Acidosis respiratoria y metabólica en

salmónidos y sus consecuencias:

NEFROCALCINOSIS, CALCINOSIS GÁSTRICA Y PÉRDIDA DE DENSIDAD ÓSEA

Carlos Sandoval Hurtado1,2, Enrique Paredes Herbach3, Javier Escarate1,2

1
M.V., MSc (c). Escuela de Graduados, Fac. Ciencias Veterinarias, Universidad Austral de Chile.
2
Investigación & Desarrollo Laboratorio Vehice Ltda.
3
M.V., Dr. med.vet. Instituto de Patología Animal, Universidad Austral de Chile.
[email protected] - [email protected] - [email protected]

INTRODUCCIÓN TOXICIDAD POR DIÓXIDO DE CARBONO

Los peces toman el O2 desde el agua de cultivo y excretan el CO2 La exposición crónica a niveles elevados pero sub-letales de CO2
(Groot et al., 1995). El intercambio de gases ocurre principal- puede comprometer el crecimiento y el bienestar de salmón del
mente a través de las branquias en la mayoría de las especies de Atlántico (Fivelstad et al., 1999). Los efectos a largo plazo de
peces, aunque algunas especies utilizan la piel y estructuras si- la exposición a altos niveles de CO2 en peces incluyen tasa de
milares a pulmones además de las branquias. Así como el agua crecimiento reducida y nefrocalcinosis (Smart et al., 1979; Fi-
fluye a través de las branquias, el O2 en el agua difunde hacia la velstad et al., 1999; 2003).
circulación sanguínea a través de los vasos de los filamentos y
lamelas. Simultáneamente, el CO2 difunde desde la sangre hacia En ambientes hiperóxicos, el pez reduce la frecuencia respira-
el agua (Groot et al., 1995). toria (hipoventilación) y esto puede causar hipercapnia debido
a la retención de CO2 en la sangre. La ventilación reducida en
La regulación ácido-base en vertebrados, lo que incluye a los pe- hiperoxia causa incremento de la PCO2 y de HCO3-, mientras
ces, se ha vinculado a la excreción del dióxido de carbono (CO2). el pH se comienza a reducir. Sin embargo, el pez compensa la
Esto ocurre a través de reacciones reversibles de hidratación y acidosis con un incremento de la concentración sanguínea de
deshidratación del CO2 y de los equivalentes ácido-base H+ y HCO3- mediante el intercambio Cl- / HCO3- (Musa, S. 2014).
HCO3-, lo cual se resume en la siguiente ecuación (Gilmour and
Perry, 2009): Por ejemplo, si la saturación de oxígeno se eleva a un 500%
durante el transporte, cuando el O2 se adiciona directamente al
agua de transporte de los peces, puede ocurrir un desbalance de
CO2 + H2O <-> H+ + HCO3- iones en el plasma, hipercapnia, acidosis respiratoria y estrés en
smolts de salmón del Atlántico (Musa, S. 2014).

