Biofertilizantes

Ovitecum rates resto odistiis nusciae net asi dolorib eaquae

digenduciis dit et quia vera velent odi consequi volorum inis
alitiumet magnis rehendit, voloria conempo rempore illisci tet
microbianos
que comnit experiat antur aut velitatio velest excesto cusae non-
sequ iasperum explibus prerspiderum eic tem nossit assus vellore Adriana Carolina Flores Gallegos
lanihiliae volo idiorecus, quiduci liquide ruptia doluptatum Víctor González
excerum exeroribus aut alit, si sita con esto te nonsequo eumet Cristóbal N. Aguilar
pliae nectia dolorro viderit qui nonsequ iberest, quibus si ut quo
tendis mos et volore, corio voluptates que nulparum dis quibust, Raúl Rodríguez Herrera (eds.)
cuptat ad moditem quatinis consequ asperiam re post, sa verna-
ture vendit versperi ommolo quae. Iliquatio velique vel ide landu-
ciam, aut experum, sequunt quia num eati dolorem quid magnis-
quamus molorum ex et volor sim latur?
Possinc tatum, tempore, asperum eriaspersped que simaximpore
prem voluptiis dolupic tem apelect aturest enime eum sequi
officiis aut quodit aute cuptat.
Ni destorempere perio. Itate odigenda voloreh enihilla quiatibus-

Biofertilizantes microbianos
ci blaut millestis ex eossunt quis magniendit vellesectur sequi as
magnimu sciendae namust, sequodi qui ommolorempor auteca-
bore prernate con pos aut as simporenit eatiaectat.
Imusdan delesequas et in cus.

Universidad Autónoma
de Coahuila
Ni destorempere perio. Itate odigenda
voloreh enihilla quiatibusci blaut millestis
Modisque idellen dellor moluptur
Sandae con restrum reraectet
Quation re veles earite dolupta
Spitatempor autem listi
 Sustancias promotoras del crecimiento vegetal

Botryodiplodia teobromae como fuente para la obtención de ácido

jasmónico en cultivo sólido
Laredo A. E. I., Eng F., Castillo G., Ortega G.,
Altuna B., Legra S., Matos S., Ilina A.,
Michelena A. G., Martínez H. J.L. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 251

Bacterias halófilas

Bacterias halófilas
Delgado-García M., Rodríguez-Herrera, R. . . . . . . . . . . . . . . . . 279

Otros hongos empleados en biofertilización

Trichoderma como biofertilizante

Berlanga-Padilla A.M., Hernández-Castillo F.D. . . . . . . . . . . . . . 301

Parte IV. Producción de biofertilizantes

Importancia de los biofertilizantes en la agricultura

Ochoa Reyes E., González-Vázquez V.M. . . . . . . . . . . . . . . . . . 319

Cinética microbiana del cultivo de microorganismos biofertilizantes

Sepúlveda-Torre L., Aguilar C.N. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 339

Escalado en el proceso de producción de compuestos bioactivos

Michelena Álvarez, G., Iliná A., Martínez-Hernández J.L. . . . . . . . . 361

Parte V. Experiencias de campo con biofertilizantes

Fosfomona: un producto bacteriano para solubilización de fósforo; aplicaciones en

cultivo en suelo mineral e hidroponia
García-Hernández, J.M., Escobedo-Avitia, M.D.,
RodríguezAmador, M.A, Muñoz-Ríos, R.,
García-Caballero, B.E., Nevárez-Moorillón, G.V,
Moorillón-Piedra, M.C.T. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 387

Biofertilizantes microbianos.indd 9 10/04/2014 02:28:41 p.m.

 Cinética microbiana del cultivo
de microorganismos biofertilizantes1

Sepúlveda-Torre L.
Aguilar C.N.2

Resumen

L
a cinética microbiana se encarga de entender todas las manifestaciones y
reacciones de la vida microbiana: crecimiento, supervivencia, muerte, adap-
taciones, formación de producto, ciclos celulares e interacciones con el medio
ambiente. En los procesos fermentativos industriales es muy importante estudiar el
comportamiento cinético del microorganismo ya que de él depende el rendimiento
del producto de interés, entre otras variables. Además, es de suma importancia ya
que representa la pérdida o ganancia económica de los procesos. La finalidad de este
capítulo es describir y resaltar la necesidad que presentan los microorganismos para su
crecimiento, procesos metabólicos y algunos factores que influyen en su crecimiento.

Palabras clave: biofertilizantes, cinética, crecimiento, ecuación de Monod, tem-

peratura.

