Proyecto Final de La Traduccion Del Libro Biochemical Ecotoxicología. de Los Capítulos 3 y 8 Grupo 3
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Proyecto Final de La Traduccion Del Libro Biochemical Ecotoxicología. de Los Capítulos 3 y 8 Grupo 3
CURSO
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BIOQUIMICA Y TOXICOLOGIA
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GRUPO Nº 3.
INTEGRANTES.
DOCENTE.
CAJAMARCA, JULIO
DEL 2021.
I. TÍTULO: “Biorremediación de hidrocarburos en aguas residuales con cultivo
mixto de microorganismos”
II. OBJETIVOS:
II.1. OBJETIVO GENERAL:
Determinar la transformación ideal de los hidrocarburos por parte los
cultivos de microorganismos.
II.2. OBJETIVOS ESPECÍFICOS:
Resumir en un informe sobre el tema de biorremediación de
hidrocarburos en aguas residuales con cultivo de microorganismos.
Determinar los procesos por los cuales remediar las aguas residuales con
cultivos de microorganismos.
Proponer soluciones y dar recomendaciones para la recuperación del agua
residual mediante cultivo de microorganismos.
III. JUSTIFICACIÓN:
Las aguas residuales y su tratamiento son un tema de gran importancia, hoy en
día debido al cambio desmedido de la temperatura ha provocado sequías de
agua, Por eso se requiere cuidar el agua e insistir en aplicar un correcto
tratamiento de aguas para así contribuir con el cuidado de la misma. Al
implementar la biorremediación de aguas residuales mediante el cultivo de
microorganismos se mejorará la calidad de vida de los habitantes cercanos a la
zona y esto ayudará al desarrollo de la ciudad. Por ende, se decide a realizar un
informe mediante el cual se determinará cual es el mejor proceso para el cultivo
de microorganismos que remediaran el agua residual contaminada por
hidrocarburos.
IV. INTRODUCCIÓN:
En la actualidad el agua es el fundamento de la vida: un recurso crucial para la
humanidad y para el resto de los seres vivos. Todos la necesitamos, y no solo
para beber. Nuestros ríos y lagos, nuestras aguas costeras, marítimas y
subterráneas, constituyen recursos valiosos que es preciso proteger. Pero su
disponibilidad disminuye paulatinamente a medida que aumenta su
contaminación, esto afecta las condiciones de saneamiento ambiental de una
comunidad disminuyendo la calidad de vida de esta.
Para disminuir estos índices de contaminación, es indispensable brindar un
tratamiento adecuado a las aguas residuales por medio de una planta de
tratamiento de agua residual para poder minimizar el impacto del vertimiento de
aguas residuales a las fuentes de agua. La eliminación de aguas residuales no
tratadas produce impactos ambientales negativos en los cursos de agua
receptores, en función de la concentración de contaminantes que dichas aguas
contengan (Ingeniería Química, 2012)
El crecimiento de las ciudades provoca un incremento del parque automotor, y
por ende el aparecimiento de servicios alrededor de la industria automotriz, así
aumenta el número de lubricadoras-lavadoras de autos en los distintos puntos de
la localidad.
Las bacterias que crecen en presencia de hidrocarburos producen una serie de
sustancias con propiedades tenso-activas llamadas biosurfactantes, capaces de
solubilizar compuestos no polares, como los contenidos en el petróleo. Además,
estas moléculas tienen la propiedad de estimular el crecimiento microbiológico
ayudando así a acelerar la biorremediación en las zonas contaminadas.
Los biosurfactantes son más biocompatibles, más fácilmente biodegradables y
por lo tanto menos tóxicos, menos perjudiciales al ambiente y más activos a
bajas concentraciones (Araujo et al., 2008; Ron y Rosenberg, 2002)
El objetivo de este trabajo consiste en evaluar el proceso de biorremediación de
hidrocarburos totales de las aguas residuales de las lubricadoras, aplicando
microorganismos degradadores de hidrocarburos y sus derivados, mediante la
técnica de la bioaumentación.
