Leishmania

Aspectos moleculares de la medicina 57 (2017) 1 mi 29
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Aspectos moleculares de la medicina
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Leishmania Infecciones: Dianas moleculares y diagnóstico.
Mohammad Akhoundi un , l , * , Tim Downing segundo , 1 , Jan Votýpka C , re , 1 , Katrin Kuhls mi ,

Julius Lukes C , F , gramo , Arnaud Cannet h , Christophe Ravel yo , Pierre Marty un , h ,
Pascal Delaunay un , h , l , Mohamed Kasbari j , Bruno Granouillac k , l , Luigi Gradoni metro ,
Denis Sereno l , norte
un Service de Parasitologie-Mycologie, Hôpital de l ' Archet, Centre Hospitalier Universitaire de Nice, Niza, Francia
segundo Escuela de Biotecnología, Dublin City University, Dublín, Irlanda
C Centro de Biología, Instituto de Parasitología, Academia Checa de Ciencias, Ceske Budejovice, República Checa
re Departamento de Parasitología, Facultad de Ciencias, Universidad Charles de Praga, Praga, República Checa
mi División de Biotecnología Molecular y Genómica Funcional, Universidad Técnica de Ciencias Aplicadas de Wildau, Wildau, Alemania
F Facultad de Ciencias, Universidad de Bohemia del Sur, Ceske Budejovice, República Checa
gramo Instituto Canadiense de Investigación Avanzada, Toronto, Canadá
h Inserm U1065, Centre Mediterraneen de Medecine Moleculaire, Universite de Nice-Sophia Antipolis, Niza, Francia
yo Centro Nacional de Referencia Francés sobre Leishmaniasis, Universidad de Montpellier, Montpellier, Francia
j Agence Nationale de Securite Sanitaire de l'Alimentation, de l'Environnement et du Travail, ANSES, Laboratoire de Sante Animale, Maisons-Alfort, Cedex, Francia
k IRD / UMI 233, INSERM U1175, Universidad de Montpellier, Montpellier, Francia

l MIVEGEC, UMR CNRS5290-IRD224-Universite de Montpellier Centre IRD, Montpellier, Francia
metro Unidad de Enfermedades Transmitidas por Vectores y Salud Internacional, Istituto Superiore di Sanita, Roma, Italia
norte Intertryp UMR IRD177, Centre IRD de Montpellier, Montpellier, Francia
información del artículo resumen
Historia del artículo: El progreso en el diagnóstico de leishmaniasis depende del desarrollo de métodos eficaces y del descubrimiento de biomarcadores adecuados.
Recibido el 12 de julio de 2016 Recibido Nos proponemos fi primero una actualización de clase fi catión de Leishmania especies y sus sinonimias. Demostramos un mapa global que
en forma revisada el 8 de noviembre de
destaca la geografía de especies endémicas conocidas Leishmania especies patógenas para los seres humanos. Resumimos una lista completa
2016
de técnicas actualmente en uso y discutimos sus ventajas y limitaciones. Los datos disponibles destacan el bene fi ts de marcadores moleculares
Aceptado el 28 de noviembre de 2016 On-line
en términos de su sensibilidad y especi fi ciudad para cuantificar la variación desde el nivel subgenérico hasta los complejos de especies, (sub)
el 31 de enero de 2017
especies dentro de los complejos y las poblaciones individuales y los focos de infección. Cada método de detección basado en ADN se
suministra con una descripción completa de marcadores y cebadores y una propuesta para una clasificación. fi catión basado en el papel de cada
Palabras clave:
objetivo y cebador en la detección, identi fi cation y cuanti fi catión de la infección por leishmaniasis. Describimos un mapa de genes de todo el
Marcadores moleculares
Métodos de diagnóstico
genoma informativo para el diagnóstico que se han utilizado para Leishmania genotipado. Además, proponemos un clasi fi método de cationes
Cepas híbridas basado en la idoneidad de marcadores moleculares bien estudiados para tipificar los 21 Leishmania
Especies simpátricas
Mapa de todo el genoma
especies patógenas para los seres humanos. Esto se puede aplicar a especies recién descubiertas y a cepas híbridas que se originan en
cruces entre especies. Desarrollar métodos de diagnóstico y biomarcadores más eficaces y sensibles es vital para mejorar Leishmania programas
de control de infecciones.
© 2017 Los Autores. Publicado por Elsevier Ltd. Este es un artículo de acceso abierto bajo CC BY-NC-ND
licencia http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/ ).
1. Introducción
1.1. La leishmaniasis es un problema global
* Autor correspondiente. Service de Parasitologie-Mycologie, Hôpital de l ' Archet, CHU de Nice, 151 route Saint Las leishmaniasis son enfermedades transmitidas por vectores causadas por parásitos protistan
Antoine de Ginestiere, CS 23079, 06202 Nice cedex, Francia.
obligados del género Leishmania Trypanosomatida: Trypanosomatidae) endémica en grandes áreas
de los trópicos, subtrópicos y cuenca mediterránea, que abarca más de 98 países. Allí
Dirección de correo electrónico: [email protected] (M. Akhoundi).
1 Igual contribución.
http://dx.doi.org/10.1016/j.mam.2016.11.012
0098-2997 / © 2017 Los Autores. Publicado por Elsevier Ltd. Este es un artículo de acceso abierto bajo la licencia CC BY-NC-ND ( http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/ ).
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hay ~ 350 millones de personas en riesgo y ~ 12 millones de casos, con una incidencia anual tipificación de microsatélites) y secuenciación) e incluyendo Sau-
estimada en todo el mundo de 0,7 mi 1,2 millones de casos de leishmaniasis cutánea (CL) y 0,2 mi 0,4 roleishmania] son conocidos y al menos 21 de ellos son patógenos para los seres humanos ( Akhoundi
millones de casos de leishmaniasis visceral (LV) ( Alvar et al., 2012 ). Por lo tanto, las leishmaniasis et al., 2016 ) ( Figura 1 ). Leishmania fl los agelados se transmiten a los vertebrados por la picadura de
constituyen un importante problema de salud pública con una carga cada vez mayor durante la última arena flebotomina hembra infectada fl ies y con frecuencia son hospedados por cánidos, roedores,
década, y entre las infecciones tropicales se ubica como el 2 Dakota del Norte
marsupiales, mangostas, murciélagos e hyraxes; por tanto, la enfermedad puede ser zoonosis,
antropozoonosis o antroponosis, aunque pocas especies son estrictamente antroponóticas.
y 4 th causa más común de muerte y enfermedad, respectivamente ( Bern et al., 2008 ).
Leishmania Las infecciones tienen seis formas clínicas, de fi nido por la localización del parásito Debido al amplio espectro de huéspedes reservorios no humanos y al gran número de vectores
en los tejidos infectados: leishmaniasis visceral (LV), leishmaniasis dérmica postkala-azar (PKDL), involucrados en la transmisión, se mejoró el diagnóstico de Leishmania parásitos es una
cutánea (CL), cutánea difusa (DCL), mucocutánea (MCL) y mucosa (ML). La forma más común es la característica importante de los programas de control ( Stauch et al., 2014 ). Solo una minoría de los
LC: más del 90% de los casos se distribuyen en tres regiones principales: (i) Afganistán, Irán, Arabia seres humanos infectados desarrolla la enfermedad: la mayoría está infectada a un nivel subclínico ( Singh
Saudita y Siria; (ii) Argelia y Túnez; y (iii) Brasil y Perú. Más del 90% de los casos de LV menos y col., 2002 ). Estos hospedadores asintomáticos ayudan a mantener la transmisión de LV en áreas
comunes pero más patógenos ocurren en otros tres focos geográficos: (i) Bangladesh, India y Nepal; endémicas y representan un desafío importante para el control de infecciones. Dado que la
(ii) Etiopía, Kenia y Sudán; y (iii) noreste de Brasil ( Alvar et al., 2012 ). virulencia, patogenicidad y manifestación clínica varía entre Leishmania especie, y que el resultado
clínico de la enfermedad también depende de la arena fl Para el tipo de vector y los antecedentes
genéticos del huésped, un diagnóstico altamente preciso es esencial para la eliminación exitosa de
estos versátiles parásitos porque es el pilar para unir la epidemiología molecular y las opciones de
terapia (local / sistémica y farmacológica).
Actualmente, 54 Leishmania especie [excluyendo especies sinónimos (la sinonimia basada en
resultados de tipificación molecular p.ej, MLEE (Multilocus
Enzima Electroforesis), MLMT (Multilocus
Figura 1. Classi actualizado fi catión de Leishmania especies

*, þ: Sinónimo; diferentes números de estrella (*) y más ( þ) los signos significan qué nombre de especie es sinónimo de qué especie original, Subrayada : No fi clasi nal fi catión. L. ' siamensis 'y L. martiniquensis también se han encontrado en
NewWorld. Leishmania los nombres entre comillas son únicos fi nombres ciales sin descripciones formales. Las especies patógenas humanas están escritas en negrita. Las especies Old y Newworld están resaltadas en azul y rojo
respectivamente. (Para la interpretación de las referencias al color en este fi leyenda de la figura, se remite al lector a la versión web de este artículo).
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1.2. Diagnóstico de leishmaniasis permitió el desarrollo de una detección rápida y altamente sensible junto con la tipificación molecular
de Leishmania en muestras biológicas. La discriminación de especies generalmente implica la
El diagnóstico de la leishmaniasis se complica por la patología clínica de la enfermedad, secuenciación directa de un producto de PCR ( Van Eys y col., 1992 ), la aplicación del polimorfismo
de conformación monocatenario (SSCP) ( Van Eys y col., 1992 ), uso de especies específicas fi c sitios
variando desde formas simples cutáneas hasta viscerales y dentro de cada una de ellas. Además, " linfadenopatía
leishmanial localizada (o linfadenitis) " fue descrito siendo de restricción mediante análisis de polimorfismo de longitud de fragmentos de restricción
(PCR-RFLP) ( Cupolillo y col., 1995; Victoir y col., 1998; Scho
frecuente en Kala-azar (y muy raro en LV mediterránea) como una manifestación clínica atípica de
los pacientes ( Daneshbod, 1978; Dabiri et al., 2014; Horrillo et al., 2015 ). Las lesiones de CL varían € nian et al., 2001 ), PCR fi huellas dactilares Sreenivas
en su gravedad ( p.ej, tamaño de la lesión), número, apariencia clínica ( p.ej, lesión seca o húmeda) y et al., 2004 ), ampli aleatorio fi ADN polimórfico ed (RAPD) ( Banu ~ ls
duración ( p.ej, el momento de la curación espontánea). Además, patologías clínicas similares pueden et al., 1999; Mauricio y col., 1999; Montalvo et al., 2008 ), o fusión de alta resolución (HRM) ( Talmi-Frank
ser causadas por especies muy divergentes: la LV puede ser causada no solo por el típico y col., 2010 ).
viscerotrópico L. donovani complejo de especies L. infantum y De estos métodos, solo la PCR-RFLP y el análisis de secuencia acoplados a la diana apropiada
en el genoma son adecuados para la discriminación de todos Leishmania especies mi En muchos
casos también se debe aplicar una combinación de diferentes marcadores para lograr un fi resolución
L. donovani), pero también por L. tropica ( Magill y col., 1993 ), y viceversa final de especies ( Harris y col., 1998; Srivastava y col., 2011; Odiwuor et al., 2011; Van der Auwera y
CL puede ser causado por L. donovani especies complejas además de las típicas especies col., 2014 ). Solo unos pocos de los ensayos basados en PCR se dirigen a casi todos los Leishmania
dermotrópicas como L. major y L. tropica (p. Ej., especie Wortmann y col., 2001; Castilho et al., 2008; Tupperwar y col., 2008 ), y la mayoría se
Pratlong y col., 2004; Alborzi et al., 2006; Svobodova et al., 2009 ). También depende del estado consideran no cuantitativos ( Harris y col., 1998; Odiwuor y col. 2011; Srivastava et al., 2011 ). Es
inmunológico mi p.ej, muchos dermotrópicos esencial la combinación correcta del objetivo apropiado dentro del Leishmania
L. infantum Los zimodemas se encuentran en pacientes VIH positivos con leishmaniasis visceral ( Pratlong
y col., 1995; Alvar y col., 1997; Chicharro et al., 2002 ). Los síntomas clínicos similares pueden
originarse en infecciones no relacionadas con leishmaniasis comunes en las regiones tropicales o
cosmopolitas. Algunos casos de miasis furuncular y úlceras tropicales bacterianas (similares a CL genoma y el método analítico, para lograr una resolución al nivel taxonómico deseado.
aguda), así como lepra, queloide, lupus vulgaris, lupus eritematoso discoide y sarcoidosis (similar a
CL crónica) tienen los signos clínicos comunes con síntomas de CL ( Convit y col., 1993; Gradoni,
2016 ). Además, algunos síntomas clínicos observados en la malaria crónica, histoplasmosis 1.3. Diversidad dentro del género Leishmania
diseminada, esquistosomiasis hepatoesplénica, fiebre tifoidea, brucelosis, tuberculosis, endocarditis,
fiebre recurrente y tripanosomiasis africana son similares a los síntomas de LV en los trópicos. La estructura taxonómica del género Leishmania está dispuesto convencionalmente a nivel de
Además, algunas enfermedades como la sífilis, los linfomas, la leucemia mieloide crónica, la subgénero, complejo de especies y (sub) especies. El objetivo de la guía que se describe a
sarcoidosis, la histiocitosis maligna y la cirrosis hepática también son indicativas de LV en regiones continuación proporciona un contexto para esta revisión y actualiza y sintetiza un extenso trabajo
cosmopolitas ( Gontijo y Melo, 2004; Van den Bogaart y col., 2012; Gradoni, 2016 ). Para complicar publicado anteriormente ( Scho
esto, todas estas enfermedades generalmente tienen una alta incidencia en áreas endémicas de € nian et al., 2011; Van der Auwera y col.,
leishmaniasis. Por lo tanto, las decisiones diagnósticas para el tratamiento clínico de la leishmaniasis 2014; Van der Auwera y Dujardin, 2015; Harkins et al., 2016 ). Es fl Efectúa la interpretación actual de
pueden ser presuntivas en algunos casos, o estar basadas en la evidencia e identificarse. fi catión de Leishmania
los datos filogenéticos disponibles y se limita a las unidades taxonómicas para las que hay
especie sólo se deduce de antecedentes epidemiológicos y clínicos. marcadores disponibles o donde se ha investigado la mezcla.
La parte mejor caracterizada del género. Leishmania es la seccion Euleishmania compuesto por
al menos cuatro subgéneros: Leishmania, Viannia, Sauroleishmania y Mundinia incluso L. enriettii, L.
martiniquensis, L. » siamensis ',' cepa de Ghana 'y L. macropodum). El subgénero Leishmania tiene
cuatro complejos de especies principales: L. donovani,
Desde la descripción inicial y el descubrimiento del agente causante de la enfermedad en 1898 y L. major, L. mexicana y L. tropica ( Akhoundi et al., 2016 ). Determinación de complejos de especies
1901 por P. Borovsky, WB Leishman y distintos dentro del subgénero Viannia es menos sencillo y está en fl influenciado por insuf fi muestreo
C. Donovan y el fi primero de fi descripción cial del género Leishmania cient. Sin embargo, si la escala de diversidad genética entre y dentro de los complejos puede
por R. Ross en 1903, conceptos y metodologías utilizados para discriminar Leishmania las especies correlacionarse con la establecida para el L.
han evolucionado considerablemente ( Weyers, 2016 ). Inicialmente, solo caracteres extrínsecos como
manifestaciones clínicas, distribuciones geográficas, ciclos epidemiológicos y el comportamiento de Leishmania
( Leishmania) subgénero, es posible clasificar el subgénero Viannia en los complejos de especies L.
en su arena fl y vectores, se utilizaron para discriminar Leishmania especies. En consecuencia, el Leishmaniabraziliensis, L. guyanensis, así como la especie L. lainsoni y L. naif fi ( Akhoundi et al., 2016 ) ( Figura
género se subdividió en dos subgéneros: Leishmania y Viannia 1 ). Recientemente, un nuevo subgénero Leishmania (Mundinia) fue creado, compuesto de conejillo
de indias que infecta L. enriettii ( Muniz y Medina, 1948 ), L. martiniquensis ( Mouri et al., 2014 ), L. ' siamensis
'
( Saf'janova, 1982; Lainson y Shaw, 1987 ). A principios de la década de 1970, los caracteres
intrínsecos relacionados con la inmunología, la bioquímica y la tipificación molecular se introdujeron ( Leelayoova et al., 2013 ), 'Cepa de Ghana' ( Kwakye-Nuako et al., 2015 ) y L. macropodum ( Barratt et
en el tipo Leishmania. La electroforesis de isoenzimas se desarrolló a fines de la década de 1970, al., 2017 ) - (un espécimen aislado de un canguro con CL en Australia) ( Rose et al., 2004 ). Este último
seguida del establecimiento del sistema de zimodemas MON ampliamente utilizado en 1990 ( Rioux y junto con L. ' siamensis 'se consideran nomem nudum
col., 1990; Akhoundi et al., 2016 ) y se consideró como el patrón oro durante un largo período. Otro
sistema (IOC-Z) que se utiliza actualmente en NewWorld fue desarrollado por Cupolillo et al. (1994) . ( Espinosa et al., 2016 ). Basado en el estudio realizado por Mouri y col. (2014) reportando la
Sigue siendo una técnica de referencia para Leishmania la tipificación que permite incluso la experiencia usando MALDI-TOF en comparación con los métodos de referencia, solo una única cepa
diferenciación dentro de las especies, sin embargo, no puede considerarse un método sencillo y de de L. martiniquensis
alto rendimiento en los servicios de atención clínica, ya que se basa en cultivos de parásitos (no se (no identi fi ed con esta nomenclatura) fue probado. Además, una cepa de L. martiniquensis fue
puede utilizar para muestras clínicas). informado por Pothirat y col. (2014) , aislado de un caso autóctono de LV en Tailandia. Sugirieron que
varias cepas originalmente identi fi ed como L. ' siamensis 'en Tailandia podría ser en realidad L.
martiniquensis.
Desde la década de 1980, la invención de ADN ampli fi catión vía PCR tiene Un nuevo género Porcisia ha propuesto recientemente dar cabida a la
Parásitos puercoespines neotropicales originalmente descritos como L. hertigi et al., 2012 ), aunque la aparición de híbridos no requiere especies genéticamente relacionadas ( Ravel
y L. deanei ( Espinosa et al., 2016; Barratt et al., 2017 ). Sin embargo, debido a la falta de análisis y col., 2006 ). Numerosos estudios sobre la diversidad de Leishmania spp. han utilizado enfoques
genéticos en profundidad, el número de subgéneros que constituyen el Paraleishmania La división es como MLEE que fueron insuf fi cient para resolver su evolución y mezcla. En la actualidad, la escala
inestable, pero del problema que plantean los nuevos híbridos es incierta: pocos descendientes son viables de
L. herreri, L. equatorensis y L. colombiensis así como el género anterior Endotrypanum son parte de
ella.
La tipificación de base molecular fue fundamental para revelar varios casos de sinonimia, como L. in vitro L. donovani cruces Sadlova et al., 2011 ), mientras que se obtienen tasas más elevadas para L.
tropica ( syn. L. killicki) ( Scho € nian et al., 2001; major ( Inbar et al., 2013 ). Sin embargo, no está claro si los reordenamientos supervivientes han
Schwenkenbecher y col., 2006; Asato et al., 2009 ), L. donovani ( syn. alterado la virulencia o la transmisibilidad. L. braziliensis / L. peruviana in vitro Los híbridos son más
L. archibaldi) ( Jamjoom y col., 2004; Kuhls et al., 2005, 2007 ), resistentes y tienen mayor virulencia que las cepas parentales ( Cortes et al., 2012 ). Además, un L.
L. infantum syn. L. chagasi) ( Maurício et al., 2000; Kuhls et al., 2011 ), infantum / L. mayor híbrido tenía un mayor potencial de transmisión en el vector ( Volf y col., 2007 ). En
L. mexicana ( syn. L. pifanoi) y L. amazonensis ( syn. L. garnhami) consecuencia, la adopción de tecnología que proporcione signi fi Una mayor cantidad de información,
( Scho € nian et al., 2010 ). como la secuenciación del genoma, iluminará cómo la exogamia entre cepas genéticamente
En el presente estudio, nos centraremos en los 21 Leishmania especies que se sabe que son discretas puede generar vigor híbrido.
patógenas para los seres humanos ( Akhoundi et al., 2016 ).
1.4. Los híbridos suponen una nueva amenaza
1.5. Alcance y objetivos

La expansión de los rangos de vectores impulsada por la aceleración del cambio climático
brinda no solo más oportunidades para las infecciones humanas, sino que también aumenta las La leishmaniasis afecta principalmente a los países de bajos ingresos de las regiones tropicales
posibilidades de mezcla entre especies hasta ahora distintas cuyos vectores ahora coexisten ( Patz y y subtropicales, para lo cual existe una necesidad urgente de contar con métodos simples, versátiles
col., 2000 ). Además, una mayor migración humana y ganadera presenta una transmisión más rápida y rentables para la detección de patógenos. Leishmania especie De Ruiter et al., 2014 ). En
de casos infectados y asintomáticos a nuevas regiones no endémicas ( Rijal et al., 2010 ). Asimismo, consecuencia, las pruebas deben considerarse en términos de su naturaleza cualitativa o
las personas susceptibles pueden trasladarse hacia y desde regiones endémicas ( OMS, 2008 ), cuantitativa, y su sensibilidad y especificidad. fi ciudad a nivel de género, subgénero, complejo de
aumentando la posibilidad de que se establezca una mayor infección y propagación Al-Salem et al., especies, especie y población ( Van der Auwera y Dujardin, 2015 ). Es fundamental que los grandes
2016 ). Estas tendencias se evidencian por la creciente frecuencia de leishmaniasis en personas avances en nuestra comprensión de la Leishmania La estructura del genoma, la actividad genética, la
inmunodeprimidas debido a infecciones preexistentes ( Cruz et al., 2006; Antinori y col., 2008 ). expresión de proteínas y los cambios en los metabolitos se traducen en mejores diagnósticos.
Existe abundante evidencia de la existencia de hibridación natural entre genéticamente discretos Un mapa global que destaca la geografía de especies endémicas conocidas
pero también distantes Leishmania Leishmania especies patógenas para los seres humanos, elaborado con información de la
especies. Estos híbridos se han aislado de pacientes infectados, por lo que se fl Echando patrones Organización Mundial de la Salud ( OMS, 2016 ) y literatura publicada ( Figura 2 ) muestra que en más
epidemiológicos reales ( Hamad y col., 2011 ). Además, se ha demostrado que se produce el de la mitad de los países endémicos al menos dos o más Leishmania las especies están presentes y
apareamiento y el intercambio genético en vectores infectados experimentalmente por L. major, producir son en su mayoría simpátricas. Distinguir entre especies simpátricas es de importancia para fines
progenie infecciosa Akopyants et al., 2009 ), sin evidencia contundente de la alternativa más médicos ( p.ej, especie-especi fi c) y fundamental para la epidemiología molecular en focos endémicos.
parsimoniosa (coinfección de diversos aislados en muestras clínicas). Además, este mapa ilustra el gran potencial de hibridación entre distintas especies.
Entre las muestras del Viejo Mundo, la hibridación entre L. donovani

y L. aethiopica ( Odiwuor et al., 2011 ) y dentro L. donovani Se han encontrado linajes en Etiopía A pesar de que Leishmania Las especies se dividen con frecuencia en las responsables de CL y
utilizando una combinación de MLMT y MLST ( Gelanew et al., 2014 ), y dentro de L. tropica VL, la evaluación crítica de los datos disponibles revela que esta subdivisión es ineficaz para más de
la mitad de las especies, que hasta ahora se han asociado con ambas. Además, la virulencia de
usando MLMT ( Schwenkenbecher et al., 2006 ). Además, MLMT y MLEE indican la presencia de L. varias especies zoonóticas ( ej., L. turanica, L. tarentolae)
infantum híbridos en Túnez Chargui et al., 2013 ). Usando sondas de ADN y MLEE, se ha encontrado
entrecruzamiento entre L. infantum y L. major En portugal ( Ravel y col., 2006 ), y entre L. major y L. no se ha estudiado o varía desde una patogenicidad leve hasta formas graves, aparentemente
arabica en Arabia Saudita ( Evans, 1987; Kelly y col., 1991 ). En América del Sur, gen fl El flujo entre dependiendo de una serie de factores ( Fig. 3 ) ( Bordbar y Parvizi, 2014; Novo et al., 2015 ).
especies parece ser común ( Noyes et al., 1996; Van der Auwera et al., 2013 ). Usando MLMT, se ha
descubierto una mezcla genética entre L. lainsoni y A continuación, presentamos una lista completa de métodos y marcadores que cubren todos los
ensayos de uso común y dianas de ADN molecular, como base para proponer un clasi fi sistema de
cationes para determinar la idoneidad de estos marcadores en el examen de la infección humana Leishmania
especies. Esta evaluación debe considerarse particularmente a la luz del objetivo de eliminar la LV
L. naif fi ( Kuhls y col., 2013 ) y MLEE y ADN fi Los métodos de huellas dactilares fueron fundamentales para 2020 y la necesidad de rastrear los casos en las etapas iniciales de la infección con una baja
para detectar híbridos entre carga de parásitos ( Medley et al., 2015 ).
L. braziliensis y L. guyanensis ( Delgado et al., 1997 ), y entre
L. braziliensis y L. panamensis en nicaragua Darce y col., 1991; Belli y col., 1994 ). Escritura MLEE y
RAPD ( Dujardin y col., 1995 ), MLMT ( Nolder y col., 2007 ) y sondas de ADN ( Dujardin y col., 1993 )
detectaron híbridos entre L. braziliensis y L. peruviana en Perú, algunos de los cuales han sido 2. Métodos y marcadores para identificar el Leishmania parásitos
investigados posteriormente en in vitro
Las características clave de cualquier ensayo de detección de cualquier agente infeccioso,
experimentos Cortes et al., 2012 ). Más tarde fue mostrado por MLST y incluidas Leishmania son: i) sensibilidad, ii) especi fi ciudad, iii) velocidad, iv) precisión, v)
hsp 70 análisis de secuencia que L. peruviana se separa como una unidad dentro del L. braziliensis los accesibilidad, vi) facilidad de uso, y vii) aplicabilidad en el
clústeres Van der Auwera y col., 2014 ), sin embargo, los límites aún no están completamente fi vejez. Para especies identi fi ensayos de cationes, se deben considerar factores adicionales, como el
resueltos. Además, ambos poder discriminatorio, la versatilidad, la rentabilidad y la capacidad para detectar y cuantificar Leishmania
L. panamensis y L. shawi están anidados dentro L. guyanensis ( Boite spp. en
Figura 2. Distribución global de 21 Leishmania especies patógenas para el ser humano. El nombre de la especie se muestra como abreviatura. UN: L. aethiopica; A.m: L. amazonensis; SEGUNDO: L. braziliensis;
C: L. colombiensis; RE: L. donovani; GRAMO: L. guyanensis; Gh: 'cepa de Ghana'; YO: L. infantum; La: L. lainsoni; L: L. lindenbergi; METRO: L. major; Mamá: L. martiniquensis; Mx: L. mexicana; NORTE: L. naif fi;
Pensilvania: L. panamensis; PAGS: L. peruviana; S: L. ' siamensis '; Sh: L. shawi; T: L. tropica; V: L. venezuelensis y W: L. waltoni. Las especies con signos de interrogación deben ser con fi rmed por más estudios de genotipado.
muestras biológicas. Los métodos actuales para diagnosticar la leishmaniasis se limitan

principalmente a hospitales de referencia o centros de investigación con entornos de laboratorio bien
equipados. Los ensayos más utilizados solo pueden detectar uno o unos pocos Leishmania especies
y, por lo tanto, no son adecuadas para áreas con varias especies simpátricas. Por lo tanto, existe la
necesidad de simplificar y adaptar los ensayos de diagnóstico en áreas endémicas. Diferentes
metodologías de diagnóstico y su poder de detección, identi fi cation y cuanti fi catión de Leishmania especies,
así como su capacidad de discriminación a diferentes niveles (género, sección, subgénero, complejo
de especies, especie y población) se resumen en tabla 1 .
2.1. Detectando Leishmania en infecciones
2.1.1. Métodos
Examinación microscópica Los frotis de biopsia de lesión para CL y los aspirados del bazo, la
médula ósea y los ganglios linfáticos para LV se examinan bajo el microscopio después de la tinción
de Giemsa ( Akhoundi et al., 2013 ). Es un método rápido y barato, pero invasivo (todas las pruebas
se basan en material de biopsia) que no es fácil de realizar. Proporciona solo información cuantitativa
parcial sobre la carga parasitaria y no permite la discriminación entre Leishmania especies. Además,
la sensibilidad depende en gran medida del número y la dispersión de parásitos en la biopsia, así
como del proceso de muestreo y las habilidades técnicas del personal que realiza las pruebas. Sin
embargo, en áreas endémicas, sigue siendo un enfoque diagnóstico útil para la atención primaria de
la salud debido a su rentabilidad y simplicidad.
Fig. 3. Diferente Leishmania especies que causan diversas manifestaciones clínicas de leishmaniasis (entre ellas, solo
se muestran las principales formas clínicas en este fi figura). *: especi fi C Leishmania especies, los agentes causantes
de la leishmaniasis difusa. La gama de colores demuestra la relativa cercanía de Leishmania especies a cada
manifestación clínica en función de la frecuencia de casos de enfermedad clínica ( Dawit y col., 2013; Gradoni, 2013;
Listo, 2014 ). Las especies no patógenas ya conocidas de
Aislamiento de Leishmania parásitos en cultivo In vitro cultura de

