ENZIMAS

Los enzimas son proteínas que catalizan reacciones químicas

en los seres vivos. Los enzimas son catalizadores, es decir,
sustancias que, sin consumirse en una reacción, aumentan
notablemente su velocidad. No hacen factibles las reacciones
imposibles, sino que solamente aceleran las que espontáneamente
podrían producirse. Ello hace posible que en condiciones fisiológicas
tengan lugar reacciones que sin catalizador requerirían condiciones
extremas de presión, temperatura o pH.

 Aspectos generales sobre los enzimas

 Propiedades de los enzimas
ASPECTOS GENERALES SOBRE LOS
 

ENZIMAS
Prácticamente todas las reacciones químicas que tienen lugar en los seres vivos están
catalizadas por enzimas. Los enzimas son catalizadores específicos: cada enzima
cataliza un solo tipo de reacción, y casi siempre actúa sobre un único sustrato o sobre un
grupo muy reducido de ellos. En una reacción catalizada por un enzima:
1. La sustancia sobre la que actúa el enzima se llama sustrato.
2. El sustrato se une a una región concreta de la enzima, llamada centro activo. El
centro activo comprende (1) un sitio de unión formado por los aminoácidos que están
en contacto directo con el sustrato y (2) un sitio catalítico, formado por los aminoácidos
directamente implicados en el mecanismo de la reacción
3. Una vez formados los productos el enzima puede comenzar un nuevo ciclo de
reacción
1.- El enzima y su sustrato 2.- Unión al centro activo 3.- Formación de productos

Los enzimas, a diferencia de los catalizadores inorgánicos catalizan reacciones

1
específicas. Sin embargo hay distintos grados de especificidad. El enzima sacarasa
es muy específico: rompe el enlace -glucosídico de la sacarosa o de compuestos muy
similares. Así, para el enzima sacarasa, la sacarosa es su sustrato natural, mientras
que la maltosa y la isomaltosa son sustratos análogos. El enzima actúa con máxima
eficacia sobre el sustrato natural y con menor eficacia sobre los sustratos análogos.
Entre los enzimas poco específicos están las proteasas digestivas como la
quimotripsina, que rompe los enlaces amida de proteínas y péptidos de muy diverso
tipo.
 

PROPIEDADES DE LOS ENZIMAS

Las propiedades de los enzimas derivan del hecho de ser proteínas y de actuar como
catalizadores. Como proteínas, poseen una conformación natural más estable que las
demás conformaciones posibles. Así, cambios en la conformación suelen ir asociados
en cambios en la actividad catalítica. Los factores que influyen de manera más directa
sobre la actividad de un enzima son:
 pH
 temperatura
 cofactores
 
EFECTO DEL pH SOBRE LA ACTIVIDAD
ENZIMÁTICA
Los enzimas poseen grupos químicos ionizables
(carboxilos -COOH; amino -NH2; tiol -SH; imidazol,
etc.) en las cadenas laterales de sus aminoácidos.
Según el pH del medio, estos grupos pueden tener
carga eléctrica positiva, negativa o neutra. Como la conformación de las proteínas
depende, en parte, de sus cargas eléctricas, habrá un pH en el cual la conformación
será la más adecuada para la actividad catalítica. Este es el llamado pH óptimo. (Para
activar la animación de la Figura de la derecha, pulsar la opción "Recargar" del
navegador).
 
La mayoría de los enzimas son muy
sensibles a los cambios de pH.
Desviaciones de pocas décimas por
encima o por debajo del pH óptimo
pueden afectar drásticamente su
actividad. Así, la pepsina gástrica tiene un
pH óptimo de 2, la ureasa lo tiene a pH 7

2
y la arginasa lo tiene a pH 10 (Figura de la izquierda). Como ligeros cambios del pH
pueden provocar la desnaturalización de la proteína, los seres vivos han desarrollado
sistemas más o menos complejos para mantener estable el pH intracelular: Los
amortiguadores fisiológicos .