V. MARCO TEÓRICO
V.1. PREPARACIÓN Y MANTENIMIENTO DE TEJIDOS VIVOS Y
CULTIVOS PRIMARIOS PARA ESTUDIOS DE TOXICIDAD:
Los estudios de toxicología in vitro o cultivo de tejidos o células se
llevan a cabo utilizando partes de un organismo que se han aislado y
cultivado o mantenido en condiciones controladas. La principal
ventaja es que permite la investigación de componentes individuales
de este sistema complejo y el estudio de funciones biológicas
fundamentales en las células. Sin embargo, esta simplificación de
estos sistemas muy complejos también es una desventaja es que para
que los resultados puedan validarse con el animal completo en
relación con el objetivo de la investigación. De hecho, los sistemas in
vitro son alternativas reconocidas para reducir el uso de animales en
las pruebas de toxicidad, refinar la evaluación de la toxicidad y
reemplazar los estudios. (Gagné, 2014)
V.1.1. REACTIVOS NECESARIOS Y PREPARACIÓN DE LA
SOLUCIÓN
Agua de cultivo celular estéril, sal sódica de rojo fenol, sal sódica,
sulfato de kanamicina, cloruro de sodio, gentamicina, Pronasa, 3-
(4,5-dimetil-2-tiazolil) -2,5-difenil-2H-tetrazolio bromuro, solución
de azul tripán, isopropanol y dimetilsulfóxido se obtuvieron de
Sigma-Aldrich (Steinheim, Alemania). Suero fetal de ternera,
glutamina, penicilina-estreptomicina y el medio Leibovitz L-15 se
adquirieron de Gibco. Los medios de cultivo en particular se
desarrollan para parecerse lo más posible a la hemolinfa del animal
cultivado. (Gagné, 2014)
V.1.2. PROCEDIMIENTO
V.1.2.1. RECOLECCIÓN Y MANTENIMIENTO DE
ANIMALES
Como los bivalvos se alimentan por filtración y pueden contener una
gran cantidad de contaminantes, deben depurarse en el laboratorio antes
de cultivarlos. Los animales deben estar lo más sanos posible para el
cultivo de tejidos, y los animales extraídos del medio silvestre deben ser
reemplazados cada 2 semanas con nuevos individuos frescos. Los
animales deben recolectarse con una mínima interferencia cortando los
hilos de bisal (sin romperlos), transportados rápidamente de regreso al
laboratorio y mantenidos en instalaciones adecuadas que reflejen su
entorno natural. (Gagné, 2014)
V.1.2.2. PREPARACIÓN DE CULTIVOS DE CÉLULAS
PRIMARIAS
Todos los procedimientos de cultivo celular deben realizarse en
condiciones estériles en una campana de flujo laminar utilizada
exclusivamente para fines de cultivo celular. Todo el material de vidrio y
el equipo utilizado para el cultivo se autoclava antes de su uso y todas las
soluciones se esterilizan por filtración. Se debe mantener una buena
técnica aséptica en todo momento para asegurar que no haya
contaminación. Todo el procedimiento para el cultivo de células en
suspensión y explantes de tejido de las branquias y la glándula digestive.
(Gagné, 2014)
V.1.3. APLICACIÓN A LAS PRUEBAS DE TOXICIDAD
Las células en suspensión se utilizan convenientemente para las pruebas
de citotoxicidad para medir los efectos letales de una sustancia química o
contaminante.