L. tarentolae y L. turanica, reportados recientemente como patógenos para humanos se muestran como
Leishmania promastigotes de tejidos aspirados, raspados o biopsias es importante para el
" outgroup ”. ( Para la interpretación de las referencias al color en este fi leyenda de la figura, se remite al lector a la
versión web de este artículo).
diagnóstico de rutina. Desafortunadamente, la recuperación de parásitos en cultivo rara vez supera el
70% de ef fi cient, incluso para cepas que se mantienen fcilmente in vitro. Es un tiempo
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y un método costoso que requiere una configuración de laboratorio sofisticada ( Berman, 1997 ). Por rasgos de organización genómica en comparación con eucariotas, como genes sin intrones,
otro lado, se necesitan cultivos de parásitos para una serie de métodos basados en ADN y en policistrones y pequeños cromosomas con alta densidad de genes. Además, estos fl los agelados
proteínas desarrollados para discriminar entre Leishmania especie tabla 1 ). poseen una sola mitocondria llamada cinetoplasto, que contiene una gran red de ADN de
cinetoplasto (kDNA) ( Lukes et al., 2002 ). En el siguiente capítulo 2.1 Se enumeran todos los
Aislamiento de Leishmania parásitos en animales de experimentación Un método alternativo de marcadores genéticos que se utilizan para la detección de Leishmania a nivel de género mediante
diagnóstico es la inoculación de Leishmania PCR (presencia de un producto de PCR) y otros métodos moleculares. Dependiendo de los objetivos
células aisladas de materiales biológicos en la base de la pata, la nariz o la cola de un ratón o y los respectivos cebadores de PCR, los ensayos pueden ser genusspeci fi c o incluso especies
hámster BALB / c susceptible. La evaluación histopatológica de una biopsia puede ser informativa, específicas fi c (véanse también los capítulos 2.2 y 2.3 ).
pero rara vez es suficiente. fi cliente para un diagnóstico Loría-Cervera y Andrade-Narvaez, 2014 ).
Este método requiere mucho tiempo, no es cuantitativo y no es factible sin una instalación para
animales.
2.1.2.1. ADN cromosómico
Pruebas de diagnóstico cutáneo los Leishmanin prueba cutánea (LST), o prueba de 2.1.2.1.1. ADN ribosómico (ADNr). Los genes del ARN ribosómico (ARNr) se encuentran
Montenegro, mide la reacción de hipersensibilidad de tipo retardado (DTH) a una inyección principalmente en el cromosoma 27, generalmente como copias múltiples de repeticiones de cabeza
intradérmica en el antebrazo de una suspensión de Leishmania promastigotes. La comparación del a cola en tándem de aproximadamente 12,5 Kb ( Yan y col., 1999 ) ( Figura 4 ). Entre los diferentes
tamaño de la induración con un control, representado por la inyección de fenol-solución salina en el componentes de estos genes, las regiones ITS más variables son ideales para la tipificación de
otro antebrazo, permite realizar la prueba de infección. Es una herramienta útil e importante para el especies ( Scho
diagnóstico de leishmaniasis debido a su simplicidad, sensibilidad y especi fi ciudad Weigle y col., 1991 ). € nian et al., 2001; Kuhls y col., 2005 ). Como la mayoría de eucariotas,
Sin embargo, no permite la identi fi catión de La subunidad ribosómica grande (LSU) se compone de rRNA 28S, 5.8S y 5S, mientras que la
subunidad pequeña (SSU) contiene rRNA 18S. Los 18,
Los rRNA 5.8S y 28S están codificados por una sola unidad de transcripción llamada cistrón
Leishmania especie y no discrimina entre infecciones pasadas y actuales. ribosómico que es transcrito por la RNA polimerasa I para producir una gran transcripción primaria
(45S o pre-rRNA) ( TorresMachorro et al., 2010 ). El gen de ARNr de 5S se transcribe por separado
Xenodiagnóstico se realiza exponiendo tejidos o lesiones posiblemente infectados a un vector mediante la ARN polimerasa III. El procesamiento de las transcripciones da como resultado la
eliminación de los espaciadores transcritos internos y externos (ITS y ETS, respectivamente), que se
de flebotomina competente y el examen después de la alimentación para detectar la presencia de Leishmania
fl agelados en el intestino Sadlova et al., 2015 ). Es relativamente simple, con alta especi fi ciudad y degradan rápidamente. Por lo tanto, la unidad de ARNr está compuesta por una región transcrita y
sensibilidad razonable, pero no discrimina entre Leishmania especies. Además, el xenodiagnóstico una región intergénica (también llamada espaciador intergénico) que consta de un espaciador no
requiere mucho tiempo, no es cuantitativo y no es factible sin instalaciones para animales / transcrito (NTS) y un ETS ( Sollner-Webb y Mougey, 1991 ). Las secuencias repetitivas dentro de los
insectarios. espaciadores intergénicos o el NTS están sujetas a una evolución concertada, porque hay una
secuencia extensa entre los espaciadores dentro de una especie pero poca homología entre los
espaciadores de especies relacionadas ( Requena y col., 1997 ). En una sola unidad de repetición, la
PCR convencional habilita el ampli fi catión de ADN o ARN a través de ciclos repetitivos in vitro. La región de codificación es de aproximadamente 9 Kb (dependiendo de la Leishmania especies),
descripción de varias especies fi c Los fragmentos de ADN han hecho viable este método para el mientras que las regiones NTS varían en longitud de 4 a 12 Kb. Para obtener una lista completa de
diagnóstico de leishmaniasis desde principios de la década de 1990 ( Smyth y col., 1992 ). La PCR es los cebadores dirigidos a estas regiones, consulte la Información complementaria: Tabla SI mi 1 .
superior a otros métodos parasitológicos como la microscopía o el cultivo, particularmente para
muestras con baja carga parasitaria ( Antinori et al., 2007 ). Además del diagnóstico, la PCR tiene
aplicaciones en quanti fi cación de los parásitos y, por lo tanto, también monitoreando la progresión de
la enfermedad, prediciendo y controlando el resultado de la terapia antileishmanial, de fi ningun
parásito específico fi c características como virulencia o resistencia a los medicamentos y 2.1.2.1.1.1. Unidades de transcripción de ARN ribosómico
discriminación de especies ( Scho los ARNr 18S es un ARN estructural de la SSU ribosomal. La alta conservación de este gen y su fl
regiones de anking lo hacen adecuado para reconstruir relaciones filogenéticas.
€ nian et al., 2011 ). los ARNr 5.8S es un componente no codificante de la LSU ribosomal y es parte del precursor de
Oligocromatografía-PCR (OC-PCR) proporciona un formato simple y rápido para la detección de 45S que también contiene los rRNAs 18S y 28S.
amplificación basada en secuencias de ácido nucleico o PCR fi productos catiónicos (NASBA) (más
abajo) visualizados en una tira reactiva mediante hibridación con una sonda conjugada con oro, lo los ARNr 28S actúa como ribozima, catalizando la formación de enlaces peptídicos. Leishmania Las
que permite una secuencia específica fi c detección de producto. Este formato de detección toma solo especies son atípicas en su composición, ya que contienen dos grandes (24S un y 24S segundo) y
5 mi 10 min y no requiere más equipo que un baño de agua y una pipeta. Controles internos para cuatro pequeñas moléculas de ARNr ( Ƴ, z, d, Ɛ) ( Soto et al., 2004 ). Finalmente, el 120 nt de largo ARNr
ampli fi El catión y la migración cromatográfica se incorporan al ensayo ( Deborggraeve et al., 2008; 5S es un componente estructural y funcional del LSU del ribosoma ( Schramm y Hernandez, 2002 ).
Laurent y col., 2009 ). El método tiene una alta sensibilidad, pero no permite la discriminación de El gen de ARNr 5S no suele estar vinculado al cistrón ribosómico ( Paule y White, 2000 ). Debido a su
varios Leishmania especie Mugasa y col., 2010; Saad y col., 2010 ). pequeño tamaño y, por lo tanto, bajo contenido informativo, rara vez se utiliza para filogenia
molecular ( Figura 4 , Información suplementaria: Tabla SI mi 1 ).
Ampli basado en secuencia de ácido nucleico fi catión (NASBA) es un ampli isotérmico, basado
en transcripción fi sistema de cationes diseñado para la detección de objetivos de ARN. Suele 2.1.2.1.1.2. Espaciador transcrito interno
funcionar a una temperatura isotérmica de 41 C y se ha utilizado ampliamente para la detección de Leishmania El espaciador transcrito interno (ITS) se refiere al ADN espaciador no codificante ubicado entre
especies porque da resultados más rápido que la PCR con más sensibilidad, pero no es adecuado los rRNA de SSU y LSU ( Figura 4 ). los
para cuantificar y discriminar diferentes Leishmania ITS1 La región varía de 50 a 350 pb y está ubicada entre los genes de ARNr 18S y ARNr 5.8S ( Scho
€ nian et al., 2003 ). Tiene suficiente
especie Van der Meide y col., 2005; Rodríguez-Lazaro et al., 2006; Saad y col., 2010; Mugasa et al., fi cientificamente alta conservación para ser un Leishmania Objetivo de la PCR, pero su polimorfismo
2010 ). permite la tipificación de especies, como la diferenciación
L. aethiopica, L. tropica, L. major, L. turanica y el L. donovani
2.1.2. Marcadores complejo, L. mexicana, L. amazonensis, L. guyanensis, L. braziliensis
Leishmania spp. y otros tripanosomátidos tienen características únicas ( Cupolillo y col., 1995; Scho € nian et al., 2001; 2003; Mauricio et al.,
Figura 4. Mapa genético de genes de ADNr (ubicados en el cromosoma 27) con la longitud correspondiente de los fragmentos en Leishmania especies
2004; Odiwuor et al., 2011 ). los ITS2 región es de 50 mi 650 pb de largo y se encuentra entre los bp) utilizado para Leishmania genotipado. Su variación de tamaño permite una discriminación
genes de ARNr 5.8S y ARNr LSU. Ampli fi catión de ITS2 con cebadores de PCR genéricos revelaron preliminar entre los principales países del Viejo y Nuevo Mundo.
diferencias sustanciales entre el Viejo y el Nuevo Mundo Leishmania spp. sino también entre Leishmania complejos Fernandes y col., 1994; Ramos y col., 1996; Harris y col., 1998; Marfurt y col.,
complejos de especies y especies de estos subgéneros ( Scho 2003 ). El mini-exón de 39 pb se puede utilizar para cuantificar la expresión génica porque está
presente en el 5 0
€ nian et al., 2003; Kuhls y col., 2005 ). Estos ITS (ITS1 e ITS2) final de los ARNm ( Haydock et al., 2015 ).
regiones también fueron consideradas por Cupolillo et al. (1995) como objetivos adecuados para la Espaciador transcrito externo (ETS) es una región de ARN que está estrechamente relacionada
tipificación del Viannia subgénero. con ITS y se encuentra fuera del ARNr estructural en una transcripción precursora común ( Figura 4 ).
2.1.2.1.1.3. Región espaciadora intergénica (IGS) El ~ 1 Kb mi larga región ETS de
El IGS es un elemento genómico que varía en tamaño, número y secuencia en Leishmania especies Leishmania especie tiene un tamaño similar entre especies: L. amazonensis
y aislados. los Leishmania (1050 pb) ( Uliana y col., 1996 ), L. chagasi ( syn L. infantum) ( 1060 pb) ( Gay y col., 1996 ), L. donovani
IGS contiene 60 mi Elemento de repetición de 64 pb de 16 mi 275 copias, lo que provoca variaciones ( 1020 pb) ( Yan y col., 1999 ). Sin embargo, las diferencias en las secuencias de ETS pueden
de longitud de 4 mi 12 Kbp ( Orlando et al., 2002 ). El tamaño de la región IGS es aproximadamente el distinguir Sauroleishmania desde Leishmania.
mismo en Sauroleishmania y
Leishmania especie, demostrando su conservación a nivel de subgénero. El IGS está menos El espaciador no transcrito (NTS) es un espaciador de ARNr intergénico de 2 a 30 Kb de
conservado que los genes de ARNr y, por lo tanto, es más adecuado para mapear las relaciones longitud. Es probable que contenga la mayoría de los elementos reguladores necesarios para la
evolutivas entre Leishmania especies. transcripción ( Sollner-Webb y Mougey, 1991 ).
2.1.2.1.2. Genes codificadores de proteínas. La estructura cromosómica difiere entre Leishmania entre
Mini-exón (o ARN líder empalmado; ARN SL) El gen de los protistas de cinetoplastoides está y dentro de las especies. L. major es la referencia óptima para estudiar los cambios cromosómicos
presente en 100 mi 200 copias repetidas en tándem por genoma nuclear y se ha utilizado para Leishmania porque su genoma se ensambló utilizando datos de secuencias capilares largas. Miembros de los
la filogenómica Zelazny y col., 2005; Azmi y col., 2010 ). Cada repetición consta de tres partes subgéneros L. (Leishmania) Poseen 36 cromosomas (chr) con la excepción del L. mexicana complejo,
principales: i) un exón (o mini-exón) de 39 pb de longitud transcrito que está altamente conservado que tiene 34 debido a la fusión de los homólogos L. major chr8 con chr29 como un solo chr8 en L.
entre las posiciones 1 mi 9 y 21 mi 39 ( Sturm y col. 2001 ); ii) un intrón moderadamente conservado, que mexicana, y otra fusión de los homólogos L. major
varía en tamaño de 55 a 101 pb; y iii) un espaciador altamente variable no transcrito (51 mi 341
chr20 con chr36 en L. mexicana chr29 ( Rogers et al., 2011 ). los

subgénero Viannia tiene 35 cromosomas de modo que su cr20 largo es ortólogo al homólogo L. discriminativo para distinguir Viannia complejos de especies Fraga y col., 2010 ) porque su estructura
major chr20 más chr36 ( Britto et al., 1998 ). El subgénero Sauroleishmania tiene 38 cromosomas geográfica puede haber permitido más genes ancestrales fl Ay. Aún así, la resolución podría
debido a fi sión de los homólogos a chr30 y chr36 en el mejorarse mediante la evaluación simultánea de otros hsp loci tales como hsp20 ( Fraga et al., 2013 ).
Leishmania subgénero Coughlan et al., 2017 ).

Como era de esperar para un parásito obligatorio unicelular, los genomas de Variación en hsp70 se ha asociado con la resistencia al antimonio en L. donovani ( Vergnes et
Leishmania son compactos y aerodinámicos debido a la pérdida de genes: el al., 2007 ), L. tarentolae y
L. major El genoma es de 33 Mb en comparación con los 40 Mb de vida libre. Bodo saltans Jackson y L. infantum Brochu y col., 2004 ). Adicionalmente, hsp70 Se observaron mutaciones en un L. donovani foco
col., 2016; Opperdoes et al., 2016 ). El mayor número de genes se ha registrado en L. tarentolae ( 8530) donde la diversidad genética total era mínima ( Downing et al., 2011 ). Por consiguiente, hsp70 tiene un
seguido de L. major ( 8400), L. infantum / L. donovani 8 199), L. braziliensis gran poder filogenético, aunque un papel putativo en el metabolismo de los metales pesados podría
sesgar las estimaciones cuantitativas de la distancia evolutiva.
(8 175), L. mexicana ( 8106), L. adleri ( 7 959) y L. panamensis
(7 748). Sin embargo, estos valores tienden a representar diferencias en los métodos de ensamblaje
del genoma, el tipo y la longitud de la lectura de la secuencia y la resolución del número de copias Cisteína proteasa B (cpB) pertenece a una gran familia de cisteína peptidasas expresadas por
del gen en lugar de diferencias reales, con la excepción de ciertas familias de genes bien cisteína peptidasa A, B y C ( cpa, cpb, cpc). Varias especies mi especi fi c Ensayos de PCR dirigidos cpb
caracterizadas. genes y sus secuencias intergénicas no codificantes se han desarrollado para discriminar diferentes Leishmania
Algunos genes se han utilizado como controles endógenos para afirmar el nivel de expresión de especie Quispe Tintaya y col., 2004; Ocultar y prohibir
genes diana. Estos incluyen varios genes de copia única o múltiple utilizados para la detección, identi fi
catión y análisis filogenético de Leishmania especies como alfa-tubulina y segundo- actina. Una ~ uls, 2008 ).
lista completa de cebadores para ampli fi La descripción de diferentes genes que codifican proteínas Proteína de superficie acilada hidrófila B (HASPB) Pertenece a una familia de genes chr23
se proporciona en la Información complementaria: Tabla SI mi 2 . Se introduce la ubicación ortólogos (incluidos HASPA y HASPB) que se encuentran en el Viejo y el Nuevo Mundo Leishmania especie
cromosómica de estos genes y otros marcadores MLMT y MLST Tabla 2 . Además, varios marcadores que originalmente se llamó el locus LmcDNA16 ( Flinn y Smith, 1992 ).
basados en proteínas que se utilizan para el genotipado MLST ( yo G GOT, ASAT, GPI, NP1, NP2,
ICD, ME, FH, etc.), presentamos a continuación solo algunos de ellos que se utilizan comúnmente Leishmania HASPB es una lipoproteína que se exporta al espacio extracelular a través de una vía
para Leishmania secretora no convencional presente en la membrana plasmática de promastigotes y amastigotes
metacíclicos. Se caracteriza por dominios repetitivos que muestran polimorfismo entre especies e
intraespecies ( McKean y col., 1997; Alce y col., 1999; Bhatia y col., 1999 ). HASPB participa en la
identi fi cación y discriminación. metaciclogénesis y desempeña un papel en la localización del promastigote dentro de la arena fl y
Proteasa de superficie principal (MSP) también se llama Gp63 o leishmanolisina, y es la vector Sadlova et al., 2010 ). Se expresa solo en estadios metacíclicos de vector, correlacionándose
glicoproteína de superficie más abundante. Esta molécula de 63 kDa participa en la unión inicial del con la expresión de metacíclicos específicos. fi c GLP y proporcionando fi primero de fi marcador de
parásito a los macrófagos de mamíferos y probablemente contribuye a su supervivencia dentro de los proteína nitive para esta arena infecciosa
fagolisosomas de los macrófagos. Ha sido identi fi ed como factor de virulencia en varios Leishmania especies,
y se ha utilizado como una herramienta discriminatoria de especies (Información complementaria:
fl y etapa.
Subunidad catalítica de la ADN polimerasa a (polA) El Pol de 60 kDa un
Tabla SI mi 2 ) ( Victoir y col., 1998; Guerbouj y col., 2001; Mauricio et al., 1999, 2001, 2007 ). complejo (o Pol un- Complejo de ADN primasa) consta de cuatro subunidades: la subunidad
catalítica POLA1, la subunidad reguladora POLA2 y las subunidades primasa pequeña y grande
Proteínas de choque térmico (HSP) Durante el estrés, estas proteínas altamente conservadas PRIM1 y PRIM2, respectivamente. La subunidad catalítica POLA1 se ha utilizado para Leishmania
mantienen la homeostasis proteica al interactuar con proteínas desnaturalizadas e inhibir la
formación de agregados de proteínas citotóxicas ( Feder y Hofmann, 1999 ). La mayoría de las HSP discriminación de especies Croan y col., 1997; Noyes et al., 2002; Tsokana et al., 2014 ).
exhiben actividad de chaperón y tienen múltiples objetivos de interacción para controlar su
maduración, activación, translocación y degradación. Basándose en sus masas moleculares y N-acetilglucosamina-1-fosfato transferasa (NAGT) es una proteína transmembrana del retículo
estructuras primarias, las HSP se han dividido en las siguientes familias: HSP10, HSP40, HSP60, endoplásmico, cuya acción enzimática cataliza la fi primer paso de NORTE- vía de glicosilación. Se
HSP70, HSP83, HSP90, HSP100, HSP110 y HSP pequeñas ( Feder y Hofmann, 1999 ). Las expresa a partir de un gen de copia única que está altamente conservado y funcionalmente
pequeñas HSP protegen a otras proteínas de la agregación y mantienen la viabilidad celular durante indispensable y se usó para la discriminación de especies y análisis filogenéticos ( Waki y col., 2007 ).
el estrés. HSP20 y HSP23 están codificados por un solo gen y a veces se utilizan para estudios
filogenéticos ( Fraga et al., 2013 ). los hsp70 gen ha sido ampliamente utilizado para estudios
filogenéticos y taxonómicos de Leishmania Información suplementaria: Pequeñas proteínas SHERP hidrofílicas asociadas a ER se expresan en promastigotes
metacíclicos en cultivo y el insecto vector. Su producto es una proteína de membrana periférica de
6.2 kDa que se localiza en la membrana mitocondrial externa ( Knuepfer y col., 2001 ), pero aún se
desconoce la función de esta pequeña proteína inusual ( Sadlova et al., 2010 ).
Tabla SI mi 2 , Figura 5 ). Regiones con hsp70 Se han encontrado homología en los cromosomas 26,
28, 30 y 35. Estos han sido identi fi ed como adecuado para el diagnóstico de PCR-RFLP que no Proteína quinasa activada por mitógenos (MAPK) Las cascadas son módulos de tres quinasas
requiere cultivo de parásitos antes de la amplificación fi catión García et al., 2004, 2007; Montalvo et conservados evolutivamente que desempeñan un papel clave en la regulación de las funciones
al., 2014 ), por lo que pueden convertirse en objetivos de uso generalizado. los hsp70 celulares en respuesta a una variedad de estímulos extracelulares. Están compuestos por varios
miembros, incluidos MAPK2, MAPK3, MAPK4, MAPK5 y MAPK7. Genes MAPK que se activan en
gen, así como otros miembros de este grupo como hsp20 y hsp23 respuesta a una amplia variedad de estímulos fisiológicos y relacionados con el estrés y se cree que
puede diferenciar Leishmania subgéneros, como Leishmania, Viannia tienen el mismo papel en
y Sauroleishmania, y también complejos de especies L. donovani,
L. major, L. tropica, L. mexicana, L. braziliensis y L. guyanensis así como especies individuales ( Fraga Leishmania especie Brumlik y col., 2011; Ashutosh et al., 2012 ). los Gen A2 familia en chr22
y col., 2013; Van der Auwera y col., comprende los 5 0 A2 rel, 3 0 A2 rel, A2 rel interno y genes A2 ( Zhang y Matlashewski, 2001;
2013, 2014; Hombach et al., 2015 ). Sin embargo, hsp70 parece ser menos
Tabla 2
Localización cromosómica de diferentes marcadores moleculares de tipificación de microsatélites multilocus (MLMT), tipificación de secuencias multilocus (MLST) y genes codificadores de proteínas.
Cromosoma MLMT MLST Genes codificantes de proteínas
1 Li22-35, Lm2TG, Lm4TA, Li21-34, 36GTG, proteína hipotética (LinJ.01.0010) proteína de choque térmico 70 (LmxM.01.0640,
39GTG, 45GTG, 1GACA, LiBTG, Li71-5 / 2, LmjF.01.0640, LinJ.01.0660, LbrM.01.0790), GP63
LiBTA (LinJ.10.0490), Poli A (LmjF.01.0320, LmxM.01.0320,
LinJ.01.0330, LdBPK_010330,
LbrM.01.0360), proteína 1 inducible por daño al ADN (LbrM.01.0030,
LmjF.01.0610, LmxM.01.0610,
LinJ.01.0630, LdBPK_010630)
2 GA2, GT4, 2079372-72-448, 2079372-119374
3 LIST7006, 27GTG, 1 GC, ARP, M233 Pirofosfatasa inorgánica (AC125735), factor de iniciación de elongación 2
alfa (LdBPK_030960,
LmxM.03.0980)
4 LIST7004, LIST7007, ST436, 2079447-148- Espermidina sintasa 1 (LinJ.04.0570, LdBPK_040570, LmjF.04.0580,
646, 2079447-193-429 LmxM.04.0580, LbrM.04.0630)
5 28AT, G09, M202, M207, M402 LISTA 7022
6 Dihidrofolato reductasa-timidilato sintasa Histona H4 (LinJ.06.0010, LmxM.06.0010)
(LbrM.06.0830, LmjF.06.0860, LmxM.06.0860,
LinJ.06.0890, LdBPK_060890)
7 M166 Cisteína proteasa b (LmxM.07.0550,
LdBPK_070600)
8 DPB1, DPB2, Rossi 1 Poli A (LmjF.08.1010, LmxM.08_29.2600), Beta tubulina
(LbrM.08.1040, LbrM.08.1040,
LmjF.08.1230, LmxM.08.1230, LinJ.08.1280,
LinJ.08.1280)
9 Factor de alargamiento-1 gamma (LinJ.09.1020), Histona H2B
(LmxM.09.1340, LinJ.09.1410)
10 CSg55, LIST7025, LIST7031, LIST7032, 2079619-25-438, Isocitrato deshidrogenasa (LinJ10.0200, LmjF10.0290), GP63 (LmxM.10.0405, LmjF.10.0470,
2079619-166-373, Ibh3 Proteína similar a la deshidrogenasa de unión al zinc (LmjF.10.0560, LdBPK_100520, LbrM.10.1630), Histona H3 LmxM.10.0560,
LmjF.10.0570, LmxM.10.0570, (LmxM.10.0870, LinJ.10.0920)
LdBPK_100610, LinJ.10.0610, LdBPK_100620,
LinJ.10.0620, LbrM.10.0690, LbrM.10.0700), Gp63 (LmxM.10.0405,
LmjF.10.0470, LinJ.10.0490,
LdBPK_100520, LbrM.10.1630)
11 AC16R, AC16, 3 (Lmj), 21 (Lmj) Ácido esteárico desaturasa (LbrM.11.0330), proteína hipotética
(LinJ.11.0280)
12 LIST7034, GA3, 19 (Lmj), 26 (Lmj, Ld), LIST7002, Alanina aminotransferasa (LinJ.12.0580, LbrM.12.0630), Glucosa-6-fosfato
M196, Li71-7, CS19 isomerasa (LinJ.12.0490,
LbrM.12.0490, LdBPK-120490, LmjF.12.0530,
LmxM.12.0530),
Factor alfa de iniciación de traducción (LinJ.12.0001, LmjF.12.0010,
LdBPK_120010, LmxM.12.0010,
LbrM.12.0020)
13 LISTA 7026, 2079709-131-590, 2079709-205-
450, LISTA7001, M149, M155
14 LIST7010, LIST7011, Rossi2, ISA136, Enolasa (LinJ.14.1240, LbrM.14.1330), Proteína similar a nucleósido Poli A (LmjF.14.1180, LmxM.14.1180, LdBPK_141260,
2079734-89-538, 2079734-196-471 hidrolasa (LdBPK_140130, LinJ.14.1260, LbrM.14.1350)
LmxM.14.0130),
Ácido esteárico desaturasa (LmjF.14.0510, LmxM.14.0510, LinJ.14.0520,
LdBPK_140520)
15 2079764-93-547, LRC, 2079764-207-434, 8 (Lmj, Ld), 11 Histona H4 (LinJ.15.0010, LmxM.15.0010)
(Lmj, Ld)
dieciséis B6F, GA1, GA3, GA6, GTG1, GTG3, Li45-24, Li72-14 Histona H3 (LmxM.16.0570)
17 LISTA 7030, M140 Factor de alargamiento-1 alfa (LmxM.17.0080,

LmxM.17.0083, LinJ.17.0110), Histona H2B (LinJ.17.1320)
18 CSg46, 10F, 22 (Lmj, Li) Aconitasa (LinJ.18.0510, LbrM.18.0570), nucleósido hidrolasa 1 o

nucleósido fosforilasa 1
(LDBPK_181570), nucleósido hidrolasa 2 o nucleósido fosforilasa 2
(LDBPK_181570)
19 AC01R, AC01, CS20, LIST7003, LIST7009, LIST7012, Poli A (LinJ.19.1450, LbrM.19.1680), Histona H2B (LinJ.19.0030)
2079862-64-549, 2079862-235-
376, CS20
20 CSg48, AC52, M292 Malato deshidrogenasa mitocondrial (LbrM.20.0010) Factor de alargamiento-1 beta (LbrM.20.0770), LPG2
(LbrM.20.2700)
21 CSg53, 11H, 71AT, LIST7008, LIST7013, LIST7037, Hipoxantina-guanina fosforribosiltransferasa Tubulina beta (LmjF.21.1860, LmxM.21.1860, LbrM.21.2150,
Mix9, HG (LinJ.21.0980, LbrM.21.0990), fosfoglucomutasa LbrM.21.2150, LinJ.21.2240,
(LbrM.21.0700, LinJ.21.0700), hipoxantina-guanina LinJ.21.2240), Histona H2A (LinJ.21.1160), Histona H4 (LmxM.21.0015,
fosforribosil transferasa (AL596287) LinJ.21.0020, LmxM.21.0915) Proteína A2 (LinJ.22.0670,
22 cytb5R-Ch22II (LinJ.22.0590) LmxM.22.0691) Proteína pequeña hidrofílica asociada a ER
23 LISTA7035 Pteridina reductasa 1 (LmjF.23.0270, LmxM.23.0270, LbrM.23.0300,
LdBPK_230310, LinJ.23.0310) (LmxM.23.1050, LmjF.23.1086, LinJ.23.1210),
Proteína de superficie acilada hidrófila B
(LinJ.23.1220), Poli A (LbrM.23.0650, LinJ.23.0660)
Tabla 2 ( continuó)
Cromosoma MLMT MLST Genes codificantes de proteínas
24 7 (Lmj), 28 (Lmj), LIST7002, Li71-7, CS19 Enzima málica (LinJ24.0440, LmxM.24.0761, LmjF.24.0770, Poli A (LinJ.24.0110)
LinJ.24.0780, LbrM.24.0780,
LdBPK_240780), aspartato aminotransferasa
(LinJ.24.0370, LbrM.24.0370, LmjF.24.0370,
LdBPK_240370, LmxM.24.0370)
25 CSg59, Li23-41, LIST7033 Poli A (LinJ.25.0080, LmjF.25.0080, LdBPK_250080, LmxM.25.0080),
Factor de alargamiento-1alpha
(LinJ.25.0130), Histona H4 (LmxM.25.2450, LinJ.25.2560)
26 LIST7027, LIST7036, LIST7038, 20 (Lmj), 17 (Lmj), 27 (Ld), Adenina fosforribosiltransferasa (LinJ.26.0120,

