AGAR CHOCOLATE

1. FINALIDAD
Agar chocolate es un medio enriquecido y no selectivo para cultivo de bacterias sensibles
y exigentes

Registro ANVISA:
10097010-137
Presentación: LB 172307
540158 – CHOCOLATE ENRIQ.-AGAR-20mL-PL90X15-10PL Rev. 09 – 12/2019
540198 - BIPLACA-CHOCOLATE ENRIQ.-AGAR-2X10mL-10PL

1. INTRODUCCIÓN - No usar materiales con la fecha de caducidad expirada o que

Agar Chocolate consiste en un medio enriquecido con complemento presenten sello de calidad roto o alterado.
VX de tal forma que favorece el crecimiento de diversos patógenos - Antes de descartar el material usado, esterilizar en autoclave a
fastidiosos como Haemophilus spp. y Neisseria spp. aislados de 121ºC por 20 minutos. Para condicionamiento del material usado,
materiales clínicos nobles (LCR, aspirados invasivos) o no (sangre, recomendamos el uso de Detrilab.
secreciones) entre otros. La adición de bacitracina al medio facilita
el desarrollo de especies como Haemophilus spp., promoviendo
ligera inhibición sobre algunos microorganismos de la microbiota. 4. INFORMACIONES GENERALES SOBRE EL PRODUCTO
Indicado para la investigación clínica de microorganismos a- Principio
fastidiosos en muestras de origen noble y en muestras de El medio contiene nutrientes nitrogenados en forma de caseína y
secreciones. peptonas de carne, tampón de fosfato para mantener el pH y
Carpenter y Morton describieron un medio mejorado para el almidón de maíz, que neutraliza los ácidos grasos tóxicos que
aislamiento del gonococo en 24 horas. La eficacia de este medio, pueden estar presentes en el agar. La hemoglobina suministra el
Agar GC complementado con hemoglobina y concentrado de factor X (hemin) y el calor libera el factor V (nicotinamida adenina
levadura, se demostró en un estudio de doce medios utilizados en la dinucleótido NAD) para el desarrollo de las especies de
altura para el aislamiento de este microorganismo. La BBL® mejoró Haemophilus spp. El enriquecimiento favorece una mayor
el medio sustituyendo el concentrado de levadura por el concentración de los factores V y X, además de vitaminas,
complemento de enriquecimiento IsoVitaleX Enrichment®, un aminoácidos, coenzimas, dextrosa, ion férrico y otros factores que
complemento definido químicamente, desarrollado especialmente mejoran la recuperación de microorganimos fastidiosos, como
para auxiliar en el crecimiento de gonococos, aunque se aplique Neisseria spp. y Haemophilus spp.
ampliamente a otros microorganismos como, por ejemplo, el
Haemophilus spp. y Streptococcus pneumoniae. b- Almacenamiento y estabilidad
Para el transporte, el producto puede permanecer a temperatura
ambiente hasta por 72h. En el laboratorio las placas se deben
2. COMPOSICIÓN almacenar a temperaturas entre 2 a 12ºC, condiciones en las que se
mantienen estables hasta la fecha de caducidad impresa en el
Formulación Concentración/L rótulo, siempre que libre de contaminación de cualquier naturaleza.
Hidrolizado pancreático de caseína 7,5 El uso de refrigerador tipo frost-free no es recomendable para
Peptona de carne 7,5 medios de cultivo debido al efecto deshidratante de este tipo de
Fosfato dipotásico 4,0 equipo.
Fosfato monopotásico 1,0
Almidón de maíz 1,0 Considerando que este producto es gelatinoso y su composición
Cloruro de sodio 5,0 puede presentar hasta 80% de agua, al sufrir variación de
Ágar Base 13,0
temperatura (caliente-fría o fría-caliente) todo medio de cultivo
Hemoglobina 10,0
puede generar condensación, de poca a mucha, acumulándose
Complemento VX 10 mL
agua en la placa. Se recomienda guardar las placas con los medios
H2O ultra purificada 1L
de cultivo hacia arriba y, cuando necesario, despreciar el agua
pH 7,3 ±0,2 a 25ºC
acumulada y dejar estabilizar el medio de cultivo a temperatura
antes de utilizarlo.
La fórmula se puede ajustar y/o complementar siempre que sea
Conforme descripto en la literatura, el laboratorio debe retirar de la
necesario cumplir criterios de desempeño del producto.
refrigeración apenas la cantidad de producto que necesite utilizar en
su rutina y dejarlo estabilizar a temperatura, o secar el agua
condensada, antes de su utilización, a temperatura ambiente,
3. MUESTRA
pudiendo utilizar la incubación en estufa (± 37ºC) para reducción del
a- Tipos de muestras
tiempo de secado o estabilización. No se recomienda la repetición
- Se pueden utilizar muestras clínicas como: orina, secreciones y
del proceso de refrigeración/estabilización, la constante alteración
otros fluidos corporales, materiales biológicos diversos, muestras o
de temperatura puede llevar a la deshidratación del medio, exponer
cualquier otra muestra que pueda contener microorganismos con
el producto a contaminaciones o generar una excesiva acumulación
capacidad de desarrollarse en este producto.
de agua.
- El laboratorio debe establecer criterios de recolección, rechazo y
El agua acumulada por condensación, ocasionada por variación de
conservación de las muestras, de acuerdo con su política de
temperatura, no influye en el desempeño del producto, desde que
calidad.
este no presente desecamiento o disminución de espesura.
-Siempre considerar las necesidades específicas de los
Debido a la presencia de substratos sensibles, se recomienda
microorganismos que se quieren recuperar en los análisis,
mantener el producto protegido de la incidencia directa de luz
microorganismos con necesidades especiales (complementos
(natural o artificial) y evitar grandes variaciones de temperatura
específicos o ambientes controlados) pueden no presentar
hasta su utilización.
crecimiento adecuado si sembrados en medio de cultivo que no
presente los requisitos mínimos.
d- Precauciones y cuidados especiales
- El producto está destinado apenas para el uso diagnóstico in vitro;
b- Precauciones y cuidados especiales
- Uso restricto por profesionales;
- Producto destinado al uso diagnóstico in vitro;

