CRISP Abel

Instituto Nacional de Salud Pública
Centro Regional de Investigación en Salud Pública
Identificación de los compuestos químicos del extracto acuoso de

Spathodea campanulata P Beauvois (Scrophulariales: Bignoniaceae)
que causan toxicidad sobre estadios inmaduros de Anopheles
albimanus (Diptera: Culicidae).
TESIS
Que para obtener el grado de
Maestro en Ciencias de la Salud
Presenta
QFB Abel Zacarías Gómez
Director de Tesis:
Dr. José Luis Torres Estrada

Centro Regional de Investigación en Salud Pública
Instituto Nacional de Salud Pública
Asesores:
Dra. María Guadalupe Vázquez Martínez

Dr. Américo David Rodríguez Ramírez
Dr. Ramón Marcos Soto Hernández
Tapachula, Chiapas, México. Agosto de 2013.

El fin supremo de la ciencia es la verdad;
el fin del arte es el placer (Gottohold Lessing).
Dedicatorias
A Dios por permitirme seguir formándome profesionalmente, por darme la oportunidad de

consolidar uno de mis objetivos.
A mis padres, Abel Zacarías López y Marina Gómez Cruz por estar presente en cada
momento de mi vida y de este nuevo logro académico, por ser fuente de motivación
constante, por sus sabias palabras.
A mi hermana Madai y mis hermanos Isaí e Higinio por todo el apoyo brindado durante
todo este proceso, por sus palabras de aliento.
Agradecimientos
Al Dr. José Luis Torres Estrada por dirigir esta tesis, por su asesoría y sus constantes
consejos, muchas gracias Dr.
A mis asesores, Dra. María Guadalupe Vázquez Martínez, Dr. Américo David Rodríguez
Ramírez por su contribución, para realizar esta tesis. Así también al Dr. Ramón Marcos
Soto Hernández por brindarme la oportunidad de consolidar uno de mis sueños al
permitirme llevar a cabo la estancia de investigación en su laboratorio del Colegio de
Postgraduados, Campus Montecillo.
A las compañeras de laboratorio M en C Farah Zamira Vera Maloof e IBT Alejandra

Maldonado Ramírez por la disposición mostrada, por todo el apoyo que han significado
para realizar el presente trabajo.
A los Técnicos en Sistemas de Salud Crecencio Diaz Espinoza, Sandra Robles Cruz,
Octavia Pérez Medina y Lizbeth Maldonado Hernández por el apoyo brindado y por
compartir su experiencia durante el desarrollo de esta tesis.
A ustedes compañeros y amigos que me han brindado la oportunidad de conocerles y

disfrutarles en este proceso de Maestría, muchas gracias por sus amistad Daenna Kaori
Romero Moreno, Fabiola de los Ángeles Castillo García, Alicia Dorantes Delgado, Roger
López Bello, Amílcar Mendoza Vázquez, Federico Alonso Zumaya Estrada.
Al Consejo Nacional de Ciencia y Tecnología (CONACYT) por el financiamiento para

llevar a cabo esta Maestría, además de la estancia en el Colegio de Postgraduados.
Contenido
Resumen ........................................................................................................................................ 7
Introducción................................................................................................................................... 8
Materiales y Métodos ................................................................................................................... 10

Sitio de colecta ......................................................................................................................... 10
Obtención de extracto .............................................................................................................. 10
Análisis de los extractos ........................................................................................................... 11
Pruebas de susceptibilidad ........................................................................................................ 11
Análisis de resultados ............................................................................................................... 12
Resultados ................................................................................................................................... 13
Análisis de los extractos ........................................................................................................... 13
Pruebas de susceptibilidad ........................................................................................................ 13
Discusión ..................................................................................................................................... 14
Conclusión................................................................................................................................... 16
Referencias .................................................................................................................................. 17
Anexo .......................................................................................................................................... 25
Tablas ...................................................................................................................................... 25
Identificación de los compuestos químicos del extracto acuoso de
Spathodea campanulata P Beauvois (Scrophulariales: Bignoniaceae) que
causan toxicidad sobre estadios inmaduros de Anopheles albimanus
(Diptera: Culicidae).
Zacarías-Gómez Abel, MCS1, Vázquez-Martínez María Guadalupe, Dra.1, Rodríguez-
Ramírez Américo David, Dr.1, Soto-Hernández Ramón Marcos, Dr.2, Torres-Estrada José
Luis, Dr.1
(1) Instituto Nacional de Salud Pública, Centro Regional de Investigación en Salud Pública,
Tapachula, Chiapas, México.
(2) Colegio de Postgraduados, Campus Montecillos, Texcoco, Estado de México, México.