M147, 21 (Lmj), E11 6F, ITSbraz, ITS1, M329 LbrM.26.0130, LmjF.26.0140)
27
28 B3H, GACA1, Li71-19 Cinasa C activada por Leishmania (LmxM.28.2740, LdBPK_282970), proteína de choque térmico 70 (LmxM.28.2770,
proteína de choque térmico 70 (LmjF.28.2770, LmxM.28.2780, LinJ.28.2950, LmjF.28.2780, LinJ.28.2950, LdBPK_282960,
LdBPK_282950, LinJ.28.2960, LbrM.28.2980, LinJ.28.3060)
LbrM.28.2970), proteína hipotética (LinJ.28.0190) Fumarato hidratasa
29 CSg47, M80, M81 (LmjF29.1960), proteína quinasa activada por mitógenos (AJ243188) proteína de choque térmico 70 (LmjF.29.1240, LbrM.29.1320,
LdBPK_291330, LinJ.29.1330), Poli A (LinJ.29.2710, LdBPK_292710),
Antígeno de membrana apical 1 (LmxM.29.1420)
30 LIST7024, LIST7029 Subunidad más grande de ARN polimerasa II (LmxM.30.2610) Antígeno de membrana apical 1 (LmjF.30.1410, LinJ.30.1470,
LdBPK_301470, LbrM.30.1520), subunidad más grande de ARN
polimerasa II (LmxM.30.2610) GP63 (LbrM.31.2250), subunidad más
31 LIST7039, LIST7040, Li46-67, Li71-33, Li72- subunidad más grande de ARN polimerasa II (LmjF.31.2610, grande de ARN polimerasa II (LmjF.31.2610) , LinJ.31.2680,
20, 23 (Lmj, Ld, Li), 13 (Lmj), CAK, 5 (Lmj, LinJ.31.2680, LdBPK_312680), proteína hipotética
Ld), 6 (Lmj) (Lmj.31.0280, LbrM.31.0280) LdBPK_312680), reductasa dependiente de tiol 1 (LbrM.31.0550),
histona H4 (LinJ.31.3320) proteína quinasa activada por mitógenos
32 Li71 mi 42, GA09, GA10, 1 (Lmj), 4 (Lmx), 15 Manosa fosfato isomerasa (LmjF32.1580, (Ld) (LmxM.32.1380), proteína de choque térmico 20 (LmjF.32.2260,
LinJ32.1600)
LdBPK_322410, LinJ.32.2410, LbrM.32.2490), Beta tubulina
(LmxM.32.0792), proteína hipotética
(LinJ32.1600), genes de isomerasa de fosfato de manosa (LmjF.32.1580)
33 11C, LIST7023, M269, 4 (Izquierda) Proteína quinasa activada por mitógenos (LmjF.33.1380,
LinJ.33.1470, LbrM.33.1650), Beta tubulina (LmjF.33.0794,
LinJ.33.0860, LbrM.33.0950,
LbrM.33.0950), factor inhibidor de la migración de macrófagos
(LmjF.33.1740, LinJ.33.1840), reductasa 1 dependiente de tiol
(LmjF.33.0240,
LinJ.33.0260), Lipophosphoglycans2
(LmxM.33.3120), Factor de alargamiento-1 beta
(LmxM.33.0820)
34 TubCA, 18 (Lmj, Ld, Li), 16 (Lmj) Aspartato aminotransferasa (LmxM.34.0820), proteína de choque térmico 70 proteína de choque térmico 70 (LbrM.34.4680), proteína A2
(LbrM.34.4680), Glucosa-6-fosfato deshidrogenasa (LbrM.34.3250, (LmxM.34.3020), Poli A (LmxM.34.4130), Factor de
LmxM.34.3340, alargamiento-1 beta (LinJ.34.0870),
CT005271), adenilato quinasa 2 (AF156853), malato deshidrogenasa Proteína 11 de membrana de cinetoplastido (LbrM.34.2140,
mitocondrial (LmjF.34.0160, LmxM.34.2210), Lipophosphoglycans2
LinJ.34.0170, LdBPK_340170), proteína hipotética (LinJ.34.0550) (LmjF.34.3120, LinJ.34.4290)
35 Li72-17 / 2, 7 GN, M75, M78, LIST7005, 4GTG, proteína de choque térmico 70 (LmjF.35.4710, LinJ.35.4780, 2080398-188-553, proteína de choque térmico 70 (LmjF.35.4710, LinJ.35.4780,
2080398-243-507, EMI LdBPK_354780), Fosfomanomutasa LdBPK_354780), proteína A2 (LbrM.35.2200, LdBPK_353070), Poli A
(LbrM.35.2180), 6-fosfogluconato deshidrogenasa (LinJ.35.2390,
(LmjF.35.3340, LinJ.35.3390, LdBPK_353390), aspartato aminotransferasa LmjF.35.4130), NORTE- acetilglucosamina-1-fosfato
(LmjF.35.0820, LinJ.35.0840, transferasa (LbrM.35.4430), Histona H4 (LmjF.35.0015,
LdBPK_350840) LbrM.35.0050, LinJ.35.1320),
Proteína 11 de la membrana del cinetoplastido (LmjF.35.2210,
LinJ.35.2250, LdBPK_352260)
36 Li41-56, LBA, 1CA, LIST7021, LIST7028, Fosfomanomutasa (LinJ.36.2070), hipotético Proteína A2 (LmjF.36.1980, LmxM.36.1980, LinJ.36.2090,
2080492_169_582, 2080492_192_516, proteína (LinJ.36.1190, LinJ.36.0350) LdBPK_362090, LdBPK_354200), Poli A (LinJ.36.6630), Factor de
2080455_268_439, 2080455_230_522, alargamiento-2 alfa (LmxM.36.0180, LinJ.36.0190), NORTE-
2080483_178_461, 2080476-49-610,
2080476-227-539, 2080483-70-595 acetilglucosamina-1-fosfato transferasa
(LmjF.36.4180, LinJ.36.4390), Histona H4 (LinJ.36.0020,
LmxM.36.0020)
Se han dado entre paréntesis diferentes copias de un gen con su identificación sistemática.
Zhang y col., 2003 ). Es la única familia de genes que se sabe que es responsable de la Factor de alargamiento-1 un ( EF-1 un) Los factores de elongación se utilizan para la síntesis de
visceralización y tiene una especie específica fi c número de copia en Leishmania. Las proteínas A2 proteínas e incluyen los factores de elongación 1-alfa, 1-beta, 1gamma y el factor de elongación 2.
son abundantes amastigotespeci fi c factores de virulencia (que varían de 42 a 100 kDa) necesarios Como proteína ubicua altamente conservada EF-1 un puede ser adecuado para la inferencia
para la supervivencia en el hospedador mamífero. Las proteínas A2 son similares a las Leishmania etapa filogenética entre complejos de especies ( Momen y Cupolillo, 2000 ). Sin embargo, los genes que
especi fi c Antígeno S. codifican EF-1 un son miembros de una gran familia de genes que se someten a
Figura 5. Gen Hsp70 utilizado para diagnóstico y tipificación Leishmania especies
cambios extensos en el número de copias en Leishmania especies y también durante el estrés a macrófagos y ratones BALB / c ( Garami e Ilg, 2001 ).
corto plazo relacionado con las drogas. EF-1 un ortólogos se informó previamente como ampli fi ed en Lipophosphoglycans (LPG) La superficie de las etapas de promastigote está recubierta con una
L. infantum JPCM5 (7 mi 12 copias) y en L. major Friedlin (7 mi 21 copias) ( Rogers et al., 2011 ). Uno L. variedad de glicoconjugados interrelacionados, incluido el GLP, y se considera un factor crítico para
la supervivencia del parásito tanto en el insecto vector como en el mamífero hospedador. Es
donovani EF-1 un El homólogo (LdBPK_354220, también conocido como supresor 1 de la subfamilia comúnmente modi fi ed por la adición de cadenas laterales de carbohidratos que varían
B HSP70 o HBS1) tuvo un número reducido de copias debido a una única extensión de CNV de 674 significativamente fi caly a través de las etapas del ciclo de vida y especies. En consecuencia, los
Kb durante la inducción de resistencia a miltefosina ( Shaw y col., 2016 ). los Factor inhibidor de la genes que codifican las enzimas implicadas en la modificación de la cadena lateral de GLP fi cation
migración de macrófagos (MIF) juega un papel importante en la regulación de la función de los exhiben una alta variabilidad entre las especies, con varios loci ubicados en regiones subteloméricas
macrófagos en la defensa del huésped a través de la supresión del anti-in. fl efectos inflamatorios de ( Llanes et al., 2015 ).
los glucocorticoides. Rara vez se ha utilizado para Leishmania identi fi-
Subunidad más grande de la ARN polimerasa II (RPOIILS) La ARN polimerasa (RNAP) II es una
enzima de múltiples subunidades responsable de la transcripción de proteínas que forma parte de un
catión Weiser y col., 1989 ) (Información suplementaria: gran multifuncional ' holoenzima ' involucrado en el empalme, la poliadenilación y la reparación del
Tabla SI mi 2 ). daño del ADN ( Hampsey y Reinberg, 1999; Holstege y Young, 1999 ). La subunidad más grande
Glucosa-6-fosfato deshidrogenasa (G6PD) es una de las enzimas utilizadas para identificar Leishmania (RPOIILS) lleva un dominio carboxi-terminal formado por largas repeticiones de múltiples 7
por electroforesis enzimática multilocus (MLEE) y análisis MLST ( Zemanova y col., 2007; Boite et al., aminoácidos. Se ha utilizado para estudios evolutivos del género. Leishmania Croan y col., 1997;
2012 ). El patrón polimórfico revelado por la caracterización parcial del gen G6PD por PCR generó Noyes et al., 2002 ).
ocho isoformas de esta enzima que pueden usarse como marcadores moleculares para diferentes
Leishmania especie Cupolillo y col., 1994; Castilho et al., 2003 ).

2.1.2.2. ADN no cromosómico
6-fosfogluconato deshidrogenasa (6PGDH) es una enzima clave de la vía oxidativa involucrada
2.1.2.2.1. ADN de cinetoplasto (ADN mitocondrial). Todo Kinetoplastid
en la generación de NADPH y ribulosa 5-fosfato. El gen codifica una proteína de 52 kDa. Se ha
fl Los agelados poseen un solo genoma mitocondrial conocido como ADN del cinetoplasto (ADNk),
utilizado con frecuencia en análisis MLEE y MLST para tipificar el Viejo y el Nuevo Mundo Leishmania
que consta de varios miles de moléculas de ADN circulares unidas entre sí en una red concatenada ( Lukes
especie Zemanova y col., 2007; Boite et al., 2012 ).
et al., 2002 ).
Es una masa de ADN circular que consta de miles de minicírculos (~ 1 Kb cada uno) y varias
Histonas son componentes principales del nucleosoma y juegan un papel importante durante la
docenas de maxicírculos (~ 23 Kb cada uno). Los maxicírculos codifican genes homólogos a los
transcripción de genes. Son clasi fi ed como histonas centrales (H2A, H2B, H3 y H4) e histonas
presentes en el ADN mitocondrial de otros eucariotas. Los minicírculos constituyen aproximadamente
enlazadoras (H1 y H5). Sus masas moleculares varían de 14 (H2A y H2B) a 21 kDa (H1) ( Khorasanizadeh,
el 95% del kADN y codifican pequeñas moléculas de ARN denominadas ARN guía, que proporcionan
2004 ). Se ha informado que algunos genes de histonas son candidatos potentes para Leishmania mecanografía
información para la edición del ARN del maxicírculo. mi transcripciones codificadas Stuart y col., 2005 ).
(Información complementaria: Tabla SI mi 2 ) ( Lukes y Maslov, 2000 ).
El kDNA es tradicionalmente el objetivo más utilizado para la detección y tipificación de Leishmania debido
a su naturaleza de múltiples copias y aunque alta sensibilidad ( Jara et al., 2013 ). Se sabe que la
diversidad de secuencias entre el kDNA minicírculo y maxicírculo es de naturaleza variable.
Tubulinas constituyen una familia de genes codificadores de proteínas que incluye tubulina alfa,
beta, gamma, zeta y épsilon. Las tubulinas alfa y beta altamente conservadas se forman a / b- heterodímeros
de tubulina que son componentes fundamentales del citoesqueleto eucariota, la maquinaria de
división celular, el transporte intracelular y los
2.1.2.2.1.1. maxicírculo de kDNA
Este componente de kDNA codifica subunidades de los complejos de la cadena respiratoria
fl motilidad agellar McKean y col., 2001 ). La síntesis de tubulina se correlaciona con los cambios
mitocondrial, una subunidad ribosómica y dos rRNA inusualmente pequeños (12S y 9S). A diferencia
morfológicos durante la transición de promastigoto a mastigote, donde los promastigotes sintetizan
de la mayoría de los ADN mitocondriales, el ADN k no codifica los ARNt ( Alfonzo y col., 1997; Lukes
más tubulina que los amastigotes ( Fong y Chang, 1981 ). Entre los diferentes miembros de la familia
y col., 2005 ).
de la tubulina, el un- y segundo- Los genes de tubulina se utilizan ampliamente para Leishmania mecanografiar
porque están presentes en múltiples copias en tándem, formando grupos separados de un- y segundo-
El maxicírculo consta de una región conservada que codifica proteínas y rRNA y una región
variable no transcrita (VR). El VR está compuesto por una variedad de secuencias repetidas con
función desconocida y tiene una estructura similar en todos Leishmania especies, con repeticiones
genes de tubulina, y se encuentran dispersos por todo el genoma ( Landfear y col., 1983; Jackson y
largas ricas en GC intercaladas por repeticiones cortas ricas en AT. El maxicírculo codifica tres
col., 2006 ).
marcos de lectura abiertos no asignados, MURF1, MURF2 y MURF4, que probablemente codifican
Genes de manosa fosfato isomerasa (MPI) codifican proteínas que facilitan la interconversión de
proteínas ( Figura 6 ). Los genes del maxicírculo poseen niveles variables de conservación de la
fructosa 6-fosfato (F6P) y manosa-6-fosfato (M6P), aplicadas en el análisis MLEE. También se han
secuencia, que van desde la subunidad I de la citocromo oxidasa altamente conservada (COI), hasta
utilizado ampliamente para examinar la variación dentro de los complejos de especies utilizando
la COIII menos conservada, otra subunidad del mismo complejo. Diferencias de kDNA de Maxicircle
MLST ( Zemanova y col., 2007; Boite et al., 2012 ). Se descubrió que MPI es el único marcador
entre Leishmania las especies se encuentran casi exclusivamente en la realidad virtual. La estructura
enzimático confiable que puede distinguir entre L. peruviana y L. braziliensis, dos miembros del
de la Leishmania
subgénero estrechamente relacionados genéticamente Viannia ( Arana y col., 1990 ). Desempeña un
papel importante en la infección parasitaria en
maxicírculos Figura 6 ) y lista de cebadores utilizados para ampli fi catión de sus genes se encuentra en
Información complementaria: Tabla SI mi 3 .
Los elementos genéticos más importantes de maxicircles son breves fl y se describe a aproximadamente 150 pb de largo, y se puede utilizar para una discriminación precisa entre Leishmania
continuación: especies y entre cepas ( Smyth y col., 1992; Piarroux y col., 1993; Minodier y col., 1997; Morales et
ARN mitoribosómico 9S y 12S de tripanosomátidos son los ARNr mitocondriales más cortos al., 2001; Salotra et al., 2001; Lachaud y col., 2002; Gangneux et al., 2003; Jirku et al., 2006 ).
conocidos y están altamente conservados entre estos fl agellates Figura 6 , Información suplementaria: Además, cebadores titulados " Marcadores anónimos " se enumeran en Información adicional: Tabla
SI mi 5 . Estos cebadores se han utilizado para la detección e identi fi catión de Leishmania, pero sus
Tabla SI mi 3 ). objetivos se desconocen actualmente.
Citocromo oxidasa (CO) I, II y III forman las tres subunidades del complejo enzimático terminal
de la cadena respiratoria. El gen COI es inusual en su organización porque está codificado en la
hebra opuesta del maxicírculo en comparación con otros genes. El gen COII menos conservado se
ha utilizado para examinar la variación dentro del L. donovani complejo Ibrahimand Barker, 2001 ). Sin
embargo, se ha utilizado para estudios dirigidos a las relaciones filogenéticas de 2.2. Distinguir entre complejos de especies
2.2.1. Métodos
Leishmania especie Cao et al., 2011 ). Ninguno de los métodos parasitológicos o no basados en PCR descritos anteriormente es
MURF La función de los genes MURF sigue siendo desconocida. Debido a su variación y eficaz para distinguir entre Leishmania complejos de especies. La mayoría de los ensayos de PCR
especie-speci fi c editar patrones Verner et al., 2015 ), no son adecuados para fines de diagnóstico. basados en los objetivos descritos anteriormente son de género específico fi c probar simplemente la
presencia o ausencia de un producto de PCR (detección del parásito); algunos se pueden utilizar para
Lo mismo se aplica a las subunidades del complejo NADH deshidrogenasa (ND) que cataliza la cuanti de carga de parásitos fi catión en muestras clínicas ( Verma et al., 2010 ).
oxidación de NADH por ubiquinona. No se cree que el gen ND1 esté involucrado en la catálisis. El
complejo de tripanosomátidos ND se reduce y en condiciones de cultivo no es esencial ( Verner et al., PCR Identi fi cación y discriminación de Leishmania Los complejos de especies y las especies se
2015 ). pueden realizar a través de diferentes enfoques técnicos. Ampli fi Los fragmentos ed de las muestras
pueden examinarse mediante electroforesis para determinar las diferencias de longitud, la variación
Una sola mitocondrial mi subunidad codificada del complejo de citocromo reductasa y otro del sitio de restricción utilizando enzimas de restricción, secuenciación o análisis de la curva HRM.
citocromo b (Cyt b), Los citocromos se han utilizado ocasionalmente para Leishmania discriminación Sin embargo, la variabilidad de muchos de los objetivos enumerados anteriormente es demasiado
( LuyoAcero y col., 2004; Kato y col., 2007; Yang et al., 2013 ), debido a su alta conservación de baja, lo que hace que otros métodos como RFLP o secuenciación sean inútiles y solo algunos de
secuencia ( Asato et al., 2009 ). los Región divergente (RD) se describió inicialmente como un estos objetivos son ideales para la diferenciación y tipificación por debajo del nivel de género. Otro
segmento maxicírculo variable y presumiblemente no codificante ( Maslov y col., 1984 ). Se compone enfoque es el uso de especies complejas o especies específicas. fi cebadores c p.ej, en PCR multiplex,
de varias matrices repetidas que difieren entre PCR anidada).
Leishmania especies. Las secuencias de DR incluyen dos tipos de repeticiones largas ricas en GC que PCR anidado y semi-anidado son versiones no cuantitativas de la PCR destinadas a reducir las fi c
vinculante. Implican dos conjuntos de cebadores utilizados en dos ejecuciones sucesivas. El segundo
se alternan con grupos de repeticiones cortas ricas en AT, que varían en longitud desde 10 Kb en L. amazonensis
a 12 Kb en L. mayor Flegontov et al., 2006 ). conjunto de cebadores ampli fi es un objetivo secundario dentro del fi primer producto. Esto asegura
que el producto de la segunda PCR tenga poca contaminación de dímeros de cebadores, horquillas y
De los varios cientos de genes de ARN guía (ARNg) solo unos pocos están codificados en el objetivos de cebadores alternativos ( Akhavan et al., 2010 ). Se puede utilizar para discriminar
maxicírculo. Estos pequeños ARN juegan un papel en la inserción y deleción precisas de uridinas en especies con los cebadores adecuados.
12 de 18 transcripciones maxicíricas ( Estévez y Simpson, 1999; Lukes y col., 2005 ).
PCR multiplex se refiere a la amplificación simultánea fi catión de varios objetivos de ADN

