UNIVERSIDAD TECNOLÓGICA DE LOS ANDES FILIAL CUSCO

VICE RECTORADO ACADÉMICO

FACULTAD DE INGENIERÍA
ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA AMBIENTAL Y RECURSOS
NATURALES

DOCENTE: BLGA. /ING. GLADYS ALLENDE RAMOS. SEM: 22-I

ASIGNATURA: TOXICOLOGÍA AMBIENTAL
AUTORES
➢ MARY LUZ CONDORI QUISPE.
➢ ANGEL RAUL HUILLCA NOA.
➢ ERICK MILLAGUI HERMOZA VEGA.
➢ LUDWING BRAULIO ANCALLA BELLOTA.
PRÁCTICA 2

Objetivo General. Permiten identificar los gradientes de concentración ÁREA: Ingenierías

necesarios para observar algún efecto (actividad biológica) entre
sustancia y organismo incluyendo la muerte de estos. Se propone
realizar dos pruebas de bioensayos a llevarse a cabo en el laboratorio de
Bioquímica y Farmacología de la UTEA, para lograr que el estudiante
se entrene en hacer pruebas toxicológicas que contribuyan al desarrollo
de capacidades en la asignatura de Toxicología Ambiental.

Duración: 2 hr para Grupo A y Grupo B: Fecha: 21-11-2022

instalación. 30 min de
control diario. Lunes de 10:30 a 12:10

Tema: Bioensayos Duración: Una semana de control. Unidad. 4

de Toxicidad en Cada 6 hrs en lombrices.
laboratorio
Cada 24 hrs en semillas

BIOENSAYOS EN LABORATORIO

MATERIALES, EQUIPOS Y REACTIVOS

MATERIALES MATERIAL BIOLÓGICO REACTIVOS Y EQUIPOS

1. Placas Petri 1. Lombriz del compost

2.
2. Probetas 1. Sulfato de Cobre
2. Balanza analítica
3. Pipetas graduadas 4. 3. Cámara fotográfica
Pipetas Pasteur 5.
Cubetas plásticas
RESUMEN
En la presente investigación se desarrolló el estudio de los efectos fitotóxicos que puede generar el
vertimiento de sustancias toxicas como los “Sulfatos y Cromatos” por medio de bioensayos de toxicidad
realizados con semillas de lechuga (Lactuca sativa L.) y lombrices rojas (Eisenia foetida), en los cuales
se determina el medio de impacto del agente tóxico sobre los organismos expuestos. Estos organismos
son bioindicadores apropiados para este tipo de estudio por su por gran sensibilidad a varianzas que
pueden tener su medio de cultivo o su desarrollo. Como etapa inicial se emplearon 10 pruebas iníciales
con Cromato y Sulfato para semillas y lombrices rojas con el propósito de determinar la sensibilidad de
estas al momento de exponer el organismo al agente tóxico, gracias a estas pruebas de laboratorio se
obtuvieron diferentes promedios de germinación en las semillas el cual fue menor que el propuesto dentro
de sus características.