  EFECTO
DE LA TEMPERATURA SOBRE LA
ACTIVIDAD ENZIMÁTICA
 En general, los aumentos de temperatura
aceleran las reacciones químicas: por cada
10ºC de incremento, la velocidad de
reacción se duplica. Las reacciones
catalizadas por enzimas siguen esta ley
general. Sin embargo, al ser proteínas, a
partir de cierta temperatura, se empiezan a
desnaturalizar por el calor. La temperatura
a la cual la actividad catalítica es máxima
se llama temperatura óptima (Figura de la
derecha). Por encima de esta temperatura,
el aumento de velocidad de la reacción
debido a la temperatura es contrarrestado por la pérdida de actividad catalítica debida
a la desnaturalización térmica, y la actividad enzimática decrece rápidamente hasta
anularse.

 EFECTODE LOS COFACTORES SOBRE LA

ACTIVIDAD ENZIMÁTICA
A veces, un enzima requiere para su función la presencia de sustancias no proteicas
que colaboran en la catálisis: los cofactores. Los cofactores pueden ser iones
inorgánicos como el Fe++, Mg++, Mn++, Zn++ etc. Casi un tercio de los enzimas conocidos
requieren cofactores. Cuando el cofactor es una molécula orgánica se llama coenzima.
Muchas de estas coenzimas se sintetizan a partir de vitaminas. En la figura inferior
podemos observar una molécula de hemoglobina (proteína que transporta oxígeno) y
su coenzima (el grupo hemo). Cuando los cofactores y las coenzimas se encuentran
unidos covalentemente al enzima se llaman grupos prostéticos. La forma
catalíticamente activa del enzima, es decir, el enzima unido a su grupo prostético, se
llama holoenzima. La parte proteica de un holoenzima (inactiva) se llama apoenzima,
de forma que:

apoenzima + grupo prostético= holoenzima

3
NOMENCLATURA DE LAS ENZIMAS
 
Hay varias formas mediante las cuales se asigna un nombre a un enzima:
 nombres particulares
 nombre sistemático
 código de la comisión enzimática (enzyme comission)

  NOMBRES PARTICULARES
 Antiguamente, los enzimas recibían nombres particulares, asignados por su
descubridor. Al ir aumentando el número de enzimas conocidos, se hizo necesaria una
nomenclatura sistemática que informara sobre la acción específica de cada enzima y
los sustratos sobre los que actuaba.
  
NOMBRE SISTEMÁTICO

El nombre sistemático de un enzima consta actualmente de 3 partes:

 el sustrato preferente
 el tipo de reacción realizado
 terminación "asa"
Un ejemplo sería la glucosa fosfato isomerasa que cataliza la isomerización de la
glucosa-6-fosfato en fructosa-6-fosfato.
Muchos enzimas catalizan reacciones reversibles. No hay una manera única para fijar
cual de los dos sentidos se utiliza para nombrar al enzima. Así, la glucosa fosfato
isomerasa también podría llamarse fructosa fosfato isomerasa.
Cuando la acción típica del enzima es la hidrólisis del sustrato, el segundo
componente del nombre se omite y por ejemplo, la lactosa hidrolasa se llama

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simplemente lactasa. Además de los nombres sistemáticos, aún persisten otros
consagrados por el uso. Así, la glucosa:ATP fosforiltransferasa se llama habitualmente
glucoquinasa.

NOMENCLATURA DE LA COMISIÓN ENZIMÁTICA

El nombre de cada enzima puede ser identificado por un código numérico,
encabezado por las letras EC (enzyme commission), seguidas de cuatro
números separados por puntos. El primer número indica a cual de las seis
clases pertenece el enzima, el segundo se refiere a distintas subclases dentro
de cada grupo, el tercero y el cuarto se refieren a los grupos químicos
específicos que intervienen en la reacción. (Este enlace te lleva a la página de
la Enzyme Comission, donde puedes acceder a todas las clases y subclases
de enzimas).
Así, la ATP:glucosa fosfotransferasa (glucoquinasa) se define como EC 2.7.1.2.
El número 2 indica que es una transferasa, el 7 que es una fosfotransferasa, el
1 indica que el aceptor es un grupo OH, y el último 2 indica que es un OH de la
D-glucosa el que acepta el grupo fosfato.