1
Departamento de Investigación en Alimentos, Facultad de Ciencias Químicas, Universidad Autó-
noma de Coahuila, Blvd. Venustiano Carranza s/n. Col. República Oriente, 25280, Saltillo, Coahuila,
México. Tel. +52(844)4161238.
2
Autor por correspondencia: [email protected]

343

Biofertilizantes microbianos.indd 343 10/04/2014 02:29:47 p.m.

 BIOFERTILIZANTES MICROBIANOS

Introducción
Los principios de cinética microbiana se establecieron en el periodo entre los finales
de los cuarenta, hasta finales de los sesenta. Uno de los personajes destacados fue
Jacques Monod, que junto con Francois Jacob y André Lwoff recibieron el premio
nobel en 1965. Su trabajo se enfocó en el crecimiento de bacterias como un método
para el estudio de la fisiología y la bioquímica bacteriana, en donde se consideró
exclusivamente a las fases del crecimiento positivas, ya que el estudio de la fase de
muerte, que hasta ese tiempo implicaba muchos problemas de entendimiento, no fue
considerado. En contraste, con el desarrollo de nuevas técnicas de cultivo, la evolu-
ción de la genética y la genómica, entre otras, se establece el avance contundente en
el estudio y la elucidación del comportamiento bacteriano.

Requerimientos nutrimentales
En un proceso de cultivo, el microorganismo necesita de una seria de requerimientos
para su crecimiento óptimo. La variabilidad de los nutrientes es considerable, todo
dependerá del tipo de cultivo y del microorganismo que se utilice. Sin embargo, se
pueden mencionar tres aspectos muy importantes que son indispensables para el cre-
cimiento microbiano: 1) los macronutrientes, que son compuestos que son agregados
en cantidades de gramos o litros que están representados por las fuentes de C, N, S, P,
K y Mg, y 2) los micronutrientes o elementos traza representados por sales de Fe, Mn,
Mo, Ca, Zn y Co, que se agregan en cantidades de miligramos por litro. En el Cuadro
1 se presentan compuestos orgánicos de los principales elementos de la masa celular
y su porcentaje en peso seco. Para poder formular un medio de cultivo adecuado se
deben de considerar estos elementos, además de otros compuestos para la obtención
de productos especiales (Nakayama, 1976).

Cuadro1. Compuestos orgánicos de los principales elementos

constituyentes en un proceso de cultivo

Elemento Compuestos Peso seco (%)

H Orgánicos y agua 8
O Orgánicos y agua 20
C Orgánicos 50
N Proteínas, ácidos nucleicos y coenzimas 14

344

Biofertilizantes microbianos.indd 344 10/04/2014 02:29:48 p.m.

 CINÉTICA MICROBIANA DEL CULTIVO DE MICROORGANISMOS BIOFERTILIZANTES

S Proteínas y algunas coenzimas 1

P Ácidos nucleicos, fosfolípidos y coenzimas 3
Mg Cofactor de reacciones enzimáticas 0.5
Mn Cofactor de algunas enzimas 0.1
Ca Cofactor de enzimas (proteasas) 0.5
Fe Citocromos, proteínas y cofactor de enzimas 0.2

Co
Zn Constituyentes de la vitamina B12 y constituyentes de
0.03
Cu ciertas enzimas
Mo

Fuente: Quintero, 1990.

Y finalmente, el tercer aspecto a considerar en el crecimiento microbiano: los fac-

tores de crecimiento, que están constituidos generalmente por componentes orgánicos
suministrados en baja concentración y que no son sintetizados ni metabolizados por las
células, sino incorporados a estructuras celulares y de función metabólica específica,
como vitaminas, algunos aminoácidos, ácidos grasos no saturados, etc. En el Cuadro
2 se muestran algunos de estos factores.

Cuadro 2. Factores de crecimiento: vitaminas y sus funciones

Vitamina Función
Ácido p-aminobenzóico Precursor del ácido fólico
Ácido fólico Metabolismo de compuestos de carbono; transferencia de grupos metilo
Biosíntesis de ácidos grasos; -descarboxilaciones; algunas reacciones
Biotina
de fijación de CO2
Reducción y transferencia de restos monocarbonados; síntesis de
Cobalamina
desoxirribosa
Transferencia de grupos acilo en la descarboxilación del piruvato y
Ácido lipoico
α-cetoglutarato
Precursor del NAD+; transferencia de electrones de reacciones de oxi-
Niacina
dación-reducción
Ácido pantoténico Precursor de la coenzima A; activación del acetilo y derivados acilados
Precursor del FMN, FAD en flavoproteínas implicadas en el transporte
Ribofavina
de electrones
Continúa...
345

Biofertilizantes microbianos.indd 345 10/04/2014 02:29:48 p.m.