Los tamaños y posiciones de fi cinco regiones intergénicas (IG) ( 12S mi 9S, 9S-ND8, ND7-COIII, diferentes. Implica realizar varias reacciones de PCR separadas juntas en un experimento. Utiliza
COIII-CyB y RPS12-ND5) en el Leishmania varios conjuntos de cebadores dentro de una sola mezcla de PCR para producir amplicones de
maxicircles se muestran en Figura 6 . diferentes tamaños de especi fi c Dianas de ADN. Las temperaturas de recocido para cada uno de los
2.1.2.2.1.2. minicírculo de kDNA juegos de cebadores deben optimizarse para que funcionen correctamente en un solo tubo de
Los minicírculos de kDNA tienen especie-speci fi c tamaños que van desde aproximadamente 0,8 reacción, y los tamaños de amplicón deben ser suficientes. fi cientemente distintos para ser
a 1,0 Kb. Dado que estos pequeños círculos de ADN están presentes en miles de copias por célula, visualizados mediante electroforesis en gel. Este método se ha utilizado para el diagnóstico de
son objetivos ideales para la detección altamente sensible de Leishmania de muestras biológicas con leishmaniasis utilizando diferentes tipos de marcadores, como los ARN SL multicopia ( Harris y col.,
bajo número de parásitos ( Ceccarelli et al., 2014 ). Los minicírculos constituyen> 95% de la masa total 1998; Jorquera et al., 2005 ) y minicírculos de kDNA ( Pita-Pereira et al., 2008 ).
de kDNA, y sus secuencias típicamente heterogéneas (hay alrededor de 10 clases de secuencias
diferentes y el número de minicírculos en cada clase es variable) pueden perder diversidad durante el
cultivo continuo ( Barker, 1987; Lukes et al., 2002 ). Cada minicírculo se compone de uno a cuatro 150 mi PCR en tiempo real ( PCR cuantitativa) permite la medición fiable de los productos de ADN
Regiones conservadas de 200 pb que contienen los orígenes de replicación para ambas cadenas, y generados mediante el seguimiento de la amplificación fi-
una región variable que codifica generalmente un solo gen de ARNg ( Sturm y Simpson, 1991; Stuart catión de la molécula de ADN diana durante cada ciclo de PCR. Se puede utilizar cuantitativamente
y col., 2005 ). Un mapa de la (PCR cuantitativa en tiempo real) o semicuantitativamente, y estos métodos son importantes para
ciertos tratamientos de leishmaniasis ( Paiva-Cavalcanti et al., 2010 ). Diferentes controles internos
(genes como GAPDH, segundo- microglobulina, segundo- actina, ARNr 18S) se utilizan con
mayor frecuencia como indicadores de la extracción óptima de ácidos nucleicos, la calidad de las
Leishmania minicírculo se muestra en Figura 7 , y una lista completa de cebadores para el ampli fi La muestras, la calidad de la PCR, así como la inhibición de la PCR ( Mortarino et al., 2004 ). Quanti
descripción de las diferentes regiones de minicírculos se muestra en la información complementaria: Tabla absoluto fi catión necesita también el uso de un estándar de ADN.
SI mi 4 . los minicírculo conservado región contiene bloques de secuencia conservados (CSB mi I,
CSB-II y CSB-III) que son de longitud variable en todo el género Leishmania Ray, 1989 ). Por lo tanto,
son objetivos efectivos para ampli de PCR fi cación de todas las clases de minicírculos. La región Secuenciación los fi La tecnología de secuenciación de ADN de primera generación fue
conservada puede discriminar Leishmania solo a nivel subgenérico ( Lachaud et al., 2002 ). los región desarrollada por Sanger y col. (1977) basado en la incorporación selectiva de didesoxinulceótidos que
variable de minicírculos es terminan la cadena y la
fi La primera máquina de secuenciación automática (Applied Biosystems 370A) se produjo en 1987.
Está mejorando rápidamente en calidad, longitud de lectura,
Figura 6. maxicírculo de kDNA y sus genes componentes y fragmentos longitudes en 5 Leishmania especies de L. major, L. donovani, L. amazonensis, L. braziliensis y L. tarentolae.
et al., 2012 ). MLST tiene un gran poder para diferenciar muestras donde el número total de
biomarcadores distintos es grande. En la Información complementaria se proporciona una lista
completa de marcadores MLST y sus características: Tabla SI mi 6 .
Ampli aleatoriamente fi ADN polimórfico ed (RAPD) se basa en la PCR ampli fi catión de ADN
utilizando sólo un cebador corto que se define arbitrariamente fi ned y, por tanto, puede utilizarse para
cualquier organismo sin conocimiento previo de las secuencias diana. RAPD se puede utilizar solo o
junto con otras técnicas para investigar genéticas interand intraespecíficas fi c diversidad dentro Leishmania
especies y complejos Toledo y col., 2002; Zemanova y col., 2004; Botilde et al., 2006 ). Sin embargo,
su uso está restringido debido a la necesidad de Leishmania ADN y estandarización precisa de las
condiciones de PCR para garantizar especi fi ciudad. También es dif fi culto para estandarizar e
interpretar los resultados de ensayos con mala reproducibilidad ( Scho
€ nian
et al., 1996; Eisenberger y Jaffe, 1999 ). Una lista completa de marcadores RAPD y sus
características se encuentra en Información complementaria:
Tabla SI mi 7 .
Ampli fi polimorfismo de longitud de fragmento ed (AFLP) es una herramienta basada en PCR
utilizada en ADN fi huellas dactilares de Leishmania especies. Se basa en la PCR selectiva ampli fi catión
Figura 7. minicírculo de kDNA de Leishmania sp. y sus fragmentos componentes. CSB: Bloque de secuencia de fragmentos de restricción de una digestión total de ADN genómico, unido a un adaptador de
conservada. oligonucleótidos ( Vos y col., 1995 ). El ampli fi Los fragmentos ed se separan y visualizan en geles de
poliacrilamida y se puntúan como polimorfismos de presencia / ausencia. Es una herramienta
poderosa y de alto rendimiento para identi fi catión e investigar la variación genética en cepas o
velocidad y costo y es ampliamente utilizado para la identi fi catión de estrechamente relacionadas Leishmania especie Kumar y col., 2010 ) como en el L. braziliensis complejo
Leishmania especies (complejos) y estudios filogenéticos. Secuenciación de alto rendimiento se ha Odiwuor et al., 2011 ).
convertido en fundamental en los estudios de genómica, epigenómica y transcriptómica. Por lo tanto,
se está utilizando cada vez más para identificar y discriminar diferentes especies de parásitos,
incluidos Leishmania Cantacessi et al., 2015 ). Tipificación de microsatélites multilocus (MLMT) se basa en el ampli fi catión de microsatélites
(también llamado secuencia simple repeticiones SSR o repeticiones cortas en tándem mi STR), que
Escritura de secuencia multilocus (MLST) es un método en el que varios genes de son repeticiones en tándem de un 1 simple mi Motivo de 6 nucleótidos. Los microsatélites están
mantenimiento no vinculados (normalmente 4 a 6) se amplifican (simultáneamente) fi ed mediante presentes en regiones codificantes (raras veces) y no codificantes en todo el genoma y mutan a
PCR y posteriormente analizado por secuenciación ( Zemanova et al., 2007 ; Mauricio et al., 2006 ; Boite tasas 5 mi 6 órdenes de magnitud más alto que el grueso
ADN. Los microsatélites son marcadores neutrales y codominantes. La variación de la longitud de el fragmento de ssDNA plantilla, lo que permite la amplificación fi proceso de cationes para amplificar
microsatélites resulta de la ganancia o pérdida de repeticiones, que pueden detectarse después de rápidamente el objetivo a un alto número de copias. Esto se puede detectar a simple vista como un
ampli fi catión usando speci fi cebadores c fl anking el locus. Los tamaños de los fragmentos de PCR se precipitado blanco o como una solución de color amarillo verdoso después de la adición de colorante
determinan mediante electroforesis en gel de agarosa de metáfora o gel de poliacrilamida o análisis verde SYBR. Este método sensible, simple, rápido y rentable no requiere reactivos especiales o
de fragmentos automatizado (uso de fl cebadores marcados con orescencia). MLMT generalmente equipos sofisticados e incluso puede combinarse con un paso de transcripción inversa para permitir
usa un conjunto de 10 mi 20 loci de microsatélites no ligados y asume un modelo de mutación la detección de ARN. LAMP puede ser más sensible que la PCR convencional y se ha utilizado para
escalonada. Los microsatélites tienen un alto poder discriminatorio dentro de los complejos de la detección de Leishmania especie Khan et al., 2012; Ghasemian et al., 2014; Sriworarat et al., 2015 ).
especies ( Kuhls y col., 2007; Scho Sus principales limitaciones son el requisito de un contenido de GC no extremo, el riesgo de
estructuras de ADN secundarias y el rango de temperatura adecuado limitado. Además, los cuatro
€ nian et al., 2010 ). Las cartillas cebadores tienen numerosos requisitos de diseño, como que no debe haber homología con el ADN
suelen ser especies o especies complejas fi c (en cuanto a los complejos L. donovani, L. tropica, L. del huésped, el 5 0 Los extremos de los imprimadores externos deben estar separados por 120 a 180
major) y no se puede aplicar para la comparación de especies pertenecientes a diferentes complejos bases, los 5 ' los extremos de los cebadores internos deben tener una separación de 0 a 20 bases, y
de especies. Regiones fl anking los microsatélites no se conservan fuertemente entre especies las regiones de bucle deben tener una longitud de 40 a 60 bases.
relacionadas de Leishmania y las repeticiones polimórficas en una especie pueden estar ausentes o
no ser informativas en otras especies ( Jamjoom y col., 2004; Schwenkenbecher y col., 2006; Scho
€ nian
et al., 2010 ). Hay algunas aceptaciones de cebadores que funcionan también para diferentes Los métodos basados en proteínas incluyen electroforesis enzimática multilocus (MLEE), que
complejos de especies, p.ej, un conjunto estándar de cebadores desarrollados para el subgénero Viannia examina enzimas con especificación similar o idéntica fi ciudades, pero diferentes estructuras
( Oddone y col., 2009 ). En muchos estudios conjuntos estándar de cebadores de microsatélites denominadas isoenzimas ( Rioux y col., 1990 ). Las isoenzimas son producidas por múltiples genes,
específicos fi c para una determinada especie o complejo de especies se utilizan con el fin de lograr no son redundantes y son importantes para los procesos metabólicos en varios compartimentos
resultados comparables entre diferentes laboratorios y utilizar una base de datos determinada para celulares. Usando un de fi nido conjunto de isoenzimas, una especie o cepa característica fi C " patrón
cepas ya estudiadas. Una lista completa de marcadores MLMT y sus características se encuentra en de movilidad " se puede establecer. Sin embargo, MLEE no discrimina entre poblaciones debido a
Información complementaria: Tabla SI mi 8 . homoplasia, bajo número de marcadores o heterocigosidad del gen diana que causa más de un
patrón de movilidad ( Jamjoom et al., 2004 ). Por otro lado, este método resultó eficaz para detectar
PCR-ELISA es un método inmunológico para detectar y cuantificar los productos de la PCR los principales eventos de hibridación entre complejos e intracomplejos (véanse las secciones C2 y
directamente después de la inmovilización de ADN biotinilado en una microplaca mediante tres C3, respectivamente). No se recomienda MLEE debido a la falta de poder discriminativo dentro de
pasos: ampli fi catión, inmovilización y detección. El gen de interés es ampli fi ed mediante PCR en algunas especies y poblaciones ( por ejemplo, L. infantum MON-1), laborioso cultivo de parásitos y
presencia de digoxigenina-11-dUTP (DIG-dUTP). Los productos de PCR marcados con DIG se unen necesidad de equipo especializado ( Scho
a speci fi c sondas de oligonucleótidos marcadas con biotina en sus 5 0 extremos para que puedan
inmovilizarse en la microplaca y puedan detectarse sus ácidos nucleicos. La PCR-ELISA es más
sensible que la PCR convencional, tiene tiempos de análisis más cortos y límites de detección más
bajos. Combinado con su naturaleza semicuantitativa, este método puede ser una poderosa € nian et al., 2010 ).
herramienta de detección en ensayos médicos, pero no para la discriminación entre especies ( De Ionización por desorción láser asistida por matriz mi tiempo de- fl bien MALDI-TOF) La
Doncker y col., 2005a, b; Sue et al., 2014 ). espectrometría de masas (MS) es una herramienta poderosa para
Leishmania especie identi fi catión Mouri et al., 2014 ). Después de la ionización de la muestra en un
speci fi c solución ácida, MALDI-TOF MS utiliza rayos láser de espectrómetros (costosos) para
evaporar la muestra hacia el sensor, donde el " tiempo de fl bien " depende del peso molecular de las
PCR-HRM mide los cambios en el fl Intensidad de fluorescencia de un tinte de intercalación de moléculas ionizadas. Esta proteína espectral fi La huella digital de un aislado se puede comparar con
ADN durante la disociación de ADN bicatenario (dsDNA) en ADN monocatenario (ssDNA). Puede una base de datos espectral de referencia. Este método es adecuado solo para parásitos cultivados;
detectar alternativas de dsDNA y discriminar diferentes Leishmania especies en función de su por lo tanto, no funciona con muestras clínicas.
composición, longitud, contenido de GC y complementariedad de hebras ( Nasereddin y Jaffe, 2010;
Hernandez et al., 2014 ).
PCR-RFLP es un método que detecta la variación entre los patrones de fragmentos de ADN 2.2.2. Marcadores
producidos por digestión con enzimas de restricción visualizados mediante electroforesis en gel. MLST ha permitido un ef fi ciente discriminación entre
Estos RFLP son causados por nucleótidos alternativos en los sitios de restricción y, a menudo, se L. braziliensis, L. guyanensis, L. naif fi y L. lainsoni, así como dentro de los complejos de especies
usaban como marcadores en mapas de ligamiento genético. La variación de longitud y la diferencia utilizando cuatro genes internos: glucosa6-fosfato deshidrogenasa ( g6pd), 6-fosfogluconato
en los números y patrones de los fragmentos se pueden utilizar para deshidrogenasa ( 6pgd), manosa fosfato isomerasa ( mpi) e isocitrato deshidrogenasa ( icd) ( Boite et
al., 2012 ). De manera similar, MLST de siete genes fue eficaz para examinar la diversidad dentro de
Leishmania diferenciación de especies Marfurt y col., 2003; Akhoundi et al., 2013 ), particularmente complejos y especies ( El Baidouri et al., 2013 ). Estos genes codificaban una subunidad alfa del factor
cuando se aplica a ITS1 ( Scho € nian y col., 2 de inicio de elongación, espermidina sintasa 1, una proteína deshidrogenasa de unión a zinc, una
2003 ) y mini-exón ( Minodier y col., 1997 ) regiones o las hsp70 subunidad alfa del factor de inicio de la traducción, una proteína nucleósido hidrolasa, una proteína
( Montalvo et al., 2012 ). hipotética y la subunidad más grande de RNAP II. De hecho, MLST de estos genes (4677 pb
Ampli isotérmico mediado por bucle fi catión (LÁMPARA) utiliza cuatro cebadores diferentes concatenados en total), el locus de ARN SL (176 mi 397 pb) y hsp70 ( 1245 pb) proporcionó una mejor
específicos fi cally diseñado para reconocer seis regiones distintas en un locus objetivo, de modo que resolución de la variación entre complejos e intraespecies que el locus ITS1 del rDNA (257 mi 302 pb),
ampli fi El catión y la detección del objetivo de dsDNA se pueden completar en un solo paso a gen de ARN 7SL (184 mi 187 pb) o MLEE ( Van der Auwera y col., 2014 ). Además de los objetivos
temperatura isotérmica ( Notomi y col., 2000 ). La ADN polimerasa utilizada tiene actividad de mencionados, uno de los objetivos importantes, utilizado para Leishmania identi fi catión se basa en la
desplazamiento de cadena, por lo que no hay necesidad de calor (para desnaturalizar el ADN caracterización de la Leishmania telómeros llamados LCTAS
bicatenario en ADNss para el apareamiento del cebador y el alargamiento del amplicón). Cada
producto de ssDNA inicial proporciona una plantilla adicional para una reacción en cadena utilizando
un segundo cebador interno y externo a través de una estructura intermedia de tallo-bucle ( Fu y col.,
2011 ). Luego, un cebador interno une esta sección de bucle para permitir la producción de una copia
de
( Leishmania secuencia conservada asociada a los telómeros) ( Cantacessi
dieciséis M. Akhoundi y col. / Aspectos moleculares de la medicina 57 (2017) 1 mi 29
et al., 2015 ). 2003; Scho € nian et al., 2003; Zhang y col., 2003; Kuhls y col., 2005;
Una evaluación de varios miembros del género. Leishmania Mauricio et al., 2007; Waki y col., 2007; Ocultar y prohibir ~ uls, 2008;
usando ampli de PCR fi cationes de diferentes cromosomas y marcadores mitocondriales mostraron Cao et al., 2011; Leelayoova y col., 2013; Fraga y col., 2013; Yang et al., 2013 ) ( Tabla 3 ).
que, entre ellos, las regiones ITS1 e ITS2, Mini-exón / Líder empalmado (rDNA), gp63, hsp70, cpb,
POLA, G6PD, 6PGDH, MPI, histonas, RPOIILS, NAGT, A2, EF-1 un ( gen codificante de proeína), cytb,
COII ( maxicírculo de kDNA) y minicírculo de kDNA son informativos y tienen un poder razonable para 2.4. Variación dentro de focos y poblaciones
diferenciar entre complejos de especies ( Harris y col., 1998; Momen y Cupolillo, 2000; Noyes et al.,
2002; Marfurt y col., 2003; Scho 2.4.1. Métodos
Varios estudios han examinado la variación genética dentro o entre focos de infección o
€ nian et al., 2003; Zhang categorías de especies. MLST de un gran número de genes podría, en principio, ser eficaz ( Boite et
et al., 2003; Kuhls y col., 2005; Mauricio et al., 2007; Waki y col., 2007; Ocultar y prohibir al., 2012 ), pero esto fue apoyado por L. donovani diversidad Downing et al., 2011 ). Las diferencias
~ uls, 2008; Cao et al., 2011; Leelayoova y col., entre L. braziliensis focos de Bolivia y Perú muestreados en dos intervalos de tiempo ( Rougeron et al.,
2013; Fraga y col., 2013; Yang et al., 2013 ) ( Tabla 3 ). 2009 ), la diversidad de L. major, L. tropica, L. donovani y
En la Información complementaria se resume una lista completa de diferentes marcadores y
cebadores, incluidos los marcadores cromosómicos, MLST, RAPD y MLMT utilizados para distinguir
entre complejos de especies: Tablas SI-1, 2, 6, 7 y 8 . L. infantum en el Viejo Mundo Bulle y col., 2002; Ochsenreither et al., 2006; Schwenkenbecher y col.,
2006; Kuhls y col., 2007; AlJawabreh et al., 2008 ) y en Túnez muestreados en los años 1991 mi 1992
y 2008 mi 2012 ( Harrabi et al., 2015 ), podría evaluarse eficazmente utilizando MLMT. Sin embargo,
2.3. Identificación de especies dentro de complejos para ciertos focos, la homogeneidad de los alelos marcadores tiene inferencias limitadas sobre la
estructura de la población ( Downing et al., 2012 ), por lo que MLMT parecería más adecuado para la
2.3.1. Métodos discriminación entre complejos e intracomplejos ( Scho
De los métodos anteriores, MLST, MLMT y PCR-RFLP son eficaces para examinar la variación
dentro de los complejos de especies. AFLP se ha utilizado para examinar L. peruviana ( Dujardin y € nian et al., 2010 ).
col., 1998 ) y L. braziliensis Odiwuor et al., 2011 ), pero pueden tener valores intraespecíficos
sobreestimados fi c diversidad en comparación con los estudios basados en MLMT. 2.4.2. Marcadores
UN polimorfismo de un solo nucleótido (SNP) es una posición de ADN con más de un alelo
(normalmente dos). Estos son distintos de los indeles (inserciones-deleciones) donde se agrega o
MLMT ha sido eficaz para examinar la diversidad de subespecies dentro de los complejos de elimina una sola base, lo que provoca un cambio en la longitud total de la secuencia. Suponiendo
especies. Los paradigmas para esto incluyen L. donovani disomía con un alelo de referencia conocido, un SNP puede ser homocigoto si ambas bases se
linajes de Etiopía Gelanew et al., 2014 ), L. donovani (infantum) cambian al alelo alternativo, o heterocigoto si solo se cambia una. Los SNP en las regiones
en Túnez ( Chargui et al., 2013 ), Francia ( Hide et al., 2013 ), Pavo ( Gouzelou et al., 2012 ), L. donovani codificantes de proteínas alteran el aminoácido correspondiente para el codón particular (un SNP no
de todo el Viejo Mundo Downing et al., 2012 ), y L. infantum de América del Sur Kuhls et al., 2007, sinónimo) o codifican el mismo aminoácido (un SNP sinónimo). La selección de purificación reduce el
2011 ). Estudios basados en MLMT y MLST de L. chagasi en Sur America ( Kuhls y col., 2007 ) y L. cambio en las regiones codificantes, por lo que la diversidad es mayor en las regiones no
archibaldi en África Oriental El Baidouri et al., 2013 ), identi fi ed el primero como L. infantum, y este codificantes y, en consecuencia, se reduce para cambios no sinónimos ( Downing et al., 2011 ). El
último como una entidad indistinta dentro del L. donovani complejo. MLMT ha servido como una cribado con un gran número de SNP permite un alto poder discriminatorio, como lo demuestra su uso
poderosa herramienta para el análisis de otros Leishmania para tipificar diferentes especies. por ejemplo, L. donovani y L. braziliensis ( Downing et al., 2011;
Vanaerschot et al., 2012; Zhang y col., 2014; Imamura et al., 2016 ). Una lista completa de
marcadores SNP y sus características se muestra en Información complementaria: Tabla SI mi 9 .
especies, como L. tropica Schwenkenbecher et al., 2006 ) e iraní L. mayor Tashakori et al., 2011 ).
También se ha utilizado para investigar L. lainsoni y L. naif fi ( Kuhls y col., 2013 ), L. braziliensis y L.
peruviana ( Nolder y col., 2007 ) y
L. braziliensis y L. guyanensis ( Rougeron et al., 2010 ).

El genotipado de SNP es un método poderoso para discriminar en cualquier nivel: un diseño
2.3.2. Marcadores apropiado puede producir información a nivel de subgénero, complejo de especies, especies y dentro
La MLST combinada de siete genes enumerados anteriormente y el locus de ARN SL fue muy de las poblaciones ( Mardis, 2011 ). El genotipado de SNP generalmente se completa de una manera
superior en su poder discriminante que el uso de genes individuales, lo que ilustra la importancia de de alto rendimiento a través de extensos paneles de muestras y para una gran cantidad de
una gran cantidad de biomarcadores ( Boite y col., 2012; Van der Auwera y col., 2014 ). Se ha biomarcadores, lo que proporciona este ampli fi enfoque catiónico con potencia superior a MLST,
proporcionado una resolución más profunda mediante el análisis estilo MLST de 49 genes en MLMT u otros enfoques, como se muestra en L. donovani ( Downing et al., 2012 ) y otras especies ( Tokarska
215,644 SNP de todo el genoma ( Harkins et al., 2016 ). Una ventaja adicional del enfoque de et al., 2009 ). Este enfoque requiere SNP conocidos para crear una matriz que pueda evaluarse
múltiples locus es que la reconstrucción de la historia genealógica de una especie requiere simultáneamente utilizando especificaciones fi c, por lo que es más eficaz para investigar focos y
biomarcadores heredados verticalmente de muchos sitios de ADN en evolución neutra, por lo que la poblaciones individuales porque una mayor diferenciación genética se asocia con más cambios
variación en un solo gen, como hsp70 re fl ects una señal ancestral, mientras que las regiones estructurales que eliminarían la amplificación eficaz. fi catión. La selección previa del panel de SNP
independientes indican otros patrones. Si se apuntan muchas regiones en paralelo, se pueden puede sesgar los resultados debido a alelos raros ( Clark y col., 2005 ), evolución no neutral ( Rosenberg
identificar inconsistencias filogenéticas fi ed mediante evaluaciones independientes de genealogías de y col., 2003 ) o una falta de conservación local en el objetivo. Además, la genotipificación de SNP solo
genes para diferenciar loci con patrones neutrales vs no neutrales. Además, entre todos los puede evaluar mutaciones puntuales y, por lo tanto, no puede descifrar alteraciones en el número de
marcadores enumerados en la sección B1, parece que solo ITS1 copias de cromosomas, episomas u otras variantes estructurales. El genotipado de SNP también
está limitado por el contenido de GC del objetivo, la variación dentro de los homólogos y la
proximidad de los marcadores debido a SNP-speci fi c ampli fi catión.
región, Líder mini-exón / empalmado ( ADNr), gp63, hsp70, cpb, POLA, G6PD, 6PGDH, MPI,
histonas, RPOIILS, NAGT, A2, EF-1 un ( gen codificante de proeína), cytb, COII ( maxicírculo de
kDNA) y minicírculo de kDNA tienen la capacidad de diferenciarse dentro de complejos ( Harris y col.,
1998; Momen y Cupolillo, 2000; Noyes et al., 2002; Marfurt y col.,
Además de los enfoques mencionados anteriormente, el minicírculo de kDNA,
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hsp70, gp63 y los marcadores Mini-exon / Spliced Leader se utilizan para discriminar a nivel de así como su capacidad de discriminación a nivel de género, sección, subgénero, especie y población
subespecie o cepa ( Harris y col., 1998; Marfurt y col., 2003; Gangneux et al., 2003; Jirku y col., 2006; se resumen en Tabla 3 .
Mauricio et al., 2007; Fraga et al., 2013 ) ( Tabla 3 ).
Realizar un análisis exhaustivo de los marcadores moleculares basados en ADN utilizados
La lista completa de marcadores MLST, MLMT, SNP utilizados para distinguir la variación dentro para la detección e identificación fi catión de todos Leishmania
de los focos y las poblaciones se encuentra en Información complementaria: Tablas SI-6, 8 y 9 . especies conocidas por infectar a los seres humanos, analizamos la literatura disponible y
compilamos una lista de todos los marcadores y cebadores conocidos, incluidos kDNA, rDNA, genes
codificadores de proteínas, RAPD, MLMT, MLST y SNP, así como marcadores y sondas anónimos.
3. Marcadores disponibles para diagnóstico Esto incluye más de 1200 pares de cebadores con sus características: nombre del cebador,
secuencia, sonda, ampli fi ed longitud del fragmento, longitud del gen correspondiente, TM, riqueza de
La capacidad de distinguir entre Leishmania especie es un requisito previo para el diagnóstico GC, programa de PCR, ubicación del cromosoma, etiqueta de colorante, matriz de repetición, rango
preciso de la enfermedad y tiene una consecuencia importante para establecer el tratamiento de alelos, número de alelos, mono / polimorfismo, copia única / múltiple, conservación / variabilidad
correcto y aplicar las medidas de control. Esto es especialmente cierto en áreas donde varios Leishmania de un gen dado, y referencia a los ensamblajes del genoma para 21 Leishmania especies junto con
las especies coexisten Figura 2 ). sus ID de la OMS. Los marcadores y cebadores moleculares adecuados para la detección y la
tipificación se han clasificado de la siguiente manera:
3.1. Classi fi esquema de cationes
Se ha aprovechado una amplia gama de herramientas y marcadores moleculares para abordar

cuestiones epidemiológicas y clínicas clave relacionadas con la leishmaniasis. La elección de los i) Los conjuntos de marcadores utilizados speci fi cally para Leishmania tipificación como MLST,
más adecuados depende del objetivo del estudio. Las características comunes incluyen: i) estabilidad RAPD, MLMT y SNP se agruparon por separado, según la especie (Información
durante in vitro o en vivo pasajes, ii) reproducibilidad de análisis entre laboratorios, iii) comparabilidad complementaria: Tablas SI-6, 7, 8 y 9 ).
de métodos, iv) ensayo directo en muestras clínicas yv) simplicidad y rentabilidad.
ii) Los genes codificantes de proteínas, ADNr y ADNc se separaron en función de sus
componentes, y posteriormente se categorizaron en dos secciones: a) marcadores para
detección (con el mismo ampli fi ed longitud del fragmento en todas las especies) yb) marcadores
Si bien todos los enfoques anteriores proporcionan una multitud de caracteres válidos para el para identi fi catión (subrayado con diferentes ampli fi ed longitudes de fragmentos para especies
diagnóstico de leishmaniasis, idealmente deberían diferenciar Leishmania especies, establecer la individuales). En cada sección, los marcadores se subdividieron nuevamente en dos
carga de parásitos en huéspedes mamíferos e insectos vectores, y monitorear la ef fi cacia del subsecciones según su uso en el Viejo y el Nuevo Mundo (o en ambos). (Información
tratamiento farmacológico Shaw et al., 2015 ). También deben identificar los orígenes de la muestra, la suplementaria:
asociación con patologías clínicas, la relación con nuevos reservorios no humanos y nuevos vectores
de flebotominos y / o artrópodos. Además, se requiere discriminación dentro de los focos para Tablas SI-1, 2, 3, 4 y 5 ). Los marcadores moleculares propuestos utilizados para la
evaluar la estructura de la población, la diferenciación geográfica, la propagación de nuevas discriminación en diferentes niveles jerárquicos de género, sección, subgénero, especie y
mutaciones, los patrones de transmisión entre casos, la evolución intrahospitalaria y el origen de las población se enumeran en Tabla 3 . Una lista completa de especies con genomas publicados o
recaídas debido a recrudescencia o Leishmania reinfección Mathis y Deplazes, 1995; Bhattacharyya et ensamblados está en Cuadro 4 .
al., 1996 ).
Estadística descriptiva de los diferentes marcadores y cebadores moleculares utilizados para el

diagnóstico de leishmaniasis y Leishmania
Algunos factores son esenciales para la validación de métodos adecuados basados en la PCR: identi fi cation se dan en Figs. 8 y 9 . En estos fi cifras, la diferencia en el uso de varios tipos de genes y
i) la secuencia objetivo (tamaño del amplicón esperado, estabilidad genética, número de copias en el sus interfragmentos, así como su aplicación para identificar diferentes Leishmania especies (basadas
genoma, género y especie específica fi ciudad); ii) ef metodológico fi cacy (especi fi ciudad, sensibilidad, en la literatura) se muestran en detalle.
precisión, exactitud y reproducibilidad); y iii) clínico-diagnóstico
sensibilidad y especi fi ciudad (pruebas 3.2. Hibridación entre complejos

muestras clínicas, pacientes con síntomas similares pero etiología diferente).
Intercambio genético entre Leishmania especie tiene la mayoría
La elección adecuada de genes diana y cebadores es esencial. Cabe señalar que para las con frecuencia se ha detectado para aquellos con mayor sintonía y menos diferencias en el
investigaciones de Leishmania, Existen diferencias sustanciales entre los estudios basados en complemento genético, como la hibridación de
genes de copia única o múltiple en términos de sensibilidad y ef fi la eficiencia Bossolasco et al., 2003; L. major con L. infantum en la arena fl y Lutzomyia longipalpis
Talmi-Frank y col., 2010 ). Los genes de copias múltiples se prefieren a menudo porque mejoran la ( Romano et al., 2014 ). Suponiendo que la mezcla entre distintos complejos de especies es rara, la
sensibilidad de la detección y son ventajosos para la detección, pero pueden producir ampli fuera del resolución de los híbridos que surgen de especies conocidas no es un desafío porque se habrá
objetivo fi catión. Además, la variación en el número de copias del gen objetivo entre y dentro de las acumulado un gran número de mutaciones con patrones independientes de deriva genética durante
especies ( Weirather et al., 2011 ) puede ser desafiante y confuso para cuanti fi catión utilizando curvas un período sustancial.
estándar. Por tanto, los genes de copias múltiples, como los marcadores de kDNA, son preferibles
para las investigaciones que se centran en Leishmania detección, mientras que los genes de copia En un sistema ideal de apareamiento entre dos muestras euploides en equilibrio
única son más adecuados para estudios filogenéticos. Del mismo modo, los estudios que tienen Hardy-Weinberg y sin apareamiento adicional o parasexualidad ( Rougeron et al., 2015 ), las
como objetivo discriminar entre Leishmania Las especies son más eficaces con genes altamente mutaciones detectadas en la progenie con respecto a uno de los padres (o linaje ancestral) deben
polimórficos, como algunos genes de codificación proteica mitocondrial. Las características de ser heterocigotas. Estos alelos parecerán similares a ambos linajes ancestrales, por lo que se
diferentes genes aplicados para la detección, identi fi cation y cuanti fi catión de Leishmania especies, requeriría una gran cantidad de biomarcadores para detectar híbridos ( Scho
€ nian et al., 2010 ). Esto se ilustra con MLST ap-
proaches que utilizan cuatro genes domésticos ( g6pd, 6pgd, mpi, icd) en una colección de 96
aislamientos de L. braziliensis, L. guyanensis, L. naif fi y
L. lainsoni que discriminan claramente tanto entre especies como dentro de ellas
Cuadro 4
Leishmania especies con genomas publicados o ensamblados ordenados según grupo taxonómico.
Subgénero Complejo (Subespecie ID de la OMS (si tiene secuenciación del genoma) Publicación o Consorcio y Asamblea del NCBI / ID de la SRA
Leishmania mayor arábica MPSA / SA / 1983 / JISH220 Consorcio de genomas de cinetoplasto, GCA_000410695, véase también SRP021540
gerbilli MRHO / CN / 1960 / GERBILLI Consorcio de genomas de cinetoplasto, GCA_000443025, véase también SRP021543
mayor MHOM / IL / 1981 / Friedlin Ivens et al., 2005
mayor MHOM / SN / 1974 / SD Consorcio de genomas de cinetoplasto, GCA_000250755
turanica MMEL / SU / 1979 / MEL Consorcio Kinetoplastid Genomes, GCA_000441995, véase también SRP021547
tropica aethiopica MHOM / ET / 1972 / L100 Consorcio de genomas de cinetoplasto, GCA_000444285

tropica MHOM / IL / 1990 / LRC-L590 Consorcio de genomas de cinetoplasto, GCA_000410715, véase también SRP015935
donovani donovani MHOM / NP / 2003 / BPK282 / 0cl4 Downing et al., 2011

Infantum MCAN / ES / 1998 / LLM-87 Peacock et al., 2007
mexicana amazonensis MHOM / BR / 1973 / M2269 Real et al., 2013

mexicana MHOM / GT / 2001 / U1103cl25 Rogers et al., 2011
Sauroleishmania tarentolae adleri MARV / ET / 1975 / HO174 Coughlan et al., 2017

tarentolae RTAR / DZ / 1939 / Parrot-TarII Raymond y col., 2012
Viannia braziliensis braziliensis MHOM / BR / 1975 / M2903 Consorcio de genomas de cinetoplasto, GCA_000340355
braziliensis MHOM / BR / 1975 / M2904 Peacock et al., 2007
ingenuo fi MCAN / CO / 1986 / CL223 Coughlan et al., 2017 , ERX180449
panamensis / guyanensis MHOM / PA / 1994 / PSC-1 Llanes et al., 2015
panamensis / guyanensis MHOM / COL / 1981 / L13 Consorcio de genomas de cinetoplasto, GCA_000340495
guyanensis MCAN / CO / 1985 / CL085 Coughlan et al., 2017 , ERX180458
Mundinia martiniquensis MHOM / MQ / 1992 / MAR1 Consorcio de genomas de cinetoplasto, GCA_000409445
enriettii MCAV / BR / 1995 / CUR3 Consorcio de genomas de cinetoplasto, GCA_000410755
complejos Boite et al., 2012 ). Enfoques similares han sido reveladores para las muestras de et al., 2009 ). Esto se ilustra mediante la mezcla entre L. donovani
OldWorld, donde se ha encontrado hibridación entre L. donovani y L. aethiopica en Etiopía Odiwuor et linajes L. donovani y L. infantum) en Turquía y Chipre detectado originalmente con PCR-RFLP ( Svobodova
al., 2011 ). MLEE es adecuado para detectar la hibridación entre complejos, como lo indica la et al., 2009 ) y MLMT ( Gouzelou y col., 2013 ), posteriormente veri fi ed y cuanti fi ed por secuenciación
detección de la L. infantum / L. mayor del genoma que permitió la inferencia de los dos antecedentes genéticos del cruce original ( Rogers
et al., 2014 ). Este enfoque es esencial para la precisión porque la diversidad genética natural dentro
híbridos aislados en Portugal ( Ravel y col., 2006 ) y también los de de los focos individuales puede ser baja, lo que produce híbridos potenciales con pocos loci variables
L. major / L. arábica De Arabia Saudita ( Evans, 1987; Kelly y col., 1991 ), pero tiene mucho menos detectables ( Rougeron y col., 2009; Imamura et al., 2016 ). El cribado con paneles de variación
poder de resolución en comparación con MLST. extendidos facilita el seguimiento de la evolución y la epidemiología subyacentes a las infecciones
clínicas, diferenciando los patrones de transmisión entre hospedadores, identificando los orígenes de
nuevas variantes, descubriendo mutaciones asociadas con la tolerancia a fármacos, distinguiendo
3.3. Hibridación dentro del complejo
entre recaídas y reinfecciones e infiriendo las fuentes evolutivas originales de nuevos casos .
El apareamiento dentro de un complejo de especies se puede evaluar utilizando enfoques

similares a los de los eventos intercomplejos, nuevamente basados en el supuesto de que son
raros. El trabajo anterior demuestra que la falta de genes recientes fl ow en el L. donovani complejo
fue suf fi ciente para identificar especímenes de Turquía con ascendencia mixta: uno de los padres
estaba relacionado con L. infantum, y el origen genético del otro era enigmático ( Rogers et al., 2014 ).
Aunque MLEE no se recomienda para evaluar la variación dentro del complejo ( Scho
4. Detección de alto rendimiento y actualización de los genomas disponibles