1. Bases teoricas

➢ SOLUCIÓN. Mezcla homogénea constituida por dos o más sustancias. Es decir que una
solución es un sistema material homogéneo (una sola fase) y de dos o más componentes.
➢ ROCIADOR. Un rociador diseñado para instalarse de forma tal que la descarga de agua
es dirigida hacia arriba contra el deflector.
➢ PAPEL FILTRO. El papel de filtros es un papel que se corta en forma circular y se
introduce en un embudo de filtración, con el fin de ser filtro para las impurezas.
➢ PAPEL TOALLA. Es un tipo de papel que se utiliza en labores de secado y limpieza,
fundamentalmente, en la cocina.
➢ PIPETAS. Tubo de vidrio, generalmente graduado y más ancho por la parte central, usado
en los laboratorios para transvasar pequeñas porciones de líquido.
➢ PROBETAS. Vaso de vidrio de forma tubular, con pie, generalmente graduado, que se usa
en los laboratorios para medir líquidos o gases.
➢ BALANZA ELECTRONICA. son instrumentos de pesaje de funcionamiento no
automático que utilizan la acción de la gravedad para determinación de la masa. Se
compone de un único receptor de carga (plato) donde se deposita el objeto para medir.
➢ CROMATO. Los cromatos y los dicromatos son sales del ácido crómico y del ácido
dicrómico, respectivamente. Los cromatos contienen el ión CrO42−, que les da un fuerte
color amarillo. Los dicromatos poseen el ión Cr2O72−, por lo que son de un color
anaranjado intenso.
➢ SULFATO. Sal formada por combinación del ácido sulfúrico y una base; se obtiene al
hacer reaccionar el ácido sulfúrico con los metales, sus hidróxidos y carbonatos o al oxidar
un sulfuro; también se conocen algunos sulfatos orgánicos.
➢ COMPOST. Fertilizante compuesto de residuos orgánicos (desechos domésticos, hierbas,
deyecciones animales, etc.), tierra y cal
➢ HUMUS. Sustancia que se crea a partir de la descomposición de materias orgánicas
presentes en la capa superficial de un suelo.
➢ LOMBRICES ROJAS. Esta especie se encuentra comúnmente dentro de la materia
orgánica en descomposición o en estiércol muy húmedo, cerca de la superficie del suelo.
INTRODUCCIÓN.
Los ensayos in vitro o bioensayos son técnicas especializadas realizadas en organismos bajo
condiciones controladas de laboratorio y que pueden incluir cultivos celulares, bacterias, hongos,
insectos, plantas e incluso pequeños animales como helmintos o artrópodos. Los bioensayos se
utilizan en varias áreas de la ciencia para conocer las reacciones de algún organismo ante la
presencia controlada de una o varias sustancias. Las reacciones pueden incluir diferentes efectos
benéficos, pero también negativos, e incluso hasta la toxicidad o muerte del organismo evaluado.
La toxicidad es la capacidad de una sustancia química que, al estar en contacto con un organismo
por exposición, ingestión, absorción, inyección, e inhalación en cantidad suficiente, tiene la
capacidad de ocasionar daño a células, tejidos, órganos o sistemas e incluso provocar la muerte
(Langman y Kapur 2006). En este contexto, los bioensayos pueden servir para evaluar el potencial
tóxico de sustancias e identificar los diferentes daños o lesiones (Gámez y Más 2007). En los
bioensayos de toxicidad la muerte es considerada sólo como una respuesta biológica más (Pérez y
Lazo 2010) y se reporta como un valor de mortalidad o letalidad. Varias plantas pueden ser
utilizadas como modelos para evaluar sustancias bioactivas con diversos tipos de actividad sobre
otras plantas.
La fitotoxicidad es un término que se emplea para describir el grado de efecto tóxico producido
por un compuesto sobre el crecimiento de las plantas. Estos daños pueden ser causados por una
gran variedad de compuestos. Es importante destacar que, durante el período de germinación y los
primeros días de desarrollo de la plántula, ocurren numerosos procesos fisiológicos en los que la
presencia de una sustancia tóxica puede interferir en la supervivencia y el desarrollo normal de la
planta. Por esta razón, la germinación es una etapa de gran sensibilidad frente a factores externos
adversos. Para observar la toxicidad y sus características se realizará un bioensayo de toxicidad
con semillas de lechuga de 14 días, en el cual se evaluarán los efectos de crecimiento de las plantas
de lechuga de acuerdo a la concentración de toxicidad a las que se exponga las plántulas.
Las lombrices de tierra junto con macro y microorganismos, forman la fauna más importante del
suelo, ayudando a degradar la materia orgánica, formar y poner a disposición nutrientes esenciales
para el crecimiento. Son utilizadas de manera habitual en el proceso de vermicompostaje de
residuos orgánicos sólidos generando abono para remediar suelos contaminados para remover
compuestos orgánicos persistentes, remover algunos derivados de petróleo (y como bioindicador
de toxicidad.
OBJETIVO GENERAL.
Permiten identificar los gradientes de concentración necesarios para observar algún efecto
(actividad biológica) entre sustancia y organismo incluyendo la muerte de estos. Se propone
realizar dos pruebas de bioensayos a llevarse a cabo en el laboratorio de Bioquímica y
Farmacología de la UTEA, para lograr que el estudiante se entrene en hacer pruebas toxicológicas
que contribuyan al desarrollo de capacidades
OBSERVASION DE NIVEL DE GERMINACION DE SEMILLAS
1. Materiales

✓ 100 semillas de Lechuga.

✓ 100 semillas de Grass.
✓ Agua.
✓ Algodón.
✓ Tapa de táper.
✓ Rociador.