 BIOFERTILIZANTES MICROBIANOS

...continuación
Tiamina α-Descarboxilaciones; transcetolasa
Vitaminas B6 Transformaciones de aminoácidos y cetoácidos
Grupo vitamina K;
Transporte de electrones; síntesis de esfingolípidos
quinonas
Compuestos que unen al hierro; solubilización y transporte del hierro
Hidroxamatos
al interior celular
Fuente: Quintero, (1990).

Los medios de cultivo pueden clasificarse considerando la naturaleza química de

los componentes en:

• Medios sintéticos o medios químicamente definidos, y

• Medios complejos en cuya composición intervienen sustancias de origen
animal o vegetal como peptonas, extracto de levadura, macerado de maíz,
harina de soja, etcétera.

La formulación tiene que ver con los aspectos cuantitativos de los medios, es
decir, deben establecer la concentración de cada componente a utilizar. Una primera
aproximación con respecto a las cantidades a utilizar de las diversas fuentes la da
el conocimiento de la composición de la biomasa del microorganismo al ser em-
pleado. Una composición elemental y típica de biomasa es (en peso seco): carbono
46-48; nitrógeno, 7-12; fósforo 1-3; azufre, 0.5-1 y magnesio, 0.5-1. Es decir, que
si queremos formular un medio para producir una determinada cantidad de biomasa
debemos promover las distintas fuentes que aseguren como mínimo las cantidades de
elementos que deben ser suministrados. Además, la composición de un medio mínimo
también tiene en cuenta los requerimientos de las fuentes de energía. En el Cuadro
3, se muestra la composición del medio de cultivo para la producción de Klebsiella
aerogenes según Pirt, (1976).

Cuadro 3. Composición de un medio de cultivo mínimo para el crecimiento

de Klebsiella aerogenes

Componente Elemento provisto o función Masa del componente (g)

Glucosa C, energía 22.7
NH4Cl N 4.37
KH2PO4 P+K 1.13

346

Biofertilizantes microbianos.indd 346 10/04/2014 02:29:48 p.m.

 CINÉTICA MICROBIANA DEL CULTIVO DE MICROORGANISMOS BIOFERTILIZANTES

MgSO4.7H2O S + Mg 0.232
CaCl2.2H2O Ca 0.011
FeSO4.7H2O Fe 0.007
MnSO4.4H2O Mn 0.002
ZnSO4.7H2O Zn 0.002
CuSO4.5H2O Cu 0.0004
CoCl2.6H2O Co 0.0004
EDTA, sal disódica
Agente quelante 0.394
dihidrato
H2O destilada 1,000 ml
Fuente: Pirt, (1976).

Existen medios de cultivos específicos para la producción de metabolitos secun-

darios. Según Robledo y col. (2008); realizaron una investigación sobre la capacidad
que presentaron Aspergillus niger GH1 y PSH, cepas aisladas por Cruz-Hrnández y
col. (2005); estos microorganismos son capaces de crecer con requerimientos míni-
mos en este medio de cultivo. En el cuadro 4 se muestra la composición del medio
de cultivo para la obtención de compuestos polifenólicos.

Cuadro 4. Composición del medio de cultivo mínimo

para el crecimiento de A. niger GH1 y PSH

Fuente Compuesto Gramos/Litro

Carbono Residuos de granada Depende del volumen y humedad
Nitrógeno NaNO3 7.65
Fósforo KH2PO4 3.04
Magnesio MgSO4 1.52
Potasio KCl 1.52
Fuente: Robledo y col. (2008).

Metabolismo microbiano
Cuando se tienen las condiciones optimas de crecimiento de un microorganismo, las
células empiezan a crecer a consecuencia, se generan productos debido al metabolis-
mo del microorganismo. La conversión de cierto sustrato a productos ha sido motivo
de muchas investigaciones, Malek, (1972). La figura 1 indica la importancia de las

347

Biofertilizantes microbianos.indd 347 10/04/2014 02:29:48 p.m.

 BIOFERTILIZANTES MICROBIANOS

reacciones metabólicas, sobre todo en lo que se refiere a la producción de metabolitos

específicos. Bolívar y Quintero, (1975), han demostrado los mecanismos de control
microbiano tanto para metabolitos primarios como secundarios.

Figura 1. Metabolismo microbiano

-3 -2
Glucosa, N, Mg, PO4 , SO4 , vitaminas, otros

Temperatura, pH
Glucosa
Precursores biostintéticos Proteínas
Gl Enzimas
uc Energía
óli
sis Ácidos nucleicos

Oxígeno
Acet CoA
Polisacáridos

Lípidos
Ciclo de Krebs Energía

Precursores biostintéticos
Energía

Producto

Producto extracelular

Fuente: Quintero, 1990.