€ nian et al., 2010; camioneta
der Auwera et al., 2014 ), ha mostrado mezcla entre

L. braziliensis y L. panamensis ( Belli y col., 1994 ), L. braziliensis con El cribado genómico, transcriptómico, proteómico y metabolómico de alto rendimiento en todo el
L. peruviana ( en combinación con datos RAPD) ( Dujardin y col., 1995 ) o con L. guyanensis ( incluso L.
sistema representa una oportunidad para integrar de manera más completa los resultados
panamensis). Estos patrones son compatibles con MLMT de L. braziliensis y L. peruviana ( Nolder y
taxonómicos, evolutivos y clínicos ( Cantacessi et al., 2015 ) y puede proporcionar información sobre
col., 2007 ). la regulación genética ( Haydock et al., 2015 ). Aunque existen diferencias entre especies en la
estructura cromosómica y genética, es posible resolver esto a un nivel elemental sobre la base de la
homología, la inferencia de estados ancestrales y la filogenia. Los enfoques más avanzados basados
3.4. Aplicabilidad al apareamiento dentro de subespecies en el mapeo de lectura de ADN pueden deducir cambios en la aneuploidía, una propiedad universal
de todas estas especies ( Mannaert y col., 2012 ). De manera similar, la inferencia de proteínas
Instancias donde gene fl El flujo es continuo o frecuente requiere diferentes enfoques basados expresadas en el huésped y el vector puede hacer uso de datos del genoma de alto rendimiento para
en un gran tamaño de muestra y numerosos biomarcadores para resolver múltiples eventos de mejorar las especificaciones de la etapa del ciclo de vida. fi ciudad de diagnósticos basados en
intercambio genético ( Rougeron et al., 2015 ). Los métodos para inferir la evolución durante largos proteínas ( Nirujogi et al., 2014 ).
períodos de tiempo no tienen la potencia suficiente para evaluar el cambio durante intervalos más
cortos, y viceversa. La suposición de deriva genética independiente entre muestras ya no se aplica y,
por lo tanto, solo una minoría de biomarcadores es informativa. Como resultado, solo el cribado
multilocus de un gran número de biomarcadores ha sido suficiente. fi ciente poder para detectar y Nuestra comprensión de los genomas de Leishmania spp. esta mejorando ( Cuadro 4 ). Los
clasificar infecciones inusuales o mixtas ( Rougeron genomas de L. major MHOM / IL / 1981 / Friedlin ( Ivens et al., 2005 ), L. infantum MCAN / ES / 1998 /
LLM-87 ( Peacock et al., 2007 ), L. donovani MHOM / NP / 2003 / BPK282 / 0cl4
Figura 8. Panel A. Representación gráfica que muestra la proporción de los diversos marcadores moleculares (o genes) actualmente identi fi ed para diagnóstico molecular o tipificación, Panel B. Número de pares de cebadores para cada tipo de
marcador (o gen) -y / o sus componentes-usados para detección e identificación fi catión de 21 humanos Leishmania especies. *: COI, COII, COIII; **: MURF1, MURF4; ***: ND1, ND3, ND4, ND5, ND7, ND8 y ND9.
Figura 9. Número de pares de cebadores de diferentes marcadores moleculares (genes), utilizados para la detección e identi fi catión de 21 Leishmania especie patógena obligatoria en el ser humano.
( Downing et al., 2011 ), L. mexicana MHOM / GT / 2001 / U1103cl25 ( Rogers et al., 2011 ) y L. Esmeraldo (TcII), no Esmeraldo (TcIII) y CL Brenner (TcVI) ( ElSayed y col., 2005; Weatherly et al.,
amazonesis MHOM / BR / 1973 / M2269 ( Real et al., 2013 ) se han ensamblado utilizando una 2009 ). Además, para análisis comparativos con relaciones más lejanas fl agelados
combinación de secuenciación de lectura de ADN larga y corta. Genomas de L. tropica MHOM / IL /
1990 / LRC-L590 (Consorcio Kinetoplastid Genomes, KGC) y Paratrypanosoma confusum ( Flegontov et al., 2013 ) es una elección obvia.
L. aethiopica MHOM / ET / 1972 / L100 (KGC) representará un complejo distinto una vez lanzado.
Asambleas de los familiares de L. major 5. Enfoques y perspectivas moleculares disponibles
( Harkins et al., 2016 ), incluir L. arabica ( la L. major complejo) LEM1108 akaMPSA / SA / 1983 /
JISH220 (KGC), L. turanica LEM423 también conocido como MMEL / SU / 1979 / MEL (KGC), L. Un punto crucial en el diagnóstico de laboratorio es la detección de agentes etiológicos y la
gerbilli LEM452 también conocido como MRHO / CN / 1960 / GERBILLI (KGC) y SD-75.1 también identificación de especies. fi catión. A pesar del gran progreso en las técnicas de diagnóstico, existe
conocido como MHOM / SN / 1974 / SD (KGC). Otros estudios han evaluado la variación dentro de una brecha entre los científicos fi c avances y el proceso de diagnóstico de Leishmania infecciones en
tres de estos complejos utilizando un mapeo de referencia de lectura corta de L. major LV39 también las zonas endémicas. Por tanto, el verdadero desafío para los investigadores y clínicos se ha
conocido como MRHO / SU / 1959 / P y L. mexicana MNYC / BZ / 1962 / M379 ( Rogers et al., 2011 ) y concentrado en fi Llene esta distancia. Históricamente, el diagnóstico de leishmaniasis se ha fi rmed
numerosos L. donovani aislados Imamura et al., 2016 ). Los enfoques basados en la alineación se han aislando, visualizando y cultivando el parásito del tejido infectado. El diagnóstico de rutina se realizó
utilizado para L. pifanoi MHOM / VE / 1960 / Ltrod, L. tropica MHOM / SU / 60 / LRC-L39 y L. generalmente de acuerdo con los parámetros clínicos y epidemiológicos, pero de fi El diagnóstico
aethiopica definitivo se basó en la observación parasitológica de Leishmania en frotis directo, cultivo o
inoculación animal. Después de un largo tiempo de uso de métodos parasitológicos clásicos, el
MHOM / ET / 1972 / L100 ( Harkins et al., 2016 ). Para el subgénero Viannia, los genomas de solo L. advenimiento del método de PCR proporcionó un poderoso enfoque de diagnóstico para la aplicación
braziliensis de técnicas de biología molecular en la identificación de parásitos. fi catión. Se han desarrollado varios
MHOM / BR / 1975 / M2904 ( Peacock et al., 2007 ) y L. panamensis / guyanensis MHOM / PA / 1994 / enfoques moleculares basados principalmente en técnicas basadas en ADN para la detección e
PSC-1 ( Llanes et al., 2015 ) han sido publicados, aunque este pequeño grupo será ampliado por los identificación. fi catión de parásitos. Simultáneamente, una serie de especies-speci fi c se han
genomas de L. guyanensis MCAN / CO / 1985 / CL085 y los relacionados desarrollado para Leishmania identi fi catión en muchas muestras diferentes.
L. naif fi MCAN / CO / 1986 / CL223 ( Coughlan et al., 2017 ). Los genomas de L. braziliensis MHOM /
BR / 75 / M2903 (KGC) y L. panamensis
MHOM / COL / 1981 / L13 (KGC) será informativo pero aún no está disponible. Poder comparativo
dentro del L. braziliensis complejo ha sido mejorado por datos de secuencia de L. peruviana LEM1537
también conocido como MHOM / PE / 1984 / LC39 y PAB-4 377 ( Valdivia et al., 2015 ), y por
alineaciones comparativas de L. lainsoni MHOM / BR / 1981 / M6426, La aplicación de aplicaciones moleculares depende principalmente de varios criterios, incluido el
objetivo del estudio, la disponibilidad de los métodos en uso, la sensibilidad / especi fi ciudad, requisito
L. guyanesis MHOM / BR / 75 / M4147, L. naif fi MDAS / BR / 70 / M5533, de habilidades técnicas así como el gasto. En el contexto del diagnóstico de leishmaniasis, varios
L. panamensis / guyanensis MHOM / PA / 1974 / WR120 y L. shawi / guyanensis MCEB / BR / 1984 / objetivos son cruciales. Estos objetivos pueden clasificarse fi ed en dos categorías principales: i)
M8408 ( Harkins et al., 2016 ). Para el subgénero Sauroleishmania, la fi El primer genoma secuenciado Diagnóstico ( p.ej, detección, identi fi cación, discriminación y cuanti fi catión) y ii) Mecanografía ( p.ej, fi huellas
fue para L. tarentolae RTAR / DZ / 1939 / Parrot-TarII ( Raymond y col., 2012 ) al que un segundo dactilares). Por lo tanto, en función de cada objetivo, se necesitan los métodos y marcadores
tecleó como L. adleri MARV / ET / 1975 / HO174 ( Coughlan et al., 2017 ) fue añadido. Este par ha moleculares adecuados.
sido comparado con L. adleri RLAT / KE / 1957 / SKINK-7 ( Harkins et al., 2016 ), destacando los
cromosomas adicionales presentes en ciertos Sauroleishmania aislamientos.
Se han desarrollado varios sistemas de detección basados en la metodología de PCR y
actualmente están disponibles para el diagnóstico de leishmaniasis. De estos métodos de laboratorio,
la PCR todavía se considera adecuada para el diagnóstico. Entre los diferentes marcadores
Genomas relacionados con el subgénero Mundinia son L. martiniquensis moleculares, las secuencias repetitivas como el ADN del minicírculo del cinetoplasto, los genes del
LEM2494 también conocido como MHOM / MQ / 1992 / MAR1 ( Mouri et al., 2014 ), ARN ribosómico, los genes del ARN derivado del miniexón o las repeticiones genómicas se
L. enriettii LEM3045 también conocido como MCAV / BR / 1995 / CUR3 (KGC), L. enriettii consideran las mejores dianas con máxima sensibilidad para la PCR ( Schallig y Oskam, 2002 ). Se
MCAV / BR / 1945 / L88 ( Harkins et al., 2016 ), L. ' siamensis 'y propone un diagrama descriptivo para el diagnóstico de leishmaniasis en Figura 10 .
L. macropodum ( Barratt et al., 2017 ) aislado de un canguro en Australia ( Rose et al., 2004 ).
También relacionados pero distintos es una variedad de Paraleishmania especies A pesar de los importantes avances en las técnicas de diagnóstico durante la última década, no
probablemente incluyendo el ensamblaje de Endotrypanum monterogeii LV88 (KGC, hay especi fi c estándar de oro para la detección y el diagnóstico de Leishmania Infecciones En la
GCA_000333855), que puede estar más relacionado con el Paraleishmania que Euleishmania, determinado actualidad, no existe un método único para diagnosticar todos los patógenos. Leishmania especies, ni
sobre la base de los datos disponibles para Endotrypanum schaudinni MCHO / BR / 80 / M6159 y para su uso en la
género Porcisia incluso L. deanei MCOE / BR / 1978 / M5088 y fi campo en regiones endémicas. El método elegido depende a menudo de la aplicación. Debido a la
falta de esta estandarización, el objetivo principal fue el desarrollo de un enfoque de diagnóstico
L. hertigi MCOE / PA / 2000 / M4051 ( Harkins et al., 2016 ). confiable que negara estos defectos.
L. colombiensis, L. equatorensis y L. herreri permanecer sin examinar.
Los siguientes genomas más estrechamente relacionados son Crithidia fasciculata Además de estas técnicas moleculares, la secuenciación completa de varios Leishmania genomas
C1 (KGC, GCA_000331325) y luego Leptomonas seymouri ( Kraeva et al., 2015 ) y Leptomonas ha abierto una nueva era en el diagnóstico de leishmaniasis ( Van der Auwera y col., 2014 ). Estos
pyrrhocoris ( Flegontov et al., 2016 ). Los genomas externos relevantes adicionales para la genomas permiten la investigación de muchos biomarcadores adicionales para el diagnóstico, que
comparación pertenecen principalmente a los más distantes Trypanosoma brucei TREU927 ( Berriman finalmente producirán diagnósticos más efectivos. Varios estudios han examinado diferentes Leishmania
y col., 2005 ), Lister 427 ( Becker y col., 2004 ), T. gambiense especies con tecnologías de alto rendimiento. La secuenciación continua del genoma completo y el
análisis de SNP, así como el análisis adicional por MLST y MLMT contribuirán a mejorar aún más el
DAL 972 ( Jackson y col., 2010 ), T. grayi ANR4 ( Kelly y col., 2014 ), identi fi cation de diferentes Leishmania
T. evansi cepa STIB 805 ( Carnes et al., 2015 ), T. congolense IL3000 ( Jackson y col., 2012 ), T. vivax Y486
( Jackson y col., 2013 ), y T. cruzi
cepas Tula cl2 ( Hamilton y col., 2011 ), B7 ( Franzen et al., 2012 ), Dm28c ( Grisard et al., 2014 ), Sylvio especies.
X10 / 1 (TcI) ( Franzen et al., 2011 ), A pesar de la Introducción de novela tecnicas y
Figura 10. Marcadores moleculares y herramientas propuestas para diferentes objetivos del diagnóstico de leishmaniasis.
mejoras a las existentes, todavía existe una seria necesidad de desarrollo de herramientas más La información mejorará el diagnóstico de leishmaniasis en hospitales, centros de salud clínica e
precisas, rápidas, baratas, sensibles y específicas. fi c pruebas de diagnóstico que pueden utilizarse institutos de investigación. Además, el recurso presentado se puede aplicar para estudiar la
no solo en los centros de salud sino también en las regiones endémicas. Además, es necesario epidemiología y los rangos geográficos de arena. fl y vectores y reservorios animales de
simplificar las pruebas de diagnóstico de laboratorio interpretadas fácilmente con alta sensibilidad y
especi fi ciudad. Por lo tanto, se requerirá más esfuerzo para Leishmania spp.
mejorar molecular metodologias para diagnosticar Reconocimiento