Resumen
Objetivo: Identificar los compuestos químicos del extracto acuoso de Spathodea
campanulata que producen toxicidad a larvas de Anopheles albimanus. Materiales y
métodos: Se analizaron extractos acuosos de S. campanulata y se identificaron los
compuestos mediante un sistema de cromatografía de gases acoplado a un espectrómetro de
masas. Se realizaron pruebas de susceptibilidad sobre larvas de An. albimanus con dos de
los compuestos identificados y obtenidos comercialmente. Resultados: El análisis
cromatográfico muestra la presencia de ocho compuestos químicos, entre los cuales se
identificaron el 1,3,5-trioxano y diclorometano. El 1,3,5-trioxano causó una mortalidad del
23% de larvas a una concentración de 20000 ppm mientras que el diclorometano causó una
mortalidad del 96% de larvas a una concentración de 1600 ppm. Conclusiones: El
diclorometano fue el compuesto que causó una mayor mortalidad a larvas de An.
albimanus, por lo que se le puede atribuir que una parte del efecto tóxico de S. campanulata
se debe a este compuesto. Se requiere realizar estudios con los demás compuestos para
determinar su efecto sobre larvas de An. albimanus.
Palabras claves: Paludismo, Anopheles albimanus, extractos vegetales.
7
Introducción
El paludismo es una enfermedad causada por parásitos del género Plasmodium, la infección
en el humano comienza cuando un mosquito infectado se alimenta e inyecta los
esporozoítos en la sangre circulante 1. Las cinco especies de parásitos que causan la
enfermedad son Plasmodium malariae, P. ovale, P. knowlesi, P. falciparum y P. vivax;
estas dos últimas, son las de mayor distribución en el mundo 2.
A pesar de los intensos esfuerzos para controlar el paludismo, éste continúa siendo un
problema de salud pública a nivel mundial debido a que causa 300 millones de casos y 781
mil muertes al año 3. La mayor cantidad de víctimas que sufren este padecimiento son niños
del África Subsahariana cuyas edades oscilan en los cinco años de edad 3. En México, los
focos de transmisión permanente de paludismo se han reportado sobre la costa del Océano
4, 5
Pacífico siendo el foco más activo el localizado en la frontera sur del territorio nacional,
específicamente en el estado de Chiapas. Hasta la semana epidemiológica número 31 del
2013 el Sistema Nacional de Vigilancia Epidemiológica (SINAVE) reportó que 99 de los
262 casos causados por P. vivax (37.78%), se han presentado en este foco de transmisión
permanente 5 - 13, siendo An. albimanus el principal vector 14.
La principal estrategia de control de anofelinos en México se basó, por más de medio siglo,
en la aplicación del diclorodifeniltricloroetano (DDT) pero debido a la resistencia que se
empezó a registrar desde inicios de los años setentas en los vectores de paludismo, los
efectos nocivos de este sobre la salud humana y la firma del acuerdo de norteamérica para
15 – 17
la cooperación ambiental su uso fue descontinuado .
8
Debido a esto el programa de control de vectores contempló la aplicación de insecticidas
18
piretroides en los brotes y focos de transmisión desde el año 2000 . Sin embargo, el uso
intensivo y extensivo de insecticidas favoreció el desarrollo de la resistencia en anofelinos a
este grupo toxicológico 19, 20.
En México, se ha documentado la resistencia a insecticidas en An. albimanus, vector de

21 - 23
paludismo en la costa del Océano Pacífico . Derivado de los problemas reportados por
el uso intensivo de insecticidas sintéticos existe la necesidad de buscar nuevas alternativas

24
de control . En este sentido, las plantas pueden ser una opción viable debido a que
producen una serie de sustancias con efectos insecticidas como saponinas, alcaloides,
fenoles, flavonoides, terpenoides 25 - 28, peróxidos cíclicos 29, entre otros.
Una de las plantas con efecto tóxico más estudiada por su eficacia en el control de insectos
plaga en todo el mundo es Tanacetum cinerariifolium debido a su contenido de piretrinas