VI.1. MATERIALES
Libro de Biochemical Ecotoxicology
Recopilación de adicional de bases de datos tales como Scielo,
Redalyc, Google Académico y Alicia
VI.2. METODOS
VI.2.1. Tipo, Diseño, Método y Técnica usado para el proyecto
VIII. DISCUSIÓN
- Por cultivos mixtos nos referimos a que se encuentran presentes desde un
inicio más de una especie/raza de microbio. Los cultivos mixtos que crecen
en mezclas de sustratos juegan un papel fundamental en la bioingeniería. El
método más usual es la siembra por estría sobre un medio de cultivo sólido
adecuado dispuesto en una placa de petri. Para ello se toma una pequeña
cantidad de muestra con un asa de platino y se reparte sobre la superficie del
medio de cultivo. Sobre el medio quedan separadas e inmovilizadas las
células bacterianas.
- (Araujo, Gómez, Barrera, N, et al., 2008; Romaniuk et al., 2007) en un
estudio con cepas bacterianas observaron que las concentraciones de crudo
disminuyeron rápidamente durante los primeros 30 días, período durante el
cual los microorganismos degradaron entre un 50 % y un 60 % del
hidrocarburo. Otros autores, afirman que durante la biodegradación de los
hidrocarburos del petróleo las bacterias oxidan el petróleo a dióxido de
carbono, agua y energía, y plantean que aproximadamente 50 % del carbono
en el petróleo es usado para biomasa bacteriana. En los trabajos de (Araujo,
Gómez, Barrera, N, et al., 2008) con la adición de biosurfante y la aplicación
de un cultivo mixto se obtuvo porcentajes de remoción de hidrocarburo del
81 %.
- También es posible a la segregación de biosurfante propio del metabolismo
de los cultivo de las bacterias, hace que se incremente la cantidad de tenso
activos en las aguas residuales.
IX. CONCLUSIONES
- En conclusión la aplicación de la biaumentación mediante un cultivo mixto
para la biorremediación de las aguas residuales de una lubricadora es de
resultado eficiente obteniéndose porcentajes de remoción del Hidrocarburo
Total de Petróleo por encima del 86 %.
- Por otro lado los mejores resultados de remoción del TPH se obtuvieron a la
tercera semana de aplicado los microorganismos con un 92 %.
- Además, los microorganismos remueven el DQO (40 %), aceites y grasas
(50 %), tensoactivos (43 %), lo que evidencia que es una alternativa
técnicamente factible, viable y de bajo costo.
X. BIBLIOGRAGÍA:
Araujo, I., Gómez, A., Barrera, M., Angulo, N., Morillo, G., Cardenas, C., & Herrera,
L. (2008). Surfactantes biológicos en la biorremediación de aguas contaminadas
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Araujo, I., Gómez, A., Barrera, M., N, A., Morillo, G., Cárdenas, C., & Herrera, L.
(2008). Surfactantes biológicos en la biorremediación de aguas contaminadas con
crudo liviano. Scielo. http://ve.scielo.org/scielo.php?
script=sci_arttext&pid=S0378-18442008000400004
Romaniuk, R., Brandt, J. F., Rios, P. R., & Giuffré, L. (2007). Atenuación natural y
remediación inducida en suelos contaminados con hidrocarburos.
https://www.suelos.org.ar/publicaciones/vol_25n2/25_2_romaniuk_139_149.pdf
Ron, E., & Rosenberg, E. (2002). Biosurfactants and oil bioremediation. Elsevier
Science Ltd.
UNIVERSIDAD PRIVADA DEL NORTE
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BIOQUIMICA Y TOXICOLOGIA
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INTEGRANTES.
DOCENTE.
CAJAMARCA, JULIO
DEL 2021.
III.JUSTIFICACIÓN:
La presente investigación se enfocará en la descripción de la asignación de
energía celular en la bioquímica y toxicología, ya que la bioquímica estudia la
química de los procesos vitales clasificando en grupos conde la célula convierte
energía en formas biológicamente útiles y en grupos donde se aporta energía
para su funcionamiento , además de ello se requiere de la energía celular para
desintoxicar y reparar daños inducidos por los xenobióticos a costa de las
reservas energéticas destinadas al crecimiento, supervivencia y reproducción;
siendo estos procesos fundamentales para la reproducción de un organismo.
