Tincion Micro Expo

Unidad 1
TINCION DE MICROORGANISMOS
TECNICAS DE OBSERVACIÓN
MICROSCOPICA
TIPO DE OBSERVACIONES
MICROSCÓPICAS
1. Observación en fresco
Son preferibles en las situaciones siguientes:
• La morfología de las bacterias se altera cuando se desecan y tiñen.

• Cuando las bacterias se observan para determinar movilidad
•Para observar los cambios citológicos que ocurren durante la
división celular
•Por este método se observan fácilmente algunas inclusiones
celulares como vacuolas y materias grasa.
2. Observación con tinciones

• Para observar las características morfológicas de las bacterias
•Identificación y diferenciación de microbios entre especie y
dentro de la misma especie (tinción diferencial o selectiva).
TIPO DE OBSERVACIONES
MICROSCÓPICAS
•preparación en fresco simple
•preparación en gota pendiente
2. Observación con tinciones
•Tinción simple: un solo colorante.
•Tinción diferencial: más de un colorante
•Tinción especial
Tinción negativa: colorea el medio que rodea
a la bacteria permaneciendo ésta sin teñir.
Procedimiento para un preparado en fresco
("entre porta y cubre")
1. Colocar una gota de 2.- Tomar la muestra con el

SSF o agua en un porta asa de siembra o un gotero
Muestr
a
Porta
objeto
El microscopio de
campo oscuro esta
constituido por
un microscopio óptico al
cual se le acondiciona un
condensador especial,
este tiene como fin
producir una disfracen de
los rayos luminosos
enviándolos lateralmente
sobre el objeto en forma
de un cono luminosos, y
de esta forma tampoco
penetran directamente al
objetivo
Observación microscópica
 Bacterias: Leptospiras,
treponemas (M. campo oscuro)
1. Observación en fresco : (SSF)
 Parásitos : Trofozoitos, larvas.
 Hongos: Levaduras
1. Observación en fresco con
modificaciones
 Hongos
 NaOH 10% (hifas)
Procedimiento para un preparado en fresco
en gota pendiente
2. TINCIONES O COLORACIONES
COLORANTE: DEFINICIÓN
• Son compuestos orgánicos que tienen

alguna afinidad específica por algún
componente.
• Los colorantes son compuestos

químicos utilizados para aumentar
el contraste
COLORANTES: Tipos
a) Sales colorantes: más comúnmente usados
 básicos: Consisten en un catión coloreado unido a
un anión incoloro.Tiñen la célula bacteriana
uniformemente (ácidos nucleicos y los polisacáridos
ácidos )
 (cromatina nuclear de pro y eucariotas)
 (más usados en citología bacteriana).
• Ej: clorhidrato (-) de azul de metileno (+). la safranina, la fucsina
básica, el cristal violeta
 ácidos:Tienen el catión incoloro unido a un anión

coloreado. No tiñen la célula bacteriana, pueden usarse
como color de contraste (coloración negativa). Tiñen
estructuras citoplasmáticas de las células eucariotas(Rx
básicas)
COLORANTES: Tipos
b) Colorantes liposolubles
• Se combinan con los componentes
lipídicos de la célula, usados para revelar
la localización de los depósitos de grasa.
Ej. Negro Sudán.
COLORACIONES : Tipos
• Vitales
– Son aquellas que se practican sobre células que
están vivas, mediante la introducción de un
colorante en la circulación de un organismo vivo.
– Ejem: el verde Jano y el azul de metileno.
• Supravitales
– son aquellas que se realizan sobre células o tejidos vivos,
pero que están aislados del organismo del que proceden.
• No vitales
– se realizan sobre células muertas.
TÉCNICAS PARA REALIZAR UNA
PREPARACIÓN COLOREADA
a) Frotis o película
(extensión)
b) La fijación
c) Coloración.
Tinción de células para la observación
microscópica
Extensión de una fina capa

de células sobre el porta
Adición del colorante

lavado y secado
Secado al aire
Se coloca una gota de aceite de

inmersión sobre el porta y se observa
con el objetivo de 100X
Fijación por flameado del p orta
a) Frotis o película (extensión)
• Utilizar portaobjetos limpios y desengrasados
b) La fijación:
Los microorganismos queden adheridos al portaobjeto ( coagula las sustancias
proteicas)
TIPOS
– CON CALOR (O MÉTODO DE KOCH)
– FIJACIÓN QUÍMICA: alcohol metílico, formalina al 5 % (v/v), licor de Hoffman (partes
iguales de etanol absoluto y éter)
Metanol
c) Coloración. SIMPLE : Positiva o
negativa
Tinción simple de azul de metileno.
Frotis y fijación
1.- Poner una gota de agua 2.- Tomar la muestra con el 3.-Extender sobre el agua y
en un porta asa de siembra fijar a la llama del mechero
Tinción
1.- Cubrir la preparación 2.- Lavar con agua, dejar Micrococcus luteus
con Azul de Metileno 5’ secar y observar al
microscopio
Tinción negativa.
1.- Colocar una gota de