A menos que el CO2 sea removido del agua de cultivo (usual-

mente con recambio del agua o desgasificación), la excreción de
CO2 por el pez incrementa la concentración y la presión parcial
de CO2 en el agua. Cualquier incremento en la presión parcial
de CO2 en el ambiente, se refleja con el aumento del CO2 en la
sangre. Es por esto, que la hipercarbia acuática (aumento de la
presión de CO2 en el agua) causa hipercapnia (aumento de la
presión parcial de CO2 sanguíneo) en los peces y correspondien-
temente una disminución del pH sanguíneo (acidemia) y esto,
cambia el equilibrio de HCO3- a CO2. Sin embargo, en un perio-
do de pocos días el pez puede compensar la reducción del pH
sanguíneo por excreción de H+ y tomando HCO3- desde el agua
que lo rodea, a través del intercambio de HCO3- y Cl- (Musa, S.
2014). Por esto, el pez sujeto a ambientes hipercárbicos puede
Figura 1. Representación esquemática de los tipos celulares del epitelio tener el pH de la sangre cerca de valores normales mientras
branquial de la trucha, responsables de la regulación ácido-base (Perry
y Gilmour, 2006).
está hipercápnico. Sin embargo, las concentraciones de CO2 que
reducen el crecimiento no son lo suficientemente elevadas para con el desarrollo de nefrocalcinosis. Esto último se corresponde
afectar la afinidad del oxígeno a la hemoglobina. Los peces pue- con el incremento en la variación de minerales en riñón según el
den tolerar moderadamente concentraciones elevadas de CO2 estudio de trucha arcoíris expuesta a CO2 observado por Smart et
disuelto. Si la tasa de incremento es lenta, se debe a que el siste- al., (1979); Fivelstad et al., (2003).
ma de buffer en la sangre puede compensar con un incremento
de la concentración de HCO3- en el plasma, lo suficiente para También se ha demostrado que en salmónidos expuestos a ele-
estabilizar el pH y prevenir la acidosis. vadas concentraciones de CO2, se produce un incremento en los
niveles de bicarbonato sanguíneo, lo que podría conducir a un
Cuando falla la remoción del dióxido de carbono, se produce aumento en la excreción urinaria de bicarbonato con un posterior
hipercapnia, acidosis y estrés respiratorio, hipoxia en los tejidos, aumento de pH de la orina (Smart et al., 1979).
narcosis por CO2 y la muerte. En general, los peces producen
alrededor de 1.4 mg de CO2 por cada mg de O2 que ellos consu- Una explicación al efecto del CO2 en la aparición de nefrocalci-
men. De esta manera, por 1 kg de carga de peces consumiendo nosis es que el ácido de fosfato de calcio presente en la orina,
O2 a 200 mg/h, producen cerca de 280 mg de CO2 cada una precipita si el pH de la orina se alcaliniza, debido a que su solu-
hora. La trucha arcoíris cuando es transportada a una densidad bilidad disminuye al aumentar el pH. Hay evidencias de que un
de carga normal de 0.36 kg/L, puede fácilmente producir sufi- cambio de este tipo podría ocurrir en los peces expuestos a una
ciente CO2 para elevar la concentración inicial a un indeseable elevada concentración de CO2. Al respecto y para complementar
valor de 30 mg/L o más dentro de 30 minutos. lo anteriormente citado, se sabe que el riñón juega un rol clave
en la regulación ácido-base, contribuyendo en esta regulación
En la práctica, las concentraciones de CO2 de 20-30 mg/L se entre un 5 a un 30%, cuando se alteran las tasas de excreción
producen dentro de 30 minutos después de carga en la mayoría de H+ del cuerpo completo por cambios en el pH sistémico
de las especies, a menos que se tomen ciertas medidas preven- (Gilmour and Perry, 2009).
tivas como lo es la aireación y agitación de superficie del agua
(Wedemeyer, 1996). Deformidades óseas asociadas al incremento
del CO2
Concentraciones mayores a 15-20 mg CO2 /L, son consideradas El rol del CO2 en el rendimiento, en la composición/estructura de
por sobre el máximo recomendable para los salmónidos durante huesos y como potencial causa de deformidades de la columna
el traslado, ya que el estrés respiratorio de los efectos de Bohr se ha estudiado por Martens et al (2006). En dónde 2 grupos
y de Root comienzan a ocurrir a niveles mayores. Si se permite de peces fueron expuestos a un nivel bajo (control) y a un nivel
que el CO2 disuelto del agua del estanque de traslado aumente alto de CO2 por 135 días durante la fase de agua dulce. Al final
sobre los 20-30 mg/L, la concentración de CO2 en la sangre del periodo de agua dulce, hubo diferencias de peso entre el
comenzará a aumentar, y si la hipercapnia se torna severa, el grupo expuesto y el grupo control. Esta fue de un 20.9% menos
pH sanguíneo declinará (acidosis respiratoria) y el transporte de para el grupo expuesto. Estas diferencias de peso no fueron ob-
oxígeno a los tejidos se verá perjudicado. servadas al final del periodo de engorda. Al final del periodo de
agua dulce no se observó nefrocalcinosis ni deformidades de la
La acidosis puede disminuir el transporte del oxígeno a los teji- columna vertebral. Al realizar examen de rayos X, se reveló anor-
dos por disminución de la capacidad de unión de la hemoglobina malidades leves en algunos cuerpos vertebrales, indistintamente
al oxígeno (efecto Root). Para los salmónidos, el oxígeno disuel- de los grupos experimentales. A pesar de la ausencia de defor-
to requerido para proveer suficiente oxígeno a los tejidos y así midades, la histología reveló que la exposición a altos niveles de
soportar una actividad de natación moderada, aumenta desde CO2 resultó en un incremento en el volumen trabecular y mayor
los 6 mg/L, siempre que no haya o exista un nivel pequeño de tasa de remodelación ósea (aumento de actividad de osteoblas-
CO2, hasta más de 11 mg/L si es que la concentración de CO2 tos) y reabsorción (actividad de osteoclastos) al final de la etapa
disuelto se eleva a 30 mg/L. de agua dulce (Martens et al., 2006).

