Recepción de Muestras en El Laboratorio Memoria Laboral Terminada

Recepción de muestras en el laboratorio:
Con la intención de preservar la calidad y la inalterabilidad de las muestras, desde el

momento de su llegada a la recepción, se realizará una inspección para comprobar el estado
de conservación de las mismas, identificación, e incidencias que hayan podido sufrir
durante el transporte. Esta inspección determinará la aceptación de las muestras o, el
rechazo de las mismas antes de obtener unos resultados sin calidad.1
Las causas por las que se rechazará una petición y/o una muestra son:
1 - Espécimen o petición no recibidas.
2 - Espécimen mal identificado. Las muestras que se considerarán mal identificadas son
aquellas en las que:
>No coinciden los datos de la solicitud y la muestra.
>La muestra está sin identificar.
3 - Derrame o ruptura del contenedor.
4 - Solicitud mal cumplimentada o tramitada incorrectamente. Siendo ésta aquella solicitud

a la que falta uno o varios de los siguientes datos:
>Nombre y apellidos del paciente.
>Sexo y edad.
>Número de afiliación (si es el caso).
>Procedencia de la solicitud y destino del resultado.
>Facultativo responsable de la solicitud.1
Hay otros criterios de rechazo que no siempre se podrán identificar antes de la entrada al
sistema informático del laboratorio (SIL). Estos otros motivos de rechazo se comunicarán
en el informe de resultados, y son los siguientes:
1 - Muestra hemolizada:
Aquella muestra de plasma o suero en la que se ha producido la ruptura de hematíes
permitiendo la salida del contenido celular. La hemolisis” in vitro” se produce por una
extracción dificultosa o brusca, por uso de una aguja muy grande o muy pequeña, por una
brusca expansión de la sangre dentro del tubo, por una mala centrifugación, o por un
transporte incorrecto.
Hay determinaciones cuyos resultados se alteran cuando existe este problema bien por
interferencias metodológicas, bien por incorporación de sustancias que existen en el interior
de glóbulos rojos.1
2 - Muestra lipémica:
Aquella muestra de suero o plasma con alto contenido en grasa. Presenta un aspecto
blanquecino y puede deberse a una extracción de una muestra de un paciente con
alimentación parenteral o tras una ingesta copiosa. Hay determinaciones cuyos resultados
se alteran cuando existe este problema.1
3 - Muestra coagulada:
Aquella muestra que presenta coágulos parciales o total coagulación, y que se extrajo en
tubo con anticoagulante. Puede deberse a una extracción lenta, a una mezcla incorrecta del
anticoagulante con la muestra o a un defecto del propio anticoagulante.
Hay determinaciones, como el hemograma y pruebas de coagulación, cuyos resultados se

alteran cuando existe este problema.1
4 - Nivel incorrecto de la muestra (muestra insuficiente):
Aquella muestra a la que no se pueden realizar todas las determinaciones solicitadas por
volumen insuficiente. No entrará en esta categoría la muestra que se agote por una
repetición o por un mal procesamiento en el laboratorio. También muestras que precisen un
volumen concreto para mantener la proporción con el anticoagulante y que incumplan este
requisito.1
5 - Muestra incorrecta:
Muestra obtenida en contenedor incorrecto.

6 - Espécimen o muestra mal transportada.
Aquella muestra que estando bien extraída o recogida no se envía en las condiciones de
transporte indicadas, o se estropea durante el transporte: no se envía refrigerada o
congelada, se descongela, se derrama, se rompe durante el transporte, llega fuera de hora,
etc.1
7 - Muestra estropeada en el laboratorio:
Aquella muestra que llegando correctamente al laboratorio, se estropea en el proceso de

preparación. (Ejemplos: mal centrifugada, derramada, caída al suelo, extraviada).
Una vez que el personal técnico del laboratorio identifica que una muestra/solicitud se
encuentra dentro de uno de estos criterios, registrará la incidencia y se cumplimentará el
impreso de comunicación de incidencias de fase pre-analítica, que se remitirá al solicitante
para comunicarle el rechazo de la muestra y el motivo, así como una propuesta de acción
correctora: extracción de nueva muestra, citar de nuevo al paciente, etc.1
Manipulación de especímenes:
• Respetar los tiempos de retracción del coagulo. Normalmente, el tiempo de espera es de

unos 30 minutos excepto en pacientes con deficiencias en la coagulación o con terapia
anticoagulante en los que el tiempo es algo superior.
• Centrifugar los tubos primarios durante 10 minutos a 3500 r.p.m., tapados para evitar
evaporaciones de las muestras y aerosoles contaminantes. No se debe abrir la tapa de la
centrifuga hasta que no esté completamente parada.
• Las muestras con barrera de gel nunca deben volverse a centrifugar.
• Plasma: 10 minutos a 3000 r.p.m. (temperatura en función de la prueba solicitada).
• Plasma pobre en plaquetas: 10 minutos a 3000 r .p.m. a temperatura ambiente.
• Plasma rico en plaquetas: 10 minutos a 900 r.p.m. a temperatura ambiente.2
c) Conservación
Se conservarán a temperatura ambiente todas las muestras que se vayan a analizar

inmediatamente, o las de sangre total para obtener suero o plasma.
d) Refrigeración
Suero, plasma y muestras para análisis bacteriológico a analizar después de 4 h.
e) Congelación
Suero o plasma que se vaya analizar en un periodo mayor a 12 horas (solo aplica para
algunos parámetros).2
5.2.8 REGISTRO DE PETICIONES EN EL S.I.L
La entrada de datos en el Sistema Informático de Laboratorio (SIL) es otro paso crítico.

Cualquier error a este nivel repercutirá directamente en la veracidad del resultado, y por
otro lado la propia velocidad de entrada de estos datos condicionará toda la logística del
laboratorio, ya que hoy en día no se puede comenzar ningún procesamiento de las muestras
hasta que los datos no estén en el sistema informático.
Por estos motivos se tiende a utilizar sistemas informáticos de gestión de laboratorio con
software cada vez más rápido y fiable. En el laboratorio que se ha diseñado todos los
registros serán realizados por los técnicos de laboratorio, o Diplomados de enfermería, y
revisados por un químico. Existirán dos modos de introducción de registros:
Electrónico: mediante una aplicación informática que integrará la petición efectuada por el
clínico desde su consulta al sistema informativo del laboratorio.
Manual: es el sistema tradicional con volante de papel e introducción manual de los datos
al sistema informático. Es más lento, implica trascripción de datos, y requiere más
personal.3
5.2.9 DISTRIBUCIÓN DEL TRABAJO
Se identificará cada muestra por folio y nombre del paciente (proceso de etiquetado), e
inmediatamente se elaborará una petición con los datos que han quedados recogidos en la
hoja de extracción donde figuran como fundamentales: el nombre del paciente, médico que
solicita el análisis, sexo, edad, ingesta y tratamiento del paciente, así como la localización y
teléfono del mismo. En el citado petitorio se marcan los perfiles y/o pruebas de laboratorio
a analizar.
Para terminar la fase pre-analítica se clasificarán las muestras en función de la naturaleza de

las mismas, así como de las pruebas a las que se le someterá. Para ello, se agruparán en
gradillas para su transporte y manejo en las distintas áreas del laboratorio.3
Capítulo 2: Fase analítica
En el área analítica se deberán llevar a cabo todos los procedimientos relacionados

directamente con el procesamiento de las muestras. Abarcando el período que transcurre
desde que la muestra es recibida en el área pre-analítica, hasta que se terminan los ensayos
pertinentes a realizar. Las diferentes áreas establecidas en un laboratorio son:
2.1 Área de bioquímica.
2.1.1 Introducción:
. La bioquímica es la ciencia que estudia los componentes químicos de los seres vivos,
especialmente las proteínas, carbohidratos, lípidos y ácidos nucleicos, además de otras
pequeñas moléculas presentes en las células. Moléculas que componen las células y los
tejidos, que catalizan las reacciones químicas de la digestión, la fotosíntesis y la inmunidad,
entre otras. Su estudio en el laboratorio se basa en la determinación de la concentración de
un analito (por ejemplo la glucosa, o la urea), en una muestra de origen biológico (sangre,
orina, etc.). 4
La Bioquímica Clínica es un campo multidisciplinario cuya finalidad es la aplicación de la