CLASIFICACIÓN DE LOS ENZIMAS

En función de su acción catalítica específica, los enzimas se clasifican en 6 grandes
grupos o clases:
 Clase 1: OXIDORREDUCTASAS
 Clase 2: TRANSFERASAS
 Clase 3: HIDROLASAS
 Clase 4: LIASAS
 Clase 5: ISOMERASAS
 Clase 6: LIGASAS

 Clase 1: OXIDORREDUCTASAS
Catalizan reacciones de oxidorreducción, es
decir, transferencia de hidrógeno (H) o electrones
(e-) de un sustrato a otro, según la reacción general:
AH2 + B A + BH2

Ared + Box Aox + Bred

Ejemplos son la succinato deshidrogenasa o la

citocromo c oxidasa.

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Clase 2: TRANSFERASAS

Catalizan la transferencia de un grupo químico (distinto del hidrógeno) de un sustrato a

otro, según la reacción:
A-B + C A + C-B
Un ejemplo es la glucoquinasa, que cataliza la reacción
representada en la Figura de la derecha:
glucosa + ADP + glucosa-6-
ATP fosfato

 
Clase 3: HIDROLASAS
Catalizan las reacciones de hidrólisis:
A-B + H2O AH + B-OH
Un ejemplo es la lactasa, que cataliza la reacción:
lactosa + agua glucosa + galactosa

Clase 4: LIASAS
Catalizan reacciones de ruptura o soldadura de sustratos:
A-B A+B
Un ejemplo es la acetoacetato descarboxilasa, que cataliza la reacción:
ácido acetoacético CO2 + acetona

Clase 5: ISOMERASAS
Catalizan la interconversión de isómeros:
A B

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Son ejemplos la fosfotriosa isomerasa y la fosfoglucosa isomerasa, que catalizan las reacciones
representadas en la tabla inferior:
fosfotriosa isomerasa fosfoglucosa isomerasa
gliceraldehído-3- dihidroxiacetona- glucosa- fructosa-6-
fosfato fosfato 6-fosfato fosfato

  
Clase 6: LIGASAS

Catalizan la unión de dos sustratos con hidrólisis simultánea de un nucleótido trifosfato

(ATP, GTP, etc.):
A + B + XTP A-B + XDP + Pi
Un ejemplo es la piruvato carboxilasa, que cataliza la reacción:
piruvato + CO2 + ATP oxaloacetato + ADP + Pi

MODO DE ACCIÓN DE LOS ENZIMAS

En las reacciones espontáneas, los productos finales tienen menos energía libre de Gibbs
(G) que los reactantes (Figura inferior izquierda). Por tanto, en las reacciones
espontáneas se libera energía de Gibbs G<0). Sin embargo, el comienzo de la reacción
requiere un aporte inicial de energía. Esta energía inicial que hay que suministrar a los
reactantes para que la reacción transcurra se llama energía de activación (Ea). Cuanto
menor es la Ea más fácilmente transcurre la reacción.
Perfil energético de una reacción espontánea Perfil energético de una reacción catalizada

7
 La acción de los catalizadores consiste,
precisamente, en disminuir la E a (Figura superior
derecha). Los enzimas son catalizadores
especialmente eficaces, ya que disminuyen la E a aún
más que los catalizadores inorgánicos. Por ejemplo, la
descomposición del agua oxigenada (H 2O2) para dar
H2O y O2 puede ocurrir sin catalizador, con un
catalizador inorgánico (platino), o con un enzima
específico (catalasa). Las respectivas E a para cada
proceso son 18, 12 y 6 Kcal/mol. Así, se puede calcular
que el platino acelera la reacción 20.000 veces,
mientras que la catalasa la acelera 370.000 veces.
Para que una reacción química tenga lugar, las moléculas de
los reactantes deben chocar con una energía y una orientación
adecuadas. La actuación del enzima (1) permite que los
reactantes (sustratos) se unan a su centro activo con una
orientación óptima para que la reacción se produzca y (2)
modifica las propiedades químicas del sustrato unido a su
centro activo, debilitando los enlaces existentes y facilitando
la formación de otros nuevos (Figuras inferiores):

Hay dos modelos sobre la forma en que el sustrato se

une al centro activo del enzima:
 el modelo llave-cerradura
 el modelo del ajuste inducido

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  MODELO LLAVE-CERRADURA
El modelo llave-cerradura supone que la estructura del
sustrato y la del centro activo son complementarias, de la
misma forma que una llave encaja en una cerradura.
Este modelo es válido en muchos casos, pero no es
siempre correcto.