leishmaniasis.
Los autores agradecen a la Dra. Roser Fisa de la Universidad de Barcelona, España, por su
6. Conclusión valiosa ayuda con respecto a los marcadores MLMT. Los autores también agradecen al profesor
Marc Ouellette, Centre Hospitalier de l'Universite Laval (CHUL), Canadá; Profesor Patrick Bastien y
La detección e identi fi catión de Leishmania especie es esencial para un diagnóstico preciso, Dra. Elodie Gazanion (MIVEGEC), Francia, por compartir datos sobre marcadores SNP de L.
rápido y sensible de la leishmaniasis, que tiene una gran importancia fl influencia sobre las medidas de infantum MON1 y L. infantum MON281.
control y tratamiento eficaces ( Medley et al., 2015 ). Por tanto, el conocimiento de las diferentes
metodologías y sus objetivos es fundamental. Nuestro objetivo era proponer la actualización clasi fi catión
de Leishmania especies y sus sinonimias. Nuestro mapa global destaca la geografía de especies
Apéndice A. Datos complementarios
endémicas conocidas Leishmania especies patógenas para los seres humanos. Presentamos una
lista completa de técnicas moleculares actualmente en uso, y para comparar y discutir sus ventajas y
Los datos complementarios relacionados con este artículo se pueden encontrar en http: //
limitaciones. Además, hemos reunido una lista completa de marcadores moleculares basados en
dx.doi.org/10.1016/j.mam.2016.11.012 .
ADN y los hemos categorizado de acuerdo con su aplicación en la detección, identi fi cación,
discriminación y cuanti fi catión de
Referencias
Adams, ER, Jacquet, D., Schoone, G., Gidwani, K., Boelaert, M., Cunningham, J., 2012.
Prueba de aglutinación directa de leishmaniasis: uso de imágenes como material de formación para reducir la
Leishmania parásitos. Nuestro siguiente objetivo fue esbozar las ubicaciones cromosómicas de los variabilidad entre lectores y mejorar la precisión. PLoS Negl. Trop. Dis. 6 e1946 .
genes de diagnóstico. Hemos compilado una lista de más de 1200 pares de cebadores con sus
Akhavan, AA, Mirhendi, H., Khamesipour, A., Alimohammadian, MH, Rassi, Y.,
características, y sugerimos cebadores y sondas óptimos para la detección y tipificación de las 21 Bates, P., Kamhawi, S., Valenzuela, JG, Arandian, MH, Abdoli, H., Jalali-zand, N., Jafari, R., Shareghi, N.,
especies patógenas conocidas. Finalmente, destacamos la sensibilidad y especificidad Ghanei, M., Yaghoobi-Ershadi, MR , 2010. Especies de Leishmania: detección e identificación fi catión por ensayo
de PCR anidado de muestras de piel de reservorios de roedores. Exp. Parasitol. 126, 552 mi 556 .
fi ciudad de diferentes marcadores para detectar parásitos en diferentes niveles taxonómicos (género, Akhoundi, M., Hajjaran, H., Baghaei, A., Mohebali, M., 2013. Distribución geográfica
subgénero, complejo de especies, especies y focos). Esta ción de leishmania especies de leishmaniasis cutánea humana en la provincia de Fars,
el sur de Irán. Irán. J. Parasitol. 8, 85 mi 91 . Carrington, M., Cherevach, I., Chillingworth, TJ, Churcher, C., Clark, LN, Corton, CH, Cronin, A., Davies, RM,
Akhoundi, M., Kuhls, K., Cannet, A., Votýpka, J., Marty, P., Delaunay, P., Sereno, D., Doggett, J., Djikeng, A., Feldblyum, T. , Field, MC, Fraser, A., Goodhead, I., Hance, Z., Harper, D., Harris, BR,
2016. Una reseña histórica de la clasi fi catión, evolución y dispersión de Hauser, H., Hostetler, J., Ivens, A., Jagels, K., Johnson , D., Johnson, J., Jones, K., Kerhornou, AX, Koo, H.,
Leishmania parásitos y arena fl ies. PLoS Negl. Trop. Dis. 10 http://dx.doi.org/ Larke, N., Landfear, S., Larkin, C., Leech, V., Line, A., Lord, A., Macleod, A., Mooney, PJ, Moule, S., Martin, DM,
10.1371 / journal.pntd.0004349 e0004349. Morgan, GW, Mungall, K., Norbertczak, H., Ormond, D., Pai, G., Peacock, CS, Peterson , J., Codornices, MA,
Akopyants, NS, Kimblin, N., Secundino, N., Patrick, R., Peters, N., Abogado, P., Rabbinowitsch, E., Rajandream, MA, Reitter, C., Salzberg, SL, Sanders, M., Schobel, S., Sharp, S., Simmonds,
Dobson, DE, Beverley, SM, Sacks, DL, 2009. Demostración del intercambio genético durante el desarrollo cíclico M., Simpson, AJ, Tallon, L., Turner, CM, Tait, A., Tivey, AR, Van Aken, S., Walker, D., Wanless, D., Wang, S.,
de Leishmania en la arena fl y vector. Ciencia 10, 265 mi 268 . White, B., White, O., Whitehead , S., Woodward, J.,Wortman, J., Adams, MD, Embley, TM, Gull, K., Ullu, E.,
Barry, JD, Fairlamb, AH, Opperdoes, F., Barrell, BG, Donelson, JE, Hall, N., Fraser , CM, Melville, SE, El-Sayed,
Al-Jawabreh, A., Diezmann, S., Müller, M., Wirth, T., Schnur, LF, Strelkova, MV, NM,
Kovalenko, DA, Razakov, SA, Schwenkenbecher, J., Kuhls, K., Scho € nian, G.,
2008. Identi fi cación de subpoblaciones distribuidas geográficamente de Leishmania (Leishmania) mayor por
análisis de microsatélites. BMC Evol. Biol. 8, 183 .
Al-Salem, W., Herricks, JR, Hotez, PJ, 2016. Una revisión de la leishmaniasis visceral 2005. El genoma del tripanosoma africano Trypanosoma brucei. Ciencias
durante la estafa fl tic en Sudán del Sur y las consecuencias para los países de África Oriental. Vectores de 309, 416 mi 422 .
parásitos 9, 460 . Beverley, SM, 1988. Caracterización de la ' raro ' movilidad de grandes circulares
Alborzi, A., Rasouli, M., Shamsizadeh, A., 2006. Leishmania paciente con tropica aislado ADN en pulsado fi electroforesis en gradiente de campo. Ácidos nucleicos Res. 16, 925 mi 939 .
con leishmaniasis visceral en el sur de Irán. A.m. J. Trop. Medicina. Hyg. 74, 306 mi 307 . Bhatia, A., Daifalla, NS, Jen, S., Badaro, R., Reed, SG, Skeiky, YA, 1999. Clonación,
caracterización y evaluación serológica de K9 y K26: dos antígenos hidrófilos relacionados de Leishmania
Alce, TM, Gokool, S., McGhie, D., Stager, S., Smith, DF, 1999. Expresión de hy- chagasi. Mol. Biochem. Parasitol. 102, 249 mi 261 .
proteínas de superficie hidrófilas en etapas infecciosas de Leishmania donovani. Mol. Biochem. Parasitol. 102, Bhattacharyya, R., Das, K., Sen, S., Roy, S., Majumder, HK, 1996. Desarrollo de un
191 mi 196 . género speci fi c juego de cebadores para la detección de Leishmania parásitos por reacción en cadena de la polimerasa.
Alfonzo, JD, Thiemann, O., Simpson, LX, 1997. El mecanismo de inserción de U / FEMS Microbiol. 135, 195 mi 200 .
edición de ARN de deleción en mitocondrias de cinetoplastidos. Nucl. Acids Res. 25, 3751 mi 3759 . Boite, MC, Mauricio, IL, Miles, MA, Cupolillo, E., 2012. Nuevos conocimientos sobre taxonomía,
filogenia y genética de poblaciones de Leishmania (Viannia) parásitos basados en análisis de secuencia
Alvar, J., Can ~ avate, C., Gutierrez-Solar, B., Jimenez, M., Laguna, F., Lopez-Velez, R., Molina, R., Moreno, J., multilocus. PLoS Negl. Trop. Dis. 6 http://dx.doi.org/10.1371/ journal.pntd.0001888 e1888.
1997. Leishmania e inmunodo humano fi coinfección por el virus de la fi primeros 10 años. Clin. Microbiol.
Apocalipsis 10, 298 mi 319 . Bordbar, A., Parvizi, P., 2014. Alta frecuencia de infección, baja diversidad de Leishmania
Alvar, J., Vélez, ID, Bern, C., Herrero, M., Desjeux, P., Cano, J., Jannin, J., den Boer, M., mayor y fi primera detección de Leishmania turanica en humanos en el norte de Irán. Acta Trop. 133, 69 mi 72 .
2012. Equipo de control de la leishmaniasis de la OMS. Leishmaniasis en todo el mundo y estimaciones globales
de su incidencia. PLoS One 7. http://dx.doi.org/10.1371/journal.pone.0035671 e35671. Bossolasco, S., Gaiera, G., Olchini, D., Gulletta, M., Martello, L., Bestetti, A., Bossi, L.,
Germagnoli, L., Lazzarin, A., Uberti-Foppa, C., Cinque, P., 2003. Ensayo de PCR en tiempo real para el manejo
Antinori, S., Calattini, S., Longhi, E., Bestetti, G., Piolini, R., Magni, C., Orlando, G., clínico del inmunodo humano fi pacientes infectados por el virus de la eficiencia con leishmaniasis visceral. J.
Gramiccia, M., Acquaviva, V., Foschi, A., Corvasce, S., Colomba, C., Titone, L., Parravicini, C., Cascio, A., Clin. Microbiol. 41, 5080 mi 5084 .
Corbellino, M., 2007. Uso clínico de reacción en cadena de la polimerasa realizada en muestras de sangre Botilde, Y., Laurent, T., Quispe, Tintaya, W., Chicharro, C., Can ~ avate, C., Cruz, I.,
periférica y médula ósea para el diagnóstico y seguimiento de la leishmaniasis visceral en pacientes infectados y Kuhls, K., Scho € nian, G., Dujardin, JC, 2006. Comparación de marcadores moleculares
no infectados por el VIH: experiencia de 8 años en un único centro en Italia y revisión de la literatura. Clin. Infec. para la tipificación de cepas de Leishmania infantum. Infectar. Gineta. Evol. 6, 440 mi 446 .
Dis. 44, 1602 mi 1610 . Britto, C., Ravel, C., Bastien, P., Blaineau, C., Pages, M., Dedet, JP, Wincker, P., 1998.
Grupos de ligamiento conservados asociados con reordenamientos cromosómicos a gran escala entre el Viejo y
Antinori, S., Cascio, A., Parravicini, C., Bianchi, R., Corbellino, M., 2008. Leishmaniasis el Nuevo Mundo Leishmania genomas. Gene
entre los receptores de trasplantes de órganos. Lancet Infect. Dis. 8, 191 mi 199 . 222, 107 mi 117 .
Arana, M., Evans, DA, Zolessi, A., Cuentas, AL, Arévalo, J., 1990. Bioquímica Brochu, C., Haimeur, A., Ouellette, M., 2004. La proteína de choque térmico HSP70 y calor
caracterización de Leishmania (Viannia) braziliensis y Leishmania (Viannia) peruviana por electroforesis de La proteína HSC70 afín al choque contribuye a la tolerancia al antimonio en el parásito protozoario leishmania. Chaperones
isoenzimas. Trans. R. Soc. Trop. Medicina. Hyg. 84, 526 mi 529 . de estrés celular 9, 294 mi 303 .
Brumlik, MJ, Pandeswara, S., Ludwig, SM, Murthy, K., Curiel, TJ, 2011. Parasite
Asato, Y., Oshiro, M., Myint, CK, Yamamoto, Y., Kato, H., Marco, JD, Mimori, T., proteína quinasas activadas por mitógenos como dianas de descubrimiento de fármacos para tratar patógenos
Gomez, EA, Hashiguchi, Y., Uezato, H., 2009. Análisis filogénico del género protozoarios humanos. J. Transducción de señales. http://dx.doi.org/10.1155/2011/
Leishmania por secuenciación del gen del citocromo b. Exp. Parasitol. 121, 352 mi 361 . 971968 .
Ashutosh, MG, Sundar, S., Duncan, R., Nakhasi, HL, Goyal, N., 2012. Down- Bulle, B., Millon, L., Bart, JM, Ga'llego, M., Gambarelli, F., Portu's, M., Schnur, L.,
regulación de la proteína quinasa 1 activada por mitógenos de Leishmania donovani fi Los aislados de campo se Jaffe, CL, Fernández mi Barredo, S., Alunda, JM, Piarroux, R., 2002. Enfoque práctico para tipificar cepas de Leishmania
asocian con la resistencia al antimonio. Antimicrob. Agentes Chemother. infantum por análisis de microsatélites.
56, 518 mi 525 . J. Clin. Microbiol. 40, 3391 mi 3397 .
Azmi, K., Nasereddin, A., Ereqat, S., Scho € nian, G., Abdeen, Z., 2010. Identi fi catión de Cantacessi, C., Dantas-Torres, F., Nolan, MJ, Otranto, D., 2015. El pasado, presente y
Viejo Mundo Leishmania especies por PCR mi RFLP del gen de ARN líder de 7 empalmes y ensayo de transferencia futuro de Leishmania genómica y transcriptómica. Tendencias Parasitol. 31, 100 mi 108 .
puntual inversa. Trop. Medicina. En t. Salud 15, 872 mi 880 .
Banu ~ ls, AL, Hide, M., Tibayrenc, M., 1999. Epidemiología molecular y genética evolutiva de Leischmania parásitos. Cao, DP, Guo, XG, Chen, DL, Chen, JP, 2011. Delimitación de especies y filoge-
En t. J. Parasitol. 29 de 1137 mi 1147 . relaciones netas de chinos Leishmania aislamientos reexaminados utilizando secuencias del gen de la citocromo
Barker, D., 1987. Diagnóstico por ADN de leishmaniasis humana. Parasitol. Hoy 3, 177 mi 184 . oxidasa II del cinetoplasto. Parasitol. Res. 109, 163 mi 173 .
Barratt, J., Kaufer, A., Peters, B., Craig, D., Lawrence, A., Roberts, T., Lee, R., Carnes, J., Anupama, A., Balmer, O., Jackson, A., Lewis, M., Brown, R., Cestari, I.,
McAuliffe, G., Stark, D., Ellis, J., 2017. Aislamiento de tripanosomátidos nuevos, Zelonia australiensis sp. nov. Desquesnes, M., Gendrin, C., Hertz-Fowler, C., Imamura, H., Ivens, A., Korený, L., Lai, DH, MacLeod, A.,
(Kinetoplastida: Trypanosomatidae) proporciona apoyo para un origen gondwano de parasitismo dixenoso en McDermott, SM, Merritt, C., Monnerat, S., Moon, W., Myler, P., Phan, I., Ramasamy, G., Sivam, D., Lun, ZR,
Leishmaniinae. PLoS Negl. Trop. Dis. 11 e0005215 . Lukes, J., Stuart, K., Schnaufer, A., 2015 .Análisis genómico y filogenético de Trypanosoma evansi
Basiye, FL, Mbuchi, M., Magiri, C., Kirigi, G., Deborggraeve, S., Schoone, GJ, revelan una gran similitud con T. brucei y múltiples orígenes independientes para la discinetoplastia. PLoS Negl.
Saad, AA, El-Sa fi, S., Matovu, E., Wasunna, MK, 2010. Sensibilidad y especi fi ciudad de Leishmania OligoC-Test Trop. Dis. 9, e3404 .
y NASBA-oligocromatografía para el diagnóstico de leishmaniasis visceral en Kenia. Trop. Medicina. En t. Salud Castilho, TM, Shaw, JJ, Floeter-Winter, LM, 2003. Nuevo ensayo de PCR con glucosa-6-
15, 806 mi 810 . fosfato deshidrogenasa para identi fi catión de leishmania especies. J. Clin. Microbiol. 41, 540 mi 546 .
Becker, M., Aitcheson, N., Byles, E., Wickstead, B., Louis, E., Rudenko, G., 2004.
Aislamiento del repertorio del sitio de expresión de VSG que contiene telómeros de Trypanosoma brucei 427 Castilho, TM, Camargo, LM, McMahon-Pratt, D., Shaw, JJ, Floeter-Winter, LM,
usando recombinación asociada a transformación en levadura. Genome Res. 14, 2319 mi 2329 . 2008. Un ensayo de reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real para el identi fi cation y cuanti fi catión de
americano Leishmania especies sobre la base de glucosa-6fosfato deshidrogenasa. A.m. J. Trop. Medicina.
Belli, AA, Miles, MA, Kelly, JM, 1994. Un putativo Leishmania panamensis / Leish- Hyg. 78, 122 mi 132 .
mania braziliensis híbrido es un agente causante de la leishmaniasis cutánea humana en Nicaragua. Parasitol Castilla, JJ, Sánchez-Moreno, M., Mesa, C., Osuna, A., 1995. Leishmania donovani:
109, 435 mi 442 . cultivo in vitro y caracterización [1H] NMR de formas similares a amastigotes. Mol. Celda. Biochem. 142, 89 mi 97 .
Bensoussan, E., Nasereddin, A., Jonas, F., Schnur, LF, Jaffe, CL, 2006. Comparación de
Ensayos de PCR para el diagnóstico de leishmaniasis cutánea. J. Clin. Microbiol. 44, 1435 mi 1439 . Ceccarelli, M., Galluzzi, L., Migliazzo, A., Magnani, M., 2014. Detección y caracterización
terización de leishmania (leishmania) y leishmania (viannia) mediante PCR en tiempo real de base verde SYBR y
Berman, JD, 1997. Leishmaniasis humana: clínica, diagnóstica y quimioterapéutica análisis de fusión de alta resolución dirigido al ADN del minicírculo del cinetoplasto. PLoS One 9 e88845 .
desarrollos en los últimos 10 años. Clin. Infectar. Dis. 24, 684 mi 703 .
Bern, C., Maguire, JH, Alvar, J., 2008. Complejidades de la evaluación de la carga de morbilidad Chargui, N., Haouas, N., Slama, D., Gorcii, M., Jaouadi, K., Essabbah-Aguir, N.,
atribuible a la leishmaniasis. PLoS Negl. Trop. Dis. 2 e313 . Mezhoud, H., Babba, H., 2013. Transmisión de leishmaniasis visceral en una región previamente no endémica
Berriman, M., Ghedin, E., Hertz-Fowler, C., Blandin, G., Renauld, H., de Túnez: detección de Leishmania ADN en Phlebotomus perniciosus. J. Vector Ecol. 38, 1 mi 5 .
Bartholomeu, DC, Lennard, Nueva Jersey, Caler, E., Hamlin, NE, Haas, B., Bo € hme, U.,
Hannick, L., Aslett, MA, Shallom, J., Marcello, L., Hou, L., Wickstead, B., Alsmark, UC, Arrowsmith, C., Atkin, RJ, Chicharro, C., Morales, MA, Serra, T., Ares, M., Salas, A., Alvar, J., 2002. Molecular
Barron, AJ, Bringaud, F. , Brooks, K., epidemiología de Leishmania infantum en la isla de Mallorca: una comparación de
herramientas fenotípicas y genotípicas. Trans. R. Soc. Trop. Medicina. Hyg. 96, 93 mi 99 . 101, 399 mi 407 .
Clark, AG, Hubisz, MJ, Bustamante, CD, Williamson, SH, Nielsen, R., 2005. Eisenberger, CL, Jaffe, CL, 1999. Leishmania: identi fi catión de especies del Viejo Mundo
Sesgo de verificación en estudios de polimorfismo en todo el genoma humano. Genome Res. 15 de 1496 mi 1502 . utilizando una reacción en cadena polimórfica-polimerasa intergénica cebada permisivamente. Exp. Parasitol.
91, 70 mi 77 .
Convit, J., Ulrich, M., Fernandez, CT, Tapia, FJ, Caceres-Dittmar, G., Castes, M., El-Baidouri, F., Diancourt, L., Berry, V., Chevenet, F., Pratlong, F., Marty, P., Ravel, C.,
Rondon, AJ, 1993. El espectro clínico e inmunológico de la leishmaniasis cutánea americana. Trans. R. Soc. 2013. Estructura genética y evolución de la leishmania género en África y eurasia: qué nos dice MLSA. PLoS
Trop. Medicina. Hyg. 87, 444 mi 448 . Negl. Trop. Dis. 7, e2255. http: //
Cortes, S., Esteves, C., Mauricio, I., Maia, C., Cristova ~ o, JM, Miles, M., Campino, L., dx.doi.org/10.1371/journal.pntd.0002255 .
2012. Comportamiento in vitro e in vivo de simpatric Leishmania (V.) braziliensis, L (V.) peruviana y sus híbridos. El-Sayed, Nuevo México, Myler, PJ, Bartholomeu, DC, Nilsson, D., Aggarwal, G., Tran, AN,
Parasitol 139, 191 mi 199 . Ghedin, E., Worthey, EA, Delcher, AL, Blandin, G., Westenberger, SJ, Caler, E., Cerqueira, GC, Branche, C.,
Coughlan, S., Mulhair, P., Sanders, M., Schonian, G., Cotton, JA, Downing, T., 2017. Haas, B., Anupama, A., Arner, E. , Aslund, L., Attipoe, P., Bontempi, E., Bringaud, F., Burton, P., Cadag, E.,
El genoma de Leishmania adleri de un huésped mamífero destaca el cromosoma fi ssion en Sauroleishmania. Sci. Campbell, DA, Carrington, M., Crabtree, J., Darban, H., da Silveira, JF, de Jong, P., Edwards, K., Englund, PT,
Rep. 7, 43747 . Fazelina, G., Feldblyum, T., Ferella, M., Frasch, AC, Gull, K., Horn, D., Hou , L., Huang, Y., Kindlund, E.,
Croan, DG, Morrison, DA, Ellis, JT, 1997. Evolución del género Leishmania Klingbeil, M., Kluge, S., Koo, H., Lacerda, D., Levin, MJ, Lorenzi, H., Louie, T., Machado, CR, McCulloch, R.,
revelado por comparación de secuencias de genes de ADN y ARN polimerasa. Mol. Biochem. Parasitol. 89, 149 mi McKenna, A., Mizuno, Y., Mottram, JC, Nelson, S., Ochaya, S., Osoegawa, K., Pai, G., Parsons, M., Pentony, M.
159 . , Pettersson, U., Pop, M., Ramirez, JL, Rinta, J., Robertson, L., Salzberg, SL, Sanchez, DO, Seyler, A., Sharma,
Cruz, I., Nieto, J., Moreno, J., Can ~ avate, C., Desjeux, P., Alvar, J., 2006. Leishmania / VIH R., Shetty, J., Simpson, AJ, Sisk, E., Tammi, MT,Tarleton, R., Teixeira, S., Van Aken, S., Vogt, C., Ward, PN,
coinfecciones en la segunda década. Indian J. Med. Res. 123, 357 mi 388 . Wickstead, B., Wortman, J., White, O., Fraser, CM, Stuart, KD, Andersson, B., 2005. La secuencia del genoma
Cupolillo, E., Grimaldi, JG, Momen, H., 1994. A general classi fi catión del Nuevo Mundo de Trypanosoma cruzi,
Leishmania utilizando zimotaxonomía numérica. A.m. J. Trop. Medicina. Hyg. 50, 296 mi 311 .
Cupolillo, E., Grimaldi Júnior, G., Momen, H., Beverley, SM, 1995. Región intergénica
tipificación (IRT): un enfoque molecular rápido para la caracterización y evolución de Leishmania. Mol. Biochem. agente etiológico de la enfermedad de Chagas. Ciencia 309, 409 mi 415 .
Parasitol. 73, 145 mi 155 . Espinosa, OA, Serrano, MG, Camargo, EP, Teixeira, MMG, Shaw, JJ, 2016. An
da Silva, MR, Brandao, NA, Dorta, ML, Fatima, RD, Costa, DL, Oliveira, MA, valoración de la taxonomía y nomenclatura de tripanosomátidos actualmente clasificados fi ed como Leishmania y
2015. Evaluación de una prueba inmunocromatográfica basada en rK39 para el diagnóstico de leishmaniasis Endotrypanum. Parasitol 1 mi 13 .
visceral en saliva humana. Trop. Biomed. 32, 247 mi 256 . Estevez, AM, Simpson, L., 1999. Edición de ARN de inserción / deleción de uridina en
Dabiri, S., Safavi, M., Shamsi Meymandi, S., Youse fi, K., Shamsi Meymandi, M., Fotouhi Ardakani, R., Soo fi Abadi, mitocondrias de tripanosomas: una revisión. Gene 240, 247 mi 260 .
MF, 2014. Patología molecular e histopatológica. fi hallazgos en la linfadenitis localizada por Leishmania. Arco. Evans, DA, 1987. Leishmania. En: Taylor, AER, Baker, JR (Eds.), Vitro Methods for
Irán. Medicina. 17, 122 mi 126 . Cultivo de parásitos. Academic Press, Londres, págs. 52 mi 75 .
Feder, ME, Hofmann, GE, 1999. Proteínas de choque térmico, chaperonas moleculares y
Daneshbod, K., 1978. Linfadenitis localizada debida a Leishmania simulando toxo- la respuesta al estrés: fisiología evolutiva y ecológica. Annu. Rev. Physiol.
plasmosis. Valor de la microscopía electrónica para la diferenciación. A.m. J. Clin. Pathol. 61, 243 mi 282 .
69, 462 mi 467 . Fernandes, O., Murthy, VK, Kurath, U., Degrave, WM, Campbell, DA, 1994. Mini-
Darce, M., Moran, J., Palacios, X., Belli, A., Gomez-Urcuyo, F., Zamora, D., Valle, S., variación del gen del exón en patógenos humanos Leishmania especies. Mol. Biochem. Parasitol. 66, 261 mi 271 .
Gantier, JC, Momen, H., Grimaldi Jr., G., 1991. Etiología de la leishmaniasis cutánea humana en Nicaragua.
Trans. R. Soc. Trop. Medicina. Hyg. 85, 58 mi 59 . Figueiredo, FB, Madeira, MF, Nascimento, LD, Abrantes, TR, Mouta-Confort, E.,
Dawit, G., Girma, Z., Simenew, K., 2013. Una revisión sobre biología, epidemiología y Passos, SR, Schubach, TM, 2010. Leishmaniasis visceral canina: estudio de métodos para la detección de IgG
significado de salud pública fi cáncer de leishmaniasis. J. Bacteriol. Parasitol. 4, 166 . en muestras de suero y eluidos. Rev. Inst. Medicina. Trop. São Paulo 52, 193 mi 196 .
De Doncker, S., Hutse, V., Abdellati, S., Rijal, S., Singh Karki, BM, Decuypere, S.,
Jacquet, D., Le Ray, D., Boelaert, M., Koirala, S., Dujardin, JC, 2005a. Un nuevo PCRELISA para el diagnóstico Flegontov, PN, Strelkova, MV, Kolesnikova, AA, 2006. El Leishmania mayor
de leishmaniasis visceral en sangre de sujetos VIH negativos. Trans. R. Soc. Trop. Medicina. Hyg. 99, 25 mi 31 . La región divergente del maxicírculo es variable en diferentes aislamientos y tipos de células. Mol. Biochem. Parasitol.
146, 173 mi 179 .
De Doncker, S., Hutsea, V., Abdellatib, S., Rijalc, S., Karkic, BMS, Decuyperea, S., Flegontov, P., Votýpka, J., Skalický, T., Logacheva, MD, Penin, AA, Tanifuji, G.,
Jacqueta, D., Le Raya, D., Boelaerta, M., Koiralac, S., Dujardina, JC, 2005b. Un nuevo PCR re ELISA para el Onodera, NT, Kondrashov, AS, Volf, P., Archibald, JM, Lukes, J., 2013. Paratrypanosoma es un nuevo
diagnóstico de leishmaniasis visceral en sangre de sujetos VIH negativos. Trans. R. Soci. Trop. Medicina. Hyg. tripanosomátido de ramificación temprana. Curr. Biol. 23 de octubre de 1787 mi 1793 .
99, 25 mi 31 .
De Ruiter, CM, Van der Veer, C., Lee fl ang, MM, Deborggraeve, S., Lucas, C., Flegontov, P., Butenko, A., Firsov, S., Kraeva, N., Elias, M., Field, MC, Filatov, D.,
Adams, ER, 2014. Herramientas moleculares para el diagnóstico de leishmaniasis visceral: revisión sistemática y Flegontova, O., Gerasimov, ES, Hlavacova, J., Ishemgulova, A., Jackson, AP, Kelly, S., Kostygov, A.,
metanálisis de la precisión de las pruebas diagnósticas. J. Clin. Microbiol. Logacheva, MD, Maslov, DA, Opperdoes, F., OReilly, A. , Sadlova, J., Sevcíkova, T., Venkatesh, D., Vlcek, C.,
52, 3147 mi 3155 . Volf, P., Votýpka, J., Zahonova, K., Yurchenko, V., Lukes, J., 2016. Genoma de Leptomonas pyrrhocoris: una
Deborggraeve, S., Laurent, T., Espinosa, D., Auwera, GV, Mbuchi, M., Wasunna, M., referencia de alta calidad para tripanosomátidos monoxenosos y nuevos conocimientos sobre la evolución de Leishmania.
El-Sa fi, S., Al-Basheer, AA, Arevalo, J., Verastegui, CM, Leclipteux, T., Mertens, P., Dujardin, JC, Herdewijn, P., Sci. Rep. 6, 23704 .
Büscher, P., 2008. A simpli fi ed y formato estandarizado de reacción en cadena de la polimerasa para el
diagnóstico de leishmaniasis. J. Infect. Dis. 198, 1565 mi 1572 . Flinn, HM, Smith, DF, 1992. Organización genómica y expresión de un
familia de genes regulados diferencialmente de Leishmania major. Nucl. Acids Res. 20, 755 mi 762 .
Delgado, O., Cupolillo, E., Bonfante-Garrido, R., Silva, S., Belfort, E., Grimaldi, JG,
1997. Leishmaniasis cutánea en Venezuela causada por infección con un nuevo híbrido entre Leishmania Fong, D., Chang, KP, 1981. Biosíntesis de tubulina en el ciclo de desarrollo de un
(Viannia) braziliensis y L. (V.) guyanensis. Mem. Inst. Oswaldo Cruz 92, 581 mi 582 . protozoo parásito, Leishmania mexicana: cambios durante la diferenciación de etapas móviles y inmóviles. Proc.
Natl. Acad. Sci. Estados Unidos 78, 7624 mi 7628 .
Downing, T., Imamura, H., Decuypere, S., Clark, TG, Coombs, GH, Cotton, JA, Fraga, J., Montalvo, AM, De Doncker, S., Dujardin, JC, Van der Auwera, G., 2010.
Hilley, JD, de Doncker, S., Maes, I., Mottram, JC, Quail, MA, Rijal, S., Sanders, M., Scho Filogenia de Leishmania especies basadas en el gen de la proteína de choque térmico 70. Infectar. Gineta. Evol.
€ nian, G., Stark, O., Sundar, S., Vanaerschot, M., Hertz-Fowler, C., 10, 238 mi 245 .
Dujardin, JC, Berriman, M., 2011. Secuenciación del genoma completo de múltiples Fraga, J., Montalvo, AM, Van der Auwera, G., Maes, I., Dujardin, JC, Requena, JM,
Leishmania donovani Los aislados clínicos proporcionan información sobre la estructura de la población y los mecanismos de 2013. Evolución y discriminación de especies según el Leishmania gen de la proteína 20 de choque térmico.
resistencia a los medicamentos. Genome Res. 21, 2143 mi 2156 . Infectar. Gineta. Evol. 18, 229 mi 237 .
Downing, T., Stark, O., Vanaerschot, M., Imamura, H., Sanders, M., Decuypere, S., de Franzen, O., Ochaya, S., Sherwood, E., Lewis, MD, Llewellyn, MS, Miles, MA,
Doncker, S., Maes, I., Rijal, S., Sundar, S., Dujardin, JC, Berriman, M., Scho Andersson, B., 2011. Análisis de secuenciación de escopeta de Trypanosoma cruzi I Sylvio X10 / 1 y
€ nian, G., 2012. La variación de microsatélites y SNP en todo el genoma ilumina la epidemiología a nivel de comparación con T. cruzi VI CL Brener. PLoS Negl. Trop. Dis. 5, e984.
población en el Leishmania donovani complejo de especies. Infectar. Gineta. Evol. 12, 149 mi 159 . http://dx.doi.org/10.1371/journal.pntd.0000984 .
Franzen, O., Talavera-Lopez, C., Ochaya, S., Butler, CE, Messenger, LA, Lewis, MD,
Dujardin, JC, Llanos-Cuentas, A., Caceres, A., Arana, M., Dujardin, JP, Guerrini, F., Llewellyn, M.S., Marinkelle, C.J., Tyler, K.M., Miles, M.A., 2012. Andersson B. Comparative genomic analysis of
Gómez, J., Arroyo, J., De Doncker, S., Jacquet, D., Hamers, R., Guerra, H., Le Ray, D., Arévalo, J., 1993. human infective Trypanosoma cruzi lineages with the bat-restricted subspecies T. cruzi marinkellei. BMC
Variación del cariotipo molecular en Leishmania (Viannia) peruviana: indicación de poblaciones geográficas en el Genomics 13, 531 .
Perú distribuidas a lo largo de una línea norte-sur. Ana. Trop. Medicina. Parasitol. 87, 335 mi 347 . Fu, S., Qu, G., Guo, S., Ma, L., Zhang, N., Zhang, S., Gao, S., Shen, Z., 2011. Applications
of loop-mediated isothermal DNA ampli fi cation. Appl. Biochem. Biotechnol.
Dujardin, JC, Banuls, AL, Llanos-Cuentas, A., Alvarez, E., DeDoncker, S., Jacquet, D., 163, 845 e 850 .
Arévalo, J., Tibayrenc, M., 1995. Putativo leishmania híbridos en el valle andino oriental de huánuco, Perú. Acta Gangneux, J.P., Menotti, J., Lorenzo, F., Sarfati, C., Blanche, H., Bui, H., Pratlong, F.,
Trop. 59, 293 mi 307 . Garin, Y.J., Derouin, F., 2003. Prospective value of PCR ampli fi cation and sequencing for diagnosis and typing of
Dujardin, JC, Ban ~ uls, AL, Dujardin, JP, Arevalo, J., Tibayrenc, M., Le Ray, D., 1998. old world Leishmania infections in an area of nonendemicity. J. Clin. Microbiol. 41, 1419 e 1422 .
Comparación del polimorfismo de cromosomas e isoenzimas en poblaciones geográficas de Leishmania
(Viannia) peruviana. Parasitol 117, 547 mi 554 . Garami, A., Ilg, T., 2001. The role of phosphomannose isomerase in Leishmania
Dweik, A., Scho € nian, G., Mosleh, IM, Karanis, P., 2007. Evaluación de PCR-RFLP mexicana glycoconjugate synthesis and virulence. J. Biol. Chem. 276, 6566 e 6575 .
(basado en ITS-1 y HaeIII) para la detección de especies de Leishmania, utilizando aislamientos caninos griegos
y material clínico jordano. Ana. Trop. Medicina. Parasitol. García, L., Kindt, A., Bermúdez, H., Llanos-Cuentas, A., De Doncker, S., Arévalo, J.,
Wilber Quispe Tintaya, K., Dujardin, JC, 2004. Tipificación de especies neotropicales independientes del cultivo Leishmania 269 e 273 .
para la validación clínica de un ensayo basado en PCR dirigido a genes de la proteína de choque térmico 70. J. Ibrahim, M.E., Barker, D.C., 2001. The origin and evolution of the Leishmania
Clin. Microbiol. 42, 2294 mi 2297 . donovani complex as inferred from a mitochondrial cytochrome oxidase II gene sequence. Infect. Genet. Evol. 1,
García, AL, Parrado, R., De Doncker, S., Bermúdez, H., Dujardin, JC, 2007. Estadounidense 61 e 68 .
leishmaniasis tegumentaria: identificación directa de especies fi catión de Leishmania en muestras clínicas no Imamura, H., Downing, T., Van den Broeck, F., Sanders, M.J., Rijal, S., Sundar, S.,
invasivas. Trans. R. Soc. Trop. Medicina. Hyg. 101, 368 mi 371 . Mannaert, A., Vanaerschot, M., Berg, M., De Muylder, G., Dumetz, F., Cuypers, B., Maes, I., Domagalska, M.,
Gay, LS, Wilson, ME, Donelson, JE, 1996. El promotor de genes de ARN ribosómico Decuypere, S., Rai, K., Uranw, S., Bhattarai, N.R., Khanal, B., Prajapati, V.K., Sharma, S., Stark, O., Scho
de Leishmania chagasi. Mol. Biochem. Parasitol. 77, 115 mi 252 . € nian, G., De Koning, H.P.,
Gelanew, T., Hailu, A., Scho } nian, G., Lewis, MC, Miles, MA, Yeo, M., 2014. Multi- Settimo, L., Vanhollebeke, B., Roy, S., Ostyn, B., Boelaert, M., Maes, L., Berriman, M., Dujardin, J.C., Cotton,
secuencia de locus e identificación de microsatélites fi catión de intraespecífica fi c híbridos y donantes similares a J.A., 2016. Evolutionary genomics of epidemic visceral leishmaniasis in the Indian subcontinent. Elife 5. http://
antepasados entre los aislamientos naturales de Etiopía Leishmania donovani.
Int. J. Parasitol. 44, 751 e 757 . dx.doi.org/10.7554/eLife.12613 e12613.
Ghasemian, M., Gharavi, M.J., Akhlaghi, L., Mohebali, M., Meamar, A.R., Aryan, E., Inbar, E., Akopyants, N.S., Charmoy, M., Romano, A., Lawyer, P., Elnaiem, D.-E.A.,
Oormazdi, H., 2014. Development and assessment of loop-mediated isothermal Am-pli fi cation (LAMP) assay for Kauffmann, F., Barhoumi, M., Grigg, M., Owens, K., Fay, M., Dobson, D.E., Shaik, J., Beverley, S.M., Sacks, D.,
the diagnosis of human visceral leishmaniasis in Iran. Iran. J. Parasitol. 9, 50 e 59 . 2013. The mating competence of geographically diverse Leishmania major strains in their natural and unnatural
sand fl y vectors. PLoS Genet. 9 http://dx.doi.org/10.1371/journal.pgen.1003672 e1003672.
Gontijo, C.M.F., Melo, M.N., 2004. Leishmaniose Visceral no Brasil: quadro atual,
desa fi os e perspectivas. Rev. Bras. Epidemiol. 7, 338 e 349 . Ivens, A.C., Peacock, C.S., Worthey, E.A., Murphy, L., Aggarwal, G., Berriman, M.,
Gonçalves, C.C.M., Reiche, E.M.V., De Abreu Filho, B.A., Silveira, T.G.V., Felizardo, T.C., Sisk, E., Rajandream, M.A., Adlem, E., Aert, R., Anupama, A., Apostolou, Z., Attipoe, P., Bason, N., Bauser, C.,
Maia, K.R., Costacurta, R., Padovesi, E.J., Filho, B.P.D., Jankevicius, S.I., Jankevicius, J.V., 2002. Evaluation of Beck, A., Beverley, S.M., Bianchettin, G., Borzym, K., Bothe, G., Bruschi, C.V., Collins, M., Cadag, E., Ciarloni,
antigens from various Leishmania species in a Western blot for diagnosis of American tegumentary L., Clayton, C., Coulson, R.M., Cronin, A., Cruz, A.K., Davies, R.M., De Gaudenzi, J., Dobson, D.E.,
leishmaniasis. Am. J. Trop. Med. Hyg. 66, 91 e 102 . Duesterhoeft, A., Fazelina, G., Fosker, N., Frasch, A.C., Fraser, A., Fuchs, M., Gabel, C., Goble, A., Goffeau, A.,
Harris, D., Hertz-Fowler, C., Hilbert, H., Horn, D., Huang, Y., Klages, S., Knights, A., Kube, M., Larke, N., Litvin,
Gouzelou, E., Haralambous, C., Amro, A., Mentis, A., Pratlong, F., Dedet, J.P., L., Lord, A., Louie, T., Marra, M., Masuy, D., Matthews, K., Michaeli, S., Mottram, J.C., Müller-Auer, S., Munden,
Votypka, J., Volf, P., Toz, S.O., Kuhls, K., Scho € nian, G., Soteriadou, K., 2012. H., Nelson, S., Norbertczak, H., Oliver, K., O'neil, S., Pentony, M., Pohl, T.M., Price, C., Purnelle, B., Quail, M.A.,
Multilocus microsatellite typing (MLMT) of strains from Turkey and Cyprus reveals a novel monophyletic L. Rabbinowitsch, E., Reinhardt, R., Rieger, M., Rinta, J., Robben, J., Robertson, L., Ruiz, J.C., Rutter, S.,
donovani sensu lato group. PLoS Negl. Trop. Dis. Saunders, D., Sch €
6, e1507. http://dx.doi.org/10.1371/journal.pntd.0001507 .
Gouzelou, E., Haralambous, C., Antoniou, M., Christodoulou, V., Martinkovic, F.,
Zivicnjak, T., Smirlis, D., Pratlong, F., Dedet, J.P., O € zbel, Y., Toz, S.O., Presber, W., afer, M., Schein, J., Schwartz, D.C., Seeger, K., Seyler, A., Sharp, S., Shin, H., Sivam, D., Squares, R.,
Scho€ nian, G., Soteriadou, K., 2013. Genetic diversity and structure in Leishmania infantum populations from Squares, S., Tosato, V., Vogt, C., Volckaert, G., Wambutt, R., Warren, T., Wedler, H., Woodward, J., Zhou, S.,
southeastern Europe revealed by microsatellite analysis. Parasite Vectors 6, 342 . Zimmermann, W., Smith, D.F., Blackwell, J.M., Stuart, K.D., Barrell, B., Myler, P.J., 2005. The genome of the
kinetoplastid parasite, Leishmania major. Science 309, 436 e 442 .
Gradoni, L., 2013. Epidemiological surveillance of leishmaniasis in the European
Union: operational and research challenges. Euro Surveill. 18, 20539 . Jackson, A.P., Vaughan, S., Gull, K., 2006. Comparative genomics and concerted
Gradoni, L., 2016. Conn's Current Therapy 2016, Infectious Diseases. Elsevier, Phil- evolution of beta-tubulin paralogs in Leishmania spp. BMC Genomics 7, 137 .
adelphia, PA, pp. 134 e 136 . Jackson, A.P., Sanders, M., Berry, A., McQuillan, J., Aslett, M.A., Quail, M.A.,
Grisard, E.C., Teixeir, S.M.R., de Almeid, L.G.P., Stoco, P.H., Gerber, A.L., Talavera- Chukualim, B., Capewell, P., MacLeod, A., Melville, S.E., Gibson, W., Barry, J.D., Berriman, M., Hertz-Fowler, C.,
Lopez, C., Lima, O.C., Andersson, B., de Vasconcelos, A.T.R., 2014. Trypanosoma cruzi clone Dm28c draft 2010. The genome sequence of Trypanosoma brucei gambiense, causative agent of chronic human African
genome sequence. Genome announc.. 2 e01114 e 13 . trypanosomiasis. PLoS Negl. Trop. Dis. 4 http://dx.doi.org/10.1371/journal.pntd.0000658 e658.
Guerbouj, S., Guizani, I., Speybroeck, N., Le Ray, D., Dujardin, J.C., 2001. Genomic
polymorphism of Leishmania infantum: a relationship with clinical pleomorphism? Infect. Genet. Evol. 1, 49 e 59 . Jackson, A.P., Berry, A., Aslett, M., Allison, H.C., Burton, P., Vavrova-Anderson, J.,
Brown, R., Browne, H., Corton, N., Hauser, H., Gamble, J., Gilderthorp, R., Marcello, L., McQuillan, J., Otto, T.D.,
Gupta, S.N., 2011. Visceral leishmaniasis: experimental models for drug discovery. Quail, M.A., Sanders, M.J., Tonder, A.V., Ginger, M.L., Field, M.C., Barry, J.D., Hertz-Fowler, C., Berriman, M.,
Indian J. Med. Res. 133, 27 e 39 . 2012. Antigenic diversity is generated by distinct evolutionary mechanisms in African trypanosome species.
Hamad, S.H., Musa, A.M., Khalil, E.A.G., Abebe, T., Younis, B.M., Elthair, M.E.E., EL- PNAS 109, 9 .
Hassan, A.M., Hailu, A., Bart, A., 2011. Leishmania: Probable genetic hybrids between species in Sudanese
isolates. J. Microbiol. Antimicrob. 3, 142 e 145 . Jackson, A.P., Allison, H.C., Barry, J.D., Field, M.C., Hertz-Fowler, C., Berriman, M.,
Hamilton, P.B., Lewis, M.D., Cruickshank, C., Gaunt, M.W., Yeo, M., Llewellyn, M.S., 2013. A cell-surface phylome for african trypanosomes. PLoS Negl. Trop. Dis. 7
Valente, S.A., Maia da Silva, F., Stevens, J.R., Miles, M.A., Teixeira, M.M.G., 2011. Identi fi cation and lineage http://dx.doi.org/10.1371/journal.pntd.0002121 e2121.
genotyping of South American trypanosomes using Jackson, A.P., Otto, T.D., Aslett, M., Armstrong, S.D., Bringaud, F., Schlacht, A.,
fl uorescent fragment length barcoding. Infect. Genet. Evol. 11, 44 e 51 . Hartley, C., Sanders, M., Wastling, J.M., Dacks, J.B., Acosta-Serrano, A., Field, M.C., Ginger, M.L., Berriman,
Hampsey, M., Reinberg, D., 1999. RNA polymerase II as a control panel for multiple M., 2016. Kinetoplastid phylogenomics reveals the evolutionary innovations associated with the origins of
coactivator complexes. Curr. Opin. Genet. Dev. 9, 132 e 139 . parasitism. Curr. Biol.
Harkins, K.M., Schwartz, R.S., Cartwright, R., Stone, A.C., 2016. Phylogenomic 26, 161 e 172 .
reconstruction supports supercontinent origins for leishmania. Infect. Genet. Evol. 38, 101 e 109 . Jamjoom, M.B., Ashford, R.W., Bates, P.A., Chance, M.L., Kemp, S.J., Watts, P.C.,
Noyes, H.A., 2004. Leishmania donovani is the only cause of visceral leishmaniasis in East Africa; previous
Harrabi, M., Bettaieb, J., Ghawar, W., Toumi, A., Za^ âtour, A., Yazidi, R., Chaâbane, S., descriptions of L. infantum and " L. archibaldi" from this region are a consequence of convergent evolution in the
Chalghaf, B., Hide, M., Ban ~ uls, A.L., Ben Salah, A., 2015. Spatio-temporal genetic isoenzyme data. Parasitol 129, 399 e 409 .
structuring of Leishmania major in Tunisia by microsatellite analysis. PLoS Negl. Trop. Dis. 9 http://dx.doi.org/10.1371/journal.pntd.0004017
e0004017. Jara, M., Adaui, V., Valencia, B.M., Martinez, D., Alba, M., Castrillon, C., Cruz, M.,
Harris, E., Kropp, G., Belli, A., Rodriguez, B., Agabian, N., 1998. Single-step multiplex Cruz, I., Van der Auwera, G., Llanos-Cuentas, A., Dujardin, J.C., Arevalo, J., 2013. Real-time PCR assay for
PCRassay for characterization of NewWorld Leishmania complexes. J. Clin. Microbiol. 36, 1989 e 1995 . detection and quanti fi cation of leishmania (viannia)
organisms in skin and mucosal lesions: exploratory study of parasite load and clinical parameters. J. Clin.
Haydock, A., Terrao, M., Sekar, A., Ramasamy, G., Baugh, L., Myler, P.J., 2015. RNA-seq Microbiol. 51, 1826 e 1833 .
approaches for determining mRNA abundance in Leishmania. Methods Mol. Biol. 1201, 207 e 219 . Jirku, M., Zemanova, E., Al-Jawabreh, A., Schonian, G., Lukes, J., 2006. Development
of a direct species-speci fi c PCR assay for differential diagnosis of Leishmania tropica. Diagn. Microbiol. Infect.
Hernandez, C., Alvarez, C., Gonzalez, C., Ayala, M.S., Leon, C.M., Ramírez, J.D., 2014. Dis. 55, 75 e 79 .
Identi fi cation of six new world leishmania species through the implementation of a high-resolution melting (HRM) Jorquera, A., Gonzalez, R., Marchan-Marcano, E., Oviedo, M., Matos, M., 2005.
genotyping assay. Parasite Vectors 7, 501 . Multiplex-PCR for detection of natural Leishmania infection in Lutzomyia spp. captured in an endemic region for
Hide, M., Marion, E., Pomares, C., Fisa, R., Marty, P., Ban ~ uls, A.L., 2013. Parasitic cutaneous leishmaniasis in state of Sucre, Venezuela. Mem. Inst. Oswaldo Cruz 100, 1 .
genotypes appear to differ in leishmaniasis patients compared with asymptomatic related carriers. Int. J.
Parasitol. 43, 389 e 397 . Kato, H., Uezato, H., Gomez, E.A., Terayama, Y., Calvopin ~ a, M., Iwata, H.,
Hide, M., Ban ~ uls, A.L., 2008. Polymorphisms of cpb multicopy genes in the Leishmania (Leishmania) donovani complex. Hashiguchi, Y., 2007. Establishment of a mass screening method of sand fl y vectors for Leishmania infection by
Trans. R. Soc. Trop. Med. Hyg. 102, 105 e 106 . molecular biological methods. Am. J. Trop. Med. Hyg. 77, 324 e 329 .
Holstege, F.C.P., Young, R.A., 1999. Transcriptional regulation: contending with Kelly, J.M., Law, J.M., Chapman, C.J., Van Eys, G.J., Evans, D.A., 1991. Evidence of
complexity. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 96, 2 e 4 . genetic recombination in Leishmania. Mol. Biochem. Parasitol. 46, 253 e 263 .
Hombach, A., Ommen, G., Sattler, V., Clos, J., 2015. Leishmania donovani P23 protects Kelly, S., Ivens, A., Manna, P.T., Gibson, W., Field, M.C., 2014. A draft genome for the
parasites against HSP90 inhibitor-mediated growth arrest. Cell Stress Chaperones 20, 673 e 685 . Africancrocodilian trypanosome. Trypanos. Grayi. Sci. Data 1, 140024 .
