AGAR SANGRE

Finalidad:
Medio enriquecido, no selectivo y diferencial, debido a la caracterización de hemólisis y
prueba del satelitismo, para cultivo de bacterias en materiales clínicos y no clínicos.
Registro ANVISA:
10097010-137
Presentación:
540159 - SANGRE-AGAR-TSA-20mL-PL 90X15-PC 10PL LB 172310
540195 - BIPLACA-SANGRE-AGAR-TSA-2X10mL-10PL Rev. 08 – 12/2019

1. INTRODUCCIÓN Streptococcus pneumoniae, siendo la base para determinar los

El medio de cultivo agar sangre ovina proporciona el crecimiento de niveles de hemólisis.
la gran mayoría de las bacterias Gram-positivas y Gram-negativas
así como de hongos (mohos y levaduras), a partir de una base rica y b- Almacenamiento y estabilidad
complementada, ofreciendo óptimas condiciones de desarrollo para Para el transporte, el producto puede permanecer a temperatura
microorganismos no fastidiosos. ambiente hasta por 72h. En el laboratorio las placas se deben
La conservación de los eritrocitos íntegros favorece la formación de almacenar a temperaturas entre 2 a 12ºC, condiciones en las que se
halos de hemólisis nítidos, facilitando la diferenciación de algunas mantienen estables hasta la fecha de caducidad impresa en el
especies hemolíticas. rótulo, siempre que libre de contaminación de cualquier naturaleza.
El uso de refrigerador tipo frost-free no es recomendable para
medios de cultivo debido al efecto deshidratante de este tipo de
2. COMPOSICIÓN equipo.

Formulación Concentración/L Considerando que este producto es gelatinoso y su composición

Hidrolizado pancreático de caseína 12.0 puede presentar hasta 80% de agua, al sufrir variación de
Hidrolizado péptido de tejido animal 5.0 temperatura (caliente-fría o fría-caliente) todo medio de cultivo
Extracto de levaduras 3.5 puede generar condensación, de poca a mucha, acumulándose
Extracto de bovino 3.0 agua en la placa. Se recomienda guardar las placas con los medios
Almidón de maíz 1.0
de cultivo hacia arriba y, cuando necesario, despreciar el agua
Cloruro de sodio 5.0
acumulada y dejar estabilizar el medio de cultivo a temperatura
Ágar Base 15.0
Sangre ovina, desfibrinada 5%
antes de utilizarlo.
H2O ultra purificada 1L
Conforme descripto en la literatura, el laboratorio debe retirar de la
pH 7,3 ±0,2 a 25ºC
refrigeración apenas la cantidad de producto que necesite utilizar en
su rutina y dejarla estabilizar a temperatura o secar el agua
La formulación se puede ajustar y/o complementar siempre que sea condensada, antes de su utilización, a temperatura ambiente,
necesario cumplir criterios de desempeño del producto. pudiendo utilizar la incubación en estufa (± 37ºC) para reducción del
tiempo de secado o estabilización. No se recomienda la repetición
del proceso de refrigeración/estabilización, la constante alteración
3. MUESTRA de temperatura puede llevar a la deshidratación del medio, exponer
a- Tipos de muestras el producto a contaminaciones o generar una excesiva acumulación
- Se pueden utilizar muestras clínicas como: orina, secreciones y de agua.
otros fluidos corporales, materiales biológicos diversos, muestras o El agua acumulada por condensación, ocasionada por variación de
cualquier otra muestra que pueda contener microorganismos con temperatura, no influye en el desempeño del producto, desde que
capacidad de desarrollarse en este producto. este no presente desecamiento o disminución de espesura.
- El laboratorio debe establecer criterios de recolección, rechazo y Debido a la presencia de substratos sensibles, se recomienda
conservación de las muestras de acuerdo con su política de calidad. mantener el producto protegido de la incidencia directa de luz
-Siempre considerar las necesidades específicas de los (natural o artificial) y evitar grandes variaciones de temperatura
microorganismos que se quieren recuperar en los análisis, hasta su utilización.
microorganismos con necesidades especiales (complementos
específicos o ambientes controlados) pueden no presentar d- Precauciones y cuidados especiales
crecimiento adecuado al sembrarse en medio de cultivo que no - El producto está destinado apenas para el uso diagnóstico in vitro;
presente los requisitos mínimos. - Uso restricto por profesionales;
- Mismo tratándose de producto libre de agentes infecciosos, se
b- Precauciones y cuidados especiales recomienda tratar este producto como potencialmente infeccioso,
- Producto destinado al uso diagnóstico in vitro; observando el uso de equipos de protección individual y colectiva;
- No usar materiales con la fecha de caducidad expirada o que - No inhalar o ingerir;
presenten sello de calidad roto o alterado. - No utilizar placas con señales de contaminación, desecamiento o
- Antes de descartar el material usado, esterilizarlo en autoclave a con alteraciones de color o espesura;
121ºC por 20 minutos. Para condicionamiento del material usado, - No usar materiales con fecha de caducidad expirada o que
recomendamos el uso de Detrilab. presenten sello de calidad roto o alterado;
- Se recomienda la lectura de la directriz aprobada para “Protección
de Trabajadores de Laboratorio e Infecciones laborales - CLSI®
4. INFORMACIONES GENERALES SOBRE EL PRODUCTO M29-A” para una manipulación segura;
a- Principio - El procedimiento de descarte del producto se basa en la RDC 222
El medio contiene, peptona de caseína y extracto de levadura que (ANVISA) de 28 de marzo de 2018, que reglamenta las buenas
proveen nitrógeno, carbono, aminoácidos y vitaminas. Proteoma prácticas de gestión de residuos de servicios de salud.
peptona es la fuente de nitrógeno para la sangre. El equilibrio - Para condicionamiento del material a ser esterilizado,
osmótico se mantiene gracias a la concentración de cloruro de sodio recomendamos el uso de bolsas para autoclave - Detrilab.
y el agar utilizado como agente solidificante. Está complementado - Contacte el servicio de vigilancia sanitaria de su región para
con sangre ovina desfibrinada a 5%, factores de crecimiento para garantizar el cumplimiento correcto de la legislación de descarte de
microorganismos fastidiosos como, por ejemplo, el productos potencialmente contaminantes.