30
. Debido a la inestabilidad que presentan las piretrinas a la luz y al aire algunos
investigadores buscaron métodos para sintetizar compuestos químicos análogos a las
piretrinas, dando como resultado la aletrina, el primer piretroide sintetizado 30.
Estudios realizados con Azadirachta indica (árbol de Nim), otra planta ampliamente
estudiada, han reportado mortalidades de 85 y 90% para larvas de Aedes aegypti y Culex
31
quinquefasciatus, respectivamente . De esta planta se han extraído compuestos químicos
32 - 37
de importancia insecticida, como es el caso de la azadiractina , la cual se ha evaluado
contra larvas de An. stephensi, Cx. quinquefasciatus y Ae. aegypti mostrando actividad
larvicida 38. Recientemente, se ha reportado que extractos con diversos solventes y diversas
especies de plantas como Pentzia globosa, Ricinus communis y Pterocarpus angolensis
9
39
causaron mortalidad del 100% de larvas de An. arabiensis . También, se han realizado
estudios con extractos acuosos de S. campanulata (tulipán africano), quienes produjeron

40, 41
altas mortalidades para larvas de Ae. fluviatilis y An. albimanus . Por lo tanto, el
objetivo del presente estudio fue identificar los compuestos químicos del extracto acuoso de
S. campanulata que producen la toxicidad a larvas de An. albimanus.
Materiales y Métodos
Sitio de colecta
Los bulbos preflorales de S. campanulata fueron colectados en árboles localizados en
diferentes sitios de la ciudad de Tapachula, Chiapas, México. Para realizar la colecta se
utilizaron tijeras jardineras. Los bulbos se trasladaron inmediatamente al laboratorio en
bolsas plásticas colocadas dentro de hieleras para evitar pérdida de compuestos por efecto
de la temperatura.
Obtención de extracto
La extracción se realizó en el laboratorio de Ecología Química del Centro Regional de
Investigación en Salud Pública (CRISP), Instituto Nacional de Salud Pública (INSP),
Tapachula, Chiapas, México. El extracto fue obtenido al realizar una incisión en la parte
apical de los bulbos preflorales con la ayuda de un bisturí estéril, posteriormente el extracto
fue almacenado en frascos de vidrio color ámbar a una temperatura de 4ºC.
10
Análisis de los extractos
Una muestra de 5 mL al 5% del extracto acuoso de S. campanulata fue inyectada a un
concentrador (purga y trampa) Velocity XPT Tekmar Domrmann, usando una jeringa
estéril. La muestra fue arrastrada con helio, con un tiempo de 11 min con una “purga" de 2
min. La "desorción" de la muestra fue de 1 min y el “horneado" de 2 min, el tiempo total de
la extracción fue de 16 min. Después de este tiempo, la muestra fue inyectada
automáticamente a un cromatógrafo de gases acoplado a un espectrómetro de masas (CG-
EM), Agilent Technologies modelos 6890 y 5973N, respectivamente. La separación se
realizó con una columna capilar HP-5ms (5% fenil metil siloxano) de 30 m X 250 µm X
0.25 µm. El gas acarreador fue helio con un flujo constante de 1 mL/min. Se inyectó 1µl de
muestra en modo split 15:1 a 200ºC. El horno inició a 50ºC durante 3 min, posteriormente
se incrementó 10ºC/min hasta 300ºC y permaneció a esa temperatura 2 min. La temperatura
de la línea de transferencia fue 280ºC. La ionización fue con 70 EV en modo “scan” (m/z
42
50-400) . La identificación de los compuestos se realizó comparando los espectros de
masas de cada compuesto con los registrados en la biblioteca espectral NIST 2002 y
algunos corroborados con estándares comerciales.
Pruebas de susceptibilidad
Una vez identificados los diversos compuestos químicos presentes en el extracto, se optó
por obtener comercialmente los compuestos 1,3,5-trioxano (Sigma-Aldrich, 99% de pureza,
Toluca, estado de México, México) y diclorometano (Golden Bell Reactivos, grado HPLC,
Zapopan, Jalisco, México). La elección de estos compuestos se debió a los antecedentes de
11
toxicidad reportados en vertebrados e invertebrados acuáticos, además de su fácil obtención
comercial.
Las pruebas de susceptibilidad se realizaron con los dos compuestos químicos,
anteriormente citados, en larvas de 3er estadio tardío y 4to estadio temprano de An.
albimanus de una colonia establecida en el CRISP, mantenidas a una temperatura de 28ºC ±

43
2ºC y una humedad relativa de 75% ± 5% . Las concentraciones utilizadas en los
bioensayos fueron para el 1,3,5-trioxano 100, 200, 300, 400, 500, 1000, 10000 y 20000
ppm mientras que para el diclorometano 200, 400, 600, 800, 1000, 1200, 1400 y 1600
ppm, las anteriores concentraciones fueron seleccionadas en base a los reportes de

