UNIVERSIDAD DEL MAGDALENA

FACULTAD E INGENIERIA
PROGRAMA DE INGENIERIA AGRONOMICA
SANTA MARTA D. T.C.H.

MICROBIOLOGIA AGRICOLA
GRUPO #2

2021-1
 Objetivos
Establecer la forma adecuada de desarrollar las diferentes técnica y métodos de la tinción de
Gram.
Determinar si una bacteria es Gram positivas o Gram negativas.
Identificar las características morfológicas de las bacterias mediante la técnica de tinción de
Gram.
Comprender los pasos necesarios para realizar la tinción de Gram y su fundamento.

Introducción
Debido a que las bacterias y otros microorganismos tienen un tamaño pequeño, se requiere de
tinciones biológicas para visualizarlos, demostrar detalles de su estructura interna o de algunas
funciones fisiológicas, en este informe se presenta la tinción de gram, la cual permite identificar la
morfología celular bacteriana y es útil para diferenciar bacterias grampositivas de las bacterias
gramnegativas, esta diferenciación se fundamenta principalmente en la composición de la pared
celular, las principales características en la pared celular para que las bacterias gramnegativas no se
tiñan con el cristal violeta es porque tienen una pequeña proporción de peptidoglicano comparado
con las grampositivas que adicionalmente presentan una capa de lipopolisacaridos en su membrana
externa, todo esto impide que las bacterias gramnegativas adquieran la coloración.

MARCO TEORICO
IMPLEMENTACIÓN DE TINCIÓN DE GRAM

Para aplicar la tinción de gram es de gran importancia conocer su mecanismo y ventajas, así como
también la correcta aplicación de sus conceptos básicos, esto para un acertado proceso en la practica
y para realizar la adecuada diferenciación de bacterias positivas y negativas.

La tinción de gran está fundamentada, de acuerdo a Lopez et al (2013), en la composición y

estructura de la pared celular, la cual permite retener o no el primer colorante en las bacterias, lo que
permite reaccionar con el colorante de contraste.

Rodriguez y Arenas (2018) establecían que las bacterias pueden clasificarse gracias a la tinción de
gram en estos grupos:
Bacterias Gram Negativas: Compuestas por Bacterias Gram Positivas: Compuestas por una
una capa fina de peptidoglicano, una membrana pared celular gruesa de peptidoglicano, no cuenta con
celular externa y unos lipopolisacáridos. Se tiñen membrana celular externa. Se tiñen de un color
de un color rosado rojizo, después de aplicar la violeta intenso, luego de aplicar la tinción.
tinción.
 Tipos de colorante: Se debe definir este punto ya que es una herramienta que orienta a diferenciar el
tipo de bacteria según la tinción. (Corrales y Caycedo 2020).
Cristal Violeta: Según Baggini (2007), está formado por la combinación de N-tetra, N-penta y
N-hexametil p-rosanilinas, es el colorante inicial. Se aplica sobre el frotis anteriormente
preparado. Tiñe a bacterias gram negativas.
Lugol: Formado por la mezcla de yodo y yoduro potásico. Potencia el cristal violeta, logrando
que este se precipite, fijando la tinción entre colorante y células. (Baggini, 2007).
Alcohol Acetona: Actúa
Materiales como solución, no es una
sustancia pura como
ELEMENTOS DE USO OBLIGATORIO POR LOS ESTUDIANTES Lugol. Captura las
moléculas de agua de la
membrana por sus
propiedades
deshidratantes, de este
modo se obtiene el efecto
Guantes de nitrilo Bata de laboratorio Tapa Bocas Gafas de proteccion decolorante en bacterias
gram negativas. (Corrales
REACTIVOS Y EQUIPO BRINDADO POR EL LABORATORIO
y Caycedo, 2020).
Safranina: Su efecto
diferenciador tiñe
bacterias gram negativas.
cristal

Se utiliza para identificar

safranina
violeta

las bacterias decoloradas

Cristal
Safranina Microscopio Mechero solucion salina de color rojo, resaltando
violeta
las bacterias gram
Asa bacteriana punta positivas (preservan el
redonda color azul) y bacterias
acetona
alcohol
lugol
gram negativas
(decoloradas). (Baggini,
Acetona lugol
Medio de cultivo 2007).
alcohol Laminas portabojetos
bacteriano

Pinza

Puente decolorante
Aceite de inmersion Marcador Agua destilada

Todos los insumos de laboratorio como pipetas espatulas prohibe la entrada de agentes infecciosos al laboratorio con el
materiales de vidrio etc. deben de estar debidamente fin de reducir la exposicion de los materiales biologicos y
esterilizados metodo seguro de trabajo personal
 METODOLOGIA

Paso1. Ubicar el puente de colorante y mechero en un lugar plano y seguro para el previo montaje
del material biológico al portaobjeto, garantizando que la muestra se trabaje en condiciones de
esterilidad. Luego tomar una lámina de portaobjeto previamente esterilizada y depositar una pequeña
gota de soluciónsalina