Ciencia Química para contribuir a la resolución de problemas de salud. La función del
laboratorio de Bioquímica Clínica es realizar análisis, tanto cualitativos como cuantitativos,
en fluidos corporales como sangre, orina, líquido seminal, líquido cefalorraquídeo, etc. Para
que los resultados de dichos análisis sean útiles a los médicos en el diagnóstico, tratamiento
y seguimiento de una enfermedad, éstos deberán realizarse bajo un estricto control de
calidad logrando niveles óptimos de precisión y exactitud, características deseables en
cualquier resultado de diagnóstico.5
Al diseñar el proceso analítico se ha tenido muy en cuenta que esta rama es la que soportará
mayor volumen de procesado de muestras. De ahí que tengan mayores requerimientos en
cuanto a superficies, instalaciones y equipos.4 Para esta área en especial en el laboratorio de
análisis clínicos LABPAC utilizamos el analizador A15, que cumple con los requerimientos
del área, ya que es un instrumento muy completo y eficaz.
2.1.2 Analizador A 15:
Es un instrumento de precisión, automático para diagnóstico In Vitro de acceso aleatorio

especialmente diseñado para realizar análisis clínicos de bioquímica y turbidimetría, tales
como: glucosa, urea, creatinina, pruebas de funcionamiento hepático, amilasa, lipasa, perfil
de lípidos, etc… en orina, suero, y algunos otros líquidos.6
El control del instrumento se realiza on-line en tiempo real desde un ordenador PC externo
dedicado. El analizador lleva a cabo el análisis, paciente a paciente y permite la
introducción continua de muestras. Los resultados son mostrados inmediatamente después
de realizar cada medida. Un brazo manipulador cartesiano de tres ejes, lleva a cabo la
preparación de las reacciones. La dosificación se realiza mediante una bomba dosificadora
de pistón cerámico a través de una punta desmontable termostatizada con control Fuzzy
Logic. El analizador puede llevar a cabo una preparación cada 15 segundos. Una estación
de lavado garantiza que la punta se mantenga perfectamente limpia durante todo el proceso.
Las reacciones tienen lugar dentro de un rotor termostatizado a 370 C, en el que
directamente se realizan las lecturas de absorbancia mediante un sistema óptico integrado.6
Debido a su diseño tan practico, la interfaz de usuarios ágil, simple y muy gráfica,
separando claramente las tareas diarias de rutina y las tareas menos frecuentes. Todos los
datos y resultados se almacenan de forma segura. En el podemos programar un número
indefinido de procedimientos de medida (técnicas), perfiles de técnicas y racks de reactivos,
dependiendo solamente de la capacidad del disco duro del ordenador. El analizador nos
permite trabajar con 5 tipos de muestras: suero, orina, líquido cefalorraquídeo sangre total y
plasma. Para cada uno de ellos es posible adaptar cada procedimiento de medida.6
Guía de uso diario para A-15
Encendido del equipo:
1.- Encender el analizador, en la parte posterior izquierda.
2.- Encender el equipo de cómputo.
3.- Observar que encienda el LED (indicador frontal derecho) y esperar un beep del
analizador.
4.- En ese momento entrar al software de A15 (icono MORADO con una “A”), dar doble
clic.
5.- Checar el nivel de las soluciones (liquido de sistema / solución de lavado), verificar que
el contenedor de residuos este vacío.
6.- Colocar el ROTOR en el analizador LIMPIO.
7.- Inicializar el equipo con W-Up (warming up).
8.- Terminando W-Up, dar clic en N-Rotor para contabilizar en ceros los pocillos
utilizados.
9.- Quitar la tapa de los frascos para reactivos.
10.- En lo que termina el W-Up, se puede ir creando la lista de trabajo.
Crear lista de trabajo:
Nota: se “calibra” y se programa “blanco de reactivo” cada semana. Los “controles” se

procesan diario.
Programar controles y/o calibradores:

1.- Dar clic en el tubo de ensayo o en el menú sesión de trabajo, y submenú “nueva
muestra”.
2.- Se selecciona en clase el control o la pestaña de controles.
3.- Seleccionar las pruebas que se correrán. Para seleccionar varias pruebas se deja
presionando el botón “Ctrl” control.
4.- Una vez seleccionada las pruebas se pasan del otro lado con la flecha que se encuentra
en medio de los dos cuadros.
5.- Se palomean los controles. Si ese día se calibra, nos vamos a la pestaña de blancos y
calibradores y se palomean.
6.- Nos regresamos a la pestaña de controles y se posicionan desde ahí en la parte superior.
Programación de pacientes:
1.- Dar clic en el tubo de ensayo o en el menú, “sesión de trabajo” y submenú “nueva
muestra”.
2.- Colocar el código o nombre del paciente.
3.- Seleccionar las pruebas que se le correrán a ese paciente. Para seleccionar varias
pruebas se deja presionando el botón “Ctrl” control.
4.- Una vez seleccionada las pruebas se pasan del otro lado con la flecha que se encuentra
en medio de los dos cuadros.
NOTA: -Para borrar un paciente, solo se selecciona con un clic el paciente, y se da clic en
el borrador.
-Para cambiar el nombre a un paciente ya dado de alta, nos posicionamos sobre le nombre y
le damos un clic en el botón derecho y ya nos permitirá cambiar el nombre.
-Para agregar más pruebas a un mismo paciente. Se selecciona el paciente y se regresa

hacia el lado izquierdo con la flecha contraria, entonces agregar las pruebas que faltan
presionando el botón “Ctrl”.
5.- Una vez terminada la lista de pacientes, nos vamos a la pestaña de controles y
seleccionamos todos los controles correspondientes.
6.- Posicionamos desde la pestaña de pacientes. Mandamos a posicionar con el icono que se
encuentra en el extremo inferior derecho.
NOTA: - Si mandamos a posicionar desde “blancos y calibradores”; solo manda “Blancos

y Calibradores” que se hayan palomeado.
-Si se manda posicionar desde controles; solo se manda a posicionar “blancos, calibradores
y controles” que se hayan palomeado.
-Si se manda posicionar a partir de la pestaña de pacientes; manda a posicionar todos los
pacientes, blanco, calibradores y controles que se hayan posicionado.
-Una vez que mandamos a posicionar un paciente, ya no se podrá borrar de la lista de

trabajo, para esto es mejor bloquearlo en la pantalla del “monitor”
Pantalla de posicionamiento de muestras y reactivos:
-Automáticamente se quedan programados los racks de reactivos.
1.-Para las muestras, seleccionar “rack de muestra” y se seleccionar el icono que está en la
parte inferior izquierda, de “automuestras” (tubo de ensayo).
2.-Colocar físicamente los reactivos y muestras en el orden que se muestra en esta pantalla.
Para ver el orden de los reactivos y muestras dar clic en las bandejas del número 1 al 4
según sea el caso.
3.-Cerrar la tapa del analizador.
4.-Dar clic en “aceptar” para salir de la pantalla de posicionamiento de muestras y

reactivos.
5.- Nos manda a nuestra pantalla principal (monitor). Se activa el icono “Start” el cual
debemos seleccionar para que el analizador comience a procesar nuestras muestras.
Resultados actuales:
1.-Para ver los resultados dar clic en el menú “estado actual” y submenú “resultados” o
dando clic en el icono de la hojita azul. En la pantalla aparece un cuadro con tres pestañas;
Pacientes, Técnicas y Calculadas.
2.-Para checar los resultados de los pacientes seleccionar la pestaña de pacientes, para los
controles y calibradores en la pestaña de técnicas.
3.-Una vez terminada la lista de trabajo, se pueden ver los controles en las gráficas. Esto lo
vemos en el menú de “históricos” y submenú “control de calidad”.
4.-Para repetir un resultado seda clic en el cuadrito blanco que se encuentra al inicio de
cada línea de resultado, y se presiona el icono que aparece en la parte superior derecha con
una flechita azul formando un semicírculo que significa “repetir muestras seleccionadas”.
5.-Nos vamos a la pantalla “monitor” y se presiona “continuar” para que el equipo realice
las repeticiones.
Cierre de analizador:
1.- Resetear (borrar) la sesión de trabajo en la pantalla “monitor” en el icono del sol.
2.- Retirar el rotor de reacciones y lavarlo con agua corriente, después colocarlo durante 30
minutos en solución de lavado (del equipo A-15) y enjuagarlo en solución salina.
3. - Dar clic en “S-Down” (shut down).
4.- Al terminar el “shut down” vaciar el contenedor de residuos y enjuagarlo.
5.- Darle clic en “salir” para cerrar el programa.
6.- Apagar el equipo de cómputo y el analizador (de la parte posterior izquierda).
2.1.3. Parámetros que se procesan en química clínica:
Glucosa:
 Características diagnosticas:
La glucosa es la es la principal fuente de energía del organismo. La insulina, producida en