2. Procedimiento
Se estira el algodón en la base de la tapa del táper como una alfombra donde después se colocarán
las semillas y a continuación con el rociador humedecemos el algodón y cubrimos con otra
alfombra de algodón y las dejaremos donde exista una entrada de sol que no sea directo para que
ayude a su germinación.
3. Observación

PRIMERA SEMANA DE GERMINACION DE SEMILLAS DE LECHUGA

SEGUNDA SEMANA DE GERMINACION DE SEMILLAS DE LECHUGA Y GRASS
4. Resultados
➢ De las 100 semillas de Lechuga se observa un porcentaje de germinación del
90%.
➢ De las 100 semillas de Grass se observa un porcentaje de germinación del 90%.
➢

5. Conclusión
❖ El porcentaje de germinación es relativamente alto con un margen de error de solo
el 10%
❖ Las semillas no germinadas puede que hayan estado en mal estado o presenten un
lento desarrollo.
OBSERVACION DE GERMINACION DE SEMILLAS CON TOXICO DE CROMATO

1. Materiales
❖ 10 semillas de lechuga.
❖ Solución de Cromato de Potasio al 0.5%.
❖ Solución Cromato de Potasio al 1%.
❖ Solución de Cromato de Potasio al 1.5%.
❖ Solución de Cromato de Potasio al 2%.
❖ Placas Petri.
❖ Papel filtro.
❖ Papel toalla.
❖ Pipetas graduadas y Pasteur.
❖ Agua destilada.
❖ Vaso precipitado.
❖ Probeta de 100 ml.
 ❖ Matraz Erlenmeyer.
❖ 1 regla.
❖ Cubetas plásticas.

2. METODOLOGÍA

Se ha diseñado dos bioensayos, para verificar y probar el efecto nocivo o tóxico de dos
sustancias en ecosistemas terrestres.
• El primer bioensayo donde el organismo vivo pertenece al reino vegetal, de la especie
Lactuca sativa L., que es la lechuga, verdura utilizada para ensaladas.
Las concentraciones para ambos Bioensayos son:

PRODUCTO CONCENTRACIONES (mg/L)

 3. Procedimiento
Se realiza la preparación de la solución en distintos porcentajes del cromato al 0.5%, 1%, 1.5% y
2% a continuación, se recorta en forma circular el papel toalla y papel filtro estos se colocarán en
la base del recipiente, después se pondrán 10 semillas en los 5 tapers cada uno con una solución
distinta, esto se realizará con ayuda de una pipeta la cual contendrá 5ml de la solución, solo uno
recipiente será el sujeto de prueba que contendrá agua destilada.

PREPARACION DE LA SOLUCION CROMATO POTASIO

CROMATO DE POTASIO AL 1% Y 1.5 %

RECIPIENTES CON EL PAPEL TOALLA RECORTADO

SEMILLAS DE LECHUGA CON 5ML DE CROMATO DE POTASIO

 4. Observación

PRIMERA SEMANA DE LA GERMINACION DE SEMILLAS EN EL RECIPIENTE CON EL

CROMATO DE POTASIO

SEGUNDA SEMANA DE LA GERMINACION DE SEMILLAS EN EL RECIPIENTE CON

EL CROMATO DE POTASIO
GRUPO N° DE CANTIDAD DÍA 1 DÍA 7 DÍA 14
SEMILLAS DE
SOLUCION
TESTIGO 10 5ML 10 10 10
AGUA
DESTILADA
0.5% 10 5ML 10 10 10
CROMATO
DE
POTASIO
1% 10 5ML 10 10 10
CROMATO
DE
POTASIO
1.5% 10 5ML 10 10 10
CROMATO
DE
POTASIO
2% 10 5ML 10 10 10
CROMATO
DE
POTASIO
 5. Resultados
➢ La primera semana se observa en todos los recipientes que hay germinación “las raíces
crecieron aproximadamente medio centímetro y la radícula 1/3 centímetro.
➢ La primera semana se observa en todos los recipientes que hay germinación “las raíces
crecieron aproximadamente 6 centímetros y la radícula medio centímetro.
6. Conclusión
➢ No existe tasa de mortalidad en ninguno de los testigos solo presentan un
desarrollo lento.
OBSERVACION DE LOMBRICES DE TIERRA CON TOXICO SULFATO
1. Medición de lombrices tapers
TAPER 1
1. 3 centímetros.
2. 3.5 centímetros.
TAPER 3 TAPER 5
3. 3.7 centímetros.
4. 4 centímetros. 1. 3.1 centímetros. 1. 4 centímetros.
5. 3.9 centímetros. 2. 3.8 centímetros. 2. 4.8 centímetros.
3. 4.3 centímetros. 3. 6 centímetros.
TAPER 2
4. 3.7 centímetros 4. 3.6 centímetros
1. 3.2 centímetros. 5. 3.6 centímetros. 5. 5.5 centímetros.
2. 4.5 centímetros.
TAPER 4
3. 2.9 centímetros.
4. 5.9 centímetros. 1. 5 centímetros.
5. 3.6 centímetros. 2. 5.1 centímetros.
3. 3.9 centímetros
4. 2.8 centímetros.
2. Materiales 5. 4.4 centímetros.
❖ Agua destilada.
❖ Eisenia foetida / ❖ Vaso
lombriz roja. precipitado.
❖ 5 tapers. ❖ Probeta de 100
❖ Rociador. ml.
❖ Compost ❖ Matraz
❖ Pipetas. Erlenmeyer.
❖ Solución de sulfato
al 0.5%.
❖ Solución de sulfato
de cobre al 1%.
❖ Solución de sulfato
de cobre al 1.5%
❖ Solución de sulfato
de cobre al 2%
3. Metodología
El bioensayo donde el organismo vivo pertenece al reino animal, de la especie Eisenia
foetida (Savigny, 1826) conocido comúnmente como lombriz
roja californiana.