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Mac Conkey para decisión del proceso de identificación, juntamente

5. MATERIALES Y EQUIPOS NECESÁRIOS (no incluidos) con la prueba de oxidasa.
- Estufa bacteriológica;
- Asas bacteriológicas;
- Mechero de Bunsen; 7. RESULTADOS
- Sistema de generación de CO2; Informe
- Jarra herméticamente cerrada para tensión de CO2. - No hubo crecimiento:
“Ausencia de crecimiento microbiano en la muestra analizada
después de 24/48h de incubación a 35ºC”;
6. PROCEDIMIENTO TÉCNICO - Si hay crecimiento:
a- Retirar el paquete de la refrigeración y, en ambiente aséptico, “Nombre del microorganismo (indicar bacteria identificada) Contaje
separar las placas que se utilizarán, devolviendo el resto al de colonias (indicar resultado) UFC/mL“. (apenas cuando aplicable)
refrigerador;
b- Colocar las placas en estufa bacteriológica entre 35-37ºC por el
tiempo necesario para que adquieran esta temperatura, o dejar 8. LIMITACIONES DEL MÉTODO
estabilizar/secar a temperatura ambiente; (Riesgos Residuales Identificados conforme RDC 36/2015)
c- Usando procedimientos adecuados, proceder a la inoculación del - La utilización de sangre en la fórmula puede acarrear ligera
material directamente en la superficie del medio; fotosensibilidad, se recomienda proteger el producto de la incidencia
d- Incubar el material bajo tensión de CO2 en estufa bacteriológica directa de la luz.
entre 35-37ºC/18-24h; - Una vez que este medio no es selectivo, otros agentes patógenos
e- Tras la incubación, verificar el crecimiento y la ocurrencia de o no, se pueden desarrollar. Para casos que presenten crecimiento
hemólisis si fuera el caso (evidenciada a través de la visualización de múltiples microorganismos, se recomienda la utilización de
de un halo alrededor de la colonia); medios selectivos para un mejor aislamiento.
f- Debido a exigencias especiales, algunos microorganismos pueden - Algunas variaciones de coloración en la colonia, morfología,
necesitar de un período mayor de incubación, si no ocurre el tamaño o intensidad de hemólisis pueden ocurrir, debido a
crecimiento en las primeras 24 horas o el crecimiento obtenido no características únicas de la cepa analizada.
es suficiente, incubar el material bajo tensión de CO2 en estufa - La presencia de más de una variante genética intrínseca a la cepa
bacteriológica entre 35-37ºC, por más18-24h; analizada, puede interferir en las características de crecimiento. Es
g- Tras el total desarrollo de las colonias, proceder con los procesos posible que características únicas o mutadas de la cepa puedan
de identificación conforme lo establecido en su laboratorio; interferir en el desempeño del medio de cultivo afectando o
h- La evaluación microscópica de coloraciones de Gram de la retardando el total desarrollo de las colonias.
muestra y, si necesario, de la colonia analizada puede elucidar - Inoculaciones con exceso de carga bacteriana pueden interferir en
dudas y ofrecer un direccionamiento más adecuado para el proceso la evaluación de resultados.
de identificación. - La presencia de más de un microorganismo en la muestra puede
ocasionar superposición de colonias en la superficie del medio de
Morfologías típicas de las colonias en agar sangre: cultivo, dificultando su identificación, para estos casos, se
Microorganismo Características recomienda el reaislamiento de las colonias diferentes, manteniendo
Colonias grandes, opacas, cremosas con el contaje de la placa inicial.