(Berg et al., 2007) Según (De Coen & Janssen, 2003) los organismos gastan
energía para metabolizar, defenderse y eliminar los xenobióticos, donde en el
último proceso se pierde mucha más energía, disminuyendo la posibilidad de
supervivencia, crecimiento y reproducción; como ejemplo la contaminación
ambiental por cadmio, cloruro de tributilestaño y sulfonato de
alquilbencenolineal, se demuestra el gasto de reserva de energía reducida en
forma de lípidos, azúcares y proteínas en los dáfnidos. Por ende, se elaborará el
siguiente informe, con el fin de analizar las características de como la célula
reserva energía y que actividades realiza en el citocromo para dar energía celular
cuando el área se encuentre contaminada.
IV. INTRODUCCIÓN:
La característica general de los seres vivos es la autoconservación, la cual
involucra 2 mecanismos muy importantes para su correcto funcionamiento,
donde los seres vivos intercambian sustancias y energía con el medio externo,
funcionando como un sistema abierto. La energía que ingresa al ser vivo, en
forma de luz solar o energía química se almacenan en los alimentos, la cual es
transformada y usada por cada célula, adoptando diversas formas, para conjugar
reacciones químicas y transformaciones de energía que involucran la síntesis y
degradación de la molécula. (Benites, 2019)
5.2.2. Lípidos:
Los lípidos se consideran una forma de energía más calórica y susceptible de
almacenamiento a largo plazo en los organismos. Estos podrían movilizarse
fácilmente de acuerdo a la demanda del organismo. Los niveles de los lípidos se
determinan mediante el ensayo espectrofotométrico mediante el método de sufo-
fosfo-vainillina; siendo este método el más sensible y confiable para un análisis
gravimétrico. (Frings et al., 1972)
5.2.3. Análisis de perfiles lípidos por HNMR:
La Resonancia magnética nuclear basada en protones o espectroscopía HNMR,
es una de las formas más poderosas de determinar los niveles de varios
metabolismos en los tejidos biológicos. Una ventaja que nos brinda este método
es que se puede usar para determinar metabolitos específicos y una desventaja es
que no es suficientemente sensible por lo que se requiere secado y evaporación
para concentrar la muestra. El principio de la RMN de protones se basa en la
observación de que una carga giratoria genera un campo magnético.
La HRMN se basa en el principio de la frecuencia a la que resuenan los grupos
metilo de las partículas lipoproteicas. Dependiendo del tamaño que tengan esos
grupos resonarán a unas frecuencias ligeramente diferentes y podrán ser
detectados y cuantificados.(Mallol et al., 2015)
5.2.4. Contenido de proteínas:
El contenido de proteínas, está definido como los niveles de proteínas totales, los
cuales se determinan en varios ensayos que varían en grados de complejidad. La
evaluación del nitrógeno total del método de Kjeldahl en proteínas fraccionadas es
un ensayo definitivo para proteínas, pero el método es menos adecuado para
propósitos de cribado a gran escala. El contenido de proteína total podría
determinarse mediante un ensayo de unión de colorante de proteína simple, rápido y
económico. (Bradford, 1976)
5.2.5. Actividades de transporte de electrones de las mitocondrias y dependencia
de la temperatura:
Las células han de desarrollar un trabajo para crecer y desarrollarse. La
capacidad de aprovechar la energía y canalizarla en trabajo biológico es una
propiedad de los seres vivos. Las células utilizan la oxidación de los nutrientes
como fuente de energía para la obtención de ATP. (Ilmo & Pérez, 2013) El
ensayo se basa en la relación entre las tasas de respiración de las mitocondrias
(CO2 producción) y la actividad de transporte de electrones, que se puede
determinar fácilmente mediante un cromóforo aceptor de electrones.