Nigrosina en un porta
3.- Mezclar con la
Nigrosina y extender por
2.- Tomar muestra del todo el porta. Secar al
microorganismo con el aire y observar
asa, flamear el tubo y tapar
cápsulas tanto bacterianas como de levaduras, esporas que se observan como cuerpos
refringentes y espiroquetas
c) Coloración. Diferencial o
compuesta
se utilizan para distinguir entre tipos de microorganismos
Etapas :
1. tinción primaria
2. Tinción de contraste o secundaria
- Ejemplo.: COLORACION GRAM,
COLORACION DE ZIEHL- NEELSEN, ESPORAS
PROCEDIMIENTO COLORACION
GRAM
COLORACIÓN DE ZIEHL-
NEELSEN
fundamento de esta técnica diferencial se basa en la
propiedad
de la pared celular Orden Actinomycetales. (acidos
micólicos)
• Resiste la decoloración con alcohol y un ácido fuerte
cuando
• VARIANTES
• Caliente :Mycobacterium
• En frío (o de Kinyoun) :
Cryptosporidium, Cyclospora E
TINCION Shaeffer–Fulton,
también conocida como Wirtz-
Conklin.
La tinción de flagelos de Leifson
• 1.Se fija químicamente la suspensión
bacteriana, mediante formol, y se hace la
extensión en un portaobjetos.
• 2.Se deja secar al aire, sin calentamiento
alguno.
• 3.Se cubre la preparación con una mezcla de
ácido tánico y el colorante rosanilina, de
preparación extemporánea. El ácido tánico
engruesa los flagelos y la rosanilina los tiñe.
• 4.Se retira el exceso de colorante con agua.
5. Por último, se deja secar al aire, antes
de su observación al microscopio.
• Figura 3.11Tinciones específicas. (a) La tinción de Wirtz-Conklin se utiliza para
observar endosporas. Bacilius cereus (b) La tinción de Leifson revela que este
microorganismo posee flagelos, lo cual contribuye a su identificación como Spirillum
volutans..(c) La tinción negativa con tinta china permite observar que esta bacteria
posee cápsula, lo que facilita su identiticación como Klebsiella pneumoniae, agente
causal de la neumonía.
Imágenes de Paramecium al mismo aumento (1000x), pero con distintos
microscopios. (a) La microscopía de campo claro permite observar la forma y las
estructuras internas de mayor tamaño, como el núcleo. (b) La imagen de
contraste de fases muestra mayor detalle interno, y el característico halo. (c) La
microscopía de campo oscuro revela la presencia de cilios. (d) La imagen de
Nomarsky es casi tridimensional.
PARASITOS: Plasmodium
• GIEMSA O WRIGHT
COLORACION LEISHMAN
HONGOS
• AZUL DE LACTOFENOL
• T. MENTAGROPHYTES
COLORACION DE TEJIDOS
HEMTOXILINA /EOSINA

Tincion Micro Expo

Cargado por

Copyright:

Formatos disponibles

Tincion Micro Expo

Cargado por

Información del documento

Descripción original:

Título original

Derechos de autor

Formatos disponibles

Compartir este documento

Compartir o incrustar documentos

Opciones para compartir

¿Le pareció útil este documento?

¿Este contenido es inapropiado?

Copyright:

Formatos disponibles

Tincion Micro Expo

Cargado por

Copyright:

Formatos disponibles

Unidad 1

• La morfología de las bacterias se altera cuando se desecan y tiñen.

2. Observación con tinciones

1. Colocar una gota de 2.- Tomar la muestra con el

• Son compuestos orgánicos que tienen

• Los colorantes son compuestos

 ácidos:Tienen el catión incoloro unido a un anión

Extensión de una fina capa

Adición del colorante

Se coloca una gota de aceite de

1.- Colocar una gota de

También podría gustarte