De acuerdo a lo señalado por Eddy et al. (1979), niveles ele- En otro estudio realizado por Graff et al, (2002), en donde se
vados de dióxido de carbono, interfieren con la función tubular hizo un estudio multivariable de los efectos de la vitamina K,
normal del riñón, alcalinizando el fluido y la orina de los túbu- vitamina D3, calcio dietario, dióxido de carbono disuelto sobre
los, que a su vez favorece la formación de depósitos de fosfato el crecimiento, minerales de los huesos, estado vitamínico y ren-
de calcio (nefrocalcinosis). Durante la fase de agua dulce, no dimiento sanitario en smolt de salmón del Atlántico Salmo salar.
existe una tendencia general de incremento con el tiempo en los Los altos niveles de CO2 provocaron un menor crecimiento de
valores de calcio renal. Según Fivelstad et al., (1999), luego de los peces, pero no se registró ningún tipo de deformidad visible
58 días existe incremento en el efecto del tratamiento, con incre- en ningún momento. La materia seca, proteína, la composición
mentos en los niveles de calcio renal con el aumento del CO2 en de cenizas de huesos y concentraciones de Ca, fósforo (P) y
el agua. Los niveles de calcio renal son generalmente mayores magnesio (Mg) en huesos no fueron afectados significativamente
y más variables a diferencia del grupo control, lo cual se refleja por ninguna de las variables del diseño. Efectos menores fueron
observados en los parámetros clínicos de la homeostasis del Ca de absorción de cationes bivalentes lo que resulta en un au-
en plasma, estrés y rendimiento sanitario. mento de la concentración de calcio dentro del lumen tubular
favoreciendo la precipitación del calcio. Cuando ocurre la pre-
Nefrocalcinosis como consecuencia de una hi- cipitación, la presión causa una necrosis del epitelio y conse-
percapnia cuentemente se reduce la absorción del calcio llevando a una
Una de las patologías no infecciosas de importancia que se pre- acelerada precipitación del calcio al interior del lumen.
sentan en los sistemas de cultivo intensivo de agua dulce es la
nefrocalcinosis. La nefrocalcinosis o urolitiasis, es el término que Respecto al rol de las concentraciones séricas de minerales ta-
se utiliza para describir el depósito de sales de calcio y magnesio les como el Ca, P y Mg diferentes investigaciones afirman que
dentro de los uréteres y ductos colectores de peces de cultivo no existe correlación entre éstas y la prevalencia o la gravedad
y silvestres. La apariencia macroscópica de los riñones es au- de la nefrocalcinosis. Aunque un análisis químico realizado por
mentada de tamaño y color gris con una superficie irregular y Gillespie y Evans (1979) de los gránulos extraídos con NaOH,
depósitos de un material blanco en los uréteres. obtuvieron una composición de un 30.3% Ca, 2.5% de Mg,
15.3% de P, y 2.5% de CO3.
Existen dos circunstancias las cuales se consideran como causa
o que exacerban la nefrocalcinosis. Primero, una exposición pro- Signología clínica y hallazgos macroscópicos de nefro-
longada de los peces a altos niveles de CO2 a niveles mayores calcinosis:
de 10 a 20 mg/l, y en segundo lugar un aspecto nutricional, Los peces con nefrocalcinosis pueden parecer normales, o de-
en donde está implicado una deficiencia en magnesio y una mostrar signos de distensión abdominal, exoftalmia variable,
toxicidad por selenio. petequias en la piel y hemorragias en la base de las aletas. En
algunos peces existe incremento en la pigmentación de la piel y
La severidad de la nefrocalcinosis aumenta en la medida que el ano puede estar protruido.
incrementan los niveles de dióxido de carbono, las cuales pue-
den ser particularmente elevados en algunas aguas subterrá-
neas o en aguas profundas (pozo, lagos), y en donde el agua de
los sistemas de cultivo se utilice intensivamente, por ejemplo,
cuando el oxígeno se adiciona sin remover el dióxido de carbono
respiratorio acumulado.