Crecimiento microbiano
La relación entre la tasa de crecimiento específico (μ) de una población de microorga-
nismos y la concentración de sustrato (S) es una herramienta valiosa para la cinética
de microorganismos. Esta relación representa las leyes de velocidad derivadas em-
píricamente que se refieren como modelos teóricos. Estos modelos no son más que
expresiones matemáticas generadas para describir el comportamiento del sistema
generado. Los modelos clásicos, que se han aplicado al crecimiento de la población

348

Biofertilizantes microbianos.indd 348 10/04/2014 02:29:48 p.m.

 CINÉTICA MICROBIANA DEL CULTIVO DE MICROORGANISMOS BIOFERTILIZANTES

microbiana, incluyen el modelo de Verhulst y la función de Gompertz (ecuación 1),

(Verhulst, 1845, 1847; Gompertz, 1825). La función de Gompertz se basa en la re-
lación exponencial de la tasa de crecimiento específico y la densidad de población
representada en la siguiente ecuación:

Nt= Cexp{exp[-B(t-M)]│} (1)

Donde t = tiempo, Nt = densidad de población en el tiempo, C = valor asintótico del

tiempo, es decir, la máxima densidad de población, M = tiempo en que la tasa absoluta
de crecimiento es máxima y B = tasa de crecimiento relativo en M. Según Gibson
y col. (1987), quienes modificaron la función de Gompertz, existe una función que
podría ser aplicada a la descripción de la densidad celular en función del tiempo en las
curvas de crecimiento bacteriano en términos de las tasas de crecimiento exponencial
y la duración de la fase de retardo, como se muestra en la ecuación 2:

Log Nt=A+Dexp{-exp[-B(t-M)]│} (2)

Donde Nt = densidad de población en el tiempo, A = valor de la asíntota inferior

(Log N (-∞)), D = diferencia del valor de la asíntota superior e inferior [Log N (∞) – log
N (-∞)] y, M = tiempo en que la tasa de crecimiento exponencial es máxima.

Fases de crecimiento
El crecimiento de un cultivo bacteriano es una sucesión de fases, caracterizadas por
las variaciones de la tasa de crecimiento Monod, (1949). Las siguientes definiciones
se muestran en la figura 2.

1. Fase de retraso, nula tasa de crecimiento.

2. Fase de aceleración, aumenta la tasa de crecimiento.
3. Fase exponencial, tasa de crecimiento constante.
4. Fase de retraso, se reduce la tasa de crecimiento.
5. Fase estacionaria, nula tasa de crecimiento.
6. Fase de declive, tasa de crecimiento negativo.

En ocasiones algunas de estas fases pueden estar ausentes o poco notables.

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 BIOFERTILIZANTES MICROBIANOS

Figura 2. Fases de crecimiento. La curva inferior muestra las fases

de densidad bacteriana. La curva superior muestra las variaciones
de las tasas de crecimiento

(+)
GROWTH RATE

(-)
Log2 BACTERIAL DENSITY

1 2 3 4 5 6
TIME

Fuente: Monod, 1949.

El crecimiento microbiano se define principalmente con 3 constantes como:

Crecimiento total: diferencia entre el crecimiento inicial (Xo) y la densidad máxima
microbiana (Xmax), (ecuación 3):

G = Xmax - Xo (3)

Tasa de crecimiento exponencial: tasa de crecimiento durante la fase exponencial

(R). Se expresa de la siguiente manera (ecuación 4):

=  2 x 2 − 2 x 2 (4)
2 − 1
Cuando t2 – t1 es cualquier intervalo de tiempo en la fase exponencial.

350

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 CINÉTICA MICROBIANA DEL CULTIVO DE MICROORGANISMOS BIOFERTILIZANTES

Fase de retraso y crecimiento. La fase de retraso se define como la duración de la

fase de adaptación adecuada. Esta no es una buena definición, ya que no toma en cuenta,
la duración de la fase de aceleración. Debido a la forma de la curva de crecimiento, es
difícil determinar el final de la fase de retardo con precisión. Según lo propuesto por
Lodge y Hinshelwood, (1943), en donde el tiempo de retraso (Tl), se puede definir
como la diferencia entre el tiempo observado (tr) cuando el cultivo alcanza una cierta
densidad (Xr) dentro de la fase exponencial, y en el tiempo ideal en el cual la misma
densidad habría sido alcanzada (ti) la tasa de crecimiento exponencial se mantuvo desde
el principio, es decir, tenía el cultivo crecido sin ningún retraso Tl = tr – ti (ecuación 5).

