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    Informe 5 - Química Analítica Instrumental

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    Sotelo Aliaga Dhan
    1. Se determinó el pKa del indicador naranja de metilo mediante espectrofotometría UV-visible, observando el desplazamiento de bandas a diferentes pH. 2. Se graficaron los espectros de absorción de las formas ácida y básica del indicador, y ambas formas, encontrando los puntos isosbésticos a 465 nm y 510 nm. 3. Usando la ecuación de Henderson-Hasselbalch y las absorbancias medidas en los puntos isosbésticos, se calculó un pKa promedio de 3

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    Informe 5 - Química Analítica Instrumental

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    1. Se determinó el pKa del indicador naranja de metilo mediante espectrofotometría UV-visible, observando el desplazamiento de bandas a diferentes pH. 2. Se graficaron los espectros de absorción de las formas ácida y básica del indicador, y ambas formas, encontrando los puntos isosbésticos a 465 nm y 510 nm. 3. Usando la ecuación de Henderson-Hasselbalch y las absorbancias medidas en los puntos isosbésticos, se calculó un pKa promedio de 3

    Descripción original:

    informes de UNMSM

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    1. Se determinó el pKa del indicador naranja de metilo mediante espectrofotometría UV-visible, observando el desplazamiento de bandas a diferentes pH. 2. Se graficaron los espectros de absorción de las formas ácida y básica del indicador, y ambas formas, encontrando los puntos isosbésticos a 465 nm y 510 nm. 3. Usando la ecuación de Henderson-Hasselbalch y las absorbancias medidas en los puntos isosbésticos, se calculó un pKa promedio de 3

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    Informe 5 - Química Analítica Instrumental

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    Sotelo Aliaga Dhan
    1. Se determinó el pKa del indicador naranja de metilo mediante espectrofotometría UV-visible, observando el desplazamiento de bandas a diferentes pH. 2. Se graficaron los espectros de absorción de las formas ácida y básica del indicador, y ambas formas, encontrando los puntos isosbésticos a 465 nm y 510 nm. 3. Usando la ecuación de Henderson-Hasselbalch y las absorbancias medidas en los puntos isosbésticos, se calculó un pKa promedio de 3

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    UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS

    Universidad del Perú, Decana de América

    FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA

    ESCUELA PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA

    INFORME N°5

    “DESPLAZAMIENTO DE BANDAS Y DETERMINACIÓN


    ESPECTROFOTOMETRICA DEL pKa DE UN INDICADOR”
    ASIGNATURA
    Química analítica instrumental

    DOCENTE
    Mg. Carlos Casas, Norma Angélica

    “SUBGRUPO 1”

    Aliaga Sotelo, Dan Abinadab

    Cruz Huaroto, Milagros Guadalupe

    Chirinos Mejico, Anely Rocío

    Espinoza Medina, Maryori Alexandra

    Revollar Panaifo, Cristian Enrique

    Lima, Perú

    2021-II
    MARCO TEÓRICO

    Un indicador es una sustancia que permite medir el pH de un medio, es ordinariamente un


    ácido o una base débil que presenta color diferente dependiendo del estado de protonación;
    capaz de captar o donar protones generando un cambio de color al producirse esta donación o
    captación de protones. Su uso y aplicación principal es la determinación del punto final de
    una neutralización, también puede servir para comprobar si un pH es ácido o básico. El pH es
    una medida de acidez o alcalinidad de una solución; y el pK es la fuerza que tienen las
    moléculas para disociarse. Los espectros de absorción de la luz del indicador a diferentes
    valores de pH constituyen un método excelente para el estudio de los cambios de color que se
    producen en los indicadores acido-base. Al representar un indicador, el espectro de absorción
    a diferentes valores de pH en las proximidades del pK, se obtienen diferentes curvas con dos
    máximos cada uno de ellos se cortan en un punto isosbéstico.

    La ecuación de Henderson - Hasselbalch es aplicable para la disolución de un indicador (Hin


    representa la molécula de indicador en su forma ácida y In - la molécula de indicador en su
    forma básica) en agua:

    pH = pKa + log [In- ] / [HIn]

    Los indicadores ácido-base tienen un intervalo de viraje de unas dos unidades de pH, en la
    que cambian la disolución en la que se encuentran de un color a otro, o de una disolución
    incolora, a una coloreada. El indicador naranja de metilo a un pH bajo tiene un color rojo y
    aun pH alto tiene un color anaranjado-amarillo, además el valor del intervalo de transición de
    su pH varía de 3.1 a 4.4 (1).