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- Mismo tratándose de producto libre de agentes infecciosos, se pequeñas (1 a 3 mm), habitualmente

recomienda tratar este producto como potencialmente infeccioso, brillantes, con coloración verdosa
observando el uso de equipos de protección individual y colectiva; Colonias redondas, convexas, opacas,
- No inhalar o ingerir; dimensiones pequeñas (1 a 3 mm),
Moraxella catarrhallis coloraciones variando entre gris claro a
- No utilizar placas con señales de contaminación, desecamiento o ligeramente verdosas, cuando tocadas
con alteraciones de color o espesura; deslizan sobre el medio de cultivo
- No usar materiales con la fecha de caducidad expirada o que permaneciendo intactas
presenten sello de calidad roto o alterado;
- Se recomienda la lectura de la directriz aprobada para “Protección - Esquemas de identificación:
de Trabajadores de Laboratorio e Infecciones laborales - CLSI®
M29-A” para una manipulación segura; Coloración de Gram: la presencia de cocos o diplococos Gram-
- El procedimiento de descarte del producto se basa en la RDC 222 negativos en muestras del tracto respiratorio es fundamental para el
(ANVISA) de 28 de marzo de 2018, que reglamenta las buenas direccionamiento de las pruebas bioquímicas.
prácticas de gestión de residuos de servicios de salud.
- Para condicionamiento del material a ser esterilizado, Especie* Glucosa Sacarosa Maltosa Lactosa ONPG
recomendamos el uso de bolsas para autoclave - Detrilab. Neisseria
- Contacte el servicio de vigilancia sanitaria de su región para + - - - -
gonorrhoeae
garantizar el cumplimiento correcto de la legislación de descarte de
Neisseria
productos potencialmente contaminantes. + - + - -
meningitidis
Neisseria
- - - - -
5. MATERIALES Y EQUIPOS NECESÁRIOS (no incluidos) flavescens
- Estufa bacteriológica; *Las especies de Neisseria presentan Catalasa y Oxidasa positivas.
- Asas bacteriológicas;
- Mechero de Bunsen; Especies
Glucosa Ribosa Ornitina Indol Ureasa
H. influenzae*
- Sistema de generación de CO2;
Biotipo I + + + + +
- Jarra herméticamente cerrada para tensión de CO2.
Biotipo II + + - + +
Biotipo III + + - - +
Biotipo IV + + + - +
6. PROCEDIMIENTO TÉCNICO Biotipo V + + + + -
a- Retirar el paquete de la refrigeración y, en ambiente aséptico, Biotipo VI + + + - -
separar las placas que se utilizarán, devolviendo el resto al Biotipo VII + + - + -
refrigerador; Biotipo VIII + + - - -
b- Colocar las placas en estufa bacteriológica entre 35-37ºC por el *Todos los biotipos de H. influenzae presentan resultados para
tiempo necesario para que adquieran esta temperatura o dejar Sacarosa y Lactosa negativos.
estabilizar/secar a temperatura ambiente;
c- Usando procedimientos adecuados, proceder a la inoculación del Especie Catalasa α-hemólisis Optoquina MTS
material directamente en la superficie del medio; Streptococcus
- + Sensible -
d- Incubar el material bajo tensión de CO2 en estufa bacteriológica pneumoniae
entre 35-37ºC/18-24h;
Colonias
e- Tras la incubación, verificar el crecimiento y la ocurrencia de Especie Catalasa Oxidasa
móviles
MTS
hemólisis si fuera el caso (evidenciada a través de la visualización Moraxella
