Laboratorio 4 Ii

QUÍMICA ORGÁNICA III
Docente: Ronal López Parra

EAP FARMACIA Y BIOQUIMICA
Sesión N° 4– Semana 4
Práctica de Química Orgánica III
 Determinación de la glucosa por métodos espectroscópico.
Determinación de la glucosa por métodos espectroscópico.
Uno de los métodos más comúnmente usados para cuantificar azúcares totales es el de la Antrona. Este
procedimiento nos permite determinar cuantitativamente hexosas, aldopentosas, ácidos uránicos ya sea
en forma libre o formando parte de polisacáridos.
Para que la medición sea digna de confianza, deben controlarse cuidadosamente las concentraciones de
antrona y de ácido en el reactivo así como el tiempo y la temperatura de reacción. Es aconsejable que la
muestra se encuentre libre de proteínas ricas en triptófano para evitar interferencias en la reacción
colorida.
Determinación de la glucosa por métodos espectroscópico.
Fundamento.
En presencia del ácido sulfúrico del Reactivo de Antrona, los carbohidratos experimentan deshidratación
convirtiéndose en furfural o hidroximetilfurfural. Estos productos pueden condensarse con aminas
aromáticas, fenoles, antrona, etc.; produciendo compuestos coloreados. La formación del furfural o sus
derivados acomplejados con estas sustancias puede utilizarse como método cualitativo o cuantitativo para
estimar azúcares, ya que la intensidad de color desarrollado durante la condensación va a estar en función
de la concentración de carbohidrato presente en la muestra.
Espectrofotometría.
La cuantificación de azúcares se hace en base al color desarrollado por la muestra, utilizando espectrofotómetros o
fotocolorímetros para de terminar la intensidad o la energía de la luz que ha pasado a través de la celda o tubo de
fotocolorímetro conteniendo la solución coloreada. Para esta determinación se debe fijar un valor de longitud de
onda que es donde el complejo colorido muestra su máxima absorción, y además disponer de un blanco para calibrar
el aparato, esta solución solamente contiene agua destilada y reactivo de antrona sometido al protocolo indicado.
Absorbancia y Transmitancia
La cantidad de luz que absorbe la muestra se denomina ABSORBANCIA, y la luz que pasó a través de la solución se llama
TRANSMITANCIA. Existe una fórmula la que nos relaciona a ambas:
Cuantificación.
Para cuantificar la cantidad de azúcar presente en una muestra, primeramente se prepara una curva de
calibración con los valores de absorbancia mostrados por distintas soluciones de concentración conocida.
Estos valores se ajustan a una recta usando Regresión Lineal , y con la ecuación de la recta se determina la
concentración de azúcar según haya sido el valor de absorbancia que mostró.
Procedimiento:
Antrona tiourea: Solución stock 66% V/V de H2SO4 disolver 10 g de tiourea y 0,5 g de antrona en un litro de H2S04
calentando a 80 - 90°C. Conservar el reactivo entre 0-4°C, glucosa estándar: rango 25 -200 µg/mL. Hacer una curva de
calibración: Poner 0,2 mL de la solución problema más 2 mL del reactivo de antrona agitar, poner en un baño de agua a T°
ambiente y luego en un baño de agua a ebullición por 15 minutos, enfriar guardar en la oscuridad.
Medir la absorbancia de 620 nm después de 20 – 30 minutos.
Preparación de la solución “Madre”.

1. Pesar 0,5 g de glucosa y enrasar en una fiola de 1L.
Procedimiento:
Preparación de las diluciones. Cada una de las mediciones
anteriores enrasar en una fiola de
2. De la solución “madre” , coger: 100 mL
a) 5 mL
b) 7,5 mL
c) 10 mL
d) 15 mL
e) 20 mL
f) 22,5 mL
g) 30 mL
h) 32,5 mL
i) 35 mL
j) 40 mL
Preparación de las diluciones
4. De cada dilución coger 2 mL de muestra y agregar 0,5 mL de antrona.
2 mL 2 mL
0,5 mL de 0,5 mL de
antrona antrona
2 mL
2 mL
0,5 mL de
0,5 mL de
antrona
antrona
Preparación de las diluciones
5. Luego llevar a baño maria por aproximadamente 10-15 minutos.
6. Medir la absorbancia de 620 nm después de 20 – 30 minutos.
CUESTIONARIO
1. Describa los métodos que se utilizan para determinar la concentración de azúcares en líquido
biológico.
2. Graficar la curva de calibración en papel milimetrado desarrollado en la practica teórica.
1. ¿De qué manera reacciona la antrona con los azúcares?
4. ¿Por qué es necesaria la presencia de ácido sulfúrico en la reacción?
5. ¿Qué es la Ley de Lambert-Beer?

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QUÍMICA ORGÁNICA III

Docente: Ronal López Parra

Preparación de la solución “Madre”.

2. Graficar la curva de calibración en papel milimetrado desarrollado en la practica teórica.

1. ¿De qué manera reacciona la antrona con los azúcares?

4. ¿Por qué es necesaria la presencia de ácido sulfúrico en la reacción?

5. ¿Qué es la Ley de Lambert-Beer?

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