vidrio para
¾ Papel parafilm. ¾ Carretilla de transporte los medios de cultivo.
¾ Papel filtro.
Cuadro. 21. A Reactivos e insumos utilizados para la realización del cultivo in vitro de tres
variedades de caña de azúcar.
Reactivos Otros
9 CaCl2 ⋅ 2H20 9 NaMoO4 ⋅ 2H2O 9 Jabón neutral.
9 KNO3 9 Myo-inositol 9 Polyoxyethyenesorbitan monolaurate
9 NH4NO3 9 Ácido indolacético (Tween 20).
9 KH2PO4 9 6-Bencilaminopurina 9 Hipoclorito de sodio.
9 MgSO4 ⋅ 7H2O 9 Cinetina 9 Etanol al 70% y 95%.
9 KI 9 Ácido nicotínico 9 Agua desmineralizada-destilada.
9 FeSO4 ⋅ 7H2O 9 Pyridoxina-HCl 9 methyl-1-(butylcarbamoyl)-2-
9 Na2⋅EDTA 9 Thiamina-HCl benzimidazolecarbamato Benomyl
9 CuSO4 ⋅ 5H2O 9 Glicina. WP 50%.

9 Ácido cítrico. 9 Sulfato de estreptomicina y
9 CoCl2 ⋅ 6H2O
9 Ácido ascórbico. oxitetraciclina. Agrimycin WP 16.5 %.
9 MnSO4 ⋅ 4H20
9 Sacarosa. 9 Succionato de cloranfenicol.
9 ZnSO4 ⋅ 7H2O
9 Agar.
9 H3BO3

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UNIVERSIDAD DE SAN CARLOS DE GUATEMALA

EFECTO DE LA 6-BENCILAMINOPURINA EN LA PROLIFERACIÓN DE

MAK MÍLAN CRUZ SIC.

GUATEMALA, FEBRERO DEL AÑO 2004

EFECTO DE LA 6-BENCILAMINOPURINA EN LA PROLIFERACIÓN DE BROTES

PRESENTADA A LA HONORABLE JUNTA DIRECTIVA DE LA FACULTAD DE AGRONOMÍA

MAK MÍLAN CRUZ SIC

En el acto de investidura como

SISTEMAS DE PRODUCCIÓN AGRÍCOLA

GUATEMALA, FEBRERO DEL 2004

UNIVERSIDAD DE SAN CARLOS DE GUATEMALA

Dr. M. V. LUIS ALFONSO LEAL MONTERROSO

JUNTA DIRECTIVA DE LA FACULTAD DE AGRONOMÍA

DECANO Dr. Ariel Abderraman Ortiz López

Guatemala, febrero del 2004

Honorable Junta Directiva

EFECTO DE LA 6-BENCILAMINOPURINA EN LA PROLIFERACIÓN DE BROTES in vitro DE

Presentado como requisito previo a optar al titulo de Ingeniero Agrónomo en Sistemas de

Esperando que la presente investigación llene los requisitos para su aprobación, me

Mak Mílan Cruz Sic

ACTO QUE DEDICO

MIS PADRES Rosalio Cruz Gómez y

MIS HERMANOS Rosalio, Cenobia y en especial a Ely

MI ESPOSA Delia Floridalma Xitumul

MIS HIJAS Evelyn Andrea y Alexa Jimena

MIS SOBRINOS Luis, Fernanda, Rosio, Steven, Yesenia y Adolfo.

MI SUEGRA Concepción Melchor

MIS CUÑADOS (AS) Con aprecio, y agradecimiento especial a Rolando Xitumul.

TESIS QUE DEDICO

ESCUELA NACIONAL URBANA PARA VARONES “RABINAL, BAJA VERAPAZ”.

INSTITUTO “ADOLFO V. HALL DEL NORTE” SAN PEDRO CARCHÁ, A.V.

UNIVERSIDAD DE SAN CARLOS DE GUATEMALA.

LABORATORIO DE CULTIVO DE TEJIDOS DE LA SUBÁREA DE MANEJO Y

CENTRO GUATEMALTECO DE INVESTIGACIÓN Y CAPACITACIÓN DE LA CAÑA

Ing. Agr. Msc. Domingo amador Pérez

Por su incondicional aporte para la realización y orientación de la presente

ING. AGR. MARCO VINICIO FERNÁNDEZ

Por el apoyo y paciencia en la realización del Ejercicio Profesional Supervisado de

ING. AGR. ERIC ORTEGA

Por su acertada asesoría y consejos en el área estadística.

ING. AGR. FRANCISCO COSME

Por su amistad brindada durante la culminación de mi carrera.

LABORATORIO DE BIOTECNOLOGÍA VEGETAL DEL CENTRO GUATEMALTECO DE

Por el apoyo brindado en la ejecución del E.P.S.A. y de la presente investigación.

EL PERSONAL TÉCNICO Y ADMINISTRATIVO DE CENGICAÑA

Por la amistad brindada y apoyo en la fase de campo y laboratorio.

ÍNDICE DE CUADROS.............................................................................................................. viii

4.1 Objetivo General.............................................................................................................. 35

Cuadro 1. Agrupación de componentes, cantidades y volúmenes para la preparación

Cuadro 2. Volumen de soluciones concentradas para la preparación de un litro de medio

Cuadro 3. Reguladores del crecimiento y niveles de BAP aplicados al medio de cultivo en

Cuadro 4. Factores y niveles que se evaluaron en el estudio.............................................. 45

Cuadro 5. Descripción de tratamientos................................................................................. 45

Cuadro 6. Tipo de transformación empleada en las variables de estudio en las tres

Cuadro 8. Resumen de la prueba de Tukey (α=0.05), según el factor variedad, para la

Cuadro 15. Resumen de la prueba de Tukey (α=0.05), según la interacción variedad x

Cuadro 17. Resumen de la variable longitud de brotes según la interacción variedad x

Cuadro 19. Resumen de la prueba de Tukey (α=0.05), según la interacción variedad x