 2 − 2o
 =  −

(5)

Esta constante es significativa, sólo cuando los cultivos que tienen la misma tasa
de crecimiento exponencial se comparan. Una definición general de una constante
de retraso se debe basar en las características fisiológicas y no en tiempos absolutos.

Ecuación de Monod
La ecuación de Monod explica, la relación de la tasa específica de crecimiento y la
concentración limitante por la cantidad de sustrato en un cultivo microbiano (Monod,
1942), (ecuación 6):

 []
= 

 + []
(6)

Donde μ es la tasa de crecimiento específica, μmax es la tasa máxima de crecimien-

to específico y, Ks es la constante de saturación de sustrato (es decir, la cantidad de
sustrato a la mitad de μmax).
En general los valores de Ks son muy bajos, del orden de mgL-1, por tanto concen-
traciones relativamente bajas de S son suficientes para hacer que μ = μmax. En promedio
las bacterias poseen valores de velocidades cercanos a 0.9 h-1, las levaduras 0.45 h-1
y los hongos filamentosos 0.25 h-1. En el Cuadro 5 se muestran algunos ejemplos
donde se calcula Ks y μmax.

351

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 BIOFERTILIZANTES MICROBIANOS

Cuadro 5. Ejemplos de algunos valores de constante de saturación

(Ks) y tasa máxima de crecimiento específico (μmax)

Tasa máxima
Constante de saturación
de crecimiento Condiciones Referencia
de sustrato (Ks)
específico (μmax)
Medición del agotamiento de H2 Robinson
2 μM 0.06 para el crecimiento limitado en lote y Tiedje,
de Desulfovibrio sp. Cepa G11 1983
Metabolismo de benzoato por Simkins y
0.45 ± 0.58 mgmL-1 7.2 ± 0.6x10-3min-1 Pseudomonas sp. Con 3.2 μgmL-1 Alexander,
de concentración inicial 1984
Biodegradación aeróbica de tolueno
Reardon y
13.8 ± 0.9 mgL-1 0.86 ± 0.01 h-1 por cultivos de Pseudomonas putida
col. 2000
F1 a 30°C
Biodegradación aeróbica de tolueno
Pedersen y
0.1 mgL-1 0.504 h-1 por cultivos de Pseudomonas putida
col. 1997
K1 a 25 °C
Biodegradación aeróbica de
Reardon y
0.12 ± 0.02 mgL-1 0.73± 0.03 h-1 benceno por cultivos de
col. 2002
Pseudomonas putida F1
Efecto del poliuretano sobre
Treviño y
- 0.63 h-1 tanasa fúngica y producción de
col. 2007
ácido gálico
Productos de formación de Kwon y
0.3 gL-1 0.38 h-1 múltiples sustratos utilizando C. Enlger,
lusitaniane 2005

Concentración celular
La determinación de la concentración celular, se calcula de diversas maneras, de-
pendiendo de las características físicas de los microorganismos, principalmente su
tamaño. El crecimiento celular se determina midiendo el número de células o la masa
celular. El número de células se puede medir en organismos unicelulares (bacterias
y levaduras) utilizando un microscopio o método directo. El recuento directo se
puede hacer de dos formas, en muestras secas sobre un portaobjetos, o en muestras
líquidas. Con muestras líquidas se emplean las cámaras de recuento celular (cámara
de Neubauer, cámara de Hausser, cámara de Howard, cámara de Sedgewick-Rafter),
que, en esencia, son portaobjetos cavados modificados, cuya superficie de vidrio

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 CINÉTICA MICROBIANA DEL CULTIVO DE MICROORGANISMOS BIOFERTILIZANTES

está marcada con una rejilla con pequeños cuadrados de área conocida. La técnica
de éste método se explica en la figura 3. Cada cuadrado de la parrilla puede contener
un pequeño volumen conocido. En el microscopio se puede contar el número de
células por cada unidad de área de la parrilla. La conversión de ese valor a número
de células por mililitro de suspensión original se hace fácilmente multiplicando por
un factor de conversión que depende del volumen de tipo de cámara.

Figura 3. Esquema del procedimiento de recuento de células

en cámara de Neubauer

Canales

La muestra se añade por el borde de los canales, Observación de células blancas, las células se
el espacia entre el portaobjetos y el cubreobjetos cuentan en los 25 cuadros grandes (según la
es de 0.2 mm. La rejilla tiene 25 cuadros grandes, técnica), para calcular el número de células se
un área total de 1 mm2 y un volumen total de toma en cuenta la dilución (algunas ocasiones),
0.02 mm3 el volumen de la camarilla (según la técnica).

