Quanta Lite Aca Ig G III 708625
Quanta Lite Aca Ig G III 708625
Quanta Lite Aca Ig G III 708625
708625
Aplicacin
QUANTA LiteTM ACA IgG III es un ensayo basado en la tcnica ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent
Assay) para la deteccin semi cuantitativa de anticuerpos IgG anticardiolipina. Los anticuerpos
anticardiolipina se utilizan como ayuda para ayudar en la evaluacin del riesgo de trombosis en
pacientes con lupus eritematoso sistmico (LES) o trastornos de tipo lpico.
Procedimiento de trabajo
Los pocillos de la microplaca contienen antgeno cardiolipina altamente purificado que se ha unido en
condiciones que mantienen su estado nativo. Se aaden controles y muestras convenientemente
diluidas en pocillos separados, unindose durante la incubacin los anticuerpos anti cardiolipina al
antgeno que los recubre. El resto de componentes no unidos se elimina mediante lavado y se aade
conjugado anti IgG humana a cada pocillo. Un segundo paso de incubacin permite que el conjugado se
una a los anticuerpos presentes. Tras un lavado que elimina el conjugado sobrante, se aade un
sustrato cromognico y tras incubacin la actividad enzimtica presente en el pocillo es proporcional a la
intensidad de color desarrollado. Una vez que se haya detenido la produccin enzimtica de producto
coloreado, se determina la presencia o ausencia de anticuerpos contra la cardiolipina por medio de la
comparacin de la densidad ptica de la muestra con la de una curva de calibracin de cinco puntos.
Los resultados se dan a conocer de forma semicuantitativa en unidades estndar de anticardiolipina IgG
(GPL).
Reactivos
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Advertencias
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Dado que se utiliza azida sdica como conservante, este producto puede ser txico por ingestin
o absorcin a travs de piel o mucosas. La azida sdica puede reaccionar con el plomo o cobre
de las tuberas para formar azidas metlicas potencialmente explosivas. Si se utilizan desages
para la eliminacin de reactivos se recomienda lavarlos con abundante agua para prevenir la
formacin de dichas azidas metlicas.
El Conjugado HRP contiene diluido un producto qumico venenoso y corrosivo que puede ser
txico si se ingiere. Para impedir quemaduras, evitar el contacto con piel o ojos.
El Cromgeno TMB contiene un irritante. Puede ser daino si es inhalado, ingerido o absorbido
por la piel. Evitar la inhalacin, ingestin o contacto con piel y ojos.
La Solucin de parada HRP consiste de una solucin diluida de cido sulfrico. Evitar exposicin
a bases, metales, u otros compuestos que puedan reaccionar con cidos. El cido Sulfrico es
venenoso y corrosivo, puede ser txico si ingerido. Para impedir quemaduras, evitar contacto con
piel y ojos.
Se recomienda utilizar el equipo protector apropiado al trabajar con este kit.
Los reactivos derramados deben limpiarse inmediatamente. Siga las normas aplicables en su
laboratorio acerca de la eliminacin de residuos.
Precauciones
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Condiciones de Almacenaje
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Guardar todos los reactivos del kit en nevera a 2-8C. No congelar. Los reactivos son estables
hasta la fecha de caducidad si son almacenados y manipulados correctamente.
Las tiras sin utilizar deben volverse a guardar en la bolsa de aluminio que contiene desecantes
cerrndola hermticamente y almacenndola a 2-8C.
La solucin de lavado diluida es estable 1 semana a 2-8C.
Recoleccin de Muestras
Este kit requiere suero como muestra. La adicin de azida u otros conservantes a las muestras puede
afectar adversamente los resultados. No deben utilizarse muestras contaminadas, tratadas por calor o
que contengan partculas visibles. Deben asimismo evitarse las muestras lipmicas o hemolizadas.
Tras la recoleccin de las muestras de sangre, el suero debe ser separado del cogulo. El documento
NCCLS H18-A3 recomienda las siguientes condiciones de almacenaje para muestras: 1) Guardar las
muestras a temperatura ambiente no ms de 8 horas. 2) Si el ensayo no se va completar en 8 horas,
refrigerar la muestra a 2-8C. 3) Si el ensayo no se va completar entre 48 horas, o para enviar las
muestras, congelar a -20C o a temperatura inferior. Una vez descongeladas las muestras deben
agitarse bien antes de utilizarse.
Procedimiento
Materiales Suministrados
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
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Metodologa
Antes de empezar
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Procedimiento de Ensayo
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Control de Calidad
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Los controles Control ACA IgG III ELISA, Calibrador A ACA IgG III ELISA y Control Negativo
ACA deben procesarse con cada lote de muestras para asegurar que todos reactivos y
procedimientos funcionan correctamente.
El usuario debe notar que debido a que los controles Control ACA IgG III ELISA, Calibrador A
ACA IgG III ELISA y ACA Negativo son prediluidos, no controlan procedimientos asociados con
dilucin de especmenes.