las células de los islotes del páncreas, facilita la entrada de glucosa a las células de los
tejidos. Una deficiencia de insulina o una disminución de su actividad ocasionan un
aumento de la glucosa en sangre.
Se encuentran concentraciones elevadas de glucosa e suero o plasma en pacientes con

diabetes mellitus (dependiente de insulina) y con otras condiciones o síndromes.8
La hipoglucemia puede darse como respuesta al ayuno, o bien puede ser debida a fármacos,
venenos, errores congénitos del metabolismo o gastrectomía previa. El diagnóstico clínico
no debe realizarse teniendo en cuenta el resultado de un único ensayo, sino que debe
integrar los datos clínicos y del laboratorio.9
 Fundamento del método:
La muestra de glucosa presente en la muestra origina, según las reacciones acopladas a

descritas a continuación, un complejo coloreado que se cuantifica por espectrofotometría. 9
Glucosa + 1/2 O2 + H2O glucosa oxidasa

Gluónico + H2O2
2 H2O2 +4-Aminoantipirina + Fenol peróxidasa

Quinonaimina + 4 H2O2
 Reactivos:
Fosfatos 100 mmol/L. fenol 5 mmol/L glucosa oxidasa > 10 U/mL, peroxidoasa > 1U/mL,
4-aminoantipirina 0.4 mmol/L, pH 7.5. El reactivo y el patrón son estables hasta la fecha
de caducidad indicada en la etiqueta, siempre y cuando se conserven bien cerrados, a la
temperatura adecuada (2-80 C) y se evite la contaminación durante el uso.
 Muestras:
Suero o plasma recogidos mediante procedimientos estándar. El suero o plasma deben

separase de los elementos celulares lo antes posible para evitar la glucolisis. La adición de
fluoruro sódico a la muestra de sangre previene la glucolisis
La glucosa en suero o plasma es estable 5 días a 2-80 C. los anticoagulantes como la

heparina, EDTA, oxalato o Fluoruro no interfieren.
Líquido cefalorraquídeo recogido por procedimientos estándar. El líquido cefalorraquídeo

puede estar contaminado por bacterias u otras células y por lo tanto, la glucosa debe ser
analizada inmediatamente.
 Procedimiento:
1.- Atemperar el reactivo a temperatura ambiente.
2.- En analizador A-15 al dar de alta un reactivo, debemos colocar el procedimiento a

seguir con este y la muestra desde número de lote, unidades de medida, la cantidad de
muestra y de reactivo que debe pipetear y valores mínimo y máximo para controles.
Blanco Patrón Muestra

Patrón (S) --- 10 µL ---
Muestra --- --- 10 µL
Reactivo (A) 1.0 mL 1.0 mL 1.0 mL
3.- El analizador pipetea el reactivo y la muestra en el rotor en donde se incuba a 37 0 C y se
lleva a cabo la reacción, para después realizar las lecturas de absorbancia mediante un
sistema óptico integrado.
 Valores de referencia:
Suero y plasma: 8
Neonato, prematuro 25-80 mg/dL= 1.39- 4.44 mmol/L

Neonato, a termino 30-90 mg/dL = 1.67- 5.00 mmol/L
Niños, adultos 70-105 mg/dL =3.89- 5.83 mmol/L
Líquido cefalorraquídeo: 8
Niños 60-80 mg/dL = 3.33- 4.44 mmol/L

Adultos 40-70 mg/dL = 2.22 – 3.89 mmol/L
Según el National Diabetes Data Group (US), valores de glucosa plasmática en ayunas
superiores a 140 mg/dL (7.77 mmol/L) obtenidos en más de una ocasión, permiten el
diagnostico de diabetes mellitus.
Urea:
 Características diagnósticas:
La urea de sintetiza como un producto de la desanimación de los aminoácidos, su

eliminación en la orina presenta la principal vía de excreción del nitrógeno.
Se encuentran concentraciones elevadas de urea en suero o plasma como consecuencia de

una dieta hiperproteica, aumento del catabolismo proteico, después de una hemorragia
gastrointestinal, ligera deshidratación, shock e insuficiencia cardiaca o tratamientos
glucocorticoides (uremia prerrenal).8
La uremia postrenal es causada por condiciones que obstruyen el flujo urinario: nefrolitiasis
tumor o hipertrofia prostática. La utilidad de la urea de la urea como indicador de la
función renal está limitada por la variabilidad de su concentración plasmática como
consecuencia de factores no renales.11
La urea presente en la muestra consume, según las reacciones acopladas descritas a

continuación, NADH que se cuantifica espectrofotométricamente.9
Urea + H2O Ureasa

2NH4+ + CO2
PNH4+ + NADH +H+ + 2 – oxoglutarato glutamato deshidrogenasa

Glutamato + NAD +
 Reactivos:
El kit para urea consta de dos reactivo A y B:
-Reactivo A: Tris 100 mmol/L, 2-oxoglutarato 5.6 mmol/L, ureasa >140 U/mL, glutamato
deshidrogenasa >140 U/mL, etilenglicol 220 g/L, sodio azidasa 0.95 g/L, pH 8.0.
-Reactivo B: NADH 1.5 mmol/L, sodio azidasa 9.5 g/L.
Para que el reactivo esté listo para su uso, vaciar el contenido del reactivo B en el frasco del
reactivo A. Agitar suavemente y si se desea preparar otros volúmenes, mezclar en la
proporción: 4 mL de reactivo A + 1 mL de reactivo B. El reactivo trabajo (reactivo en uso)
es estable 2 meses a 2-80 C.
Nota: Reactivos nocivos para la salud en caso de ingestión. Los reactivos y el patrón son
estables hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta, siempre y cuando se conserven
bien cerrados, a la temperatura adecuada (2-80 C) y se evite la contaminación durante el
uso.
 Muestras:
Suero, plasma u orina recogidos mediante procedimientos estándar. Diluir la orina 1/50
con agua destilada antes del ensayo.
La urea en suero o plasma es estable 7 días a 2-80 C. se recomienda la heparina como

anticoagulante.
La urea en orina es estable 3 días a temperatura ambiente si no se produce crecimiento

bacteriano.
 Procedimiento:

Reactivo de trabajo 1.5 mL

Patrón o muestra 10 µL
-Suero y plasma: 15-39 mg/dL BUN= 2.5-6.5 mmol/L urea. En el periodo neonatal las
concentraciones son inferiores mientras que en personas mayores de 60 años se encuentran
valores superiores a los adultos. Las concentraciones también tienden a ser ligeramente
superiores en hombre que en mujeres.8
-Orina: 26-43 g/24 hrs urea= 12-20 g/24hrs BUN= 428-714 mmol/24 hrs urea.8
Creatinina:
La creatinina es el producto final del catabolismo de la creatina (fosfocreatina). La cantidad

producida diariamente está relacionada con las masas musculares. La creatinina filtra
libremente por lo glomérulo (pequeñas cantidades son reabsorbidas y también secretadas
por los túbulos renales). 8
La medición de creatinina tiene utilidad casi exclusivamente para la evaluación de la
función renal (perfusión renal alterada, perdida de la función de las nefronas) y en la
monitorización de la diálisis renal.11
La creatinina presente en la muestra reacciona con el picrato en medio alcalino originando

un complejo coloreado (método de jaffe). Se mide la velocidad de formato de dicho
complejo en periodos iniciales cortos, para reducir la interferencia de otros compuestos. Las
muestras de suero y plasma contienen proteínas que reaccionan de forma no específica; sin
embargo, los resultados pueden ser corregidos restando un valor fijo. La utilización de esta
corrección se conoce como método de jaffe compensado. 12
 Reactivos:
El kit para urea consta de 2 reactivos:
-Reactivo A: Hidróxido sódico 0.4 mol/L, detergente. Irritante (xi) irrita los ojos y la piel.
-Reactivo B: Acido pícrico 25 mmol/L.
NOTA: Los reactivos y el patrón son estables hasta la fecha de caducidad indicada en la
etiqueta, siempre y cuando se conserven bien cerrados, a la temperatura adecuada (15-
300C) y se evite la contaminación durante el uso. Se deben mezclar volúmenes iguales de
reactivo A y reactivo B. Homogeneizar.
El reactivo trabajo es estable un mes a 2-80C.
 Muestras:
Suero, plasma y orina, recogidos mediante procedimientos estándar. Diluir la orina fresca
1/50 con agua destilada antes de medir. Los anticoagulantes como la heparina, EDTA,
oxalato o fluoruro, no interfieren.
La creatinina en las muestras es estable 24 horas a 2-80C.
 Procedimiento:

Reactivo de trabajo 1.0 mL

Patrón o muestra 0.1 mL
Suero y plasma: 13
Método Jaffe no compensado Jaffe compensado

Hombres 0.9- 1.3 mg/dL= 80- 115µmol/L 0.7- 1.2 mg/dL= 62- 106 µmol/L
Mujeres 0.6- 1.1 mg/dL = 53- 97 µmol/L 0.5- 0.9 mg/dL = 44- 80 µmol/L
Orina: 8
-Hombres: 14-16 mg/kg/24hrs = 124- 230 µmol/kg/24hrs.
-Mujeres: 11-20 mg/kg/24hrs = 97- 177 µmol/kg/24hrs.
Ácido úrico:
En el hombre el ácido úrico es el principal producto del catabolismo de las bases puricas,
las cuales se obtienen en parte de la dieta y en parte de la síntesis in vivo.
Concentraciones elevadas de ácido úrico en suero u orina pueden ser atribuibles a una
sobreproducción de urato (síntesis incrementada de purinas) o una eliminación defectuosa
de urato.
La hiperuricemia se asocia generalmente con la gota, disminución de la función renal,

deshidratación, alteraciones mielo proliferativas y otras condiciones en las que no se
conoce bien la causa.
El ácido úrico presente en la muestra origina, según las reacciones acopladas descritas a
continuación, un complejo coloreado que se cuantifica por espectrofotometría.14
Ácido úrico + O2 + 2H2O uricasa

Alantoina + CO2 +H2O2
2H2O2 + 4-aminoantipirina + DCFS peroxidasa

Quinonaimina + 4 H2O
 Reactivos:
Fosfatos 100 mmol/L, detergente 1.5 g/L, diclorofenolsulfonato 4 mmol/L, uricasa > 0.12
U/mL ascorbato oxidasa > 5 U/mL, peroxidasa > 1 U/mL, 4-aminoantipirina 0.5 mmol/L,
pH 7.8.
El reactivo y el patrón son estables hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta,
siempre y cuando se conserven bien cerrados, a la temperatura adecuada (2-80 C) y se evite
la contaminación durante el uso.
 Muestras:
Suero, plasma y orina, recogidos mediante procedimientos estándar. Diluir la orina 1/10
con agua destilada antes de medir. Los anticoagulantes como la heparina, EDTA, oxalato o
fluoruro, no interfieren.
El ácido úrico en orina es estable 4 días a temperatura ambiente si se ajusta al pH a >8 con
NaOH. No refrigerar.
 Procedimiento:


Agua destilada 25 µL --- ---
Patrón Ácido úrico (S) --- 25 µL ---
Suero y plasma: 8
- Hombres: 3.5-7.2 mg/dL = 210-420 µmol/L.
- Mujeres: 2.6-6.0 mg/dL = 150-350 µmol/L.
Orina: 8
- Hombres: 250-750 mg/24 hrs = 1.5-4.5 mmol/24 hrs.
Colesterol total:
El colesterol es un lípido esteroide de alto peso molecular que contiene una estructura
cliclopentanofenantreno. El colesterol de la dieta se absorbe parcialmente y también se
sintetiza en el hígado y otros tejidos. El colesterol se transporta en el plasma en las
lipoproteínas. Se excreta a la bilis como tal o tras su transformación en ácidos biliares.8
Las concentraciones elevadas de colesterol se asocian con un riesgo progresivamente

creciente ateroesclerosis y enfermedad de las arterias coronarias. 11
Tanto el colesterol libre como el esterificado presente en la muestra originan, según las
reacciones acopladas descritas a continuación, un complejo coloreado que se cuantifica por
espectrofotometría. 15
Colesterol esterificado + H2O col. esterasa

Colesterol + Ácido graso.
Colesterol + 1/2 O2 + H2O col. oxidasa

Colestenona + H2O2
2 H2O2 + 4-Aminoantipirina + Fenol peroxidasa

Quinonaimina +4 H2O.
 Reactivos:
-Reactivo A: Pipes 35 mmol/L, colato sódico 0.5 mmol/L, fenol 28 mmol/L, colesterol
esterasa > 0.2 U/mL, colesterol oxidasa >0.1 U/mL, 4-aminoantipirina 0.5 mmol/L, pH 7.0.
El reactivo y el patrón son estables hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta,

 Muestras:
Suero o plasma recogidos mediante procedimientos estándar.
El colesterol en suero o plasma es estable 7 dias a 2-80 C. pueden usarse como

anticoagulantes la heparina, EDTA, oxalato o fluoruro.
 Procedimiento:


Patrón colesterol (S) --- 5 µL ---
Los siguientes valores discriminantes universales han sido establecidos por el US National
Cholesterol Education Program y también aceptados en otros países para la evaluación del
riesgo de las arterias coronarias.16
Optimo Hasta 200 mg/dL = 5.2 mmol/L

Moderado 200-239 mg/dL = 5.2- 6.21 mmol/L
Elevado > 240 mg/dL = > 6.24 mmol/L
Colesterol-HDL:
Las HDL (lipoproteínas de alta densidad) participan en l captación del colesterol de los
tejidos y en su transporte hacia el hígado en donde se eliminan en forma de ácidos biliares.
Existe una correlación positiva entre concentraciones bajas de HDL-colesterol en plasma y

la incidencia de aterosclerosis, base del infarto al miocardio y accidentes cerebro
vasculares.8
Existen diversos estados patológicos o influencias ambientales asociados con niveles

reducidos de HDL: enfermedades hepatocelulares agudas o crónicas, hiperalimentación
intravenosa, mal nutrición severa, diabetes, anemia crónica, alteraciones
mieloproliferativas, enfermedad de Tangier, estrés agudo, algunos medicamentos y el
tabaco.11
El colesterol de las lipoproteínas de baja densidad (LDL), las de muy baja densidad
(VLDL) y los quilomicrones es Hidrolizado por el colesterol oxidasa mediante una reacción
enzimática acelerada no formadora de color. El detergente presente en le reactivo B
solubiliza el colesterol de las lipoproteínas de alta densidad (HDL) se cuantifica
espectrofotométricamente mediante las reacciones acopladas descritas a continuación.17
Colesterol esterificado + H2O col. esterasa

Colesterol + Ácido graso.
Colesterol + 1/2 O2 + H2O col. oxidasa

Colestenona + H2O2
2 H2O2 + 4-Aminoantipirina + DSBmT peroxidasa
Quinonaimina + 4 H2O
 Reactivos:
-Reactivo A: 1 x 60 mL. Buffer Good, colesterol oxidasa <1 U/mL, peroxidasa <1 U/mL,
N, N-bis (4-sulfobutil) -m-toluidina (DSBmT) 1 mmol/L.
-Reactivo B: 1x 10 mL. Buffer Good, colesterol esterasa <1.5 U/mL, 4-aminoantipirina

1mmol/L, ascorbato oxidasa <3.0 KU/L, detergente.
Los reactivos y el patrón son estables hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta,
 Muestras:
El colesterol en suero o plasma es estable 7 días a 2-80 C. Como anticoagulantes puede

utilizarse EDTA litio o heparina sódica.
 Procedimiento:

Reactivo (A) 750 µL

Reactivo (B) 250 µL
Muestra / calibrador 7 µL
Las concentraciones de HDL varían considerablemente con la edad y el sexo.
El siguiente valor discriminante ha sido recomendado para identificar individuos con

elevado riesgo de enfermedad coronaria.16
Hasta 35mg/dL= 0.91 mmol/L Riesgo elevado

< 60 mg/dL = <1.56 mmol/L Riesgo bajo
Triglicéridos:
Los triglicéridos son esteres de glicerol y ácidos grasos que provienen de la dieta o son
sintetizados principalmente en el hígado. Los triglicéridos se transportan en el plasma en las
lipoproteínas y son utilizados por el tejido adiposo. Su principal función es suministrar
energía a la célula.11
Las concentraciones elevadas en el suero pueden ser debidas a alteraciones hepatobiliares,

diabetes mellitus, nefrosis, hipotiroidismo alcoholismo, hiperlipoproteinemia familiar IV y
V y otras.16
Los triglicéridos presentes en la muestra originan, según las reacciones acopladas descritas
a continuación, un complejo coloreado que se cuantifica por espectrofotometría.18
Trigliceridos +H2O lipasa

Glicerol + Acidos grasos
Glicerol +ATP Glicerol quinasa

Glicerol-3-P + ADP
Glicerol-3-p +O2 G-3-oxidasa

Dihidroxiacetona-P + H2O2
2 H2O2 + 4- Aminoantipirina + 4-Clorofenol peroxidasa

Quininaimina + 4 H2O
 Reactivos:
-Reactivo A: 10 x 50 mL. Pipes 45 mmol/L, 4-clorofenol 6mmol/L, cloruro magnésico 5

mmol/L, lipasa > 100 U/mL, glicerolquinasa > 1.5 U/mL, glicerol-3-fosfato oxidasa >4
U/mL, peroxidasa >0.78 U/ml, 4-aminoantipirina 0.75 mmol/L, pH 7.0.
la contaminación durante el uso. El reactivo abierto y conservado en el compartimiento
refrigerado del analizador es estable 2 meses.
 Muestras:
El colesterol en suero o plasma es estable 5 días a 2-80 C. Los anticoagulantes como

heparina, EDTA, oxalato u fluoruro no interfieren.
 Procedimiento:


Patrón triglicéridos (S) --- 10 µL ---
Los siguientes valores discriminantes universales han sido establecidos por el US National
Cholesterol Education Program y también aceptados en otros países para la evaluación del
riesgo de las arterias coronarias.16
Hasta 50 mg/dL = 1.7 mmol/L Bajo

150-199 mg/dL = 1.70-2.25 mmol/L Dudoso
200-499 mg/dL = 2.26-5.64 mmol/L Alto
>500 mg/dL = >5.65 mmol/L Muy alto
Magnesio:
El magnesio es una de los cationes más abundantes en el organismo. Se almacena

principalmente en el hueso, aunque se encuentra también cantidades significativas en las
secreciones biliares y gástricas. El magnesio actúa como cofactor especial de las enzimas
relacionadas con la respiración celular, glicolisis y transporte de membrana de otros
cationes.8
Habitualmente, la concentración de magnesio en el plasma se mantiene dentro de unos

límites estrechos. Los riñones son los principales órganos de homeostasis de magnesio,
manteniendo su concentración en plasma. 8
Se encuentran concentraciones elevadas de magnesio asociadas a deshidratación, acidosis,

diabética celular enfermedad de Addison, y en situaciones que afectan la filtración
glomerular.
Una baja concentración de magnesio en el plasma puede ser atribuible a una mala absorción
intestinal, perdida de fluidos y perdidas renales causadas por tratamientos con diuréticos o
amino glucósidos. También puede ser debido a hipoparatiroidismo y alcoholismo.11
El magnesio presente en la muestra reacciona con azul de xilidilo en medio alcalino

originando un complejo coloreado que puede determinarse espectrofotométricamente. La
presencia de EGTA en le reactivo evita la interferencia del calcio.19
 Reactivos:
Reactivo A: 5x 16 mL. Carbonato de sodio 0.1 mol/L, EGTA 0.1 mmol/L, trietanolamina
0.1 mol/L, cianuro de potasio 7.7 mmol/L, acido de sodio 0.95 g/L.
Peligro: Provoca quemaduras graves en la piel y lesiones oculares graves.
Reactivo B: 2x 10 mL, Glicina 25 mmol/L, azul de xilidilo 0.5 mmol/L, cloroacetamida 2.6
g/L.
Atención: Puede provocar una reacción alérgica en la piel.
Reactivo trabajo: añadir 4.0 mL de reactivo B en el frasco de reactivo A. Agitar

suavemente. Estable 15 dias a 2-80C.
 Muestras:
Suero, plasma u orina recogidas mediante procedimientos estándar. Las muestras no deben
presentar hemolisis ni lipemia. El magnesio en suero o plasma es estable 10 días a 2-80C.
Utilizar heparina como anticoagulante.
Recoger la orina de 24 horas con 10 mL de ácido clorhídrico al 10% (v/v). Estable una
semana a 2-80C. Centrifugar o filtrar y diluir 1/5 con agua destilada antes de medir.
 Procedimiento:

Patrón magnesio (S) --- 10 µL ---
Suero y plasma: 8 1.7-2.4 mg/dL = 0.70-0.98 mmol/L.

Orina: 8 72.-9122 mg/24 hrs = 3-5 mmol/24 hrs.
Calcio:
El calcio es el catión más abundante en el organismo distribuido en el hueso (99%), otros

tejidos y fluido extracelular. Su concentración plasmática está regulada por la acción de la
parathormona, la vitamina D, y la calcitonina. El calcio está implicado en la transmisión de
los impulsos nervioso, en la contracción muscular, en algunas reacciones enzimáticas como
cofactor en la coagulación sanguínea.8
Una hipercalcemia puede ser debida a intoxicación por vitamina D, aumento de la retención
renal, osteoporosis, sarcosidosis, hiperparatiroidismo, mieloma múltiple, hipercalcemia
idiopática infantil y carcinoma metastásico del hueso.20
Se encuentran concentraciones elevadas de calcio en orina en nefrolitiasis y acidosis

metabólica. Una hipocalcemia puede ser causada por hipoparatiroidismo primario y
secundario, pseudohipoparatiroidismo, deficiencia a de vitamina D, mal nutrición y mala
absorción intestinal. 20
El calcio presente en la muestra reacciona con el arsenazo III originando un complejo

coloreado que puede cuantificarse espectrofotométricamente.20
 Reactivos:
Reactivo A 10 x 50 mL, arsenazo III o.2 mmol/L, imidasol 75 mmol/.

El reactivo abierto y conservado en el compartimiento refrigerante del analizador es estable

2 meses.
 Muestras:
Suero, plasma heparinizado u orina recogidos mediante procedimientos estándar. El calcio

en suero o plasma es estable 10 días 2-80C. Los anticoagulantes quelantes de calcio (EDTA,
oxalato, etc.) interfieren.
Recoger la orina de 24 horas con 10 mL de ácido nítrico al 50%. Estable 10 días a 2-80C.
Centrifugar o filtrar y diluirla 1/2 antes de medir.
 Procedimiento:


Patrón calcio (S) --- 15 µL ---
Suero y plasma: 8 8.6-10.3 mg/dL = 2.15-2.58 mmol/L
Orina:8 100-300 mg/24 hrs = 2.5- 7.5 mmol/24 hrs.
Fosforo:
Aproximadamente el 80% del fosforo en el organismo se encuentra integrando la parte

inorgánica del hueso en forma de sales de fosfato de calcio. El resto está involucrado en la
esterificación de los intermediarios del metabolismo de carbohidratos y como componente
de fosfolípidos, fosfoproteínas, ácidos nucleicos y nucleótidos. 8
La hipofosfatemia puede ser causada por un desplazamiento de fosfato extracelular al
espacio intracelular, por aumento en las perdidas renales (defectos tubulares renales,
hiperparatiroidismo) o de las perdidas gastrointestinales (diarrea, vomito) y por absorción
intestinal disminuida.11
La hiperfosfatemia generalmente es secundaria a la incapacidad renal de excretar fosfato

por fallo renal o hipoparatiroidismo.11
El fosfato inorgánico presente en la muestra reacciona con el molibdato en medio acido,

originando un complejo que se cuantifica por espectrofotometría.21
 Reactivos:
Reactivo A: 3x 40 mL. Ácido sulfúrico 0.36 mol/L, cloruro de sodio 154 mmol/L.
Peligro: provoca quemaduras graves y lesiones oculares graves.
Reactivo B: 1x 50 mL. Ácido sulfúrico 0.36 mol/L, cloruro de sodio 154 mmol/L,
heptamolibdato de amonio 3.5 mmol/L. Conservar de 15- 300 C
siempre y cuando se conserven bien cerrados, a la temperatura adecuada (15-300 C) y se
evite la contaminación durante el uso.
Reactivo de trabajo: mezclar en la proporción: 7 ml del reactivo A más 3 mL de reactivo B.