El recuento directo de células por microscopía es un método rápido para conocer

el número de células. Sin embargo presenta ciertas limitaciones:

• No distingue células vivas de las muertas.

• Las células pequeñas son difíciles de percibir y algunas se pierden en el conteo.
• No es precisa.
• Se requiere de un microscopio de contraste de fases cuando las muestras no
se tiñen.
• El método no suele ser adecuado para suspensiones con baja densidad celular.
Si una suspensión tiene menos de 106 células por mililitro es posible que no
se vean en el campo del microscopio. No obstante las suspensiones diluidas

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 BIOFERTILIZANTES MICROBIANOS

se pueden contar con mayor facilidad si la muestra se concentra primero y se

resuspende luego en un pequeño volumen.
• Las células móviles se deben inmovilizar antes del recuento.

Otro procedimiento es colocar un volumen pequeño del cultivo en una caja Petri
con agar e incubarlo a una determinada temperatura durante un tiempo fijo; el resul-
tado, que es el número total de células, se obtiene contando el número de colonias y
multiplicándolas por la dilución que se haya hecho.

Tiempo de duplicación
Si se integra la ecuación 7 entre los límites siguientes:

 
 2  =  0  

(7)
1

Donde:
X2=2X1
td= tiempo de duplicación

Se obtiene que

2
 =


Esta ecuación es de importancia biológica pues si se tabulan los tiempos de dupli-

cación máximos para bacterias, levaduras, mohos y protozoarios, se observa que, las
bacterias tienen un td menor y los protozoarios uno mucho mayor, Quintero, (1990). En
la figura 4, se observa la existencia de traslape, de lo que se deduce que un organismo
unicelular crece no necesariamente más rápido que uno micelial.

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 CINÉTICA MICROBIANA DEL CULTIVO DE MICROORGANISMOS BIOFERTILIZANTES

Figura 4. Distribución de los tiempos máximos de duplicación

para microorganismos

bacterias levadura moho protozoario

Frecuencia de td

15 20 45 90 180 360
Tiempo de duplicación td (min)

Fuente: Quintero, 1990.

Efectos de la temperatura sobre el crecimiento

La temperatura es uno de los factores que más influye en el crecimiento de microorga-
nismos. A temperaturas muy frías o muy calientes los microorganismos no crecerán.
Se pueden distinguir cuatro grupos relacionados con su temperatura de crecimiento:
1) psicrófilos (-5-30°C), con óptimas de 10 y 20°C; 2) mesófilos (10-45°C), con óp-
timas de 20 y 40°C; 3) termófilos (25-80°C), óptimas 50 y 60°C y; 4) hipertermófilos
(80-120°C), óptimas 100 y 115°C, Madigan y col. (2003). En la figura 5 se observa
el efecto de la temperatura sobre el crecimiento del microorganismo.
Por ejemplo, según Fukao y col. (2012), investigaron la influencia que tiene la tem-
peratura sobre el crecimiento celular, de bacterias marinas como Coscinodiscus granni
aislada del mucílago marino. El crecimiento óptimo celular fue a 30°C alcanzando
1.63 divisiones por día. Estos resultados son similares a los publicados por Fukao y
col. (2008) y Olivos y col. (2005). En la investigación realizada por Cabanillas y Jones
(2009) se determinó la temperatura de crecimiento del hongo entomopatógeno Isaria
sp., en diferentes medios de cultivo, con el objetivo de eliminar una mosca agrícola
(Bemisia tabaci), que es un problema en los cultivos de maíz. Se determinó el creci-
miento óptimo del hongo entomopatógeno en agar dextrosa Sabouraud con extracto
de levadura, alcanzando colonias de 3.5 mm y encontrando que la cepa I. javanica
ex tipo CBS 134.22, fue la que tuvo mayor crecimiento. Concluyeron que estas cepas
son resistentes a altas temperaturas, teniendo eficaz control sobre la mosca agrícola.

355

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 BIOFERTILIZANTES MICROBIANOS

Figura 5. Relación entre la temperatura y la velocidad

de crecimiento de algunos microorganismos

Termófilo

Ejemplo: Hipertermófilo
Velocidad de crecimiento

M esófilo Bacillus steraothermophilus Ejemplo:

Thermoccocus celer
Ejemplo:
Escherichia coli
6
8
3
Psicrófilo
Ejemplo:
Polaromonas vaculata

0 10 20 30 40 50 60 70 80
Temperatura

Fuente: Madigan y col. (2003).