44, 45
toxicidad sobre modelos acuáticos ecotoxicológicos . Las pruebas se realizaron en
vasos de plástico conteniendo 25 larvas con 200 mL de agua tridestilada y las
concentraciones mencionadas de cada estándar comercial (4 repeticiones por cada
tratamiento), un control conteniendo agua tridestilada y 25 larvas fue colocado por cada
tratamiento. La mortalidad fue registrada a las 24 horas y se realizaron tres repeticiones del
experimento 46.
Análisis de resultados
Los resultados obtenidos de las pruebas de susceptibilidad en porcentajes fueron analizados

47
utilizando el programa Probit, para conocer la relación dosis-respuesta . Se utilizó la
versión 1.5 de la Agencia de Protección Ambiental de los Estados Unidos de América (US
EPA, por sus siglas en inglés) dónde se estimaron las CL50 y CL90, así como sus límites
fiduciales.
12
Resultados
Análisis de los extractos
El análisis cromatográfico del extracto inyectado de S. campanulata indica la presencia de
ocho compuestos químicos: 2-aziridinietilamina; 2,5-dimetoxi-4-(metilsulfonil) anfetamina;
diclorometano; acetato manganoso; 2-hidroxipropanamida; cis-biciclo[4.2.0]octa-3,7-
dieno; 1,3,5-trioxano; 9,11-ácido octadecadinoico, 8-oxo-metilester (Tabla 1).
Pruebas de susceptibilidad
Los resultados obtenidos en las pruebas de susceptibilidad con el 1,3,5-trioxano indican que
este compuesto no presentó toxicidad sobre larvas de An. albimanus excepto en las
concentraciones de 10000 y 20000 ppm en donde las mortalidades observadas fueron del 2
y 23%, respectivamente (CL50= 29523 y CL90= 58015.188 ppm). Para el diclorometano las
mortalidades fueron del 38, 68, 72, 73, 86, 91, 95 y 96% a concentraciones de 200, 400,
600, 800, 1000, 1200, 1400 y 1600 ppm, respectivamente (CL50= 285.357 CL90=
1195.513).
13
Discusión
Se encontraron diversos compuestos químicos, en el extracto acuoso de S. campanulata,
pertenecientes a diversos grupos funcionales entre ellos alcaloides, haloalcanos, ésteres,
ciclobutarenos y peróxidos cíclicos. Para realizar las pruebas de susceptibilidad en larvas de
An. albimanus se optó por el 1,3,5-trioxano y el diclorometano por sus antecedentes
reportados sobre toxicidad para algunos organismos acuáticos vertebrados e invertebrados

29, 45, 48 - 50
, además de su fácil obtención comercial.
En el presente estudio se evaluó por primera vez la toxicidad de 1,3,5-trioxano en larvas de
An. albimanus. Cabe resaltar que el grupo de compuestos químicos al que pertenece el
1,3,5-trioxano ha sido reportado por tener acción antimalárica, así también la US EPA
29, 48, 49
cataloga a este compuesto como tóxico para algunos organismos acuáticos , como
Cyprinodom variegatus y Daphnia magna, respectivamente reportándose una CL50= 16530
ppm para C. variegatus y una CL50= 15200 ppm para D. magna 44. Las pruebas realizadas
en este estudio en larvas de An. albimanus reportaron una CL50= 29523 ppm. Con los
resultados obtenidos está claro que el 1,3,5-trioxano no se podría emplear como una
alternativa para el control larvario de An. albimanus debido a que las concentraciones
necesarias de este compuesto para causar mortalidad en las larvas serían muy altas, por
arriba de las reportadas para D. magna, un organismo utilizado como referencia para
determinar efectos tóxicos sobre organismos no blanco debido a su susceptibilidad 50.
Por otro lado, el diclorometano, es un compuesto químico no evaluado anteriormente como
larvicida de culícidos pero si ha utilizado como solvente para la extracción de compuestos
14
químicos medianamente polares y ha sido reportado por tener un efecto atrayente para Ae.
51
albopictus, vector secundario de dengue en varios países . En el presente estudio se ha
encontrado que el diclorometano causó mortalidades que van desde el 38 al 96% para
larvas de An. albimanus, principal vector de paludismo en la zona costera del sur de
Chiapas, México. En otros estudios se han realizado pruebas de toxicidad del
diclorometano en D. magna, modelo ecotoxicológico para invertebrados acuáticos,

