Scribd Logo
Cargar

¡Te damos la bienvenida a Scribd!

  • 72 vistas

    BioMol Lab Sesion 6 - Electroforesis

    Cargado por

    Andrea Mendoza
    La electroforesis es una técnica que permite separar fragmentos de ADN, ARN y proteínas en función de su tamaño y carga eléctrica mediante la aplicación de un campo eléctrico. El documento describe los principios y técnicas de electroforesis de ácidos nucleicos y proteínas, incluyendo la preparación de geles de agarosa y electroforesis en gel de poliacrilamida para separar fragmentos de ADN y proteínas respectivamente. También incluye ejemplos y preguntas sobre la interpretación de resultados de electroforesis.

    Copyright:

    © All Rights Reserved
    Descargue como PDF, TXT o lea en línea desde Scribd

    BioMol Lab Sesion 6 - Electroforesis

    Cargado por

    Andrea Mendoza
    72 vistas4 páginas
    La electroforesis es una técnica que permite separar fragmentos de ADN, ARN y proteínas en función de su tamaño y carga eléctrica mediante la aplicación de un campo eléctrico. El documento describe los principios y técnicas de electroforesis de ácidos nucleicos y proteínas, incluyendo la preparación de geles de agarosa y electroforesis en gel de poliacrilamida para separar fragmentos de ADN y proteínas respectivamente. También incluye ejemplos y preguntas sobre la interpretación de resultados de electroforesis.

    Descripción original:

    Derechos de autor

    © © All Rights Reserved

    Formatos disponibles

    PDF, TXT o lea en línea desde Scribd

    ¿Le pareció útil este documento?

    ¿Este contenido es inapropiado?

    La electroforesis es una técnica que permite separar fragmentos de ADN, ARN y proteínas en función de su tamaño y carga eléctrica mediante la aplicación de un campo eléctrico. El documento describe los principios y técnicas de electroforesis de ácidos nucleicos y proteínas, incluyendo la preparación de geles de agarosa y electroforesis en gel de poliacrilamida para separar fragmentos de ADN y proteínas respectivamente. También incluye ejemplos y preguntas sobre la interpretación de resultados de electroforesis.

    Copyright:

    © All Rights Reserved
    Descargue como PDF, TXT o lea en línea desde Scribd
    Descargar como pdf o txt
    72 vistas4 páginas

    BioMol Lab Sesion 6 - Electroforesis

    Cargado por

    Andrea Mendoza
    La electroforesis es una técnica que permite separar fragmentos de ADN, ARN y proteínas en función de su tamaño y carga eléctrica mediante la aplicación de un campo eléctrico. El documento describe los principios y técnicas de electroforesis de ácidos nucleicos y proteínas, incluyendo la preparación de geles de agarosa y electroforesis en gel de poliacrilamida para separar fragmentos de ADN y proteínas respectivamente. También incluye ejemplos y preguntas sobre la interpretación de resultados de electroforesis.

    Copyright:

    © All Rights Reserved
    Descargue como PDF, TXT o lea en línea desde Scribd
    Descargar como pdf o txt
    de 4

    Laboratorio de Biología Molecular – Biología UPTC

    Grupo de lab​: _______,


    Integrantes Código
    Julieth Andrea Niño Mendoza 201524044
    Sandra Lucía Góngora Monzón 201721854
    Edith Johana Pinilla GiL 201721913
    Roberto Muñoz S. 201721760

    ELECTROFORESIS

    1. OBJETIVOS

    ● Conocer los principios de la electroforesis


    ● Identificar las dos principales técnicas de electroforesis que se realizan en biología molecular
    ● Reconocer las diferencias entre las electroforesis de ácidos nucleicos y de proteínas

    2. PROCEDIMIENTO

    2.1. PARTE 1: Durante esta parte de la sesión se presentarán los siguientes videos
    (subtitulados) ilustrativos:

    ● Science education: “DNA gel electrophoresis”


    ● Science education: “Separating Protein with SDS-PAGE”

    2.2. PARTE 2​: Durante esta parte de la sesión los estudiantes revisaran los siguientes videos
    (disponibles en el aula virtual o en YouTube):

    ● Easy method for separating charged molecules Gel Electrophoresis - Science Snacks:
    https://www.youtube.com/watch?v=OPMPAx1obIo&t=326s
    ● DIY Biology: Build a gel electrophoresis kit and conduct experiments with step-by-step
    instructions: ​https://www.youtube.com/watch?v=NYLgCq0HiH4&t=413s

    a. Diríjase al siguiente enlace: ​https://learn.genetics.utah.edu/content/labs/gel/ y realice la


    simulación de una electroforesis siguiendo las instrucciones de la página.

    b. Conteste el siguiente cuestionario a partir de la información de esta guía, la sesión de clase y


    otras fuentes.

    a. ¿Cuál es la finalidad de la electroforesis en gel?