Por otra parte, en el trabajo reportado por Schmidt-Heydt y col. (2010), se estudió
el efecto de la temperatura de crecimiento de Aspergillus parasiticus sobre la pro-
ducción de aflatoxinas del grupo B y G. Encontraron que la temperatura óptima de
crecimiento del hongo fue a 35°C, pero estas condiciones no son las mismas para la
producción óptima de las aflatoxinas, además de que otras variables están asociadas a
este comportamiento. Estos resultados son similares a los reportados por Samapundo
y col. (2007). Definitivamente, la variable de temperatura está asociado al crecimiento
de algunos microorganismos, afectando también a la velocidad específica de creci-
miento y al rendimiento de algún producto determinado.

Efectos del pH sobre el crecimiento

La medida de concentración de iones hidrógeno (pH), tiene también un marcado efecto
sobre la velocidad de crecimiento y en el rendimiento de algún producto. El pH para
una especie presenta generalmente un máximo denominado pH óptimo. En bacterias
el pH óptimo varía entre 6.0 y 8.0; en levaduras entre 4.0 y 6.0 y en mohos entre 3.0
y 7.0. La ecuación de Monod has sido modificada para indicar el efecto del pH sobre
el crecimiento microbiano, ecuación 8 Andreyeva y Biryukov, (1973):

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 CINÉTICA MICROBIANA DEL CULTIVO DE MICROORGANISMOS BIOFERTILIZANTES

  
 =  
  1 +  + 1  +  (8)
1 

Donde H1 es la concentración de iones hidrógeno, y Ka y Kb son las constantes de

disociación (ecuación 9):

pH óptimo =   (9)

Estas ecuaciones solo son válidas en cierto rango de pH y no necesariamente se

cumplen en la práctica. En el trabajo de Simpfendorfer y col. (2001), evaluaron el
efecto del pH sobre el crecimiento de esporangios de algunas cepas de Phytophtora
clandestina, encontrando que el pH óptimo era de 6.0 a 6.5. En la investigación que
describe Panikov y col. (2003), se realizó un estudio en donde variaron los rangos de
pH (5-9), en Geobacillus uralicos, ésta cepa fue aislada de las profundidades del océa-
no (4680 m). Estos microorganismos termofílicos tienen altas tasas de crecimiento,
lo que conduce a tiempos cortos de cultivo, las enzimas aisladas de estos microorga-
nismos son más resistentes a altas temperaturas y cambios drásticos de pH, debido
a sus actividades biosintéticas diferentes, son buenos candidatos para la producción
de metabolitos valiosos para la industria. En la figura 6, se muestra la influencia que
tiene el pH sobre la tasa específica de crecimiento.
En el estudio realizado por Sundari y Adholeya, (2003); determinaron la influencia
que tiene el pH en el sustrato para el crecimiento de hongos ectomicorrizales, que se
utilizan principalmente en reforestación. Se determinó que, en el orden de Agaricales
y Basidiomicota favorecen su crecimiento a pH cercanos al neutro; mientras que, la
orden de Sclerodermatales su crecimiento es favorecido a pH estrictamente ácido.
Esta evaluación indicó que el pH del sustrato está directamente relacionado con la
tasa de crecimiento del hongo, además, limita la proliferación del hongo en el medio.
Siemens y Zwiazek, (2011); realizaron un barrido de pH sobre el crecimiento de
Hebeloma crustuliniforme en diferentes medios, y concluyeron que el crecimiento
óptimo de este Basidiomiceto se encontraba a pH de 7-8, regulado por la presencia de
sales. Estos resultados son similares a los reportados por Zhu y col. (1994), quienes
afirman que el pH depende de la fuente de nitrógeno aplicada. Existen bacterias tole-
rantes a pH muy básicos, como los resultados reportados por Zaitseva y col. (2004),
en donde definieron el pH óptimo de 9 sobre el crecimiento aeróbico de bacterias
álcali-termofílicas. Queda en evidencia que el pH es determinante para el crecimiento
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 BIOFERTILIZANTES MICROBIANOS

de la mayoría de los microorganismos, ya que propicia un ambiente adecuado, ya sea

ácido o básico y para el aprovechamiento del sustrato empleado.

Figura 6. Dependencia del crecimiento de los bacilos sobre el pH

-1
μm.h Adhesión %
3 100
80
2
1 60
0 40
20
0

3 5 7 9 pH

Fuente: Panikov, 2003.