5.2.6. Actividades de citocromo c oxidasa:
La enzima citocromo c oxidasa o complejo IV es el eslabón final en la cadena de
transporte de electrones de la membrana interna mitocondrial. El citocromo c
oxidasa o CCOX es la última enzima en los pigmentos de la cadena de
transporte de electrones mitocondriales, acepta un electrón del citocromo c,
proteínas y las transfiere a una molécula de oxígeno para formar agua. Durante
este proceso, la enzima transloca protones (H) a través de la membrana y
contribuye al gradiente electroquímico transmembrana necesaria para la síntesis
de ATP.
VI. MÉTODOS, TÉCNICAS Y PROCEDIMIENTOS:
6.1. MATERIALES
Libro de Biochemical Ecotoxicology
Recopilación de adicional de bases de datos tales como Scielo,
Redalyc, Google Académico y Alicia
6.2. METODOS
Tipo, Diseño, Método y Técnica usado para el proyecto
Ilustración 4.
Típica Espectro de H-
NMR de extractos lipídicos.
Para evaluar el contenido de proteínas, se usa el método de Kjeldahl
evaluando el nitrógeno en las proteínas fraccionadas cuando es a una
escala pequeña. Para determinar el contenido total de proteínas, se
evalúa mediante un ensayo de unión de colorante de proteína simple,
rápido y económico. El ensayo se adecua en microplacas y la
preparación de tinte y también se podría usar para la tinción de
proteínas en electroforesis en gel, usando reactivo azul de
Coomassie, este proceso de realiza por triplicado, usando 10
microlitros de la muestra y 10 μL de solución de NaOH, luego de
esperar 15 minutos se agrega 140 μl de agua y 40 μl de reactivo azul
de Coomassie, se mezcla bien y se lee la absorbancia a 595 nm
después de 5 min. La adición de NaOH sirve para desnaturalizar las
proteínas para favorecer una unión más homogénea del tinte en la
muestra, pero aumenta la absorbancia de fondo (blanco).
Para evaluar el transporte de electrones de las mitocondrias y
dependencia de la temperatura, se deben aislar una densidad
suficiente para su detección, para su mejor observación en el
microscopio se tinturan al menos a 500 mg de tejidos con tijeras y se
homogeniza en 2,5 mL con un tampón helado usando un triturador
de tejidos con mortero de teflón. El sedimento se retira del
sobrenadante y se suspende en una pequeña cantidad de tampón de
homogenizado.
IX. CONCLUSIONES
- En conclusión, la aplicación de la microorganismos anaerobios y aerobios
para la biorremediación ambiental, es factible, por su alta eficiencia,
comprobada en diversas investigaciones. Tiene una alta capacidad para
degradar aceites, PCB’s, contaminantes en el suelo y agua, siendo el proceso
de selección de acuerdo al contaminante que se encuentre en el área
afectada.
- Para la biorremediación en microorganismos aerobios y anaerobios, se deben
realizar monitoreos semanales para analizar las muestras que se pretende
remediar. Si estos se aplican de manera adecuada, los resultados serán
bastante favorables cuando se aplique para la recuperación de un ecosistema.
- Este tipo de biorremediación aeróbica puede ser aplicada para la
recuperación de suelos contaminados por hidrocarburos, lodos de aguas
residuales y aguas residuales (PTAR) provenientes de aguas domésticas o
industriales, usando macro y micronutrientes, alcanzando un nivel de
remoción de casi el 65% de acuerdo a estudios realizado en laboratorio.
- La técnica propuesta es altamente eficiente, ecoamigable y sobre todo de
bajo costo, cumpliendo con la normativa del país, dando resultados a
mediano y corto plazo.
X. BIBLIOGRAFÍA:
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De Coen, W. M., & Janssen, C. R. (2003). The missing biomarker link: relationships
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Gagné, F. (2014). Biochemical Ecotoxicology: Principles and Methods. Elsevier, 282.
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