ENZIMAS
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ENZIMAS
ENZIMAS
Prácticamente todas las reacciones químicas que tienen lugar en los seres vivos están
catalizadas por enzimas. Los enzimas son catalizadores específicos: cada enzima
cataliza un solo tipo de reacción, y casi siempre actúa sobre un único sustrato o sobre un
grupo muy reducido de ellos. En una reacción catalizada por un enzima:
1. La sustancia sobre la que actúa el enzima se llama sustrato.
2. El sustrato se une a una región concreta de la enzima, llamada centro activo. El
centro activo comprende (1) un sitio de unión formado por los aminoácidos que están
en contacto directo con el sustrato y (2) un sitio catalítico, formado por los aminoácidos
directamente implicados en el mecanismo de la reacción
3. Una vez formados los productos el enzima puede comenzar un nuevo ciclo de
reacción
1.- El enzima y su sustrato 2.- Unión al centro activo 3.- Formación de productos
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específicas. Sin embargo hay distintos grados de especificidad. El enzima sacarasa
es muy específico: rompe el enlace -glucosídico de la sacarosa o de compuestos muy
similares. Así, para el enzima sacarasa, la sacarosa es su sustrato natural, mientras
que la maltosa y la isomaltosa son sustratos análogos. El enzima actúa con máxima
eficacia sobre el sustrato natural y con menor eficacia sobre los sustratos análogos.
Entre los enzimas poco específicos están las proteasas digestivas como la
quimotripsina, que rompe los enlaces amida de proteínas y péptidos de muy diverso
tipo.
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y la arginasa lo tiene a pH 10 (Figura de la izquierda). Como ligeros cambios del pH
pueden provocar la desnaturalización de la proteína, los seres vivos han desarrollado
sistemas más o menos complejos para mantener estable el pH intracelular: Los
amortiguadores fisiológicos .
EFECTO
DE LA TEMPERATURA SOBRE LA
ACTIVIDAD ENZIMÁTICA
En general, los aumentos de temperatura
aceleran las reacciones químicas: por cada
10ºC de incremento, la velocidad de
reacción se duplica. Las reacciones
catalizadas por enzimas siguen esta ley
general. Sin embargo, al ser proteínas, a
partir de cierta temperatura, se empiezan a
desnaturalizar por el calor. La temperatura
a la cual la actividad catalítica es máxima
se llama temperatura óptima (Figura de la
derecha). Por encima de esta temperatura,
el aumento de velocidad de la reacción
debido a la temperatura es contrarrestado por la pérdida de actividad catalítica debida
a la desnaturalización térmica, y la actividad enzimática decrece rápidamente hasta
anularse.
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NOMENCLATURA DE LAS ENZIMAS
Hay varias formas mediante las cuales se asigna un nombre a un enzima:
nombres particulares
nombre sistemático
código de la comisión enzimática (enzyme comission)
NOMBRES PARTICULARES
Antiguamente, los enzimas recibían nombres particulares, asignados por su
descubridor. Al ir aumentando el número de enzimas conocidos, se hizo necesaria una
nomenclatura sistemática que informara sobre la acción específica de cada enzima y
los sustratos sobre los que actuaba.
NOMBRE SISTEMÁTICO
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simplemente lactasa. Además de los nombres sistemáticos, aún persisten otros
consagrados por el uso. Así, la glucosa:ATP fosforiltransferasa se llama habitualmente
glucoquinasa.
