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    Guía de Práctica de 3 RD

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    Jorge Luis Jeremias Espejo
    Este documento presenta una guía para una práctica de laboratorio sobre la determinación de calcio en suero sanguíneo mediante espectrofotometría. Los objetivos son conocer el funcionamiento del espectrofotómetro y analizar muestras de suero para medir la concentración de calcio. Se describen los equipos, reactivos, procedimiento que involucra la reacción del calcio con un complejo colorante y lectura en el espectrofotómetro, y cálculo de resultados. Se proporcionan valores de referencia para el calcio

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    Este documento presenta una guía para una práctica de laboratorio sobre la determinación de calcio en suero sanguíneo mediante espectrofotometría. Los objetivos son conocer el funcionamiento del espectrofotómetro y analizar muestras de suero para medir la concentración de calcio. Se describen los equipos, reactivos, procedimiento que involucra la reacción del calcio con un complejo colorante y lectura en el espectrofotómetro, y cálculo de resultados. Se proporcionan valores de referencia para el calcio

    Descripción original:

    BIOQUIMICA

    Título original

    GUÍA DE PRÁCTICA DE 3 RD

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    GUÍA DE PRÁCTICA DE LA ASIGNATURA DE BIOQUIMICA

    CODIGO: 552128 PLAN DE ESTUDIOS: 2015

    SEMANA: 3

    LUGAR DE PRÁCTICAS:

    SL01LA19- Ciudad Universitaria Chorrillos

    TEMA O SESIÓN PRÁCTICAS:

    DETERMINACIÓN DE CALCIO POR ESPECTROFOTOMETRÍA

    OBJETIVOS/COMPETENCIAS:

    - Conocer el diagrama estructural del equipo espectrofotómetro, las funciones de las


    partes y los cuidados que deberá tener al operar el equipo para el análisis cuantitativo
    en el espectro visible.
    - Analizar muestras de sangre para determinar la concentración de calcio.
    ACTIVIDAD PROGRAMADA:

    - Espectrofotometría
    - Componente espectrofotométrico

    El calcio es esencial en la mayoría de las reacciones de la coagulación sanguínea y en la


    regulación de la excitabilidad de las fibras musculares. Su concentración en suero y orina está
    regulada por la acción de factores tales como niveles de parathormona, vitamina D y fósforo,
    observándose fluctuaciones fisiológicas debidas a edad, sexo, embarazo, actividad física,
    cambios estacionales (por acción de la luz solar). La hipercalcemia está relacionada con distintas
    patologías: hiperparatiroidismo, neoplasias óseas, intoxicaciones con vitamina D. La
    hipocalcemia se asocia con desórdenes tales como hipoparatiroidismo, deficiencia de vitamina
    D, malabsorción.

     FUNDAMENTOS DEL MÉTODO


    El calcio reacciona con la cresolftaleín complexona (cfx) a pH 11, dando un complejo de adición
    color magenta que se mide fotocolorimétricamente a 570 nm
    EQUIPOS Y/O INSTRUMENTOS Y/O MATERIALES A UTILIZAR

     EQUIPOS:  INSUMOS:
     Espectrofotómetro  Algodón
     Centrifuga  Alcohol
     Ligadura
     MATERIALES:  4 Aguja hipodermica N° 20, 21
     Micro pipeta de 50µL  Esparadrapo
     Pipeta 5ml
     4 Tubos de ensayo  MUESTRA:
     1 Gradilla  Suero sanguineo
     4 Cubetas de espectrofotómetro
     Escobilla para tubos

     REACTIVOS:
     Kit Para Determinación de Calcio (Wiener
    Lab.), Contiene:
     Reactivo A: Solución de Cresolftaleín
    Complexona 3,7 mmol/l.
     Reactivo B: Solución De Aminometil
    Propanol (Amp) 0,2 mol/l. En
    Metanol 35% V/V Para pH Final 11. S.
     Standard: Solución de Calcio 10
    mg/dl.
    PROCEDIMIENTO/S:

    1. Se aconseja trabajar directamente en tubos o cubetas espectrofotométricas, de manera de


    poder determinar un Blanco interno para cada ensayo, condición indispensable para
    controlar las trazas de calcio que pudieran haber escapado al proceso de lavado del material.
    En dos tubos marcados S (Standard) y D (Desconocido) colocar:
    S D
    Reactivo A 50 µL 50 µL
    Reactivo B 3,5 mL 3,5 mL

    2. Dejar reposar por 5 min a temperatura ambiente


    3. Leer en espectrofotómetro a 570 nm o en fotocolorímetro con filtro rojo (560-590 nm)
    llevando el aparato a cero con agua destilada.
    CALCULO DE LOS RESULTADOS
    Corregir las lecturas restando los Blancos internos correspondientes:
    Calcio sérico = D x f
    10 𝑚𝑔/𝑑𝐿
    𝑓=
    𝑠
    𝑫
    𝒄𝒂𝒍𝒄𝒊𝒐 𝒖𝒓𝒊𝒏𝒂𝒓𝒊𝒐 (𝒎𝒈 /𝟐𝟒𝒉𝒐𝒓𝒂𝒔) =
    𝑺
    VALORES DE REFERENCIA
    Suero: 8,5 - 10,5 mg/dl
    Orina: hasta 300 mg/24 hs (para una dieta normal)
    RESULTADOS/S O COMPETENCIAS LOGRADAS:
    OBSERVACIÓN/ES:

    REFERENCIA BIBLIOGRAFICA:

     Martinek, R.G. - J. Am. Med. Techn. 33:416 (1971)


     Rojkín, M. L. y Mariani, M.C.O. de - Bioquím. Clín. VII/4:405 (1973).
     Lorenzo, L.E. Drappo, G.A. - 1o Congreso Argentino de Osteología y Metabolismo
    Mineral - Rosario (1984). - Drappo, G.; Lorenzo, L.; - Revista ABA No 239 pág. 230, 1979.
     Young, D.S. - "Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests", AACC Press, 4th ed., 2001.
    SUGERENCIAS Y/O RECOMENDACIONES

    NOMBRE DEL JEFE DE PRACTICA Y/O DOCENTE:

    - Mg. Q.F Araceli Cordova Tapia.

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