  MODELO DEL AJUSTE INDUCIDO

En algunos casos, el centro activo adopta la
conformación idónea sólo en presencia del sustrato.
La unión del sustrato al centro activo del enzima
desencadena un cambio conformacional que da lugar
a la formación del producto. Este es el modelo del
ajuste inducido (Figura animada de la derecha.
Pulsar la opción "Recargar" del navegador para ver
la animación). Sería algo así como un cascanueces,
que se adapta al contorno de la nuez.
 
REGULACIÓN DE LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA
Una molécula de enzima no tiene por qué actuar siempre a la misma velocidad. Su
actividad puede estar modulada por:
 cambios en el pH
 cambios en la temperatura
 presencia de cofactores
 las concentraciones del sustrato y de los productos finales
 presencia de inhibidores
 modulación alostérica

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  modificación covalente
 activación por proteólisis
 isoenzimas

EFECTO DEL pH SOBRE LA ACTIVIDAD

ENZIMÁTICA
Los enzimas poseen grupos químicos ionizables
(carboxilos -COOH; amino -NH2; tiol -SH; imidazol,
etc.) en las cadenas laterales de sus aminoácidos.
Según el pH del medio, estos grupos pueden tener
carga eléctrica positiva, negativa o neutra. Como la
conformación de las proteínas depende, en parte, de sus cargas eléctricas, habrá un pH
en el cual la conformación será la más adecuada para la actividad catalítica (Figura de
la derecha). Este es el llamado pH óptimo.
 

La mayoría de los enzimas son muy

sensibles a los cambios de pH.
Desviaciones de pocas décimas por
encima o por debajo del pH óptimo
pueden afectar drásticamente su actividad.
Así, la pepsina gástrica tiene un pH óptimo
de 2, la ureasa lo tiene a pH 7 y la
arginasa lo tiene a pH 10 (Figura de la
izquierda). Como ligeros cambios del pH
pueden provocar la desnaturalización de la
proteína, los seres vivos han desarrollado
sistemas más o menos complejos para
mantener estable el pH intracelular: Los
amortiguadores fisiológicos.

EFECTO DE LA TEMPERATURA SOBRE LA

ACTIVIDAD ENZIMÁTICA
En general, los aumentos de
temperatura aceleran las
reacciones químicas: por cada
10ºC de incremento, la

10
velocidad de reacción se duplica. Las reacciones catalizadas por enzimas siguen esta
ley general. Sin embargo, al ser proteínas, a partir de cierta temperatura, se empiezan a
desnaturalizar por el calor. La temperatura a la cual la actividad catalítica es máxima se
llama temperatura óptima (Figura de la derecha). Por encima de esta temperatura, el
aumento de velocidad de la reacción debido a la temperatura es contrarrestado por la
pérdida de actividad catalítica debida a la desnaturalización térmica, y la actividad
enzimática decrece rápidamente hasta anularse.

 
EFECTO DE LOS COFACTORES SOBRE LA
ACTIVIDAD ENZIMÁTICA
A veces, un enzima requiere para su función la presencia de sustancias no proteicas
que colaboran en la catálisis: los cofactores. Los cofactores pueden ser iones
inorgánicos como el Fe++, Mg++, Mn++, Zn++ etc. Casi un tercio de los enzimas conocidos
requieren cofactores. Cuando el cofactor es una molécula orgánica se llama coenzima.
Muchas de estas coenzimas se sintetizan a partir de vitaminas. En la figura de la
izquierda podemos observar una molécula de mioglobina (proteína que transporta
oxígeno al tejido muscular) y su coenzima (el grupo hemo, representado en color
verde). Cuando los cofactores y las coenzimas se encuentran unidos covalentemente al
enzima se llaman grupos prostéticos. La forma catalíticamente activa del enzima, es decir,
el enzima unida a su grupo prostético, se llama holoenzima. La parte proteica de un holoenzima
(inactiva) se llama apoenzima, de forma que:
apoenzima + grupo prostético= holoenzima
  
EFECTO DE LAS CONCENTRACIONES SOBRE LA
ACTIVIDAD ENZIMÁTICA
La velocidad de una reacción enzimática depende de la
concentración de sustrato. La Figura de la derecha muestra
la velocidad de una reacción enzimática a 6
concentraciones distintas de sustrato.
Además, la presencia de los productos finales puede
hacer que la reacción sea más lenta, o incluso invertir su
sentido (Figura inferior).