Clase 1: OXIDORREDUCTASAS
Catalizan reacciones de oxidorreducción, es
decir, transferencia de hidrógeno (H) o electrones
(e-) de un sustrato a otro, según la reacción general:
AH2 + B A + BH2
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Clase 2: TRANSFERASAS
Clase 3: HIDROLASAS
Catalizan las reacciones de hidrólisis:
A-B + H2O AH + B-OH
Un ejemplo es la lactasa, que cataliza la reacción:
lactosa + agua glucosa + galactosa
Clase 4: LIASAS
Catalizan reacciones de ruptura o soldadura de sustratos:
A-B A+B
Un ejemplo es la acetoacetato descarboxilasa, que cataliza la reacción:
ácido acetoacético CO2 + acetona
Clase 5: ISOMERASAS
Catalizan la interconversión de isómeros:
A B
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Son ejemplos la fosfotriosa isomerasa y la fosfoglucosa isomerasa, que catalizan las reacciones
representadas en la tabla inferior:
fosfotriosa isomerasa fosfoglucosa isomerasa
gliceraldehído-3- dihidroxiacetona- glucosa- fructosa-6-
fosfato fosfato 6-fosfato fosfato
Clase 6: LIGASAS
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La acción de los catalizadores consiste,
precisamente, en disminuir la E a (Figura superior
derecha). Los enzimas son catalizadores
especialmente eficaces, ya que disminuyen la E a aún
más que los catalizadores inorgánicos. Por ejemplo, la
descomposición del agua oxigenada (H 2O2) para dar
H2O y O2 puede ocurrir sin catalizador, con un
catalizador inorgánico (platino), o con un enzima
específico (catalasa). Las respectivas E a para cada
proceso son 18, 12 y 6 Kcal/mol. Así, se puede calcular
que el platino acelera la reacción 20.000 veces,
mientras que la catalasa la acelera 370.000 veces.
Para que una reacción química tenga lugar, las moléculas de
los reactantes deben chocar con una energía y una orientación
adecuadas. La actuación del enzima (1) permite que los
reactantes (sustratos) se unan a su centro activo con una
orientación óptima para que la reacción se produzca y (2)
modifica las propiedades químicas del sustrato unido a su
centro activo, debilitando los enlaces existentes y facilitando
la formación de otros nuevos (Figuras inferiores):
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MODELO LLAVE-CERRADURA
El modelo llave-cerradura supone que la estructura del
sustrato y la del centro activo son complementarias, de la
misma forma que una llave encaja en una cerradura.
Este modelo es válido en muchos casos, pero no es
siempre correcto.
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modificación covalente
activación por proteólisis
isoenzimas
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velocidad de reacción se duplica. Las reacciones catalizadas por enzimas siguen esta
ley general. Sin embargo, al ser proteínas, a partir de cierta temperatura, se empiezan a
desnaturalizar por el calor. La temperatura a la cual la actividad catalítica es máxima se
llama temperatura óptima (Figura de la derecha). Por encima de esta temperatura, el
aumento de velocidad de la reacción debido a la temperatura es contrarrestado por la
pérdida de actividad catalítica debida a la desnaturalización térmica, y la actividad
enzimática decrece rápidamente hasta anularse.
EFECTO DE LOS COFACTORES SOBRE LA
ACTIVIDAD ENZIMÁTICA
A veces, un enzima requiere para su función la presencia de sustancias no proteicas
que colaboran en la catálisis: los cofactores. Los cofactores pueden ser iones
inorgánicos como el Fe++, Mg++, Mn++, Zn++ etc. Casi un tercio de los enzimas conocidos
requieren cofactores. Cuando el cofactor es una molécula orgánica se llama coenzima.
Muchas de estas coenzimas se sintetizan a partir de vitaminas. En la figura de la
izquierda podemos observar una molécula de mioglobina (proteína que transporta
oxígeno al tejido muscular) y su coenzima (el grupo hemo, representado en color
verde). Cuando los cofactores y las coenzimas se encuentran unidos covalentemente al
enzima se llaman grupos prostéticos. La forma catalíticamente activa del enzima, es decir,
el enzima unida a su grupo prostético, se llama holoenzima. La parte proteica de un holoenzima
(inactiva) se llama apoenzima, de forma que:
apoenzima + grupo prostético= holoenzima
EFECTO DE LAS CONCENTRACIONES SOBRE LA
ACTIVIDAD ENZIMÁTICA
La velocidad de una reacción enzimática depende de la
concentración de sustrato. La Figura de la derecha muestra
la velocidad de una reacción enzimática a 6
concentraciones distintas de sustrato.