Otros factores que influyen en la presentación de la nefrocal-

cinosis, es la densidad de cultivo y un flujo de agua lento, los
cuales pueden acentuar el cuadro. El exceso de dióxido de car-
bono en la sangre del pez va a desencadenar en una acidosis
metabólica, lo cual resulta principalmente en la precipitación de
sales de calcio en la orina. Este resultado puede ser influenciado
significativamente por la dieta que se utiliza en los sistemas de
cultivo (Bruno D., 1996). Imagen 1. O. mykiss. Riñón. Nefrocalcinosis. Se observa distensión de
los uréteres por acumulación de depósitos calcáreos (imagen. Carlos
Aspectos nutricionales involucrados en la presentación Sandoval).
de nefrocalcinosis:
Hicks et al., (1984) en su estudio realizado sobre la influencia
del selenio en la ocurrencia de nefrocalcinosis en trucha arcoíris
cultivadas con diferentes cantidades en la dieta, no detectaron
diferencias significativas en los niveles de calcio, glucosa y pro-
teínas plasmáticas, hemoglobina y hematocrito en sus grupos
de estudio.

Los niveles tóxicos del selenio en la dieta (> 10 µg/g) aumen-

taron significativamente la prevalencia de nefrocalcinosis en las
truchas arcoíris. Los niveles de calcio renal fueron significativa-
mente elevados en las truchas alimentadas con dietas elevadas
en selenio (dieta 3 con 11.6 µg/g), tanto en los peces con le-
siones evidentes como en los peces sin lesiones macroscópica-
mente evidentes de nefrocalcinosis. Entonces es posible que, Imagen 2. O. mykiss. Riñón. Nefrocalcinosis. Se observa gran disten-
el exceso de selenio compita con el calcio por un mecanismo sión de los uréteres por acumulación de depósitos calcáreos en aso-
ciación a renomagelia y superficie irregular (imagen. Carlos Sandoval).
Internamente, se observa ascitis, esplenomegalia y engrosamien-
to del estómago. En la medida que se desarrolla la condición el
riñón se observa aumentado de tamaño, de coloración grisácea,
con superficie irregular (imagen 2). Un característico depósi-
to calcáreo blanco se acumula dentro de los uréteres del riñón
(imagen 1). La nefrocalcinosis también puede asociarse con la
presencia de grandes quistes urinarios, los cuales contribuyen a
la distensión de la cavidad abdominal (Bruno D., 1996).

Histopatología de nefrocalcinosis y calcinosis gástrica

Histológicamente, muchas áreas calcificadas irregulares se en-
cuentran dentro del alterado epitelio tubular renal, llevando a un
bloqueo del lúmen, vacuolización y degeneración del glomérulo.
Esto continúa con la contracción del glomérulo y la dilatación
de la cápsula de Bowman. El progreso de estas lesiones es de Imagen 5. Tinción Von Kossa. Riñón. Se observan abundantes depósitos
naturaleza crónica. En peces severamente afectados, la mayoría calcáreos de coloración oscura en lumen tubular, consistente con un
del tejido tubular es reemplazado y se vuelve fibrótico. En esta cuadro de nefrocalcinosis. (imagen. Carlos Sandoval).
etapa la mayoría del riñón funcional se encuentra destruido. En
ciertos casos de daño renal severo se pueden reconocer lesiones
musculares (Bruno D., 1996).

Imagen 6. Tinción H&E Riñón. Se observan abundantes depósitos cal-

cáreos de coloración basófila en lumen ductal, consistente con un cuadro
de nefrocalcinosis. (imagen. Carlos Sandoval).

En algunos casos, en el parénquima renal predominan los cam-

Imagen 3. Tinción Von Kossa. Estómago. Se observan depósitos cal- bios granulomatosos y el grado del daño no siempre se refleja
cáreos de coloración oscura en pared gástrica, consistente con un cuadro
macroscópicamente. Los hallazgos, por lo general, se limitan al
de calcinosis gástrica (imagen. Carlos Sandoval).
riñón y estómago. Las lesiones en este último consisten en áreas
de calcificación y formación de granulomas, por lo general, en
la lámina propia, granulosa y submucosa aunque también se
han descrito lesiones en la capa muscular o capa sub-serosa
(Ferguson, 2006). En casos severos, en el riñón la lesión predo-
minante es la formación de granulomas con depósitos de calcio.
En cuanto a salmónidos que han presentado calcinosis gástri-
ca se observa en ellos una compactación gástrica, por falta de
digestión del pellet, debido a una disminuucón en la funciona-
lidad gástrica, además peces que cursan con esta condición
presentan bajos porcentajes de fertilidad de ova y aborto em-
brionario (estudio no publicado, Carlos Sandoval).