homogeneizar. Estable 12 meses a 15- 300C.
 Muestras:
Suero, plasma heparinizado y orina, recogidos mediante procedimientos estándar.
El fosforo en suero o plasma es estable 7 días a 2-80 C.
Recoger la orina de 24 horas con 10mL de ácido clorhídrico al 10% (v/v). Estable 10 días
de 2-300C. Centrifugar o filtrar y diluir 1/10 con agua destilada antes de medir.
 Procedimiento:

Patrón fosforo (S) --- 10 µL ---
Reactivo (trabajo) 1.0 mL 1.0 mL 1.0 mL
-Suero: 8 Adultos: 2.5- 4.5 mg/dL = 0.81-1.45 mmol/L.
Niños: 4.0-7.0 mg/dL = 1.29-2.26 mmol/L.
-Orina: 8 0.4- 1.3 g/24 hrs = 12.9-42 mmol/24 hrs.
Las concentraciones en plasma son unos 0.25 mg/dL (0.08 mmol/L) más bajas que en el
suero.
Hierro:
El hierro está distribuido en el organismo en diferentes compartimentos: hemoglobina,

mioglobina, tisular (principalmente en el hígado, bazo y medula ósea). Solamente el0.1%
del hierro total del organismo se encuentra en el plasma.
La concentración sérica del hierro resulta afectada por numerosas condiciones fisiológicas
o patológicas. La variabilidad intermediaria es bastante elevada en personas sanas. Las
principales alteraciones del metabolismo del hierro son la deficiencia de hierro y la
sobrecarga de hierro, no obstante pueden también encontrarse alteraciones del hierro en
diversas enfermedades.8
El hierro sérico se encuentra aumentado en hemocromatosis, en envenenamiento agudo por

hierro, en cirrosis activa o hepatitis aguda y como resultado de concentraciones elevadas
de transferrina. La concentración de hierro en suero se encuentra disminuida en muchos
pero no en todos los pacientes con anemia con deficiencias de hierro y en alteraciones
crónicas inflamatorias.11
La medición de hierro sérico no debe ser utilizada como prueba para la identificación de
una deficiencia de hierro.8
El ion férrico presente en la muestra y unido a la transferrina es liberado por acción del
guanidinio y reducido a ferroso por el ácido ascórbico
El ion ferroso forma un complejo coloreado con la ferrozina que se cuantifica por
espectrofotometría.21
 Reactivos:
Reactivo A: 5 x40 mL. Cloruro de guanidinio 1.0 mol/L, tampón acetato 0.4 mol/L, pH 4.0.
Reactivo B: 5 x10 mL. Ferrozina de 8 mmol/L, ácido ascórbico 200 mmol/L.
Los reactivos abiertos y conservados en el compartimiento refrigerado del analizador son

estables 20 días.
 Muestras:
Suero o plasma heparinizado recogidos mediante procedimeintos estándar. El hierro en

suero o plasma heparinizado es estable 7 días a 8-80C.
 Procedimiento:

Blanco Muestra
Muestra --- 40 µg/dL
Reactivo (A) 240 µg/dL 240 µg/dL
Reactivo (B) 60 µg/dL 60 µg/dL
-Suero y plasma:8
Hombre de 75-175 µg/dL = 11.6- 31.3 µmol/L.
Mujeres de 50- 170 µg/dL = 9.0-30.4 µmol/L.
Proteínas totales:
La mayoría de las proteínas plasmáticas se sintetizan en el hígado, exceptuando a las

inmunoglobulinas que se forman en las células plasmáticas del bazo, los nódulos linfáticos
y la medula ósea. Las dos causa generales de alteraciones de la proteína total sérica son
cambio de volumen de agua plasmática y cambios en la concentración de una o varias
proteínas sérica.8
La hiperproteinemia puede ser debida a deshidratación (aporte insuficiente de agua,

vómitos o diarreas severas, enfermedad de Addison, cetoacidosis diabética) o a un aumento
en la concentración de proteínas específicas (inmunoglobulinas en enfermedades, mieloma
múltiple).11
La hipoproteinemia se puede producir a causa de una hemodilución (síndromes de

retención salina, y la infusión intravenosa masiva) por un defecto en la síntesis proteicas
(mal nutrición severa, enfermedad hepática crónica, mala absorción intestinal) o por
pérdidas excesivas debidas a enfermedad renal crónica o quemaduras severas.11
La proteína presente en la muestra reacciona con los iones (cobre II) en medio alcalino,
originando un complejo coloreado que se cuantifica por espectrofotometría. 22
 Reactivos:
Reactivo A: 10 x 50 mL. Acetato de cobre 6 mmol/L, ioduro de potasio 12 mmol/L,

hidróxido sódico 1.15 mol/L, detergente.
Peligro: provoca quemaduras graves en la piel y lesiones oculares graves.
Reactivo trabajo: conservar de 2-80C.
 Muestras:
Suero y plasma heparinizado recogido mediante procedimeintos estándar. Estable 8 días a

2-80C.los anticoagulantes quelantes interfieren.
 Procedimiento:


Suero, Adultos:
Ambulatorio 6.4-8..3 g/dL

Recostado 60-7.8 g/dL
Las concentraciones son más bajas en niños. La concentración de proteína total en plasma
es de 2-4 g/L más elevada debido a la presencia de fibrinógeno y de trazas de otras
proteínas.
Albúmina:
La albúmina es la proteína más abundante en el cuerpo humano. Tiene tres funciones

principales: contribuyen en el mantenimiento de la presión oncótica del plasma, actúa cono
transportador no específico para muchos componentes apolares y es una fuente endógena
de aminoácidos.8
La hiperalbuminemia tiene poco significado diagnostico excepto en la deshidratación.11
La hipoalbuminemia se encuentra como resultado de diversos factores: síntesis reducida

causada por enfermedades hepáticas; absorción reducida de aminoácidos debido a
síndromes de mal absorción o mal nutrición; aumento del catabolismo como consecuencia
de inflamación daño tisular, distribución alterada entre el espacio intravascular y
extravascular causada por permeabilidad capilar aumentada, sobrehidratación o ascitis;
perdidas anormales debidas a enfermedades renales /síndrome nefrótico, diabetes mellitus,
glomerulonefritis crónica, lupus eritematoso sistémico), enfermedades del tubo
digestivo(colitis ulcerativa, enfermedad de Crohn) o alteraciones de la piel (dermatitis
exfoliativa, quemaduras extensas); ausencia congénita de albumina o analbuminemia.11
Las concentraciones plasmáticas de albumina, aunque importantes para el control y
seguimiento, tienen muy poco valor diagnóstico.
La albumina presente en la muestra reacciona con el verde de bromocresol en medio acido,

originando un complejo colorado que se cuantifica por espectrofotometría.23
 Reactivos:
Reactivo A: Tampón acetato 100 mmol/L, verde de bromocresol 0.27 mmol/L, detergente
pH 4.1.
Reactivo trabajo: conservar de 2-80C.
 Muestras:
Suero o plasma (EDTA, heparina o citrato) recogido mediante procedimientos estándar. La

albúmina en suero es estable durante 3 días a 2-8-0C.
 Procedimiento:


Patrón albúmina (S) --- 10 µL ---
-Suero:8
Recién nacidos, 2 a 4 dias 2.8-4.4 g/dL