Además, la presencia de los productos finales puede
hacer que la reacción sea más lenta, o incluso invertir su
sentido (Figura inferior).
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EFECTODE LOS INHIBIDORES SOBRE LA
ACTIVIDAD ENZIMÁTICA
Ciertas moléculas pueden inhibir la acción catalítica de un enzima: son los inhibidores.
Estos inhibidores bien pueden ocupar temporalmente el centro activo por semejanza
estructural con el sustrato original (inhibidor competitivo) o bien alteran la
conformación espacial del enzima, impidiendo su unión al sustrato (inhibidor no
competitivo) (Figuras inferiores).
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Ciertas sustancias tienden a estabilizar la forma R. Son los llamados moduladores
positivos. El propio sustrato es a menudo un modulador positivo. Las moléculas que
favorecen la forma R pero que actúan sobre una región de la enzima distinta del centro
activo son los activadores alostéricos (Figura inferior izquierda).
Las sustancias que favorecen la forma T y disminuyen la actividad enzimática son los
moduladores negativos. Si estos moduladores actúan en lugares distintos del centro
activo del enzima se llaman inhibidores alostéricos (Figura superior derecha).
EFECTO DE LA MODIFICACIÓN COVALENTE SOBRE
LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA
Otros enzimas pasan de una forma menos activa a otra más activa uniéndose
covalentemente a un grupo químico de pequeño tamaño como el P i o el AMP. También
se da el caso inverso, en el que un enzima muy activo se desactiva al liberar algún grupo
químico. En las enzimas de las vías degradativas del metabolismo, la forma fosforilada es
más activa que la no fosforilada, mientras que en las vías biosintéticas ocurre lo contrario.
En las figuras inferiores se ilustra la activación de una proteína por fosforilación.
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El enzima no fosforilado es
Elementos de la reacción El enzima fosforilado es activo
inactivo
REGULACIÓN DE LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA POR
MEDIO DE ISOENZIMAS
Algunos enzimas tienen distinta estructura molecular aunque su función biológica es
similar. Se llaman isozimas o isoenzimas. Estas diferencias de estructura se
traducen en ligeros cambios en sus propiedades, de forma que cada isozima se
adapta perfectamente a la función que debe realizar. Así, podemos observar la
existencia de isoenzimas en función de:
el tipo de tejido: Por ejemplo, la lactato deshidrogenasa presenta isozimas
distintos en músculo y corazón.
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el compartimiento celular donde actúa: Por ejemplo, la malato
deshidrogenasa del citoplasma es distinta de la de la mitocondria.
el momento concreto del desarrollo del individuo: Por ejemplo, algunos
enzimas de la glicólisis del feto son diferentes de los mismos enzimas en el
adulto.
CINÉTICA ENZIMÁTICA
Los principios generales de las reacciones químicas se aplican
también a las reacciones enzimáticas. Por este motivo, antes de
empezar con la cinética química, se van a repasar algunos
conceptos básicos de cinética química.
A continuación, se describirán los siguientes conceptos:
Cinética enzimática
Modelo cinético de Michaelis-Menten
Cálculo de la KM y la Vmax de un enzima
Actividad enzimática
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Expresión
diferencial de la
velocidad
Ecuación
integrada de la [A] = -kt + [A]0 Ln[A] = -kt + Ln[A]0
velocidad
Representación
que da lugar a [A] vs t Ln[A] vs t 1/[A] vs t
una recta
Signo de la
negativo negativo positivo
pendiente
Significado de la
-k -k k
pendiente
Significado de la
ordenada en el [A]0 Ln[A]0
origen
[A]0 es b eb 1/b
CINÉTICA ENZIMÁTICA
La cinética enzimática estudia la
velocidad de las reacciones
catalizadas por enzimas. Estos
estudios proporcionan información
directa acerca del mecanismo de la
reacción catalítica y de la
especificidad del enzima. La
velocidad de una reacción
catalizada por un enzima puede
medirse con relativa facilidad, ya que en muchos casos no es necesario purificar o
aislar el enzima. La medida se realiza siempre en las condiciones óptimas de pH,
temperatura, presencia de cofactores, etc, y se utilizan concentraciones saturantes de
sustrato. En estas condiciones, la velocidad de reacción observada es la velocidad
máxima (Vmax). La velocidad puede determinarse bien midiendo la aparición de los
productos o la desaparición de los reactivos.