de un halo alrededor de la colonia); + + SÍ -
catarrhallis
f- Debido a exigencias especiales, algunos microorganismos pueden
necesitar de un periodo mayor de incubación, si no ocurre el Los esquemas de identificación sugeridos se obtuvieron en la
crecimiento en las primeras 24 horas o el crecimiento obtenido no literatura especializada, cabe al laboratorio definir el proceso de
es suficiente, incubar el material bajo tensión de CO2 en estufa identificación que mejor atiende su necesidad y rutina.
bacteriológica entre 35-37ºC, por más18-24h;
g- Tras el total desarrollo de las colonias, proceder con los procesos
de identificación conforme establecido en su laboratorio; 8. LIMITACIONES DEL MÉTODO
h- La evaluación microscópica de coloraciones de Gram de la (Riesgos Residuales Identificados conforme RDC 36/2015)
muestra y, si necesario, de la colonia analizada puede elucidar - La utilización de sangre en la fórmula puede acarrear ligera
dudas y ofrecer un direccionamiento más adecuado para el proceso fotosensibilidad, se recomienda proteger el producto de la incidencia
de identificación. directa de la luz.
- Una vez que este medio no es selectivo, otros agentes patógenos,
o no, se pueden desarrollar. Para casos que presenten crecimiento
7. RESULTADOS de múltiples microorganismos, se recomienda la utilización de
Informe medios selectivos para un mejor aislamiento.
- No hubo crecimiento: - Algunas variaciones de coloración en la colonia, morfología,
“Ausencia de crecimiento microbiano en la muestra analizada tamaño o intensidad de hemólisis pueden ocurrir, debido a
después de 24/48h de incubación a 35ºC”; características únicas de la cepa analizada.
- Si hay crecimiento: - La presencia de más de una variante genética intrínseca a la cepa
“Nombre del microorganismo (indicar bacteria identificada) Contaje analizada puede interferir en las características de crecimiento. Es
de colonias (indicar resultado) UFC/mL“. (apenas cuando aplicable) posible que características únicas o mutadas de la cepa puedan
interferir en el desempeño del medio de cultivo afectando o
Morfologías típicas de las colonias en agar Chocolate: retardando el total desarrollo de las colonias.
Microorganismo Morfología - Inoculaciones con exceso de carga bacteriana pueden interferir en
Dimensiones pequeñas (1 mm), la evaluación de resultados.
Haemophilus influenzae húmedas, aspecto de perla y olor
característico - La presencia de más de un microorganismo en la muestra puede
Neisseria gonorrhoeae Dimensiones pequeñas (1 a 2 mm), de ocasionar superposición de colonias en la superficie del medio de
incoloras a blancas grisáceas y mucoides cultivo, dificultando su identificación, para estos casos, se
Dimensiones de medias a grandes (2 a 8 recomienda el reaislamiento de las colonias diferentes, manteniendo
Neisseria meningitidis
mm), incoloras a ligeramente grises, a el contaje de la placa inicial.
veces presentan una tonalidad azulada, - La calidad de los resultados de análisis microbiológicos está
mucoides íntimamente relacionada con la calidad de la muestra, las mejores
Streptococcus pneumoniae Colonias bajas, de dimensiones