45, 50
reportándose una CL50= 1682 ppm para este organismo . Mientras que estudios
realizados en peces como C. variegatus y Pimephales promelas, han reportado una CL50=
330 ppm para el primero, y no se ha observado efecto tóxico para el segundo en
concentraciones de 142 ppm; ambos peces son modelos ecotoxicológicos para vertebrados
acuáticos por la sensibilidad que presentan a las perturbaciones de sus medios debido a que
consumen y controlan las poblaciones de insectos, microcrustáceos y algas, a la vez que
permiten la recirculación, remoción y resuspensión del material orgánico dentro del
ecosistema 52 - 59. El diclorometano podría ser un buen candidato para el control de larvas de
An. albimanus debido a que las CL50 reportadas son superiores a la encontrada como tóxica
para este culícido en el presente estudio, 285.357 ppm. Sin embargo, el diclorometano
presenta el inconveniente de que sus metabolitos primarios de eliminación son el monóxido

60
y dióxido de carbono (CO y CO2, respectivamente) , estos gases están implicados en el
efecto invernadero, un fenómeno nocivo para el ambiente.
En estudios sobre extractos vegetales se ha reportado la identificación de diversos
compuestos químicos como la azadiractina y el gimnemagenol, terpeno y saponina,

39, 61
respectivamente, los cuales han sido eficaces contra larvas de mosquitos culícidos . En
el presente trabajo se reporta el baja toxicidad del 1,3,5-trioxano, un peróxido cíclico y la
15
alta mortalidad de larvas de An. albimanus con el diclorometano, un haloalcano. Las
diferencias entre estas mortalidades puede deberse a los distintos grupos funcionales a los
que pertenecen, si bien es el primer reporte de toxicidad del diclorometano sobre larvas de
mosquitos este efecto puede estar asociado al halógeno presente en la molécula, sin
embargo, otros estudios deben realizarse para confirmarlo.
Estudios realizados reportan que la absorción del diclorometano en animales resulta más
60
fácil en soluciones acuosas y dentro del organismo se metaboliza a CO en el citocromo
62 - 65
p450 . A la vez, el CO, al encontrarse al interior de un organismo dificulta la
transferencia de oxígeno a los tejidos, desencadenando eventos letales que pueden conducir
66
hasta su muerte . En el presente estudio se han preparado soluciones acuosas con
diclorometano y se observaron altas mortalidades en larvas de An. albimanus lo cual podría
deberse a la falta de oxígeno provocado por dicho compuesto.
Conclusión
En el presente estudio se han probado dos de los compuestos químicos identificados en el
extracto acuoso de S. campanulata, 1,3,5-trioxano y diclorometano, observándose una
mayor mortalidad en el último. Sin embargo, se deben de realizar más pruebas de
susceptibilidad en las larvas de An. albimanus con los demás compuestos químicos
identificados, para comprobar si es el diclorometano quien le brinda el efecto toxico al
extracto acuoso de esta planta o es una combinación ocurrida con los otros compuestos
identificados en el extracto.
16
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expression in DDT-resistant and susceptible strains of Drosophila melanogaster.
Gene 1996; 180: 165-71.
Anexo
Tablas
Tabla 1: Compuestos químicos identificados en el extracto acuoso de S. campanulata.
# Tiempo de Abundancia Nombre Probabilidad Grupo químico

pico retención
1 1.2 min 25000 2-aziridinietilamina 80.6 % Alcaloide
2 1.4 min 60000 2,5-Dimetoxi-4- 39.1% Alcaloide
(metilsulfonil) anfetamina
3 1.6 min 30000 Diclorometano 97.6% Haloalcano
4 1.8 min 40000 Acetato manganoso 54.9% Éster
5 2.0 min 10000 2-hidroxipropanamida 80.7% Alcaloide
6 3.2 min 10000 Cis-biciclo[4.2.0]octa-3,7- 18.7% Ciclobutareno
dieno
7 4.9 min 30000 1,3,5-trioxano 79.0% Peróxido cíclico
8 11.7 min 5000 9,11-ácido octadecadinoico, 32.2% Éster
8-oxo-metilester
25

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Instituto Nacional de Salud Pública

Centro Regional de Investigación en Salud Pública

Identificación de los compuestos químicos del extracto acuoso de

Maestro en Ciencias de la Salud

QFB Abel Zacarías Gómez

Dr. José Luis Torres Estrada

Dra. María Guadalupe Vázquez Martínez

Tapachula, Chiapas, México. Agosto de 2013.