4 dias a 14 años 3.8-5.4 g/dL
Adultos 3.5-5.0 g/dL
>60 años 3.4-4.8 g/dL
Gamma- Glutamil Trasnferasa (γ-GT):
La gamma–glutamil se encuentra en elevadas concentraciones en el hígado, en túbulos

renales e intestino aunque también está presente en los tejidos como páncreas, próstata,
glándula salival, vesícula seminal, cerebro y corazón.8
Se observa cantidad elevada de la gamma-glutamil trasnferasa en las enfermedades

hepáticas, mostrando valores máximos en casos de obstrucción biliar intra o posthepática.
También se detectan elevaciones importantes en pacientes con metástasis en el hígado. En
pancreatitis y en cáncer de páncreas, la actividad enzimática puede elevarse
moderadamente.11
La gamma-glutamil trasnferasa (γ-GT) cataliza la trasferencia del grupo γ-glutamil de la γ-

glutamil-3carboxi-4nitroanilida a la glicilglicina, liberando 3-carboxi-4nitroanilina. La
concentración catalítica se determina a través de la velocidad de formación de la 3-carboxi-
4-nitroanilina.24
γ -Glutamil-3-carboxi-4-nitroanilida +Glicilglicina γ-GT

γ-Glutamil-glicilglicina
+ 3-carboxi-4-nitroanilina
 Reactivos:
Reactivo A: Glicilglicina 206.25 mmol/L, hidróxido sódico 103 mmol/L, pH 7.9. Irrita los
ojos y la piel.
Reactivo B: γ-glutamil-3-carboxi-4-nitroanilida 32.5 mmol/L.
Reactivo trabajo: vaciar el contenido del reactivo B en el frasco del reactivo A. Agitar
suavemente. Si se desea preparar otros volúmenes, mezclar en la proporción: 4 mL de
reactivo A + 1 mL de reactivo B. Estable 2 meses a 2-80C.
 Muestras:
Suero recogido mediante procedimientos estándar. La gamma-glutamil transferasa en suero
es estable 5 días a 2-80C.
 Procedimiento:

Blanco Muestra
Muestra --- 100 µL
Reactivo (trabajo) 1.0 mL 1.0 mL
 Valores de referencia:8
Temperatura de
Hombres Mujeres
reacción
250C <22 U/L <15 U/L
300C <35 U/L <24 U/L
370C <55 U/L <38 U/L
Aspartato Aminotransferasa (AST/TGO):
Las aminotransferasas catalizan la formación de ácido glutámico a partir de 2-oxoglutarato

mediante la transferencia de grupos amino. Las concentraciones más elevadas de AST se
encuentran en el hígado y en el musculo cardiaco aunque también es abundante en el
musculo esquelético, riñones y páncreas.8
Se encuentran concentraciones séricas elevadas de AST en hepatitis y otras enfermedades

hepáticas asociadas con necrosis: mononucleosis infecciosa, cirrosis, colestasis, carcinoma
metastásico del hígado, delirium tremens, así como después de la administración de algunos
medicamentos. 11
También se encuentran concentraciones séricas elevadas de AST después de un infarto de

miocardio, enfermedades del musculo esquelético (como la distrofia muscular progresiva),
en pancreatitis aguda, enfermedad hemolítica y otras. 11

La Aspartato transaminasa aminotransferasa (AST o TGO) cataliza la transferencia del
grupo amino del aspartato al 2-oxoglutarato, formando oxalacetato y glutamato. La
concentración catalítica se determina empleando la reacción acoplada al malato
deshidrogenasa (MDH), a partir de la velocidad de desaparición del NADH, medido a 340
nm. 25
Aspartato + 2-Oxoglutarato AST

Oxalacetato + Glutamato
Oxalacetato + NADH + H + MDH

Malato + NAD
 Reactivos:
-Reactivo A: tris 121 mmol/L, L-aspartato 362 mol/L, malato deshidrogenasa <460 U/L,
lactato deshidrogenasa < 660 U/L, hidróxido sódico 255 mmol/L, pH 7.8. Provoca
irritación cutánea.
-Reactivo B: NADH 1.9 mmol/L, 2-oxoglutarato 75 mmol/L. hidróxido sódico 148

mmol/L, acido de sodio 9.5 g/L. Nocivo en caso de ingestión.
-Reactivo trabajo: vaciar el contenido del reactivo B en el frasco dl reactivo A. agitar

reactivo A + 1 mL de reactivo B. estable un mes a 2-80C.
 Muestras:
Suero y plasma recogidos mediante procedimientos estándar. La aspartato aminotransferasa

en suero y plasma es estable 7 días a 2-80C. Debe utilizarse la heparina como
anticoagulante.
 Procedimiento:

Blanco Muestra
Muestra --- 50 µL
Reactivo (trabajo) 1.0 mL 1.0 mL 3.- El analizador
pipetea el reactivo y la muestra en el rotor en donde se incuba a 37 C y se lleva a cabo la
0
reacción, para después realizar las lecturas de absorbancia mediante un sistema óptico
integrado.
Temperatura de reacción 370C 300C

Sin fosfato piridoxal, hasta8 40 U/L= 0.67 µkat/L 25 U/L = 0.42 µkat/L
Con fosfato piridoxal,
50 U/L= 0.83 µkat/L 30 U/L = 0.50 µkat/L
hasta25
Las concentraciones en niños y recién nacidos son superiores a las de los adultos. Se
encuentran valores ligeramente más elevado en hombres que en mujeres.
Alanina Aminotransferasa (ALT/TGP):
Las aminotransferasas catalizan la formación de ácido glutámico a partir de 2-oxoglutarato

mediante la transferencia de grupos amino. Las concentraciones más elevadas de ALT se
encuentran en diferentes tejidos aunque sus mayores concentraciones se hallan en el hígado
y riñón.8
Se observan concentraciones séricas elevadas de ALT en hepatitis y otras enfermedades

hepáticas asociadas con necrosis: mononucleosis infecciosa, cirrosis, colestasis, carcinoma
metastásico del hígado, delirium tremens, así como después de la administración de algunos
medicamentos como opiáceos, salicilatos o ampicilina. 11
También pueden encontrarse concentraciones séricas elevadas de ALT en enfermedades del

musculo esquelético o cardiaco.
La Aspartato transaminasa aminotransferasa (AST o TGO) cataliza la transferencia del

grupo amino del aspartato al 2-oxoglutarato, formando oxalacetato y glutamato. La
concentración catalítica se determina empleando la reacción acoplada al malato
deshidrogenasa (MDH), a partir de la velocidad de desaparición del NADH, medido a 340
nm 25
Aspartato + 2-Oxoglutarato AST

Oxalacetato + Glutamato
Oxalacetato + NADH + H + MDH

Malato + NAD
 Reactivos:
-Reactivo A: Tris 150 mmol/L, L-alanina 750 mol/L, lactato deshidrogenasa < 1350 U/L,
pH 7.3.
-Reactivo B: NADH 1.9 mmol/L, 2-oxoglutarato 75 mmol/L. hidróxido sódico 148
mmol/L, acido de sodio 9.5 g/L. Nocivo en caso de ingestión.
 Muestras:
Suero y plasma recogidos mediante procedimientos estándar. La alanina aminotransferasa

en suero y plasma es estable 7 días a 2-80C. Debe utilizarse la heparina o EDTA como
anticoagulante.
 Procedimiento:

Blanco Muestra
Muestra --- 50 µL
Reactivo (trabajo) 1.0 mL 1.0 mL
Temperatura de reacción 370C 300C

Sin fosfato piridoxal, hasta 8
41 U/L= 0.68 µkat/L 29 U/L = 0.48 µkat/L
Con fosfato piridoxal, hasta25 65 U/L= 1.08 µkat/L 35 U/L = 0.58 µkat/L
Las concentraciones en niños y recién nacidos son superiores a las de los adultos. Se
encuentran valores ligeramente más elevado en hombres que en mujeres.
Lactato Deshidrogenasa (LDH):
La lactato deshidrogenasa se encuentra presentes en todas las células del, organismo
aunque sus mayores concentraciones hallan en el hígado, corazón riñón, músculo
esquelético, y eritrocitos. 8
La concentración de LDH en suero o plasma esta aumentada en pacientes con enfermedad

hepática, alteraciones renales, infarto de miocardio, muchas enfermedades malignas,
distrofia muscular progresiva y casi en todo caso de hemolisis.11
La lactato deshidrogenasa (LD o LDH) cataliza la reacción del piruvato NADH

obteniéndose lactato y NAD+. La concentración catalítica se determina a partir de la
velocidad de desaparición del NADH, medido a 340 nm.26
Piruvato + NADH+ H+ HDL