Efecto de los nutrientes

Un medio de cultivo debe tener todos los elementos necesarios para el crecimiento
microbiano. Dentro de los elementos principales, se encuentra la fuente de carbono,
la cual emplea el microorganismo, para la obtención de metabolitos que son de alto
valor agregado, y además que pueden ser de interés industrial. También las sales que
se emplean como fuente de nitrógeno, fósforo, potasio, entre otras deben ser las más
comunes, ya que el medio sería más simple de formular y más económico. Según
Mendes y col. (2012), evaluaron el efecto que tiene la fuente de nitrato, fosfato y mo-
libdato sobre el crecimiento de la macroalga roja Gracilaria domingensis en agua de
mar sintética, encontraron que los valores óptimos para el crecimiento de la macroalga
fue fosfato 8-10 μmolL-1, nitrato 80 μmolL-1 y molibdato 5 nmolL-1, se seleccionaron
estos niveles con el fin de reducir los costos de producción de ésta macroalga, debido
a que presenta metabolitos con diferentes actividades farmacológicas como son los
carotenoides, micosporinas y polisacáridos, Cardozo y col. (2007). En estudios rea-
lizados por Osman y col. (2010), estudiaron la influencia que tienen dos especies de
cianobacterias (Nostoc entophytum y Oscillatoria angustissima), sobre el crecimiento

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 CINÉTICA MICROBIANA DEL CULTIVO DE MICROORGANISMOS BIOFERTILIZANTES

de plantas de frijol actuando como biofertilizantes, encontraron que aprovechan los

nutrientes del ecosistema para el crecimiento óptimo de la planta y, además afectan
sobre el contenido de carbohidratos y proteínas. En algunas ocasiones se utilizan al-
gunas vitaminas y metales que son factores determinantes para el crecimiento de
algunos microorganismos en el medio de cultivo, ya que actúan como cofactores
de enzimas. El oxígeno es un factor primordial en los cultivos microbianos ya que
su ausencia o abundancia permite un control adecuado, tanto del microorganismo,
como de algún producto del metabolismo. Cuando el cultivo se produce en presencia
de oxígeno molecular, la fermentación se denomina aeróbica, y cuando éste carece de
oxígeno, anaeróbica. Si la fermentación es anaeróbica la mayor parte del carbono se
emplea como energía y solo el 2 % se asimila como material celular, de acuerdo a lo
reportado por Mukhopadhyay y Ghose, (1976). En el cuadro 6 se muestran algunos
ejemplos que dan una idea general de lo que sucede.

Cuadro 6. Carbón asimilado y no asimilado como fuente de energía

Carbono de glucosa Glucosa desasimilada

Organismo Condiciones
asimilada (%) para proveer energía (%)
Streptococcus fecalis Anaeróbico 2 98
Sacharomyces cerevisiae Anaeróbico 2 98
Sacharomyces cerevisiae Aeróbico 10 90
Aerobacter cloacae Aeróbico 55 45
Fuente: Pirt, 1975.

Perspectivas
Es evidente que el estudio cinético del crecimiento microbiano es una herramienta
básica en microbiología, ya que permite estimar y definir relaciones entre las respuestas
microbianas que se monitorean en la producción de microorganismos biofertilizan-
tes, p.e. la relación entre la velocidad específica de crecimiento y la concentración
de sustrato. En las últimas tres décadas importantes avances en el estudio cinético
del crecimiento han permitido un mejor control de los bioprocesos microbianos y la
expectativa es que dichos controles sean aun mejores al mediano plazo. Es importante
tener presente que durante más de medio siglo de investigación, muchas preguntas
fundamentales sobre la validez y aplicación de la cinética microbiana según se de-
sarrollan en los laboratorios imitando y controlando condiciones medioambientales
de crecimiento microbiano aun no han sido respondidas. En el caso de cultivos

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 BIOFERTILIZANTES MICROBIANOS

puros creciendo sobre sustratos simples y únicos aun existen inconsistencias claras
que exigen respuestas en los datos obtenidos del crecimiento cinético. La compleja
relación entre todos los factores intrínsecos y extrínsecos, además de los de proceso,
convierten al estudio de, cinética microbiana un tema de alto interés en la biotecnología
moderna, que hoy trata de utilizar modelos validados e integrales que incluyan tanto
aspectos químicos, físicos y biológicos de la multiplicación celular y su asociación
con el consumo de sustrato y la formación de metabolitos.

Conclusiones
La producción celular de microorganismos biofertilizantes requiere de la aplicación
de estrictos controles de proceso en la fermentación, sin embargo, la definición de
las condiciones del cultivo dependen básicamente del conocimiento de los cambios
suscitados en el consumo de sustrato, de la formación de biomasa o algún produc-
to metabólico de interés durante el transcurso del tiempo del mismo cultivo. Cada
bioproceso en cultivo en lote está definido por la influencia que guardan los factores
intrínsecos, extrínsecos y de proceso sobre el metabolismo microbiano, y una herra-
mienta poderosa que permite una mejora al control de cinética microbiana.

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