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prácticas preanalíticas, como cuidados extremos con la asepsia del

Streptococcus 138/143 96.5% 206/207 99.5%
proceso o paciente, garantizan un mejor resultado. pneumoniae (93,4 – 99,1%) (96,3 – 100%)
- Aunque se puedan realizar algunas pruebas de diagnóstico
directamente en este medio de cultivo, es necesaria la realización
de pruebas bioquímicas para una completa identificación y, si
indicado, la realización de pruebas inmunológicas usando cultivos 10. GARANTÍA DE CALIDAD
puros. Consultar la bibliografía apropiada para más informaciones. Laborclin obedece a lo dispuesto en la Ley 8.078/90 - Código de
Defensa del Consumidor. Para que el producto presente su mejor
- Los resultados falsos negativos pueden ocurrir, con mayor desempeño, es necesario:
frecuencia, en las siguientes situaciones: - que el usuario conozca y siga rigorosamente el presente
 Técnica de recolección inadecuada procedimiento técnico;
 Incubación sin tensión de CO2 - que los materiales se almacenen en las condiciones indicadas;
 Incubación a temperatura inadecuada - que los equipos y demás accesorios necesarios estén en buenas
 Uso de antimicrobiano previo condiciones de uso, mantenimiento y limpieza.
 Utilización de asa flambeada no resfriada Antes de ser liberado para venta, cada lote del producto se somete
 Tiempo de incubación insuficiente a pruebas específicas, que se repiten periódicamente conforme
calendario establecido por la empresa hasta la fecha de caducidad
 Infección crónica (infección poco activa)
impresa en el rótulo. Los certificados de análisis de cada lote
Almacenamiento o transporte de muestra inadecuado
pueden obtenerse en el sitio www.laborclin.com.br. En caso de
 Agentes etiológicos exigentes en relación a los medios de
dudas o cualquier problema de origen técnico, contacte el SAC -
cultivo
Servicio de Asesoría al Cliente a través del teléfono 0800-410027 o
 Necesidad de medios especiales para el crecimiento de por el e-mail [email protected]. Todo problema que inviabilice
un agente infeccioso específico
una buena respuesta del producto, que haya ocurrido
comprobadamente por falla de Laborclin se resolverá sin cargo para
- Los resultados falsos positivos pueden ocurrir, con mayor el cliente, conforme lo dispuesto en ley.
frecuencia, en las siguientes situaciones:

 Técnica de asepsia inadecuada 11. REFERÊNCIAS

 Error al conservar el material 1. Association of Official Analytical Chemists. 1995. Bacteriological
 Mucho tiempo entre la recolección y el análisis analytical manual, 8th ed., App. 3.08-3.09. AOAC International,
 Excesivo tiempo de incubación Gaithersburg, MD.
 Interpretación equivocada de colonias no patógenas 2. Bisno, A.L. Acute pharyngitis. N Engl J Med, 344(3): 205–211,
 Utilización de material caducado, contaminado o en 2001.
condiciones inadecuadas 3. Colégio Brasileiro de Experimentação Animal. Princípios Éticos
 Contaminación cruzada por uso de accesorios no na Experimentação Animal. 03 março 2000.
esterilizados correctamente o ambiente no aséptico 4. Chapin, K.C., and T.-L Lauderdale. 2003. Reagents, stains, and
media: bacteriology. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen,
M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology,
9. CONTROL DE CALIDAD 8th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C.
- Materiales necesarios 5. Difco Manual, 2º ed., 2009.
Cepas estándar: ATCC® (American Type Culture Collection) o 6. Dunne Jr. W.M., Nolte, F.S. and Wilson, M.L. Blood Culture III.
derivadas). CUMITECH 1B. Coord. Ed. J.A. Hindler, American Society for
Microbiology, Washington, DC, 1997.
- Control de calidad recomendado: 7. Eschenbach, D.A., Pollock, H.M. and Schachter, J. Laboratory
Cepas Resultado esperado diagnosis of female genital tract infection. CUMITECH 17. Coord.
Neisseria gonorrhoeae Ed. S.J. Rubin. American Society for Microbiology, Washington, DC,
Buen Crecimiento 1983.
ATCC® 43069
Haemophilus influenzae 8. Isenberg, H. D. (ed.). 1992. Interpretation of aerobic bacterial
Buen crecimiento
ATCC® 49247 growth on primary culture media, Clinical microbiology procedures
Medio sólido opaco, con coloración handbook, vol.1, p. 1.6.1-1.6.7. American Society for Microbiology,
Medio no inoculado marrón homogénea, libre de Washington, D.C.
precipitados o partículas visibles. 9. Koneman, Elmer; et al. Diagnostic Microbiology. Lippincott, USA,
6 ed., 2010.
- Periodicidad 10. Murray, P.R. et al. Manual of Clinical Microbiology. 7th ed,
Testar cada nuevo lote recibido o en periodos establecidos por el American Society for Microbiology 1999.
propio laboratorio. 11. NNIS. National Nosocomial Infections Surveillance. MMWR, 49,
8, March 3, 2000.
- Análisis de los resultados 12. Russell FM et al. As a Bacterial Culture Medium, Citrated Sheep
Las cepas inoculadas en el material deben presentar características Blood Agar Is a Practical Alternative to Citrated Human Blood Agar
de crecimiento esperadas. Caso se constate algún problema o in Laboratories of Developing Countries. Journal of Clinical
diferencia, los resultados de muestras clínicas no deben ser Microbiology, 44: 3346–3351, set. 2006.
liberados hasta que las causas hayan sido apuradas debidamente y 13. Reller, R.B., Murray, P.R. and MacLowry, J.D. Blood Culture II.
los problemas constatados solucionados. CUMITECH 1A. Coord. Ed. J.A. Washington II, American Society for
- Este producto presenta sensibilidad ≥ 95,9% y especificidad Microbiology, Washington, DC, 1982.
≥ 99,5% frente a los principales microorganismos no fastidiosos. 14. Satzke C et al. Comparison of Citrated Human Blood, Citrated
Sheep Blood, and Defibrinated Sheep Blood Mueller-Hinton Agar
Sensibilidad % Especificidad % Preparations for Antimicrobial Susceptibility Testing of
Microorganismo (Intervalo de (Intervalo de Streptococcus pneumoniae Isolates. Journal of Clinical Microbiology,
confianza de 95%) confianza de 95%)
48: 3770-3772, out. 2010.
Neisseria 108/116 93.1% 207/207 100,0% 15. Schryver, A. and Meheus, A. Epidemiology of sexually
gonorrhoeae (84.2 – 89.9%) (99,8 – 100%) transmitted diseases: a global picture. Bull WHO, 68:639–654, 1990.
Haemophilus 83/92 90.2% 117/118 99.2%
influenzae (89,3 – 98.6%) (98,1 – 100%)

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