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 EFECTODE LOS INHIBIDORES SOBRE LA
ACTIVIDAD ENZIMÁTICA
Ciertas moléculas pueden inhibir la acción catalítica de un enzima: son los inhibidores.
Estos inhibidores bien pueden ocupar temporalmente el centro activo por semejanza
estructural con el sustrato original (inhibidor competitivo) o bien alteran la
conformación espacial del enzima, impidiendo su unión al sustrato (inhibidor no
competitivo) (Figuras inferiores).

Inhibidor competitivo Inhibidor no competitivo

MODULACIÓN ALOSTÉRICA DE LA ACTIVIDAD

ENZIMÁTICA

Hay enzimas que pueden adoptar 2 conformaciones interconvertibles llamadas R (relajada) y T

(tensa). R es la forma más activa porque se une al sustrato con más afinidad. Las formas R y T se
encuentran en equilibrio R <==> T (Figura inferior):

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Ciertas sustancias tienden a estabilizar la forma R. Son los llamados moduladores
positivos. El propio sustrato es a menudo un modulador positivo. Las moléculas que
favorecen la forma R pero que actúan sobre una región de la enzima distinta del centro
activo son los activadores alostéricos (Figura inferior izquierda).

Activador alostérico: favorece la Inhibidor alostérico: impide la

unión del sustrato unión del sustrato

Las sustancias que favorecen la forma T y disminuyen la actividad enzimática son los
moduladores negativos. Si estos moduladores actúan en lugares distintos del centro
activo del enzima se llaman inhibidores alostéricos (Figura superior derecha).
EFECTO DE LA MODIFICACIÓN COVALENTE SOBRE
LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA

Otros enzimas pasan de una forma menos activa a otra más activa uniéndose
covalentemente a un grupo químico de pequeño tamaño como el P i o el AMP. También
se da el caso inverso, en el que un enzima muy activo se desactiva al liberar algún grupo
químico. En las enzimas de las vías degradativas del metabolismo, la forma fosforilada es
más activa que la no fosforilada, mientras que en las vías biosintéticas ocurre lo contrario.
En las figuras inferiores se ilustra la activación de una proteína por fosforilación.

13
 El enzima no fosforilado es
Elementos de la reacción El enzima fosforilado es activo
inactivo

 ACTIVACIÓN PROTEOLÍTICA DE LA ACTIVIDAD

ENZIMÁTICA
Algunos enzimas no se sintetizan
como tales, sino como proteínas
precursoras sin actividad
enzimática. Estas proteínas se
llaman proenzimas o zimógenos.
Para activarse, los zimógenos
sufren un ataque hidrolítico que
origina la liberación de uno o varios
péptidos. El resto de la molécula proteica adopta la conformación y las propiedades del
enzima activo. Muchos enzimas digestivos se secretan en forma de zimógenos y en el
tubo digestivo se convierten en la forma activa. Es el caso de la -quimotripsina, que
se sintetiza en forma de quimotripsinógeno (Figura superior). Si estos enzimas se
sintetizasen directamente en forma activa destruirían la propia célula que las produce.
Así, la tripsina pancreática (una proteasa) se sintetiza como tripsinógeno (inactivo). Si
por alguna razón se activa en el propio páncreas, la glándula sufre un proceso de
autodestrucción (pancreatitis aguda), a menudo mortal.

 
REGULACIÓN DE LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA POR
MEDIO DE ISOENZIMAS
Algunos enzimas tienen distinta estructura molecular aunque su función biológica es
similar. Se llaman isozimas o isoenzimas. Estas diferencias de estructura se
traducen en ligeros cambios en sus propiedades, de forma que cada isozima se
adapta perfectamente a la función que debe realizar. Así, podemos observar la
existencia de isoenzimas en función de:
 el tipo de tejido: Por ejemplo, la lactato deshidrogenasa presenta isozimas
distintos en músculo y corazón.

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  el compartimiento celular donde actúa: Por ejemplo, la malato
deshidrogenasa del citoplasma es distinta de la de la mitocondria.
 el momento concreto del desarrollo del individuo: Por ejemplo, algunos
enzimas de la glicólisis del feto son diferentes de los mismos enzimas en el
adulto.
 