Al seguir la velocidad de aparición de producto (o de desaparición del sustrato) en
función del tiempo se obtiene la llamada curva de avance de la reacción, o
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simplemente, la cinética de la reacción. A medida
que la reacción transcurre, la velocidad de
acumulación del producto va disminuyendo porque
se va consumiendo el sustrato de la reacción
(Figura de la derecha). Para evitar esta complicación se procede a medir la velocidad
inicial de la reacción (v0). La velocidad inicial de la reacción es igual a la pendiente de la
curva de avance a tiempo cero (Figura de la derecha). De esta forma, la medida de v 0 se
realiza antes de que se consuma el 10% del total del sustrato, de forma que pueda
considerarse la [S] como esencialmente constante a lo largo del experimento.
Además, en estas condiciones no es necesario considerar la reacción inversa, ya que
la cantidad de producto formada es tan pequeña que la reacción inversa apenas ocurre.
De esta forma se simplifican enormemente las ecuaciones de velocidad.
Para estudiar la cinética enzimática se mide
el efecto de la concentración inicial de
sustrato sobre la velocidad inicial de la
reacción, manteniendo la cantidad de
enzima constante. Si representamos v 0
frente a [S]0 obtenemos una gráfica como la
de la Figura de la derecha. Cuando [S]0 es
pequeña, la velocidad inicial es directamente
proporcional a la concentración de sustrato,
y por tanto, la reacción es de primer orden.
A altas [S]0, el enzima se encuentra
saturada por el sustrato, y la velocidad ya no
depende de [S]0. En este punto, la reacción
es de orden cero y la velocidad es máxima (Vmax).
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finales del siglo XIX. Ya en 1882 se introdujo el concepto del complejo
enzima-sustrato como intermediario del proceso de catálisis enzimática. En
1913, Leonor Michaelis (foto de la izquierda) y Maud Menten (foto de la
derecha) desarrollaron esta teoría y propusieron una ecuación de velocidad que
explica el comportamiento cinético de los enzimas.
En este esquema, k1, k2 y k3 son las constantes cinéticas individuales de cada proceso y
también reciben el nombre de constantes microscópicas de velocidad. Según esto,
podemos afirmar que:
v1 = k1 [E] [S]
v2 = k2 [ES]
v3 = k3 [ES]
Se puede distinguir entre enzima libre (E) y enzima unido al sustrato (ES), de forma
que la concentración total de enzima, [ET], (que es constante a lo largo de la
reacción) es:
[ET] = [E] + [ES]
Como [E] = [ET] - [ES], resulta que: v1= k1[S] [ET] - k1 [S] [ES]
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Como v1=v2+v3, podemos decir que:
k1[S] [ET] - k1 [S] [ES] = k2 [ES] + k3 [ES]
v = v3 = k3 [ES] =
Para cualquier reacción enzimática, [E T], k3 y KM son constantes. Vamos a considerar dos
casos extremos:
A concentraciones de sustrato pequeñas ([S] << KM) v = (k3 [ET]/KM) [S]. Como los
términos entre paréntesis son constantes, pueden englobarse en una nueva
constante, kobs, de forma que la expresión queda reducida a: v = kobs [S], con lo cual
la reacción es un proceso cinético de primer orden.