Paso 2.
A)Tomarar el asa bacteriológica y flamear hasta enrojecimiento.
B)Dejar enfriar un poco y tomar una pequeña muestra del cultivo bacteriano.
C)Frotar sobre el portaobjeto hasta incorporar por completo la muestra bacteriana,
(Flamear el asa al finalizar para esterilizar).
Paso 3. Tomar el porta objeto con una pinza y pasarlo intermitentemente sobre el mechero hasta
lograr la evaporación de la solución salina

TINCION CON COLORANTES DE GRAM

La tinción de Gram es una técnica que se basa en el uso de colorantes que permite observar las
bacterias mejor bajo el lente del microscopio

LOS SIGUIENTES PASOS HACERLOS BAJO EL PUENTE DE COLORANTES

 Paso 4. Añadir unas pocas gotas de cristal
violeta a la muestra biológica deja incubar por
un minuto posteriormente quita el exceso de
cristal
violeta
colorante con un poco de agua destilada

Paso 5. Añadir unas gotas de Lugol a la muestra

biológica, dejar incubar por 1 minuto, este
actuara como solución mordiente, luego quitar el
exceso de colorante con un poco de agua safranina

destilada.

Paso 6. Añadir unas gotas de alcohol acetona

muestra, dejar actuar por 30 segundos,
este ayudara como decolorante de las células
acetona
bacterianas. luego quitar el exceso con un poco
de agua destilada
alcohol

Paso 7. Por último añadir unas gotas de safraninaa

la muestra biológica, dejar incubar por 1
minuto,este ayudara a teñir las bacterias de color
rojo o azul para su previa identificación en el lugol

microscopio, luego quitar el exceso de colorante

con un poco de agua destilada.

Paso 9. Tomar el portaobjeto y ubicarlo Paso 9. Añadir una gota de aceitede inmersión,
correctamente en la platinadel microscopio, enfocar con el objetivo 100x, observar los
enfocar con el objetivo de menor aumento 4x, resultados.
observar los resultados.
 PREGUNTAS COMPLEMENTARIAS

¿Cuáles son las soluciones utilizadas en el método de coloración Tinción Gram?

Según las investigaciones realizadas por (Botero et al. 2013). Se utiliza el cristal violeta que este
funciona como un primer colorante, luego se agrega el Lugol o solución mordiente, que actúa como
fijador del primer colorante, posteriormente se le agrega alcohol que actúa como descolorante de las
tinciones y por último se utiliza la safranina que es la que permite saber si la bacteria a estudiar es
Gram positiva o Gran negativa.

¿Cuál es la diferencia entre Gram Positiva o Gram negativa?

La diferencia es que las Gram positiva presentan una capa más gruesa de peptidoglicano y estas
carecen de membrana externa lo que hace que se retenga el cristal violeta, luego de la descoloración
apareciendo el color morado, y las Gram negativa presentan una capa más delgada de peptidoglicano,
estas presentan una membrana externa más delgada, luego de la descoloración esta toma color rosado
(Contreras, 2012).

BIBLIOGRAFIAS

Aulton Michael E. (2004): Ciencia y diseño de formas farmacéuticas. España: Elsevier,

segunda edición, 2004.
Bergey, David H.; Holt, John G.; Krieg, Noel R.; Sneath, Peter H. A. (1994): Bergey's
manual of determinative bacteriology. Lippincott Williams & Wilkins, novena edición,
1994. ISBN 0-683-00603-7.
Gram, C. (1884). The differential staining of Schizomycetes in tissue sections and in dried
preparations. Fortschritte der Medizin, 2, 185-9. Disponible en
https://web.archive.org/web/20160610220109/http://www.asmusa.org/ccLibraryFiles/FILE
NAME/0000000235/1884p215.pdf
Madigan, M. T; Martinko J., Parker J. (2004): Brock biology of microorganisms.
Lippincott Williams & Wilkins, décima edición, 2004. ISBN 0-13-066271-2.
Søgaard, M.; Nørgaard, M.; Schønheyder, H. (2007): «First notification of positive blood
cultures: high accuracy of the Gram stain report», artículo en la revista Journal of Clinical
Microbiology, 45: pág. 1113; 2007.
Rodríguez, P., Arenas, R (2018). Hans Christian Gram y sustinción. Dermatología
Cosmética, Médica y Quirúrgica. 16(2),166-167.
López, L., Hernández, M., Colín, C., Ortega, S., Cerón, G. y Franco, R (2013). Las tinciones
básicas en el laboratorio de microbiología. Investigación en Discapacidad, 3(1), 10-18.
Baggini, S (2007). LA COLORACION DE GRAM. Recuperado de
https://www.academia.edu/32255940/LA_COLORACION_DE_GRAM_pdf.
Corrales, L y Caycedo, L (2020). Principios fisicoquímicos de los colorantes utilizados en
microbiología. Nova, 18(33), 73-100.