borde circular, elevación convexa, de - La calidad de los resultados de análisis microbiológicos está
Staphylococcus aureus
coloración blanca o amarilla, en general íntimamente relacionada con la calidad de la muestra, las mejores
ß-hemolíticas.
prácticas preanalíticas, como cuidados extremos con la asepsia del
Colonias medias, opacas, cremosas con
Staphylococcus coagulasa proceso o paciente, garantizan un mejor resultado.
borde circular, elevación convexa, de
negativa - Algunos microorganismos fastidiosos no presentan buen
coloración blanca-grisácea, no hemolítica.
Colonias pequeñas, translúcidas, crecimiento en este medio de cultivo (Neisseria gonorrhoeae,
cremosas con bordes puntiformes, de Mycobacterium spp., Legionella spp., Bordetella spp. por ejemplo).
Streptococcus grupo viridans
coloración blanca-grisácea, elevaciones Para la recuperación de estas especies, utilizar medios de cultivo
achatadas, α-hemolíticas. apropiados.
Colonias medias, circulares, translúcidas - La recuperación de Haemophilus haemolyticus puede ser
con borde circular, elevación convexa, de
Streptococcus agalactiae
coloración gris, en general ß-hemolíticas
suprimida en agar sangre complementado con sangre ovina. Para
(aprox. 11% no presentan hemólisis). este se indica el uso de medios específicos con complemento de
Colonias pequeñas, puntiformes, sangre de caballo, por ser más rico en nucleótidos de piridina.
Streptococcus pyogenes translúcidas, elevación convexa, - Aunque se puedan realizar algunas pruebas de diagnóstico
de coloración gris, ß-hemolíticas. directamente en este medio de cultivo, es necesaria la realización
Colonias pequeñas, puntiformes, de pruebas bioquímicas para una completa identificación y, si
Streptococcus anginosus traslúcidas, elevación convexa, de indicado, la realización de pruebas inmunológicas usando cultivos
coloración gris, ß-hemolíticas. puros. Consultar la bibliografía apropiada para más informaciones.
Colonias pequeñas, con borde circular,
transparentes, elevación umbilicada o
Streptococcus pneumoniae
achatada, de coloración gris, - Los resultados falsos negativos pueden ocurrir, con mayor
α-hemolíticas. frecuencia, en las siguientes situaciones:
Colonias medias con borde circular,  Técnica de recolección inadecuada
Enterococcus spp. opacas y elevadas, de coloración gris,  Incubación sin tensión de CO2
en general no hemolíticas.  Incubación a temperatura inadecuada
Colonias grandes, con borde circular,
 Uso de antimicrobiano previo
opacas y con elevación domo, de
Moraxella catarrhalis coloración “café con leche”, secas,  Utilización de asa flambeada no resfriada
no hemolíticas y que se desprenden por  Tiempo de incubación insuficiente
entero del medio.  Infección crónica (infección poco activa)
Colonias pequeñas, con borde circular, Almacenamiento o transporte de muestra inadecuado
Neisseria gonohhhoeae translúcidas y brillantes, elevadas, de  Agentes etiológicos exigentes en relación a los medios de
coloración gris, no hemolíticas.
cultivo
Colonias pequeñas translúscidas con
Listeria monocytogenes
pequeñas zonas de beta-hemólisis.  Necesidad de medios especiales para el crecimiento de
un agente infeccioso específico
Los bacilos Gram- negativos se identifican inicialmente con base en
la fermentación o no de la glucosa. En la rutina de laboratorio la
diferenciación inicial puede utilizar características del agar - Los resultados falsos positivos pueden ocurrir, con mayor
frecuencia, en las siguientes situaciones:

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 Técnica de asepsia inadecuada - Association of Official Analytical Chemists. 1995. Bacteriological

 Error al conservar el material analytical manual, 8th ed., App. 3.08-3.09. AOAC International,
 Mucho tiempo entre la recolección y el análisis Gaithersburg, MD.
 Excesivo tiempo de incubación - Baron, E. J, L. R. Peterson, and S. M. Finegold. 1994. Bailey &
 Interpretación equivocada de colonias no patógenas Scott’s diagnostic microbiology, 9th ed., p. 415. Mosby-Year Book,
 Utilización de material caducado, contaminado o en Inc. St. Louis, MO.
condiciones inadecuadas - Bernstein, J.M. Treatment of community-acquired pneumonia.
 Contaminación cruzada por uso de accesorios no IDSA Guidelines CHEST, 115:9S-13S, 1999.
esterilizados correctamente o ambiente no aséptico - Bisno, A.L. Acute pharyngitis. N Engl J Med, 344(3): 205–211,
2001.
- Chapin, K.C., and T.-L Lauderdale. 2003. Reagents, stains, and
9. CONTROL DE CALIDAD media: bacteriology. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen,
- Materiales necesarios M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology,
Cepas estándar: ATCC® (American Type Culture Collection) o 8th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C.
derivadas). - Colégio Brasileiro de Experimentação Animal. Princípios Éticos na
Experimentação Animal. 03 março 2000.
- Control de calidad recomendado: - Difco Manual, 2º ed., 2009.
- Dunne Jr. W.M., Nolte, F.S. and Wilson, M.L. Blood Culture III.
Cepas Resultado esperado
CUMITECH 1B. Coord. Ed. J.A. Hindler, American Society for
Staphylococcus aureus Buen crecimiento – presencia de Microbiology, Washington, DC, 1997.
ATCC® 25923 β-hemólisis
- Ellner, P.D., C.J. Stoessel, E. Drakeford, and F. Vasi. 1966. A new
Enterococcus faecalis Buen crecimiento – hemólisis
culture medium for medical bacteriology. Am. J. Clin. Pathol. 45:
ATCC® 29212 ausente
502-504.
Streptococcus pneumoniae Buen crecimiento – presencia de
- Eschenbach, D.A., Pollock, H.M. and Schachter, J. Laboratory
ATCC® 49619 α-hemólisis
Medio sólido opaco, con color
diagnosis of female genital tract infection. CUMITECH 17. Coord.
rojo vivo homogéneo, libre de Ed. S.J. Rubin. American Society for Microbiology, Washington, DC,
Medio no inoculado precipitados o partículas visibles, 1983.
pudiendo presentar pequeños - Isenberg, H. D. (ed.). 1992. Interpretation of aerobic bacterial
coágulos aislados. growth on primary culture media, Clinical microbiology procedures
handbook, vol.1, p. 1.6.1-1.6.7. American Society for Microbiology,
- Periodicidad Washington, D.C.
Testar cada nuevo lote recibido o en periodos establecidos por el - Jacobs, J.A., De Brauwer, E.I.G.B., Cornelissen, E.I.M. and Drent,
propio laboratorio. M. Accuracy and precision of quantitative calibrated loops in transfer
of bronchoalveolar lavage fluid. J Clin Microbiol 38(6):2117-2121,
- Análisis de los resultados 2000.
Las cepas inoculadas en el material deben presentar características - Koneman, Elmer; et al. Diagnostic Microbiology. Lippincott, USA, 6
de crecimiento esperadas. Caso se constate algún problema o ed., 2010.
diferencia, los resultados de muestras clínicas no deben ser - Maki, D.G., Weise, C.E. and Sarafin, H.W. A semiquantitative
liberados hasta que las causas hayan sido apuradas debidamente y culture method for identifying intravenous-catheter related infection.
los problemas constatados solucionados. N Engl J Med, 296:1305–1309, 1977.