    1
    MATERIALES

    LOS REACTIVOS A UTILIZAR

    Ácido clorhídrico (concentrado) Disolución de naranja de metilo al 0.002%

    Ácido fórmico 0.1 M Hidróxido de sodio

    LA INSTRUMENTACIÓN

    Espectrofotómetro UV – visible Celdas de cuarzo

    2
    Matraces de diferentes volúmenes Fiolas de diferentes volúmenes

    Pipetas de diferentes volúmenes

    3
    PROCEDIMIENTO

    Diagrama de flujo sobre el procedimiento experimental

    RESULTADOS

    1. Graficar los espectro y hacer los cálculos para obtener el pKa del anaranjado de
    metilo.

    ESPECTRO DE ABSORCIÓN PARA LA FORMA ÁCIDA

    Concentración 0.002 %

    4
    C = 0.000008 g/ml

    PM anaranjado de metilo = 327,23 g/mol

    −8 −5
    C= 0,000008 g/ml = 2,4 x 10 mol/ml = 2,4 x 10 mol/L
    327,23 g/mol

    Cálculos de absortividad en forma ácida

    A=εxbxC

    ❖ para una longitud de onda de 510 nm

    1.123 = ε x 1 cm x 2,4 x 10-5 mol/L

    −1 −1
    ε = 46024,59 𝑀 𝑐𝑚

    ❖ para una longitud de onda de 465 nm

    0.562 = ε x 1 x 2,4 x 10-5

    −1 −1
    ε = 23032,786𝑀 𝑐𝑚

    ESPECTRO DE ABSORCIÓN PARA LA FORMA BÁSICA

    Concentración 0,002%

    C = 0.000008 g/ml

    PM anaranjado de metilo = 327,23 g/mol

    −8 −5
    C= 0,000008 g/ml = 2,4 x 10 mol/ml = 2,4 x 10 mol/L
    327,23 g/mol

    5
    Cálculos de la absortividad en forma básica

    A=εxbxC

    ❖ Para una longitud de onda 510 nm

    −5
    0,321 = ε x 1 cm x 2,4 x 10 mol/L
    −1 −1
    ε = 13155,737𝑀 𝑐𝑚

    ❖ Para una longitud de onda de 465nm

    −5
    0,669 = ε x 1 cm x 2,4 x 10 mol/L
    −1 −1
    ε = 27418,032 𝑀 𝑐𝑚

    ESPECTRO DE ABSORCIÓN PARA AMBAS FORMAS DEL INDICADOR

    Concentración 0,002%

    C = 0.000008 g/ml

    PM anaranjado de metilo = 327,23 g/mol

    −8 −5
    C= 0,000008 g/ml = 2,4 x 10 mol/ml = 2,4 x 10 mol/L
    327,23 g/mol

    Cálculos de la absortividad en ambas formas del indicador

    A=εxbxC

    ❖ Para una longitud de onda 510 nm

    −5
    0,579 = ε x 1 cm x 2,4 x 10 mol/L
    −1 −1
    ε =24151,159𝑀 𝑐𝑚

    6
    ❖ Para una longitud de onda de 465nm

    −5
    0,619 = ε x 1 cm x 2,4 x 10 mol/L
    −1 −1
    ε = 25802,013 𝑀 𝑐𝑚

    CÁLCULO DEL PKA DEL ANARANJADO DE METILO

    pH=pKa+log[Aa-A]/[A-Ab]

    ➔ pH=3.8

    ➔ Aa (absorbancia en forma ácida): 510 nm-1.123; 465 nm-0.562

    ➔ Ab (absorbancia en forma básica): 510 nm-0.321; 465 nm-0.669

    ➔ A (absorbancia para ambas formas): 510 nm-0.579; 465 nm-0.619

    A 510 nm (longitud de onda)

    3.8=pKa+log[1.123-0.579]/[0.579-0321]

    pKa=3.476

    A 465 nm (longitud de onda)

    3.8=pKa+log[0.562-0.619]/[0.619-0.669]

    pKa=3.743

    ➔ pKa promedio=3.61

    7
    DISCUSIÓN

    En esta oportunidad, la investigación de la práctica se ha basado en la observación de


    desplazamiento de bandas y determinación espectrofotometrica del pKa de un indicador, y
    para eso debemos saber que el pH de las soluciones es muy importante para la ejecución de la
    experimentación.

    Bajo una investigación realizada por Williams-Smith, et al se corroboró que para la


    realización de trabajos espectroscópicos (principalmente en espectroscopía de resonancia
    paramagnética electrónica bioquímica) u otros trabajos químicos era importante la
    conservación del pH y el control de los factores de variación como las bajas temperaturas y la
    presencia de algunas proteínas en las soluciones, ya que se encontró que los efectos aparentes
    de cambios del pH dependen del tapón y las ya mencionados factores de variación. Por lo que
    se recomienda, que para este tipo de trabajos en especial a bajas temperaturas, se deben
    realizar pruebas constantes del pH y realizarlo de forma adecuada con un sistema indicador
    (2).