CINÉTICA ENZIMÁTICA
Los principios generales de las reacciones químicas se aplican
también a las reacciones enzimáticas. Por este motivo, antes de
empezar con la cinética química, se van a repasar algunos
conceptos básicos de cinética química.
A continuación, se describirán los siguientes conceptos:
 Cinética enzimática
 Modelo cinético de Michaelis-Menten
 Cálculo de la KM y la Vmax de un enzima
 Actividad enzimática

 CONCEPTOS BÁSICOS DE CINÉTICA QUÍMICA

En una reacción de orden cero, la velocidad de formación del producto es independiente
de la concentración de sustrato: v = k
En una reacción de primer orden la velocidad de formación de los productos es
directamente proporcional a la concentración del sustrato: v = k [A]. Así, en la reacción:
sacarosa + agua glucosa + fructosa
La velocidad de hidrólisis de la sacarosa es, en todo momento, proporcional a la
concentración de sacarosa. Dicho matemáticamente, donde [A] es la concentración de
sacarosa a cada tiempo (t) y k es la constante de proporcionalidad. Se dice que ésta es
una reacción de primer orden.
Una reacción de segundo orden es aquella en la que la velocidad de formación del
producto depende

de la concentración de dos sustratos (como en una reacción de condensación): v =
k [A1] [A2]

del cuadrado de la concentración de un único sustrato (reacción de dimerización):
v = k [A]2
En la tabla siguiente se resumen los distintos tipos de reacción, y la forma de calcular
sus parámetros cinéticos.

  ORDEN CERO PRIMER ORDEN SEGUNDO ORDEN

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 Expresión
diferencial de la
velocidad
Ecuación
integrada de la [A] = -kt + [A]0 Ln[A] = -kt + Ln[A]0
velocidad

Vida media (t1/2)

Representación
que da lugar a [A] vs t Ln[A] vs t 1/[A] vs t
una recta
Signo de la
negativo negativo positivo
pendiente
Significado de la
-k -k k
pendiente
Significado de la
ordenada en el [A]0 Ln[A]0
origen
[A]0 es b eb 1/b

  CINÉTICA ENZIMÁTICA
La cinética enzimática estudia la
velocidad de las reacciones
catalizadas por enzimas. Estos
estudios proporcionan información
directa acerca del mecanismo de la
reacción catalítica y de la
especificidad del enzima. La
velocidad de una reacción
catalizada por un enzima puede
medirse con relativa facilidad, ya que en muchos casos no es necesario purificar o
aislar el enzima. La medida se realiza siempre en las condiciones óptimas de pH,
temperatura, presencia de cofactores, etc, y se utilizan concentraciones saturantes de
sustrato. En estas condiciones, la velocidad de reacción observada es la velocidad
máxima (Vmax). La velocidad puede determinarse bien midiendo la aparición de los
productos o la desaparición de los reactivos.
Al seguir la velocidad de aparición de producto (o de desaparición del sustrato) en
función del tiempo se obtiene la llamada curva de avance de la reacción, o

16
simplemente, la cinética de la reacción. A medida
que la reacción transcurre, la velocidad de
acumulación del producto va disminuyendo porque
se va consumiendo el sustrato de la reacción
(Figura de la derecha). Para evitar esta complicación se procede a medir la velocidad
inicial de la reacción (v0). La velocidad inicial de la reacción es igual a la pendiente de la
curva de avance a tiempo cero (Figura de la derecha). De esta forma, la medida de v 0 se
realiza antes de que se consuma el 10% del total del sustrato, de forma que pueda
considerarse la [S] como esencialmente constante a lo largo del experimento.
Además, en estas condiciones no es necesario considerar la reacción inversa, ya que
la cantidad de producto formada es tan pequeña que la reacción inversa apenas ocurre.
De esta forma se simplifican enormemente las ecuaciones de velocidad.
 