Pueden aadirse controles adicionales segn las directivas o requisitos del laboratorio. Pueden
prepararse controles vlidos haciendo alcuotas de un pool de suero humano que debe
almacenarse a < -20C.
Para considerar vlidos los resultados deben considerarse satisfechos todos los criterios
especificados a continuacin, si alguno de ellos no se cumple la prueba debe considerarse
invlida y repetirse.
a.
La absorbancia del control Calibrador A ACA IgG III ELISA debe ser superior a la del
Control ACA IgG III ELISA y la de este debe ser superior a la del control negativo.
b.
El control Calibrador A ACA IgG III ELISA debe tener una absorbancia mayor que 1.0
mientras que la del control negativo no debe exceder de 0.2.
c.
La absorbancia del Control ACA IgG III ELISA debe ser superior al doble del control
negativo, u oscilar entre 0.25.
d.
La concentracin del Control ACA IgG III ELISA debe estar dentro del rango especificado
en la etiqueta.
e.
El usuario puede referirse al documento NCCLS (National Committee of Clinical
Laboratory Standards) C24-A3 para una gua adicional acerca de buenas prcticas de
laboratorio.
Clculo de Resultados
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3.
En la actualidad, se est investigando la relevancia clnica del ACA en otras enfermedades que
no sean LES.
En los estudios publicados sobre el LES, la incidencia de un ACA positivo es del 23 al 54% para
IgG y del 5 al 40% para IgM.
Cuando se encuentran ttulos ACA negativos en presencia de indicios clnicos, puede estar
indicado un anticoagulante lpico u otras pruebas adicionales como, por ejemplo, el anti-2 GPI.
No se puede realizar un diagnstico tomando como base slo los resultados de ACA. stos se
deben interpretar junto con los hallazgos fsicos.
No se debe iniciar el tratamiento solo por un ttulo positivo de ACA. Tambin debe haber
indicaciones clnicas que lo respalden.
Un alto porcentaje de pacientes con sfilis activa confirmada o seropositiva tiene niveles altos de
ACA. Por lo tanto se deben emprender procedimientos de confirmacin a fin de descartar la
sfilis.
Los ACA pueden aparecer en forma transitoria en diversas infecciones. Los pacientes que dan
positivo en ACA deben volver a ser sometidos a la prueba luego de esperar un tiempo adecuado.
La presencia de inmunocomplejos u otros agregados de inmunoglobulinas en la muestra del
paciente puede producir un aumento de uniones inespecficas y causar falsos positivos en este
ensayo.
La funcionalidad del ensayo no ha sido establecida para matrices diferentes del suero.
Los resultados de este ensayo deben utilizarse conjuntamente con hallazgos clnicos y otras
pruebas serolgicas.
Si no se calienta y mezcla bien el concentrado de PBS para ACA antes de utilizarlo, pueden
obtenerse resultados incoherentes.
Valores Esperados
Rango Normal
Se analizaron 488 muestras aleatorias de donantes normales para ACA de tipo IgG III. De este total,
tres muestras se encontraban dentro del rango indeterminado de 15 a 20 GPL. Se encontraron tambin
cinco muestras positivas durante la realizacin de las pruebas normales aleatorias. Se estableci que
dichas muestras eran realmente positivas en funcin de pruebas adicionales realizadas con otros kits
comerciales que disponen de la autorizacin 510 (k). En el 97.6% de las muestras normales se
encontraron valores inferiores a 15 GPL.
96.6%
98.7%
97.3%
HCAL 1:100
HCAL 1:200
HCAL 1:400
HCAL 1:800
HCAL 1:1600
HCAL 1:3200
OD
1.469
1.011
0.607
0.326
0.184
0.103
En la curva de muestra anterior, el punto de corte de 15 GPL correspondera a 0.0282 g/mL del HCAL.
Cada laboratorio necesita determinar su propio rango normal.
Precisin y Reproducibilidad
La precisin y reproducibilidad entre ensayos fue evaluada analizando dos rplicas de un positivo y
negativas en cuatro ensayos separados. La precisin y reproducibilidad durante los ensayos fue
evaluada analizando diecisis rplicas de un fuerte y negativas en un nico ensayo. La media unidades,
la desviacin estndar y el coeficiente de variacin de las muestras se resumen a continuacin.
Global
Intra ensayo
Inter ensayo
Positivo
Media GPL
84.6
79.5
89.8
DE
2.5
1.0
4.0
%CV
2.8%
1.3%
4.4%
Negativo
Media GPL
5.0
4.6
5.3
DE
0.4
0.3
0.4
%CV
6.8%
6.4%
7.3%
QUANTA Lite y INOVA Diagnostics son marcas comerciales registradas de Derecho de Autor 2011 Todos los
derechos reservados
Referencias
1
2.
3.
4.
Fabricante:
INOVA Diagnostics, Inc.
9900 Old Grove Road
San Diego, CA 92131
United States of America
Technical Service (U.S. & Canada Only) :
877-829-4745
Technical Service (Outside the U.S.) : 00+ 1 858-805-7950
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628625ESP
July 2011
Revision 18