Khan, M.G., Bhaskar, K.R., Salam, M.A., Akther, T., Pluschke, G., Mondal, D., 2012.
Horrillo, L., San Martín, J.V., Molina, L., Madron ~ al, E., Matía, B., Castro, A., García- Diagnostic accuracy of loop-mediated isothermal ampli fi cation (LAMP) for detection of Leishmania DNA in buffy
Martínez, J., Barrios, A., Cabello, N., Arata, I.G., Casas, J.M., Ruiz Giardin, J.M., coat from visceral leishmaniasis patients. Parasit. Vectors 5, 280. http://dx.doi.org/10.1186/1756-3305-5-280 .
2015. Atypical presentation in adults in the largest community outbreak of leishmaniasis in Europe (Fuenlabrada,
Spain). Clin. Microbiol. Infect. 21, Khorasanizadeh, S., 2004. The nucleosome: from genomic organization to genomic
26 M. Akhoundi et al. / Molecular Aspects of Medicine 57 (2017) 1 e 29
regulation. Cell. 116, 259 e 272 . genotyping of old and new world leishmania species by PCR-RFLP. Diagn. Microbiol. Infect. Dis. 46, 115 e 124 .
Knuepfer, E., Stierhof, Y.D., McKean, P.G., Smith, D.F., 2001. Characterization of a
differentially expressed protein that shows an unusual localization to intracellular membranes in Leishmania Maslov, D.A., Kolesnikov, A.A., Zaitseva, G.N., 1984. Conservative and divergent base
major. Biochem. 356, 335 e 344 . sequence regions in the maxicircle kinetoplast DNA of several trypanosomatid
Kraeva, N., Butenko, A., Hlavacova, J., Kostygov, A., Myskova, J., Grybchuk, D., fl agellates. Mol. Biochem. Parasitol. 12, 351 e 364 .
Lestinova, T., Votýpka, J., Volf, P., Opperdoes, F., Flegontov, P., Lukes, J., Yurchenko, V., 2015. Leptomonas Mathis, A., Deplazes, P., 1995. PCR and in vitro cultivation for detection of Leish-
seymouri: adaptations to the dixenous life cycle analyzed by genome sequencing, transcriptome pro fi ling and mania spp. in diagnostic samples from humans and dogs. J. Clin. Microbiol. 33, 1145 e 1149 .
co-infection with Leishmania donovani. PLoS Pathog. 11, 1005127 .
Mauricio, I.L., Howard, M.K., Stothard, J.R., Miles, M.A., 1999. Genomic diversity in
Kuhls, K., Mauricio, I.L., Pratlong, F., Presber, W., Scho € nian, G., 2005. Analysis of ri- the Leishmania donovani complex. Parasitol 119, 237 e 246 .
bosomal DNA internal transcribed spacer sequences of the Leishmania donovani Maurício, I.L., Stothard, J.R., Miles, M.A., 2000. The strange case of Leishmania cha-
complex. Microbes Infect. 7, 1224 e 1234 . gasi. Parasitol. Today 16, 188 e 189 .
Kuhls, K., Keilonat, L., Ochsenreither, S., Schaar, M., Schweynoch, C., Presber, W., Mauricio, I.L., Gaunt, M.W., Stothard, J.R., Miles, M.A., 2001. Genetic typing and
Scho€ nian, G., 2007. Multilocus microsatellite typing (MLMT) reveals genetically isolated populations between phylogeny of the Leishmania donovani complex by restriction analysis of PCR ampli fi ed gp63 intergenic regions.
and within the main endemic regions of visceral leishmaniasis. Microbes Infect. 9, 334 e 343 . Parasitol 122, 393 e 403 .
Mauricio, I.L., Stothard, J.R., Miles, M.A., 2004. Leishmania donovani complex: gen-
Kuhls, K., Alam, M.Z., Cupolillo, E., Ferreira, G.E., Mauricio, I.L., Oddone, R., otyping with the ribosomal internal transcribed spacer and the mini-exon. Parasitol 128, 263 e 267 .
Feliciangeli, M.D., Wirth, T., Miles, M.A., Scho € nian, G., 2011. Comparative mi-
crosatellite typing of newworld leishmania infantum reveals low heterogeneity among populations and its recent Mauricio, I.L., Yeo, M., Baghaei, M., Doto, D., Pratlong, F., Zemanova, E., Dedet, J.P.,
old world origin. PLoS Negl. Trop. Dis. 5 Lukes, J., Miles, M.A., 2006. Towards multilocus sequence typing of the Leishmania donovani complex: resolving
http://dx.doi.org/10.1371/journal.pntd.0001155 e1155. genotypes and haplotypes for fi ve polymorphic metabolic enzymes (ASAT, GPI, NH1, NH2, PGD). Int. J.
Kuhls, K., Cupolillo, E., Silva, S.O., Schweynoch, C., Côrtes Boite, M., Mello, M.N., Parasitol. 36, 757 e 769 .
Mauricio, I., Miles, M., Wirth, T., Scho € nian, G., 2013. Population structure and
evidence for both clonality and recombination among brazilian strains of the subgenus leishmania (viannia). PLoS Mauricio, I.L., Gaunt, M.W., Stothard, J.R., Miles, M.A., 2007. Glycoprotein 63 (gp63)
Negl. Trop. Dis. 10 http://dx.doi.org/ genes show gene conversion and reveal the evolution of Old World Leishmania.
10.1371/journal.pntd.0002490 e2490. Int. J. Parasitol. 37, 565 e 576 .
Kumar, A., Boggula, V.R., Misra, P., Sundar, S., Shasany, A.K., Dube, A., 2010. Ampli fi ed McKean, P.G., Trenholme, K.R., Rangarajan, D., Keen, J.K., Smith, D.F., 1997. Diversity
fragment length polymorphism (AFLP) analysis is useful for distinguishing in repeat-containing surface proteins of Leishmania major. Mol. Biochem. Parasitol. 86, 225 e 235 .
Leishmania species of visceral and cutaneous forms. Acta Trop. 113, 202 e 206 .
Kwakye-Nuako, G., Mosore, M.T., Duplessis, C., Bates, M.D., Puplampu, N., Mensah- McKean, P.G., Vaughan, S., Gull, K., 2001. The extended tubulin superfamily. J. Cell
Attipoe, I., Desewu, K., Afegbe, G., Asmah, R.H., Jamjoom, M.B., Ayeh-Kumi, P.F., Boakye, D.A., Bates, P.A., Sci. 114, 2723 e 2733 .
2015. First isolation of a new species of Leishmania Medley, G.F., Hollingsworth, T.D., Olliaro, P.L., Adams, E.R., 2015. Health-seeking
responsible for human cutaneous leishmaniasis in Ghana and classi fi cation in the Leishmania enriettii complex. behaviour, diagnostics and transmission dynamics in the control of visceral leishmaniasis in the Indian
Int. J. Parasitol. 45, 679 e 684 . subcontinent. Nature 528, S102 e S108 .
Lachaud, L., Marchergui-Hammami, S., Chabbert, E., Dereure, J., Dedet, J.P., Minodier, P., Piarroux, R., Gambarelli, F., Joblet, C., Dumon, H., 1997. Rapid identi-
Bastien, P., 2002. Comparison of six PCR methods using peripheral blood for detection of canine visceral fi cation of causative species in patients with old world leishmaniasis. J. Clin. Microb. 35, 2551 e 2555 .
leishmaniasis. J. Clin. Microbiol. 40, 210 e 215 .
Lainson, R., Shaw, J.J., 1987. Evolution, classi fi cation and geographical distribution. Momen, H., Cupolillo, E., 2000. Speculations on the origin and evolution of the
In: Peters, W., Killick-Kendrick, R. (Eds.), The Leishmaniases in Biology and Medicine: Volume I Biology and genus leishmania. Mem. Inst. Oswaldo Cruz 95, 583 .
Epidemiology. Academic Press, London, pp. 1 e 120 . Montalvo, A.M., Monzote, L., Fraga, J., Montano, I., Muskus, C., Marín, M., de
Doncker, S., Velez, I.D., Dujardin, J.C., 2008. PCR-RFLP and RAPD for typing neotropical Leishmania. Biomedica
Landfear, S.M., McMahon-Pratt, D., Wirth, D.F., 1983. Tandem arrangement of 28, 597 e 606 .
tubulin genes in the protozoan parasite Leishmania enriettii. Mol. Cell Biol. 3, 1070 e 1076 . Montalvo, A.M., Fraga, J., Maes, I., Dujardin, J.C., Van der Auwera, G., 2012. Three
new sensitive and speci fi c heat-shock protein 70 PCRs for global Leishmania
Laurent, T., Auweraa, G.W., Hide, M., Mertens, P., Quispe-Tintaya, W., species identi fi cation. Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis. 31, 1453 e 1461 .
Deborggraeve, S., De Donckera, S., Leclipteux, T., Ban ~ uls, A.L., Büschera, P., Montalvo, A.M., Fraga, J., El Sa fi, S., Gramiccia, M., Jaffe, C.L., Dujardin, J.C., Van der Auwera, G., 2014. Direct Leishmania
Dujardina, J.C., 2009. Identi fi cation of Old World Leishmania spp. by speci fi c polymerase chain reaction ampli fi cation species typing in Old World clinical samples: evaluation of 3 sensitive methods based on the heat-shock protein
of cysteine proteinase B genes and rapid dipstick detection. Diag. Microbiol. Infect. Dis. 63, 173 e 181 . 70 gene. Diagn. Microbiol. Infect. Dis. 80, 35 e 39 .
Leelayoova, S., Siripattanapipong, S., Hitakarun, A., Kato, H., Tan-ariya, P., Morales, M.A., Chicharro, C., Ares, M., Can ~ avate, C., Barker, D.C., Alvar, J., 2001.
Siriyasatien, P., Osatakul, S., Mungthin, M., 2013. Multilocus characterization and phylogenetic analysis of Leishmania Molecular tracking of infections by Leishmania infantum. Trans. R. Soc. Trop. Med. Hyg. 95, 104 e 107 .
siamensis isolated from autochthonous visceral leishmaniasis cases, southern Thailand. BMC Microbiol. 13, 60 .
Mortarino, M., Franceschi, A., Mancianti, F., Bazzocchi, C., Genchi, C., Bandi, C., 2004.
Lixia, L., Jiping, L., Hongtao, J., Limin, S., Bo, L., Feng, W., Quan, L., 2012. Detection of Quantitative PCR in the diagnosis of leishmania. Parassitol 46, 163 e 167 .
Leishmania donovani infection using magnetic beads-based serum peptide pro fi ling by MALDI-TOF MS in mice Mouri, O., Morizot, G., Van der Auwera, G., Ravel, C., Passet, M., Chartrel, N., Joly, I.,
model. Parasitol. Res. 110, 1287 e 1290 . Thellier, M., Jaureguiberry, S., Caumes, E., Mazier, D., Marinach-Patrice, C., Buffet, P., 2014. Easy identi fi cation
Llanes, A., Restrepo, C.M., Vecchio, G.D., Anguizola, F.J., Lleonart, R., 2015. The of leishmania species by mass spectrometry. PLoS Negl. Trop. Dis. 8, e2841. http://dx.doi.org/10.1371/journal.pntd.0002841
genome of Leishmania panamensis: insights into genomics of the L. (Viannia) .
subgenus. Sci. Rep. 5, 8550 . Mugasa, C.M., Deborggraeve, S., Schoone, G.J., Laurent, T., Lee fl ang, M.M.,
Loría-Cervera, E.N., Andrade-Narvaez, F.J., 2014. Animal models for the study of Ekangu, R.A., Sa fi, S.E., Saad, A.A., Basiye, F.L., Doncker, S.D., Lubega, G.W., Kager, P.A., Büscher, P.,
leishmaniasis immunology. Rev. Inst. Med. Trop. 56, 1 e 11 . Schallig, H.D.F.H., 2010. Accordance and concordance of PCR and NASBA followed by oligochromatography for
Lukes, J., Maslov, D.A., 2000. Unexpectedly high variability of histone H4 gene in the molecular diagnosis of Trypanosoma brucei and Leishmania. Trop. Med. Int. Health 15, 800 e 805 .
Leishmania. Parasitol. Res. 86, 259 e 261 .
Lukes, J., Guilbride, D.L., Votýpka, J., Zíkova, A., Benne, R., Englund, P.T., 2002. Muniz, J., Medina, H.S.G., 1948. Leishmaniose tegumentar do cobaio ( Leishmania
Kinetoplast DNA network: evolution of an improbable structure. Eukaryot. Cell. enriettii n.sp). Hosp. (Rio de Janeiro) 33, 7 e 25 .
1, 495 e 502 . Nasereddin, A., Jaffe, C.L., 2010. Rapid diagnosis of old world leishmaniasis by high-
Lukes, J., Hashimi, H., Zíkova, A., 2005. Unexplained complexity of the mitochon- resolution melting analysis of the 7SL RNA gene. J. Clin. Microbiol. 48, 2240 e 2242 .
drial genome and transcriptome in kinetoplastid fl agellates. Curr. Genet. 48, 277 e 299 .
Nirujogi, R.S., Pawar, H., Renuse, S., Kumar, P., Chavan, S., Sathe, G., Sharma, J.,
Luyo-Acero, G.E., Uezato, H., Oshiro, M., Takei, K., Kariya, K., Katakura, K., Gomez- Khobragade, S., Pande, J., Modak, B., Prasad, T.S., Harsha, H.C., Patole, M.S., Pandey, A., 2014. Moving from
Landires, E., Hashiguchi, Y., Nonaka, S., 2004. Sequence variation of the cytochrome b gene of various human unsequenced to sequenced genome: reanalysis of the proteome of Leishmania donovani. J. Proteomics 97, 48 e 61
infecting members of the genus Leishmania .
and their phylogeny. Parasitol 128, 483 e 491 . Nolder, D., Roncal, N., Davies, C.R., Llanos-Cuentas, A., Miles, M.A., 2007. Multiple
Magill, A.J., Gro € gl, M., Gasser Jr., R.A., Sun, W., Oster, C.N., 1993. Visceral infection hybrid genotypes of Leishmania (viannia) in a focus of mucocutaneous Leishmaniasis. Am. J. Trop. Med. Hyg.
caused by Leishmania tropica in veterans of operation desert storm. N. Engl. J. Med. 328, 1383 e 1387 . 76, 573 e 578 .
Notomi, T., Okayama, H., Masubuchi, H., Yonekawa, T., Watanabe, K., Amino, N.,
Mancianti, F., Meciani, N., 1988. Speci fi c serodiagnosis of canine leishmaniasis by Hase, T., 2000. Loop-mediated isothermal ampli fi cation of DNA". Nucleic Acids Res. 28. E63 .
indirect immuno fl uorescence, indirect hemagglutination, and counterimmunoelectrophoresis. Am. J. Vet. Res. 49,
1409 e 1411 . Novo, S.P.C., Leles, D., Bianucci, R., Araujo, A., 2015. Leishmania tarentolae molecular
Mannaert, A., Downing, T., Imamura, H., Dujardin, J.C., 2012. Adaptive mechanisms signatures in a 300 hundred-years-old human Brazilian mummy. Parasites Vectors 8, 72 .
in pathogens: universal aneuploidy in Leishmania. Trends Parasitol. 28, 370 e 376 .
Noyes, H.A., Camps, A.P., Chance, M.L., 1996. Leishmania herreri ( Kinetoplastida;
Mardis, E.R., 2011. A decade's perspective on DNA sequencing technology. Nature Trypanosomatidae) is more closely related to Endotrypanum ( Kinetoplastida; Trypanosomatidae) than to leishmania.
470, 198 e 203 . Mol. Biochem. Parasitol. 80, 119 e 123 .
Marfurt, J., Niederwieser, I., Makia, N.D., Beck, H.P., Felger, I., 2003. Diagnostic Noyes, H.A., Reyburn, H., Bailey, J.W., Smith, D., 1998. A nested-PCR-based
M. Akhoundi et al. / Molecular Aspects of Medicine 57 (2017) 1 e 29 27
schizodeme method for identifying leishmania kinetoplast minicircle classes directly from clinical samples and its Würtele, M., de Carvalho, L.M., Carmonae Ferreira, R., Mortara, R.A., Barbieri, C.L., Mieczkowski, P., da
application to the study of the epidemiology of leishmania tropica in Pakistan. J. Clin. Microbiol. 36, 2877 e 2881 . Silveira, J.F., Briones, M.R., Pereira, G.A., Bahia, D., 2013. The genome sequence of Leishmania (Leishmania)
amazonensis:
Noyes, H., Pratlong, F., Chance, M., Ellis, J., Lanotte, G., Dedet, J.P., 2002. A previously functional annotation and extended analysis of gene models. DNA Res. 20, 567 e 581 .
unclassi fi ed trypanosomatid responsible for human cutaneous lesions in Martinique (French West Indies) is the
most divergent member of the genus Requena, J.M., Soto, M., Quijada, L., Alonso, C., 1997. Genes and chromosomes of
Leishmania ss. Parasitol 124, 17 e 24 . leishmania infantum. Mem. Inst. Oswaldo Cruz 92, 853 e 858 .
Ochsenreither, S., Kuhls, K., Schaar, M., Presber, W., Scho € nian, G., 2006. Multilocus Rijal, S., Uranw, S., Chappuis, F., Picado, A., Khanal, B., Paudel, I.S., Andersen, E.W.,
microsatellite typing as a new tool for discrimination of Leishmania infantum Meheus, F., Ostyn, B., Das, M.L., Davies, C., Boelaert, M., 2010. Epidemiology of
MON e 1 strains. J. Clin. Microbiol. 44, 495 e 503 . Leishmania donovani infection in high-transmission foci in Nepal. Trop. Med. Int. Health 2, 21 e 28 .
Oddone, R., Schweynoch, C., Scho € nian, G., de Sousa Cdos, S., Cupolillo, E.,
Espinosa, D., Arevalo, J., Noyes, H., Mauricio, I., Kuhls, K., 2009. Development of a multilocus microsatellite Rioux, J.A., Lanotte, G., Serres, E., Pratlong, F., Bastien, P., Perieres, J., 1990. Taxonomy
typing approach for discriminating strains of Leishmania (Viannia) species. J. Clin. Microbiol. 47, 2818 e 2825 . of Leishmania. Use of isoenzymes. Suggestions for a new classi fi cation. Ann. Parasitol. Hum. Comp. 65, 111 e 125
.
Odiwuor, S., Vuylsteke, M., De Doncker, S., Maes, I., Mbuchi, M., Dujardin, J.C., Van Rodríguez-Lazaro, D., Hernandez, M., D ’ agostino, M., Cook, N., 2006. Application of
der Auwera, G., 2011. Leishmania AFLP: paving the way towards improved molecular assays and markers of nucleic acid sequence-based ampli fi cation for the detection of viable Foodborne pathogens: progress and
diversity. Infect. Genet. Evol. 11, 960 e 967 . challenges. J. Rapid Meth. Aut. Mic. 14, 218 e 236 .
Opperdoes, F., Butenko, A., Flegontov, P., Yurchenko, V., Lukes, J., 2016. Comparative Rogers, M.B., Hilley, J.D., Dickens, N.J., Wilkes, J., Bates, P.A., Depledge, D.P., Harris, D.,
metabolism of free-living Bodo saltans and parasitic trypanosomatids. J. Euk. Microbiol. 63, 657 e 678 . Her, Y., Herzyk, P., Imamura, H., Otto, T.D., Sanders, M., Seeger, K., Dujardin, J.C., Berriman, M., Smith, D.F.,
Hertz-Fowler, C., Mottram, J.C., 2011. Chromosome and gene copy number variation allow major structural
Orlando, T.C., Rubio, M.A.T., Sturm, N.R., Campbell, D.A., Floeter-Winter, L.M., 2002. change between species and strains of Leishmania. Genome Res. 21, 2129 e 2142 .
Intergenic and external transcribed spacers of ribosomal RNA genes in lizardinfecting leishmania: molecular
structure and phylogenetic relationship to mammal-infecting leishmania in the subgenus leishmania (leishmania). Rogers, M.B., Downing, T., Smith, B.A., Imamura, H., Sanders, M., Svobodova, M.,
Mem. Inst. Oswaldo Cruz 97, 695 e 701 . Volf, P., Berriman, M., Cotton, J.A., Smith, D.F., 2014. Genomic con fi rmation of hybridization and recent
inbreeding in a vector-isolated Leishmania population. PLoS Genet. 10 http://dx.doi.org/10.1371/journal.pgen.1004092
Paiva-Cavalcanti, M., Regis-da-Silva, C.G., Gomes, Y.M., 2010. Comparison of real- e1004092.
time PCR and conventional PCR for detection of Leishmania (Leishmania) infantum infection: a mini-review. J. Romano, A., Inbar, E., Debrabant, A., Charmoy, M., Lawyer, P., Ribeiro-Gomes, F.,
Venom. Anim. Toxins Incl. Trop. Dis. 16, 537 e 542 . Barhoumi, M., Grigg, M., Shaik, J., Dobson, D., Beverley, S.M., Sacks, D.L., 2014. Cross-species genetic
exchange between visceral and cutaneous strains of
Patz, J.A., Graczyk, T.K., Geller, N., Vittor, A.Y., 2000. Effects of environmental change Leishmania in the sand fl y vector. PNAS 111, 47 .
on emerging parasitic diseases. Int. J. Parasitol. 30, 1395 e 1405 . Rose, K., Curtis, J., Baldwin, T., Mathis, A., Kumar, B., Sakthianandeswaren, A.,
Paule, M.R., White, R.J., 2000. Survey and summary: transcription by RNA poly- Spurck, T., Low Choy, J., Handman, E., 2004. Cutaneous leishmaniasis in red kangaroos: isolation and
merases I and III. Nucleic acids Res. 28, 1283 e 1298 . characterisation of the causative organisms. Int. J. Parasitol. 34, 655 e 664 .
Peacock, C.S., Seeger, K., Harris, D., Murphy, L., Ruiz, J.C., Quail, M.A., Peters, N.,
Adlem, E., Tivey, A., Aslett, M., Kerhornou, A., Ivens, A., Fraser, A., Rajandream, M.A., Carver, T., Norbertczak, Rosenberg, N.A., Li, L.M., Ward, R., Pritchard, J.K., 2003. Informativeness of genetic
H., Chillingworth, T., Hance, Z., Jagels, K., Moule, S., Ormond, D., Rutter, S., Squares, R., Whitehead, S., markers for inference of ancestry. Am. J. Hum. Genet. 73, 1402 e 1422 .
Rabbinowitsch, E., Arrowsmith, C., White, B., Thurston, S., Bringaud, F., Baldauf, S.L., Faulconbridge, A., Rougeron, V., Meeûs, T.D., Hide, M., Waleckx, E., Bermudez, H., Arevalod, J., Llanos-
Jeffares, D., Depledge, D.P., Oyola, S.O., Hilley, J.D., Brito, L.O., Tosi, L.R., Barrell, B., Cruz, A.K., Mottram, Cuentas, A., Dujardin, J.C., De Doncker, S., Le Ray, D., Ayala, F.J., Ban ~ uls, A.L., 2009.
J.C., Smith, D.F., Berriman, M., 2007. Comparative genomic analysis of three Leishmania species that cause Extreme inbreeding in Leishmania braziliensis. PNAS 106, 25 .
diverse human disease. Nat. Genet. 39, 839 e 847 . Rougeron, V., De Meeûs, T., Kako Ouraga, S., Hide, M., Ban ~ uls, A.L., 2010. “ Everything
you always wanted to know about sex (but were afraid to ask) ” in leishmania
after two decades of laboratory and fi eld analyses. PLoS Pathog. 6 http://
Piarroux, R., Azaiez, R., Lossi, A.M., Reynier, P., Muscatelli, F., Gambarelli, F., dx.doi.org/10.1371/journal.ppat.1001004 e1001004.
Fontes, M., Dumon, H., Quilici, M., 1993. Isolation and characterization of a repetitive DNA sequence from Leishmania Rougeron, V., De Meeûs, T., Ban ~ uls, A.L., 2015. A primer for Leishmania population
infantum: development of a visceral leishmaniasis polymerase chain reaction. Am. J. Trop. Med. Hyg. 49, 364 e 369 genetic studies. Trends Parasitol. 31, 52 e 59 .
. Saad, A.A., Ahmed, N.G., Osman, O.S., Al-Basheer, A.A., Hamad, A., Deborggraeve, S.,
Pita-Pereira, D., Cardoso, M.A., Alves, C.R., Brazil, R.P., Britto, C., 2008. Detection of Büscher, P., Schoone, G.J., Schallig, H.D., Laurent, T., Haleem, A., Osman, O.F., Eltom, A.M., Elbashir, M.,
natural infection in Lutzomyia cruzi and Lutzomyia forattinii ( Diptera: psychodidae: Phlebotominae) by Leishmania El-Sa fi, S., 2010. Diagnostic accuracy of the leishmania
infantum chagasi in an endemic area of visceral leishmaniasis in Brazil using a PCR multiplex assay. Acta Trop. OligoC-test and NASBA-oligochromatography for diagnosis of leishmaniasis in Sudan. PLoS Negl. Trop. Dis. 4 http://dx.doi.org/1
107, 66 e 69 .
e776.
Pothirat, T., Tantiworawit, A., Chaiwarith, R., Jariyapan, N., Wannasan, A., Sadeghian, G., Ziaei, H., Shirani Bidabadi, L., Nilforoushzadeh, M.A., 2013. Evaluation
Siriyasatien, P., Supparatpinyo, K., Bates, M.D., Kwakye-Nuako, G., Bates, P.A., of Leishmanin skin test reaction in different variants of cutaneous leishmaniasis. Indian J. Dermatol 58, 239 .
2014. First isolation of Leishmania from Northern Thailand: case report, identi fi cation as Leishmania
martiniquensis and phylogenetic position within the Sadlova, J., Price, H.P., Smith, B.A., Votypka, J., Volf, P., Smith, D.F., 2010. The stage
Leishmania enriettii complex. PLoS Negl. Trop. Dis. 8 e3339 . regulated HASPB and SHERP proteins are essential for differentiation of the protozoan parasite Leishmania
Pratlong, F., Dedet, J.P., Marty, P., Portús, M., Deniau, M., Dereure, J., Abranches, P., major in its sand fl y vector, Phlebotomus papatasi.
Reynes, J., Martini, A., Lefebvre, M., Rioux, J.A., 1995. Leishmania- human immunode fi ciency virus coinfection in Cell Microbiol. 12, 1765 e 1779 .
the Mediterranean basin: isoenzymatic characterization of 100 isolates of the Leishmania infantum complex. J. Sadlova, J., Yeo, M., Seblova, V., Lewis, M.D., Mauricio, I., Miles, M.A., 2011. Visual-
Infect. Dis. 172, 323 e 326 . isation of Leishmania donovani fl uorescent hybrids during early stage development in the sand fl y vector. PLoS
One 6, e19851. http://dx.doi.org/10.1371/ journal.pone.0019851 .
Pratlong, F., Rioux, J.A., Marty, P., Faraut-Gambarelli, F., Dereure, J., Lanotte, G.,
Dedet, J.P., 2004. Isoenzymatic analysis of 712 strains of Leishmania infantum in the south of France and Sadlova, J., Seblova, V., Votypka, J., Warburg, A., Volf, P., 2015. Xenodiagnosis of
relationship of enzymatic polymorphism to clinical and epidemiological features. J. Clin. Microbiol. 42, 4077 e 4082 . Leishmania donovani in BALB/c mice using Phlebotomus orientalis: a new laboratory model. Parasite Vectors 8,
158 .
Quispe Tintaya, K.W., Ying, X., Dedet, J.P., Rijal, S., De Bolle, X., Dujardin, J.C., 2004. Saf'janova, V.M., 1982. Classi fi cation of the genus leishmania ross. Chapter 11 (in
Antigen genes for molecular epidemiology of leishmaniasis: polymorphism of cysteine proteinase B and surface Russian). In: The Leishmaniasis. Protozoology, Academy of Sciences, USSR All Union Society of
metalloprotease glycoprotein 63 in the Leishmania donovani complex. J. Infect. Dis. 189, 1035 e 1043 . Protozoologists. Lennigrad, pp. 95 e 101. Part 7 .
Salotra, P., Sreenivas, G., Pogue, G.P., Lee, N., Nakhasi, H.L., Ramesh, V., Negi, N.S.,
Ramos, A., Maslov, D.A., Fernandes, O., Campbell, D.A., Simpson, L., 1996. Detection 2001. Development of a species-speci fi c PCR assay for detection of Leishmania donovani in clinical samples
and identi fi cation of human pathogenic Leishmania and Trypanosoma species by hybridization of PCR-ampli fi ed from patients with kala-azar and post-kala-azar dermal leishmaniasis. J. Clin. Microbiol. 39, 849 e 854 .
mini-exon repeats. Exp. Parasitol. 82, 242 e 250 .
Ravel, C., Cortes, S., Pratlong, F., Morio, F., Dedet, J.P., Campino, L., 2006. First report Sanger, F., Air, G.M., Barrell, B.G., Brown, N.L., Coulson, A.R., Fiddes, C.A.,
of genetic hybrids between two very divergent Leishmania species: Leishmania infantum and Leishmania major. Int. Hutchison, C.A., Slocombe, P.M., Smith, M., 1977. Nucleotide sequence of bacteriophage phi X174 DNA. Nature
J. Parasitol. 36, 1383 e 1388 . 265, 687 e 695 .
Ray, D., 1989. Conserved sequence blocks in kinetoplast DNA minicircles from Schallig, H.D., Oskam, L., 2002. Molecular biological applications in the diagnosis
diverse species of trypanosomes. Mol. Cell Biol. 9, 1365 e 1367 . and control of leishmaniasis and parasite identi fi cation. Trop. Med. Int. Health 7, 641 e 651 .
Raymond, F., Boisvert, S., Roy, G., Ritt, J.F., Legare, D., Isnard, A., Stanke, M.,
Olivier, M., Tremblay, M.J., Papadopoulou, B., Ouellette, M., Corbeil, J., 2012. Genome sequencing of the lizard Scho€ nian, G., Schnur, L., el Fari, M., Oskam, L., Kolesnikov, A.A., SokolowskaKo
parasite Leishmania tarentolae reveals loss of genes associated to the intracellular stage of human pathogenic € hler, W., Presber, W., 2001. Genetic heterogeneity in the species Leishmania tropica revealed by different
species. Nucleic Acids Res. 40, 1131 e 1147 . PCR-based methods. Trans. R. Soc. Trop. Med. Hyg.
95, 217 e 224 .
Ready, P.D., 2014. Epidemiology of visceral leishmaniasis. Clin. Epidemiol. 6, Scho€ nian, G., Schweynoch, C., Zlateva, K., Oskam, L., Kroon, N., Graser, Y., Presber, W.,
147 e 154 . 1996. Identi fi cation and determination of the relationships of species and strains within the genus Leishmania using
Real, F., Vidal, R.O., Carazzolle, M.F., Mondego, J.M., Costa, G.G., Herai, R.H., single primers in the polymerase
28 M. Akhoundi et al. / Molecular Aspects of Medicine 57 (2017) 1 e 29
chain reaction. Mol. Biochem. Parasitol. 77, 19 e 29 . lack of correlation with zymodeme structure. Mol. Biochem. Parasitol. 119, 257 e 264 .
Scho€ nian, G., Nasereddin, A., Dinse, N., Schweynoch, C., Schallig, H.D., Presber, W., Jaffe, C.L., 2003. PCR
diagnosis and characterization of Leishmania in local and imported clinical samples. Diagn. Microbiol. Infect. Dis. Torres-Machorro, A.L., Hernandez, R., Cevallos, A.M., Lopez-Villasenor, I., 2010.
47, 349 e 358 . RibosomalRNAgenes in eukaryotic microorganisms: witnesses of phylogeny? FEMS Microbiol. Rev. 34, 59 e 86 .
Scho€ nian, G., Mauricio, I., Cupolillo, E., 2010. Is it time to revise the nomenclature of
Leishmania? Trends Parasitol. 26, 466 e 469 . Tsokana, C.N., Athanasiou, L.V., Valiakos, G., Spyrou, V., Manolakou, K., Billinis, C.,
Scho€ nian, G., Kuhls, K., Mauricio, I.L., 2011. Molecular approaches for a better understanding of the epidemiology 2014. Molecular diagnosis of leishmaniasis, species identi fi cation and phylogenetic analysis. In: Claborn, D.M.
and population genetics of Leishmania. Parasitol 138, 405 e 425 . (Ed.), Leishmaniasis e Trends in Epidemiology Diagnosis and Treatment. InTech, Croatia .
Schramm, L., Hernandez, N., 2002. Recruitment of RNA polymerase III to its target Tupperwar, N., Vineeth, V., Rath, S., Vaidya, T., 2008. Development of a real-time
promoters. Genes & Dev. 16, 2593 e 2620 . polymerase chain reaction assay for the quanti fi cation of Leishmania species and the monitoring of systemic
Schwenkenbecher, J.M., Wirth, T., Schnur, L.F., Jaffe, C.L., Schallig, H., Al-Jawabreh, A., distribution of the pathogen. Diagn. Microbiol. Infect. Dis. 61, 23 e 30 .
Hamarsheh, O., Azmi, K., Pratlong, F., Scho € nian, G., 2006. Microsatellite analysis
reveals genetic structure of Leishmania tropica. Int. J. Parasitol. 36, 237 e 246 . Uliana, S.R.B., Fischer, W., Stempliuk, V.A., Floeter-Winter, L.M., 1996. Structural and
Shaw, J., Pratlong, F., Floeter-Winter, L., Ishikawa, E., El Baidouri, F., Ravel, C., functional characterization of Leishmania amazonensis ribosomal RNA promoter. Mol. Biochem. Parasitol. 76,
Dedet, J.P., 2015. Characterization of leishmania (leishmania) waltoni n.sp. (Kinetoplastida: Trypanosomatidae), 245 e 255 .
the parasite responsible for diffuse cutaneous leishmaniasis in the Dominican Republic. Am. J. Trop. Med. Hyg. Valdivia, H.O., Reis-Cunha, J.L., Rodrigues-Luiz, G.F., Baptista, R.P., Baldeviano, G.C.,
93, 552 e 558 . Gerbasi, R.V., Dobson, D.E., Pratlong, F., Bastien, P., Lescano, A.G., Beverley, S.M., Bartholomeu, D.C., 2015.
Comparative genomic analysis of leishmania (viannia) peruviana and leishmania (viannia) braziliensis. BMC
Shaw, C.D., Lonchamp, J., Downing, T., Imamura, H., Freeman, T.M., Cotton, J.A., Genomics 16, 715 .
Sanders, M., Blackburn, G., Dujardin, J.C., Rijal, S., Khanal, B., Illingworth, C.J., Coombs, G.H., Carter, K.C., Van den Bogaart, E., Berkhout, M.M.Z., Adams, E.R., Mens, P.F., Sentongo, E.,
2016. In vitro selection of miltefosine resistance in promastigotes of Leishmania donovani from Nepal: genomic Mbulamberi, D.B., Straetemans, M., Schallig, H.D., Chappuis, F., 2012. Prevalence, features and risk factors for
and metabolomic characterization. Mol. Microbiol. 99, 1134 e 1148 . malaria Co-Infections amongst visceral leishmaniasis patients from amudat hospital, Uganda. PLoS Negl. Trop.
Dis. 6 http://
Singh, S., Kumari, V., Singh, N., 2002. Predicting kala-azar disease manifestations in dx.doi.org/10.1371/journal.pntd.0001617 e1617.
asymptomatic patients with latent Leishmania donovani infection by detection of antibody against recombinant Van der Auwera, G., Dujardin, J.C., 2015. Species typing in dermal leishmaniasis.
K39 antigen. Clin. Diagn. Lab. Immunol. 9, 568 e 572 . Clin. Microbiol. Rev. 28, 265 e 294 .
Van der Auwera, G., Maes, I., De Doncker, S., Ravel, C., Cnops, L., Van Esbroeck, M.,
Smyth, A.J., Ghosh, A., Hassan, M.Q., Basu, D., De Bruijn, M.H., Adhya, S., Mallik, K.K., Van Gompel, A., Clerinx, J., Dujardin, J.C., 2013. Heat-shock protein 70 gene sequencing for Leishmania species
Barker, D.C., 1992. Rapid and sensitive detection of Leishmania kinetoplast DNA from spleen and blood samples typing in European tropical infectious disease clinics. Eurosurveillance 18, 1 e 9 .
of kala-azar patients. Parasitol 105, 183 e 192 .
Sollner-Webb, B., Mougey, E.B., 1991. News from the nucleolus: rRNA gene Van der Auwera, G., Ravel, C., Verweij, J.J., Bart, A., Scho € nian, G., Felger, I., 2014.
expression. Trends Biochem. Sci. 16, 58 e 62 . Evaluation of four single-locus markers for Leishmania species discrimination by sequencing. J. Clin. Microbiol.
Soto, M., Iborra, S., Quijada, L., Folgueira, C., Alonso, C., Requena, J.M., 2004. Cell- 52, 1098 e 1104 .
cycle-dependent translation of histone mRNAs is the key control point for regulation of histone biosynthesis in LeishmaniaVan der Meide, W.F., Schoone, G.J., Faber, W.R., Zeegelaar, J.E., de Vries, H.J., Ozbel, Y.,
infantum. Biochem. J. 379, 617 e 625 . Lai A Fat, R.F., Coelho, L.I., Kassi, M., Schallig, H.D., 2005. Quantitative nucleic acid sequence-based assay as
a new molecular tool for detection and quanti-
Sreenivas, G., Singh, R., Selvapandiyan, A., Negi, N.S., Nakhasi, H.L., Salotra, P., 2004. fi cation of Leishmania parasites in skin biopsy samples. J. Clin. Microbiol. 43, 5560 e 5566 .
Arbitrary-primed PCR for genomic fi ngerprinting and identi fi cation of differentially regulated genes in Indian
isolates of Leishmania donovani. Exp. Parasitol. 106, 110 e 118 . Van Eys, G.J., Schoone, G.J., Kroon, N.C., Ebeling, S.B., 1992. Sequence analysis of
small subunit ribosomal RNA genes and its use for detection and identi fi cation of Leishmania parasites. Mol.
Srivastava, P., Mehrotra, S., Tiwary, P., Chakravarty, J., Sundar, S., 2011. Diagnosis of Biochem. Parasitol. 51, 133 e 142 .
Indian visceral leishmaniasis by nucleic acid detection using PCR. PLoS One 29, Vanaerschot, M., Decuypere, S., Downing, T., Imamura, H., Stark, O., De Doncker, S.,
6. http://dx.doi.org/10.1371/journal.pone.0019304 e19304. Roy, S., Ostyn, B., Maes, L., Khanal, B., Boelaert, M., Scho € nian, G., Berriman, M.,
Sriworarat, C., Phumee, A., Mungthin, M., Leelayoova, S., Siriyasatien, P., 2015. Chappuis, F., Dujardin, J.C., Sundar, S., Rijal, S., 2012. Genetic markers for SSG resistance in Leishmania
Development of loop-mediated isothermal ampli fi cation (LAMP) for simple detection of Leishmania infection. donovani and SSG treatment failure in visceral leishmaniasis patients of the Indian subcontinent. J. Infect. Dis.
Parasit. Vectors 8, 591 . 206, 752 e 755 .
Stauch, A., Duerr, H.P., Picado, A., Ostyn, B., Sundar, S., Rijal, S., Boelaert, M., Vergnes, B., Gourbal, B., Girard, I., Sundar, S., Drummelsmith, J., Ouellette, M., 2007.
Dujardin, J.C., Eichner, M., 2014. Model-based investigations of different vectorrelated intervention strategies to A proteomics screen implicates HSP83 and a small kinetoplastid calpain-related protein in drug resistance in Leishmania
eliminate visceral leishmaniasis on the Indian subcontinent. PLoS Negl. Trop. Dis. 8 http://dx.doi.org/10.1371/jour- donovani clinical fi eld isolates by modulating drug-induced programmed cell death. Mol. Cell Proteomics 6, 88 e 101
.
nal.pntd.0002810 e2810.
Sturm, N.R., Maslov, D.A., Grisard, E.C., Campbell, D.A., 2001. Diplonema spp. Possess Verma, S., Kumar, R., Katara, G.K., Singh, L.C., Negi, N.S., Ramesh, V., Salotra, P., 2010.
spliced leader RNA genes similar to the Kinetoplastida. J. Eukaryot. Microbiol. Quanti fi cation of parasite load in clinical samples of leishmaniasis patients: IL10 level correlates with parasite
48, 325 e 331 . load in visceral leishmaniasis. PLoS One 5 e10107 .
Stuart, K.D., Schnaufer, A., Ernst, N.L., Panigrahi, A.K., 2005. Complex management:
RnA editing in trypanosomes. Trends biochem. Sci. 30, 97 e 105 . Verner, Z., Basu, S., Benz, C., Dixit, S., Dobakova, E., Faktorova, D., Hashimi, H.,
Sturm, N.R., Simpson, L., 1991. Leishmania tarentolae minicircles of different Horakova, E., Huang, Z., Paris, Z., Pena-Diaz, P., Ridlon, L., Týc, J., Wildridge, D., Zíkova, A., Lukes, J., 2015.
sequence classes encode single guide RNAs located in the variable region approximately 150 bp from the Malleable mitochondrion of Trypanosoma brucei. Int. Rev. Cell. Mol. Biol. 315, 73 e 151 .
conserved region. Nucleic Acids Res. 19, 6277 e 6281 .
Victoir, K., Banuls, A.L., Arevalo, J., Llanos-Cuentas, A., Hamers, R., Noel, S., De
Sue, M.J., Yeap, S.K., Omar, A.R., Wei Tan, S., 2014. Application of PCR-ELISA in Doncker, S., Le Ray, D., Tibayrenc, M., Dujardin, J.C., 1998. The gp63 gene locus, a target for genetic
molecular diagnosis. Biomed. Res. Int. 2014, 653014 . characterization of Leishmania belonging to subgenus Viannia.
Sundar, S., Rai, M., 2002. Laboratory diagnosis of visceral leishmaniasis. Clin. Diagn. Parasitol 117, 1 e 13 .
Lab. Immunol. 9, 951 e 958 . Volf, P., Benkova, I., Myskova, J., Sadlova, J., Campino, L., Ravel, C., 2007. Increased
Svobodova, M., Alten, B., Zídkova, L., Dvorak, V., Hlavackova, J., Myskova, J., transmission potential of Leishmania major/Leishmania infantum hybrids. Int. J. Parasitol. 37, 589 e 593 .
Seblova, V., Kasap, O.E., Belen, A., Votýpka, J., Volf, P., 2009. Cutaneous leishmaniasis caused by Leishmania
infantum transmitted by Phlebotomus tobbi. Int. Vos, P., Hogers, R., Bleeker, M., Reijans, M., van de Lee, T., Hornes, M., Frijters, A.,
J. Parasitol. 39, 251 e 256 . Pot, J., Peleman, J., Kuiper, M., Zabeau, M., 1995. AFLP: a new technique for DNA
Talmi-Frank, D., Abedelmajeed, N., Schnur, L.F., Scho € nian, G., Toz, S.O., Jaffe, C.L., fi ngerprinting. Nucleic Acids Res. 23, 4407 e 4414 .
Baneth, G., 2010. Detection and identi fi cation of old world leishmania by high resolution melt analysis. PLoS Waki, K., Dutta, S., Ray, D., Kolli, B.K., Akman, L., Kawazu, S., Lin, C.P., Chang, K.P.,
Negl. Trop. Dis. 4, e581 . 2007. Transmembrane molecules for phylogenetic analyses of pathogenic protists: leishmania- speci fi c
Tashakori, M., Al-Jawabreh, A., Kuhls, K., Scho € nian, G., 2011. Multilocusmicrosatellite informative sites in hydrophilic loops of trans- endoplasmic reticulum N-acetylglucosamine-1-phosphate
typing shows three different genetic clusters of Leishmania major in Iran. Microbes Infect. Inst. Pasteur. 13, 937 e 942 transferase. Eukaryot. Cell. 6, 198 e 210 .
.
Tibayrenc, M., Neubauer, K., Barnabe, C., Guerrini, F., Skarecky, D., Ayala, F.J., 1993. Weatherly, D.B., Boehlke, C., Tarleton, R.L., 2009. Chromosome level assembly of the
Genetic characterization of six parasitic protozoa: parity between randomprimer DNA typing and multilocus hybrid Trypanosoma cruzi genome. BMC Genomics 10, 255 .
enzyme electrophoresis. Proc. Natl. Acad. Sci. 90, 1335 e 1339 . Weigle, K.A., Valderrama, L., Arias, A.L., Santrich, C., Saravia, N.G., 1991. Leishmanin
skin test standardization and evaluation of safety, dose, storage, longevity of reaction and sensitization. Am. J.
Tokarska, M., Marshall, T., Kowalczyk, R., Wojcik, J.M., Pertoldi, C., Kristensen, T.N., Trop. Med. Hyg. 44, 260 e 271 .
Loeschcke, V., Gregersen, V.R., Bendixen, C., 2009. Effectiveness of microsatellite and SNP markers for Weirather, J.L., Jeronimo, S.M., Gautam, S., Sundar, S., Kang, M., Kurtz, M.A.,
parentage and identity analysis in species with lowgenetic diversity: the case of European bison. Hered. (Edinb). Haque, R., Schriefer, A., Talhari, S., Carvalho, E.M., Donelson, J.E., Wilson, M.E.,
103, 326 e 332 . 2011. Serial quantitative PCR assay for detection, species discrimination, and quanti fi cation of Leishmania spp.
Toledo, A., Martín-Sanchez, J., Pesson, B., Sanchiz-Marín, C., Morillas-Marquez, F., in human samples. J. Clin. Microbiol. 49, 3892 e 3904 .
2002. Genetic variability within the species Leishmania infantum by RAPD. A
M. Akhoundi et al. / Molecular Aspects of Medicine 57 (2017) 1 e 29 29
Weiser, W.Y., Temple, P.A., Witek-Giannotti, J.S., 1989. Molecular cloning of a cDNA Hyg 72, 415 e 420 .
encoding a human macrophage migration inhibitory factor. Proc. Natl. Acad. Sci. Zemanova, E., Jirku, M., Mauricio, I.L., Miles, M.A., Lukes, J., 2004. Genetic poly-
U. S. A. 86, 7522 e 7526 . morphism within the Leishmania donovani complex: correlation with
Weyers, W., 2016. William Boog Leishman - a brief remainder of his life and work geographic origin. Am. J. Trop. Med. Hyg. 70, 613 e 617 .
on the occasion of his 150th birthday. Am. J. Dermatopathol. 38, 436 e 443 . Zemanova, E., Jirku, M., Mauricio, I.L., Horak, A., Miles, M.A., Lukes, J., 2007. The
World Health Organization, 2008. Research to Support the Elimination of Visceral Leishmania donovani complex: genotypes of fi ve metabolic enzymes (ICD, ME, MPI, G6PDH, and FH), new
Leishmaniasis - 2008 Annual Report. www.who.int/tdr/publications/ targets for multilocus sequence typing. Int. J. Parasitol. 37, 149 e 160 .
documents/bl10-annual-report-2008.pdf .
World Health Organization, 2016. http://www.who.int/leishmaniasis/en/ . Zhang, W.W., Matlashewski, G., 2001. Characterization of the A2 e A2rel gene cluster
Wortmann, G., Sweeney, C., Houng, H.S., Aronson, N., Stiteler, J., Jackson, J., in Leishmania donovani: involvement of A2 in visceralization during infection. Mol. Microbiol. 39, 935 e 948 .
Ockenhouse, C., 2001. Rapid diagnosis of leishmaniasis by fl uorogenic polymerase chain reaction. Am. J. Trop.
Med. Hyg. 65, 583 e 587 . Zhang, W.W., Mendez, S., Ghosh, A., Myler, P., Ivens, A., Clos, J., Sacks, D.L.,
Yan, S., Lodes, M.J., Fox, M., Myler, P.J., Stuart, K., 1999. Characterization of the Matlashewski, G., 2003. Comparison of the A2 gene locus in Leishmania donovani and L. major and its control
Leishmania donovani ribosomal RNA promoter. Mol. Biochem. Parasitol. 103, 197 e 210 . over cutaneous infection. J. Biol. Chem. 278, 35508 e 35515 .
Yang, B.B., Chen, D.L., Chen, J.P., Liao, L., Hu, X.S., Xu, J.N., 2013. Analysis of kineto- Zhang, W.W., Ramasamy, G., McCall, L.-I., Haydock, A., Ranasinghe, S.,
plast cytochrome b gene of 16 Leishmania isolates from different foci of China: different species of Leishmania in Abeygunasekara, P., Sirimanna, G., Wickremasinghe, R., Myler, P., Matlashewski, G., 2014. Genetic analysis of Leishmania
China and their phylogenetic inference. Parasites Vector 6, 32 . donovani tropism using a naturally attenuated cutaneous strain. PLoS Pathog. 10, e1004244. http://
Zelazny, A.M., Fedorko, D.P., Li, L., Neva, F.A., Fischer, S.H., 2005. Evaluation of 7SL dx.doi.org/10.1371/journal.ppat.1004244 .
RNA gene sequences for the identi fi cation of Leishmania spp. Am. J. Trop. Med.