Para estudiar la cinética enzimática se mide
el efecto de la concentración inicial de
sustrato sobre la velocidad inicial de la
reacción, manteniendo la cantidad de
enzima constante. Si representamos v 0
frente a [S]0 obtenemos una gráfica como la
de la Figura de la derecha. Cuando [S]0 es
pequeña, la velocidad inicial es directamente
proporcional a la concentración de sustrato,
y por tanto, la reacción es de primer orden.
A altas [S]0, el enzima se encuentra
saturada por el sustrato, y la velocidad ya no
depende de [S]0. En este punto, la reacción
es de orden cero y la velocidad es máxima (Vmax).

MODELO CINÉTICO DE MICHAELIS-MENTEN

Los estudios sistemáticos del efecto de la concentración inicial del
sustrato sobre la actividad enzimática comenzaron a realizarse a

17
 finales del siglo XIX. Ya en 1882 se introdujo el concepto del complejo
enzima-sustrato como intermediario del proceso de catálisis enzimática. En
1913, Leonor Michaelis (foto de la izquierda) y Maud Menten (foto de la
derecha) desarrollaron esta teoría y propusieron una ecuación de velocidad que
explica el comportamiento cinético de los enzimas.
 

Para explicar la relación observada entre la velocidad inicial (v 0) y la concentración inicial

de sustrato ([S]0) Michaelis y Menten propusieron que las reacciones catalizadas
enzimáticamente ocurren en dos etapas: En la primera etapa se forma el complejo
enzima-sustrato y en la segunda, el complejo enzima-sustrato da lugar a la formación
del producto, liberando el enzima libre:

En este esquema, k1, k2 y k3 son las constantes cinéticas individuales de cada proceso y
también reciben el nombre de constantes microscópicas de velocidad. Según esto,
podemos afirmar que:
 v1 = k1 [E] [S]
 v2 = k2 [ES]
 v3 = k3 [ES]
Se puede distinguir entre enzima libre (E) y enzima unido al sustrato (ES), de forma
que la concentración total de enzima, [ET], (que es constante a lo largo de la
reacción) es:
[ET] = [E] + [ES]
Como [E] = [ET] - [ES], resulta que: v1= k1[S] [ET] - k1 [S] [ES]

 Este modelo cinético adopta la hipótesis

del estado estacionario, según la cual la
concentración del complejo enzima-
sustrato es pequeña y constante a lo largo
de la reacción (Figura de la derecha). Por
tanto, la velocidad de formación del
complejo enzima-sustrato (v1) es igual a la
de su disociación (v2+ v3):
v1 = v 2 + v 3
Además, como [ES] es constante, la velocidad de formación de los productos es
constante:
v = v3 = k3 [ES] = constante.

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Como v1=v2+v3, podemos decir que:
k1[S] [ET] - k1 [S] [ES] = k2 [ES] + k3 [ES]

Despejando [ES], queda que: , siendo , en

donde la expresión (k2+k3)/k1 se ha sustituido por KM, o constante de Michaelis-Menten.
Este enlace nos aporta una explicación sobre las razones que hacen de la K M un
parámetro cinético importante.
Por lo tanto, en el estado estacionario, la velocidad de formación del producto es:

v = v3 = k3 [ES] =

Para cualquier reacción enzimática, [E T], k3 y KM son constantes. Vamos a considerar dos
casos extremos:
 A concentraciones de sustrato pequeñas ([S] << KM) v = (k3 [ET]/KM) [S]. Como los
términos entre paréntesis son constantes, pueden englobarse en una nueva
constante, kobs, de forma que la expresión queda reducida a: v = kobs [S], con lo cual
la reacción es un proceso cinético de primer orden.
 A concentraciones de sustrato elevadas ([S] >> KM), v = k3 [ET]. La velocidad de
reacción es independiente de la concentración del sustrato, y por tanto, la reacción
es un proceso cinético de orden cero. Además, tanto k3 como [ET] son constantes,
y nos permite definir un nuevo parámetro, la velocidad máxima de la reacción
(Vmax): Vmax = k3 [ET], que es la velocidad que se alcanzaría cuando todo el enzima
disponible se encuentra unido al sustrato.
Si introducimos el parámetro Vmax en la ecuación general de la velocidad, (la fórmula
recuadrada anteriormente), obtenemos la expresión más conocida de la ecuación de
Michaelis-Menten:

19
 Hay enzimas que no obedecen la ecuación de
Michaelis-Menten. Se dice que su cinética no
es Michaeliana. Esto ocurre con los enzimas
alostéricos, cuya gráfica v frente a [S] no es
una hipérbola, sino una sigmoide (Figura de la
derecha). En la cinética sigmoidea,
pequeñas variaciones en la [S] en una zona
crítica (cercana a la KM) se traduce en grandes
variaciones en la velocidad de reacción.