    La electroforesis en gel es una técnica utilizada para separar fragmentos de DNA (u


    otras macromoléculas, como RNA y proteínas) por su tamaño y carga.
    b. Determine las cantidades de agarosa que necesitaría pesar para preparar un gel de
    agarosa a las siguientes concentraciones e consulte el rango en pares de bases (bp)
    óptimo para cada concentración

    g de agarosa Porcentaje final Volumen final Rango bp


    1 0,35 0.7 % 50 ml 800-12,000
    2 0,5 2% 25 ml 50-2,000
    3 2,4 3% 80 ml <100

    c. La siguiente imagen corresponde a un gel de agarosa al 3% en el que se separaron


    fragmentos de DNA obtenidos de una digestión enzimática. Con base al patrón de peso
    molecular (MP, que corresponde al Hyperladder V), determine los posibles tamaños de
    los fragmentos en las muestras 2, 4, 8 y 9.

    Muestra Tamaño en pares de bases (pb)


    Carril 2 500 250
    Carril 4 500 300 200
    Carril 8 400 300 200
    Carril 9 400 300 200

    d. En la electroforesis, el tamaño, la forma y la conformación de la molécula influye en el


    corrido electroforético. La siguiente imagen corresponde a una electroforesis que se
    corrió para confirmar la extracción de un plásmido (DNA circular de menor tamaño que
    el DNA genómico) que tiene un peso de 3200 pb. La misma muestra se sembró en dos
    pozos (P1 y P2) junto con un marcador de peso (MP) ¿Por qué se ven 3 diferentes
    bandas en el gel, si la muestra corresponde a un solo plásmido

    RTA: En la banda se observan tres bandas de diferente intensidad y tamaño, que


    corresponden a las tres formas principales de enrollamiento del DNA plasmídico.

    e. La siguiente imagen corresponde a un SDS-PAGE. Se observa una banda a 25 kDa


    (señalada con fechas rojas) que es la banda esperada de la proteína que se está
    analizando. Sin embargo, también se observa una banda que tiene un peso de 50 kDa (el
    doble de la banda esperada) y de mayor grosor. ¿A qué cree usted correspondería esta
    banda, si la muestra que se corrió en la electroforesis corresponde a una única proteína?

    RTA: que la carga, el tamaño y la forma de la proteìna afecta a todas sus tasas de
    migraciòn electroforéticas.

    3. REFERENCIAS
    Fritsch, R.J. Krause. I. (2003). ​Electrophoresis. Encyclopedia of Food Sciences and Nutrition (Second
    Edition), Academic Press, Editor(s): Benjamin Caballero. Pages 2055-2062. ISBN
    9780122270550.

    Espinosa-Asuar L. (2007). Capítulo 17: Guía practica sobre la tecnica de PCR. Ecología molecular
    Editor: México: Secretaría de Medio Ambiente y Recursos Naturales, Instituto Nacional de
    Ecología: Comisión Nacional para el Conocimiento y Uso de la Biodiversidad. Páginas 517-539.
    ISBN 9789688178393

    Garfin DE. (2009). ​One-dimensional gel electrophoresis​. Methods Enzymol 463: 497–513

    Scull. J.C. (2014). ​Nucleic Acid Extraction Techniques. Pathobiology of Human Disease,​ Academic
    Press, Editor(s): Linda M. McManus, Richard N. Mitchell. Pages 4059-4063. ISBN
    9780123864574,

    BIO-RAD. ​A Guide to Polyacrylamide Gel Electrophoresis and Detection​. Bio-Rad Laboratories, Inc.
    [Citado: 2020/07/05]. ​https://www.bio-rad.com/webroot/web/pdf/lsr/literature/Bulletin_6040.pdf

    También podría gustarte