    CONCLUSIONES

    Se concluye que para la cuantificación de los sistemas multicomponentes se va a regir bajo el


    principio que las absorbancias son aditivas y como consecuencia de esto las bandas confluyen
    entre ellas para formar una sola banda. La absorbancia de una sustancia que se utiliza como
    indicador ph varía en función al ph, debido a que la absortividad molar depende de esta,
    además se concluyó que mediante el análisis por espectrofotometría UV visible nos sirve para
    hallar la concentración de cada componente ,mediante el pka a diferentes medidas de ph ,por
    lo que se trabajó utilizando como referencia el punto isobestico ,el cual nos indica que a
    longitudes de 465nm y 560nm son las que usaremos para determinar el pka del indicador ,por
    lo tanto utilizando distintas ecuaciones y conceptos a utilizados podemos llegar a comprender
    la variación de un indicador a distintos ph y hallando su pka.

    8
    CUESTIONARIO

    1. ¿Qué es el punto isosbéstico? En la gráfica ubique este punto

    El punto isosbéstico es el punto por el cual pasan todos los espectros de absorción de
    las formas ácida y básica de una sustancia en diferentes condiciones, las
    absortividades de las dos formas han de ser iguales en el punto en que se cruzan.
    Estos corresponden a una longitud de onda determinada, cumpliéndose que para esa
    longitud de onda la absorbancia total de la muestra no cambia aunque esta
    experimente una reacción química o cambio físico. Esta longitud de onda se utiliza
    como dato para su identificación.

    2. La constante de acidez de un ácido débil se determinó preparando tres disoluciones,


    cada una de las cuales tenía una concentración total de 5x10-5M. La primera se
    acidificó con HCl y dio una absorbancia de 0,25. La segunda se alcalinizó y dio una
    absorbancia de 1,4. El pH de la tercera disolución era 2,91, con una absorbancia de
    0,662. ¿ Cuál es el valor de Ka?

    pH =pK + log [𝐴 𝐻𝑙𝑛


    − 𝐴]/[𝐴 − 𝐴 ]
    −
    𝑙𝑛

    2,91= pKa + log [0,25 - 0,662]/[0,662 - 1,4]

    2,91 = pKa - 0,2532

    3,1632 = pKa = -log Ka

    −4
    Ka = 6,8675 x 10

    3. ¿Qué efecto tiene el solvente en el espectro de absorción de las moléculas


    orgánicas?

    9
    Los posibles efectos que presenta el solvente sobre el sistema de absorbente, son
    observados normalmente en los disolventes polares tales como el agua, alcoholes,
    ésteres y cetonas, ya que estos tienden a eliminar la estructura fina del espectro como
    resultado de los efectos vibracionales. Además, las posiciones de los máximos de
    absorbancia están afectadas por la naturaleza del disolvente. Por otro lado, se puede
    obtener el efecto de que el disolvente absorbe radiación en las bandas de estudio , es
    por ello la importancia de conocer las transiciones electrónicas de un disolvente (3).

    4. ¿Cuál es la concentración de la forma ácida y básica en la disolución donde


    están presentes ambas formas del indicador ?

    La concentración de la forma ácida para una longitud de onda 510 nm es:

    A=εxbxC

    −1 −1
    1,123 = 24151,159𝑀 𝑐𝑚 x 1 cm x concentración

    −4
    concentración = 4 ,64 x 10 mol/L
    La concentración de la forma básica para una longitud de onda 510 nm es:

    A=εxbxC

    −1 −1
    0,321 = 24151,159𝑀 𝑐𝑚 x 1 cm x concentración

    −4
    concentración = 1 ,329 x 10 mol/L

    10
    Referencias:
    1. Rea S. Scribd [Internet]. 2017 [Citado 17 de noviembre de 2021]. Disponible en:
    https://es.scribd.com/embeds/317002753/content?start_page=1&view_mode=scroll&
    access_key=key-DXFMtVntRav5tlToCCWR
    2. Williams-Smith DL, Bray RC, Barber MJ, Tsopanakis AD, Vincent SP. Changes in
    apparent pH on freezing aqueous buffer solutions and their relevance to biochemical
    electron-paramagnetic-resonance spectroscopy. Biochemical Journal [Internet]. 1977
    Dec 1 [Citado 17 de noviembre de 2021];167(3):593–600. Disponible en:
    https://portlandpress.com/biochemj/article-abstract/167/3/593/12305/Changes-in-appa
    rent-pH-on-freezing-aqueous-buffer
    3. Espectroscopía visible y ultravioleta. SKOOG, D.A.; Leary J.J., Holler F. James;
    PRINCIPIOS DE ANÁLISISINSTRUMENTAL, 5° ed.; Ed. McGraw-Hill
    (1998).[Internet]. [citado 17 de noviembre de 2021]. Disponible en:
    file:///C:/Users/user/Downloads/uv_vis-033319-1..pdf

    11

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