 
CÁLCULO DE LA KM Y DE LA Vmax DE UN ENZIMA
La representación gráfica de la ecuación
de Michaelis-Menten (v0 frente a [S]0) es
una hipérbola (Figura de la izquierda). La
Vmax corresponde al valor máximo al que
tiende la curva experimental, y la K M
corresponde a la concentración de
sustrato a la cual la velocidad de la
reacción es la mitad de la Vmax.
 
Para determinar gráficamente los
valores de KM y Vmax es más sencillo
utilizar la representación doble
recíproca (1/v0 frente a 1/[S]0), ya
que es una línea recta. Esta
representación doble recíproca
recibe el nombre de representación
de Lineweaver-Burk (Figura de la
derecha). Es una recta en la cual:
 La pendiente es KM/Vmax
 La abscisa en el origen (1/v 0 =
0) es -1/KM
 La ordenada en el origen
(1/[S]0 = 0) es 1/Vmax
De esta forma, a partir de los datos

20
 experimentales se puede calcular gráficamente, los valores de K M y Vmax de un enzima
para diversos sustratos.

 ACTIVIDAD ENZIMÁTICA
Se define la unidad de actividad enzimática (U) como la cantidad de enzima que cataliza
la conversión de 1 µmol de sustrato en un minuto. La actividad específica es el número de
unidades de enzima por miligramo de proteína (U/mg Prot.) o por mililitro de disolución
(U/ml).
Recientemente, el Sistema Internacional de unidades (SI) ha definido la unidad de actividad
enzimática como la cantidad de enzima que transforma 1 mol de sustrato por segundo.
Esta unidad se llama katal (kat). Como 1 mol son 106 µmoles y 1 minuto son 60 segundos,
resulta que 1 katal equivale a 60 x 10 6 U. Esta unidad es muy grande, de forma que se
utilizan frecuentemente los submúltiplos como el microkatal (µkat, 10 -6 kat) o el nanokatal
(nkat, 10-9 kat).
Cuando se conoce el peso molecular del enzima puro y el número de centros activos por
molécula de enzima, las medidas de actividad enzimática permiten calcular el número de
recambio del enzima, o sea, el número de reacciones elementales que realiza el enzima
por cada centro activo y por unidad de tiempo.

MOTIVOS QUE HACEN DE KM UN PARÁMETRO

CINÉTICO IMPORTANTE

La constante de Michaelis-Menten (KM) es un parámetro cinético importante por

múltiples razones:
 KM es la concentración de sustrato para la cual la velocidad de reacción es
la mitad de la velocidad máxima. En efecto, si KM = [S], la ecuación de
Michaelis-Menten se reduce a: v = Vmax/2.
 El valor de KM da idea de la afinidad del enzima por el sustrato: A menor KM,
mayor afinidad del enzima por el sustrato, y a mayor K M, menor afinidad.
Este hecho tiene fácil explicación si tenemos en cuenta que K M se define como
(k2+k3/k1), donde las reacciones 2 y 3 destruyen el complejo ES, mientras que la
reacción 1 lo forma. Así, si KM es grande, el complejo ES es inestable pues
predomina la tendencia a destruirlo (poca afinidad hacia el sustrato), y si K M es

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 pequeña, el complejo ES es estable, ya que predomina la tendencia a formarlo
(gran afinidad hacia el sustrato).
 La KM del sustrato natural es menor que la de los sustratos análogos. Si dos
sustratos del mismo enzima tienen distinta K M, el que presente mayor K M tiene
menor afinidad por el enzima, y la reacción transcurre siempre a menor velocidad
que con el sustrato de menor K M, salvo a concentraciones saturantes de sustrato,
donde la v = Vmax.
 Los valores de KM de muchos enzimas son próximos a los de la
concentración fisiológica de sus sustratos, de forma que pequeñas
variaciones en la [S] pueden suponer grandes cambios en la velocidad de toda
una ruta metabólica.

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