4. Procedimiento

❖ Seleccionar a los sujetos de prueba, para ello se tomarán 5 lombrices para cada táper.
❖ Estos serán puestos en el táper que esta con el compost.
❖ Suministrares de humedad ayudándonos con un rociador.
❖ “Los sujetos de prueba pasaran una semana para ver su comportamiento antes de
incorporar el toxico.

❖ Una semana después se pondrá el sulfato de cobre en cada táper según porcentajes salvo
en uno que se pondrá agua destilada.
5. Observación

TAPER CON 0.5% DE SOLUCION SULFATO DE COBRE PRIMERA SEMANA

TAPER CON 1% DE SOLUCION SULFATO DE COBRE

PRIMERA SEMANA
 TAPER CON 1.5% DE SOLUCION SULFATO DE COBRE
PRIMERA SEMANA

TAPER CON 2% DE SOLUCION SULFATO DE COBRE

PRIMERA SEMANA

TAPER CON AGUA DESTILADA PRIMERA SEMANA

 GRUPO N° DE TALLA DE PESO DE DIA 1 DIA 7 PORCENTAJE DE TOTAL %
LOMBRICES LAS LAS MORTALIDAD
LOMBRICES LOMBRICES
N°1 (TESTIGO) 5 3.2 cm 0,564 gr 5 5 0% 0%
RECIPIENTE CONTROL 3.5 cm
AGUA DESTILADA 3.66cm
4.15 cm
2.9cm
N°2 RECIPIENTE CON 5 4,7 cm 0,678 gr 4 4 20% 20%
SUSTANCIA TOXICA DE 3,1 cm
SULFATO DE 3,4 cm
A UNA CONCENTRACION 5 cm
DE 0.5 mg/L 2.8 cm

N°3 RECIPIENTE CON 5 4 cm 0,917 gr 4 4 20% 20%

SUSTANCIA TOXICA DE 5.6 cm
SULFATO DE 4.1cm
5.2 cm
A UNA CONCENTRACION 3.6
DE 1 mg/L
N°4 RECIPIENTE CON 5 3.1cm 0,576 gr 5 5 0% 0%
SUSTANCIA TOXICA DE 3.5cm
SULFATO DE 4.6 cm
A UNA CONCENTRACION 4.5 cm
DE 1.5 mg/L 3.6 cm
N°5 RECIPIENTE CON 5 5.5 cm 0,729 gr 5 4 10 % 2.5 %
SUSTANCIA TOXICA DE 3.5 cm
SULFATO DE 3.7 cm
A UNA CONCENTRACION 3.6 cm
DE 2 mg/L 5.5 cm
 6. Resultados
Taper. Sulfato 0.5%
➢ 3 lombrices vivas, 2 están muertas.
➢ Las 3 lombrices presentan retardo volver a esconderse dentro de la tierra.
➢ Ausencia de excavación enrollamiento
Taper. Sulfato 1%
➢ 4 lombrices vivas, 1 está muerta.
➢ Las 4 lombrices presentan retardo volver a esconderse dentro de la tierra.
➢ Ausencia de excavación enrollamiento
Taper sulfato 1.5
➢ 5 lombrices vivas, 1 presenta cambio de color blanco en toda su piel y la otra la mitad de
su cuerpo de blanco.
➢ Ausencia de excavación enrollamiento
Taper. Sulfato 2.
➢ 5 lombrices vivas, sin ninguna alteración
➢ Ausencia de excavación enrollamiento
Taper. Agua destilada.
➢ Todas las lombrices están vivas y activas.

7. Conclusiones
❖ Las lombrices presentan cambio de coloración esto debido al toxico.
❖ Las lombrices muertas pueden haber muerto por el toxico o causas naturales.
❖ Las lombrices disminuyen su actividad al estar siendo afectadas por el toxico.
Anexos

• Taper, 2 % de solución de Sulfato de cobre segunda semana

• Taper, 1.5 % de solución de sulfato de cobre tercera semana