A concentraciones de sustrato elevadas ([S] >> KM), v = k3 [ET]. La velocidad de
reacción es independiente de la concentración del sustrato, y por tanto, la reacción
es un proceso cinético de orden cero. Además, tanto k3 como [ET] son constantes,
y nos permite definir un nuevo parámetro, la velocidad máxima de la reacción
(Vmax): Vmax = k3 [ET], que es la velocidad que se alcanzaría cuando todo el enzima
disponible se encuentra unido al sustrato.
Si introducimos el parámetro Vmax en la ecuación general de la velocidad, (la fórmula
recuadrada anteriormente), obtenemos la expresión más conocida de la ecuación de
Michaelis-Menten:
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Hay enzimas que no obedecen la ecuación de
Michaelis-Menten. Se dice que su cinética no
es Michaeliana. Esto ocurre con los enzimas
alostéricos, cuya gráfica v frente a [S] no es
una hipérbola, sino una sigmoide (Figura de la
derecha). En la cinética sigmoidea,
pequeñas variaciones en la [S] en una zona
crítica (cercana a la KM) se traduce en grandes
variaciones en la velocidad de reacción.
CÁLCULO DE LA KM Y DE LA Vmax DE UN ENZIMA
La representación gráfica de la ecuación
de Michaelis-Menten (v0 frente a [S]0) es
una hipérbola (Figura de la izquierda). La
Vmax corresponde al valor máximo al que
tiende la curva experimental, y la K M
corresponde a la concentración de
sustrato a la cual la velocidad de la
reacción es la mitad de la Vmax.
Para determinar gráficamente los
valores de KM y Vmax es más sencillo
utilizar la representación doble
recíproca (1/v0 frente a 1/[S]0), ya
que es una línea recta. Esta
representación doble recíproca
recibe el nombre de representación
de Lineweaver-Burk (Figura de la
derecha). Es una recta en la cual:
La pendiente es KM/Vmax
La abscisa en el origen (1/v 0 =
0) es -1/KM
La ordenada en el origen
(1/[S]0 = 0) es 1/Vmax
De esta forma, a partir de los datos
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experimentales se puede calcular gráficamente, los valores de K M y Vmax de un enzima
para diversos sustratos.
ACTIVIDAD ENZIMÁTICA
Se define la unidad de actividad enzimática (U) como la cantidad de enzima que cataliza
la conversión de 1 µmol de sustrato en un minuto. La actividad específica es el número de
unidades de enzima por miligramo de proteína (U/mg Prot.) o por mililitro de disolución
(U/ml).
Recientemente, el Sistema Internacional de unidades (SI) ha definido la unidad de actividad
enzimática como la cantidad de enzima que transforma 1 mol de sustrato por segundo.
Esta unidad se llama katal (kat). Como 1 mol son 106 µmoles y 1 minuto son 60 segundos,
resulta que 1 katal equivale a 60 x 10 6 U. Esta unidad es muy grande, de forma que se
utilizan frecuentemente los submúltiplos como el microkatal (µkat, 10 -6 kat) o el nanokatal
(nkat, 10-9 kat).
Cuando se conoce el peso molecular del enzima puro y el número de centros activos por
molécula de enzima, las medidas de actividad enzimática permiten calcular el número de
recambio del enzima, o sea, el número de reacciones elementales que realiza el enzima
por cada centro activo y por unidad de tiempo.
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pequeña, el complejo ES es estable, ya que predomina la tendencia a formarlo
(gran afinidad hacia el sustrato).
La KM del sustrato natural es menor que la de los sustratos análogos. Si dos
sustratos del mismo enzima tienen distinta K M, el que presente mayor K M tiene
menor afinidad por el enzima, y la reacción transcurre siempre a menor velocidad
que con el sustrato de menor K M, salvo a concentraciones saturantes de sustrato,
donde la v = Vmax.
Los valores de KM de muchos enzimas son próximos a los de la
concentración fisiológica de sus sustratos, de forma que pequeñas
variaciones en la [S] pueden suponer grandes cambios en la velocidad de toda
una ruta metabólica.
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