A Dios por permitirme seguir formándome profesionalmente, por darme la oportunidad de

A las compañeras de laboratorio M en C Farah Zamira Vera Maloof e IBT Alejandra

A ustedes compañeros y amigos que me han brindado la oportunidad de conocerles y

Al Consejo Nacional de Ciencia y Tecnología (CONACYT) por el financiamiento para

Materiales y Métodos ................................................................................................................... 10

Spathodea campanulata P Beauvois (Scrophulariales: Bignoniaceae) que

causan toxicidad sobre estadios inmaduros de Anopheles albimanus

Zacarías-Gómez Abel, MCS1, Vázquez-Martínez María Guadalupe, Dra.1, Rodríguez-

Tapachula, Chiapas, México.

(2) Colegio de Postgraduados, Campus Montecillos, Texcoco, Estado de México, México.

Objetivo: Identificar los compuestos químicos del extracto acuoso de Spathodea

campanulata que producen toxicidad a larvas de Anopheles albimanus. Materiales y

métodos: Se analizaron extractos acuosos de S. campanulata y se identificaron los

compuestos mediante un sistema de cromatografía de gases acoplado a un espectrómetro de

los compuestos identificados y obtenidos comercialmente. Resultados: El análisis

cromatográfico muestra la presencia de ocho compuestos químicos, entre los cuales se

identificaron el 1,3,5-trioxano y diclorometano. El 1,3,5-trioxano causó una mortalidad del

mortalidad del 96% de larvas a una concentración de 1600 ppm. Conclusiones: El

determinar su efecto sobre larvas de An. albimanus.

Palabras claves: Paludismo, Anopheles albimanus, extractos vegetales.

en el humano comienza cuando un mosquito infectado se alimenta e inyecta los

esporozoítos en la sangre circulante 1. Las cinco especies de parásitos que causan la

enfermedad son Plasmodium malariae, P. ovale, P. knowlesi, P. falciparum y P. vivax;

estas dos últimas, son las de mayor distribución en el mundo 2.

específicamente en el estado de Chiapas. Hasta la semana epidemiológica número 31 del

2013 el Sistema Nacional de Vigilancia Epidemiológica (SINAVE) reportó que 99 de los

permanente 5 - 13, siendo An. albimanus el principal vector 14.

en la aplicación del diclorodifeniltricloroetano (DDT) pero debido a la resistencia que se

intensivo y extensivo de insecticidas favoreció el desarrollo de la resistencia en anofelinos a

este grupo toxicológico 19, 20.

En México, se ha documentado la resistencia a insecticidas en An. albimanus, vector de

el uso intensivo de insecticidas sintéticos existe la necesidad de buscar nuevas alternativas

fenoles, flavonoides, terpenoides 25 - 28, peróxidos cíclicos 29, entre otros.

plaga en todo el mundo es Tanacetum cinerariifolium debido a su contenido de piretrinas

investigadores buscaron métodos para sintetizar compuestos químicos análogos a las

piretrinas, dando como resultado la aletrina, el primer piretroide sintetizado 30.

especies de plantas como Pentzia globosa, Ricinus communis y Pterocarpus angolensis

estudios con extractos acuosos de S. campanulata (tulipán africano), quienes produjeron

S. campanulata que producen la toxicidad a larvas de An. albimanus.

Los bulbos preflorales de S. campanulata fueron colectados en árboles localizados en

diferentes sitios de la ciudad de Tapachula, Chiapas, México. Para realizar la colecta se

utilizaron tijeras jardineras. Los bulbos se trasladaron inmediatamente al laboratorio en

La extracción se realizó en el laboratorio de Ecología Química del Centro Regional de

Investigación en Salud Pública (CRISP), Instituto Nacional de Salud Pública (INSP),

fue almacenado en frascos de vidrio color ámbar a una temperatura de 4ºC.

Una muestra de 5 mL al 5% del extracto acuoso de S. campanulata fue inyectada a un

min. La "desorción" de la muestra fue de 1 min y el “horneado" de 2 min, el tiempo total de

la extracción fue de 16 min. Después de este tiempo, la muestra fue inyectada

automáticamente a un cromatógrafo de gases acoplado a un espectrómetro de masas (CG-

EM), Agilent Technologies modelos 6890 y 5973N, respectivamente. La separación se

se incrementó 10ºC/min hasta 300ºC y permaneció a esa temperatura 2 min. La temperatura

algunos corroborados con estándares comerciales.