Respecto a la asociación de la nefrocalcinosis y la concentración

libre de CO2 en el agua, la evaluación histopatológica y los análisis
Imagen 4. Tinción H&E. Estómago. Se observan depósitos calcáreos de químicos permiten demostrar que la prevalencia y la severidad de
coloración basófila en pared gástrica, consistente con un cuadro de cal- la nefrocalcinosis incrementan con el aumento de la concentra-
cinosis gástrica (imagen. Carlos Sandoval). ción de este último. Sin embargo, hay que considerar que varios
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Imagen 7. Tinción H&E. Riñón. Se observa una reacción granulomatosa carbon dioxide on Atlantic salmon smolts (Salmo salar L.): ion re-
en intertiscio renal, en el cual se observan depósitos calcáreos siendo gulation, haematology, element composition, nephrocalcinosis and
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Harrison J.G. and R.H. Richards. 1979. The pathology and histo-
La técnica de elección del diagnóstico es la histología, ya que per-
pathology of nephrocalcinosis in rainbow trout Salmo gairdneri Ri-
mite la observación de depósitos de calcio tanto incipientes como chardson in fresh water. J. Fish Dis. 2: 1-12.
moderados en los túbulos y ductos renales, lo cuales no pueden
ser evidenciados a través de la observación macroscópica. Ade- Hicks B.D., J.W. Hilton, H.W. Ferguson. 1984. Influence of die-
más esta técnica permite la caracterización de los componentes tary selenium on the occurrence of nephrocalcinosis in the rainbow
del tejido comprometidos con el cuadro de nefrocalcinosis, así trout, Salmo gairdneri Richardson, J. Fish Dis. 7: 379-389.
como también permite realizar una estimación de la intensidad
Martens L.G., P.E. Witten, S. Fivelstad, A. Huysseune, B. Sae-
o magnitud de la lesión, con su respectivo pronóstico productivo. vareid, V. Vikesa, A. Obach. 2006. Impact of high water carbón
dioxide levels on Atlantic salmon smolts (Salmo salar L.): effects
La tinción utilizada en histología es Hematoxilina & Eosina, en on fish performance, vertebrae, composition and structure. Aqua-
donde los depósitos calcáreos se observan de un color basófilo culture. 261: 80-88.
dentro de los túbulos y ductos renales. La técnica histoquímica
Musa, S. 2014. The effect of oxygen saturation and carbon dioxide
de Von Kossa permite la confirmación del diagnóstico, ya que es concentration on the growth and feed conversion of aquaculture
específica para la detección de calcio, observándose los depósi- fish. United Nations University Fis.heries Training Programme, Ice-
tos de un color negro al interior del tejido renal (Ferguson, 2006) land [final project]. http://www.unuftp.is/static/fellows/document/
o gástrico (imagen 3 y 5). safina13prf.pdf

Perry S.F., K.M. Gilmour. 2006. Acid-base balance and CO2 ex-
Otros métodos histoquímicos específicos tales como Alizarin Red
cretion in fish: unanswered questions and emerging models. Resp.
S permiten visualizar a los complejos de calcio teñidos de un Physiol. Neurobiol. 154: 199-215.
color rojo anaranjado. Y con el ácido periódico de Schiff se tiñen
negativamente (Bruno, 1996). Smart G.R., D. Knox, J.G. Harrison, J.A. Ralph, R.H. Richards
and C.B. Cowey. 1979. Nephrocalcinosis in rainbow trout Salmo
NEFROCALCINOSIS: gairdneri Richardson; the effect to exposure to elevated CO2 con-
Cambios a diferentes concentraciones de CO2 (275 d) centrations. J. Fish Dis. 2: 279-289.
Concentración Cambios Cambios Histológicos Wedemeyer G. 1996. Interactions with water quality conditions.
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12 5% 45% 15%
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24 10% 55% 13% Wood Ch., C. Louise and P. Walsh. 1999. Renal responses of
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