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Aspectos moleculares de la medicina 57 (2017) 1 mi 29

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Aspectos moleculares de la medicina

revista Página de inicio: www.elsevier .com / localizar / mam

Leishmania Infecciones: Dianas moleculares y diagnóstico.

Mohammad Akhoundi un , l , * , Tim Downing segundo , 1 , Jan Votýpka C , re , 1 , Katrin Kuhls mi ,

k IRD / UMI 233, INSERM U1175, Universidad de Montpellier, Montpellier, Francia

información del artículo resumen

1.1. La leishmaniasis es un problema global

Figura 1. Classi actualizado fi catión de Leishmania especies

1.4. Los híbridos suponen una nueva amenaza

1.5. Alcance y objetivos

Entre las muestras del Viejo Mundo, la hibridación entre L. donovani

muestras biológicas. Los métodos actuales para diagnosticar la leishmaniasis se limitan

2.1. Detectando Leishmania en infecciones

Aislamiento de Leishmania parásitos en cultivo In vitro cultura de

chr20 con chr36 en L. mexicana chr29 ( Rogers et al., 2011 ). los

Leishmania subgénero Coughlan et al., 2017 ).

Cromosoma MLMT MLST Genes codificantes de proteínas

17 LISTA 7030, M140 Factor de alargamiento-1 alfa (LmxM.17.0080,

18 CSg46, 10F, 22 (Lmj, Li) Aconitasa (LinJ.18.0510, LbrM.18.0570), nucleósido hidrolasa 1 o

Cromosoma MLMT MLST Genes codificantes de proteínas

26 LIST7027, LIST7036, LIST7038, 20 (Lmj), 17 (Lmj), 27 (Ld), Adenina fosforribosiltransferasa (LinJ.26.0120,

Figura 5. Gen Hsp70 utilizado para diagnóstico y tipificación Leishmania especies

Leishmania especie Cupolillo y col., 1994; Castilho et al., 2003 ).

PCR multiplex se refiere a la amplificación simultánea fi catión de varios objetivos de ADN

L. braziliensis y L. guyanensis ( Rougeron et al., 2010 ).

3.1. Classi fi esquema de cationes

Se ha aprovechado una amplia gama de herramientas y marcadores moleculares para abordar

Estadística descriptiva de los diferentes marcadores y cebadores moleculares utilizados para el

sensibilidad y especi fi ciudad (pruebas 3.2. Hibridación entre complejos

€ nian et al., 2010 ). Esto se ilustra con MLST ap-

tropica aethiopica MHOM / ET / 1972 / L100 Consorcio de genomas de cinetoplasto, GCA_000444285

donovani donovani MHOM / NP / 2003 / BPK282 / 0cl4 Downing et al., 2011

mexicana amazonensis MHOM / BR / 1973 / M2269 Real et al., 2013

Sauroleishmania tarentolae adleri MARV / ET / 1975 / HO174 Coughlan et al., 2017

Mundinia martiniquensis MHOM / MQ / 1992 / MAR1 Consorcio de genomas de cinetoplasto, GCA_000409445

enriettii MCAV / BR / 1995 / CUR3 Consorcio de genomas de cinetoplasto, GCA_000410755

El apareamiento dentro de un complejo de especies se puede evaluar utilizando enfoques

4. Detección de alto rendimiento y actualización de los genomas disponibles

der Auwera et al., 2014 ), ha mostrado mezcla entre

mejorar molecular metodologias para diagnosticar Reconocimiento

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