- Mahon, Connie, Manuselis, George Jr. Diagnostic Microbiology.
- Este producto presenta sensibilidad y especificidad ≥ 99,9% frente Saunders, USA, 1995.
a los principales microorganismos no fastidiosos. - MiQ - Qualitätsstandards in der mikrobiologisch-infektiologischen
Diagnostik, edited by Mauch, H., R. Lüttiken, and S. Gatermann for
Sensibilidad % Especificidad % the Deutsche Gesellschaft für Hygiene und Mikrobiologie (DGHM).
Microorganismo (Intervalo de (Intervalo de Volumes 3, 6, and 7. Urban & Fischer, Munich, Germany.
confianza de 95%) confianza de 95%) - Moura RA. Meios de cultura. In: Moura, R.A., coord. Técnicas de
423/423 100,0% 423/423 100,0%
Escherichia coli Laboratório. 3 ed. São Paulo: Atheneu; 2002. p.169-179.
(99,1 – 100%) (99,8 – 100%)
502/502 100,0% 701/701 100% (98,9 - Murray, P.R. et al. Manual of Clinical Microbiology. 7th ed,
Staphylococcus aureus American Society for Microbiology 1999.
(99,7 – 100%) – 100%)
Streptococcus 264/265 99,6% (97,4 307/307 100% - NNIS. National Nosocomial Infections Surveillance. MMWR, 49, 8,
pneumoniae – 99,9%) (99,3 – 100%) March 3, 2000.
- Reller, R.B., Murray, P.R. and MacLowry, J.D. Blood Culture II.
CUMITECH 1A. Coord. Ed. J.A. Washington II, American Society for
10. GARANTÍA DE CALIDAD Microbiology, Washington, DC, 1982.
Laborclin obedece a lo dispuesto en la Ley 8.078/90 - Código de - Russell FM et al. As a Bacterial Culture Medium, Citrated Sheep
Defensa del Consumidor. Para que el producto presente su mejor Blood Agar Is a Practical Alternative to Citrated Human Blood Agar
desempeño, es necesario: in Laboratories of Developing Countries. Journal of Clinical
- que el usuario conozca y siga rigorosamente el presente Microbiology, 44: 3346–3351, set. 2006.
procedimiento técnico; - Satzke C et al. Comparison of Citrated Human Blood, Citrated
- que los materiales se almacenen en las condiciones indicadas; Sheep Blood, and Defibrinated Sheep Blood Mueller-Hinton Agar
- que los equipos y demás accesorios necesarios estén en buenas Preparations for Antimicrobial Susceptibility Testing of
condiciones de uso, mantenimiento y limpieza. Streptococcus pneumoniae Isolates. Journal of Clinical Microbiology,
Antes de ser liberado para venta, cada lote del producto se somete 48: 3770-3772, out. 2010.
a pruebas específicas, que se repiten periódicamente conforme - Silva, de Neusely; et al. Manual de Métodos de Análise
calendario establecido por la empresa hasta la fecha de caducidad Microbiológica de Alimentos e Água, 4° ed., 2010.
impresa en el rótulo. Los certificados de análisis de cada lote - Siegman-Igra, Y., Anglim, A.M. Shapiro, D.E., Adal K.A., Strain,
pueden obtenerse en el sitio www.laborclin.com.br. En caso de B.A. and Farr, B.M. Diagnosis of vascular catheter-related
dudas o cualquier problema de origen técnico, contacte el SAC - bloodstream infection: a meta-analysis. J Clin Microbiol, 35:928-936,
Servicio de Asesoría al Cliente a través del teléfono 0800-410027 o 1997.
por el e-mail [email protected]. Todo problema que inviabilice - Schryver, A. and Meheus, A. Epidemiology of sexually transmitted
una buena respuesta del producto, que haya ocurrido diseases: a global picture. Bull WHO, 68:639–654, 1990.
comprobadamente por falla de Laborclin se resolverá sin cargo para - Wiblin, R.T. Nosocomial Pneumonia In: Hospital Infection Control.
el cliente, conforme lo dispuesto en ley. Wenzel (ed.), 807-819, 1997.

11. REFERENCIAS

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