Lactato + NAD+
 Reactivos:
Reactivo A: 1x 40 mL. Tris 100 mmol/L, piruvato 2.75 mmol/L, cloruro de sodio 222
mmol/L, pH 7.2.
Reactivo B: NADH 1.55 mmol/L, acido de sodio 9,5 g/L. nocivo en caso de ingestión.
 Muestras:
El suero o plasma debe separarse de los elementos celulares lo antes posible. No utilizar
muestra hemolizadas. La lactato deshidrogenasa en suero o plasma es estable 2 días a
temperatura ambiente y 24 horas a 2-80C, utilizar heparina como anticoagulante.
 Procedimiento:

Muestra 20 µL
Reactivo (trabajo) 1.0 mL
 Valores de referencia:26
Adultos
Temperatura de reacción
U/L µkat/L
25 C0
105-210 1.70-3.5
300C 140-280 2.3-4.70
370C 207-414 3.40-6.80
Bilirrubina total:
La bilirrubina es un compuesto de desecho derivado grupo hemo de la hemoglobina de los

eritrocitos dañados o senescentes, que son destruidos en las células retículoendoteliales.
Una vez producida, la bilirrubinas se transporta al hígado en asociación con la albumina. La
bilirrubina en el hepatocito se conjuga con el ácido glucorónico se excreta en la bilis. 8
Existen una serie de enfermedades heredadas o adquiridas que afectan a la producción,

captación, metabolismo y excreción de bilirrubina, resultando en una
hiperbilirrubinemia.Se observa hiperbilirrubinemia conjugada en recién nacidos (ictericia
fisiológica), en un aumento en la destrucción de eritrocitos (anemia hemolítica, hematoma
extenso), en eritropoyesis defectuosa así como en algunas enfermedades genéticas poco
frecuentes (síndrome de Gilbert, síndrome de Crigler- Najjar).11
La hiperbilirrubinemia conjugada se asocia a una disminución en la excreción de la bilis

debida a enfermedades hepáticas (hepatitis o cirrosis) o bien a una colestasis intra o
extrahepática. 11
La ictericia es una manifestación clínica de la hiperbilirrubinemia que consiste en una

deposición de los pigmentos biliares en la piel, originando coloración amarillenta de la piel
y mucosas.8
La bilirrubina directa presente en la muestra reacciona con el ácido sulfanilico diazoado,

cetrimida solubiliza la bilirrubina directa permitiendo su reacción junto con la facción
directa. Los términos “directa” y “total” se refieren a las características en presencia o
ausencia de solubilizantes (aceleradores). La bilirrubina “directa” e “indirecta “equivale
solo de forma aproximada a las fracciones conjugada y no conjugada.27
 Reactivos:
Reactivo AT: 5 x 40 mL. Ácido sulfanilico 29mmol/L, ácido clorhídrico 0.2 mol/L,
cetramida 50 mmol/L. provoca quemaduras graves en la piel y lesiones oculares graves.
Reactivo BT: 5x 10 mL. Nitrito de sodio 11.6 mmol/L,
Los reactivos abiertos y conservados en el compartimiento refrigerado del analizador son

estables 2 meses.
 Muestras:
Suero recogido mediante procedimientos estándar. La bilirrubina en suero es estable 2 días

2-80C si se protege de la luz.
 Procedimiento:

Blanco Muestra
Muestra --- 10 mg/dl
Reactivo (A) 240mg/dl 240 mg/dl
Reactivo B 60mg/dl 60 mg/dl
Adultos: 8
Total Hasta 1.0 mg/dL =17µmol/L

Recién nacidos: 8
Edad Prematuros No prematuros
Hasta 24 horas 1.8- 8.0mg/dl= 17-137 µmol/L 2.0-6.0 mg/dL= 34- 103µmol/L
Hasta 48 horas 6.0- 12.0 mg/dL = 103-205 µmol/L 6.0- 10 mg/dL = 103-171 µmol/L
3-5 días 10-14 mg/dL= 171-239 µmol/L 4.0-8.0 mg/dL= 68-137 µmol/L
Bilirrubina directa:
La bilirrubina es un compuesto de desecho derivado grupo hemo de la hemoglobina de los

eritrocitos dañados o senescentes, que son destruidos en las células retículoendoteliales.
Una vez producida, la bilirrubinas se transporta al hígado en asociación con la albumina. La
bilirrubina en el hepatocito se conjuga con el ácido glucorónico se excreta en la bilis. 8
Existen una serie de enfermedades heredadas o adquiridas que afectan a la producción,

captación, metabolismo y excreción de bilirrubina, resultando en una hiperbilirrubinemia.
Se observa hiperbilirrubinemia conjugada en recién nacidos (ictericia fisiológica), en un
aumento en la destrucción de eritrocitos (anemia hemolítica, hematoma extenso), en
eritropoyesis defectuosa así como en algunas enfermedades genéticas poco frecuentes
(síndrome de Gilbert, síndrome de Crigler- Najjar).11
La hiperbilirrubinemia conjugada se asocia a una disminución en la excreción de la bilis

debida a enfermedades hepáticas (hepatitis o cirrosis) o bien a una colestasis intra o
extrahepática. 11
La ictericia es una manifestación clínica de la hiperbilirrubinemia que consiste en una

deposición de los pigmentos biliares en la piel, originando coloración amarillenta de la piel
y mucosas. 8
La bilirrubina directa presente en la muestra reacciona con el ácido sulfanilico diazoado,

cetrimida solubiliza la bilirrubina directa permitiendo su reacción junto con la facción
directa. Los términos “directa” y “total” se refieren a las características en presencia o
ausencia de solubilizantes (aceleradores). La bilirrubina “directa” e “indirecta “equivale
solo de forma aproximada a las fracciones conjugada y no conjugada. 27
 Reactivos:
-Reactivo A: 5 x 40 mL. HEDTA 2.0 mmol/L, cloruro de sodio 152 mmol/L. Puede
provocar una reacción alérgica en la piel.
-Reactivo B1: 5x 9 mL. Ácido sulfanilico 29 mmol/L, ácido clorhídrico 130 mmol/L.
Provoca quemaduras graves en la piel y lesiones oculares graves.
-Reactivo B2: 1x 6.5 mL. Nitrito de sodio 25 mmol/L.
Reactivo trabajo: reactivo A (listo para su uso). Añadir 1 ml de reactivo B2 en el frasco del
reactivo B1. Agitar suavemente. Estable 30 días a 2-80C.
 Muestras:
Suero y plasma recogido mediante procedimientos estándar. Debe utilizarse la heparina o

EDTA como anticoagulante. La bilirrubina en suero y plasma es estable 2 días a 2-80C si se
protege de la luz.
 Procedimiento:

Blanco Muestra
Muestra --- 10 mg/dl
Reactivo (A) 240 mg/dl 240 mg/dl
Reactivo (B) 60 mg/dl 60 mg/dl
-Adultos: 8
Directa: Hasta 0.2 mg/dL = 3.4 µmol/L
α-Amilasa:
La α-amilasa cataliza la hidrolisis de los enlaces α-1,4 de los carbohidratos constituidos

por unidades de α-D-glucosa, originando la formación de dextranos, maltosa y glucosa. La
α-amilasa se produce principalmente en el páncreas exocrino (tipo-P) y la glándula
salivales (tipo-S) aunque también se encuentran en otros tejidos.8
La medición de la actividad amilasa en suero y orina tiene utilidad principalmente para el
diagnóstico de enfermedades pancreáticas, como la pancreatitis crónica o aguda. La
hiperamilasemia también puede ser debida a insuficiencia renal, dolor abdominal agudo,
tumor en pulmones y ovarios, lesiones en la glándulas salivales, macroamilasemia,
cetoacidosis diabética, enfermedad del tracto biliar, trauma cerebral, alcoholismo crónico y
medicamentos ( opiáceos). 11
La α-amilasa cataliza la hidrolisis de 4-nitrofenil-maltohepatosido- etilideno a

oligosacáridos que son sustrato para la α-glucosidasa capaz d liberar 4- nitrofenol.
La concentración catalítica se determina a partir de la velocidad de formación del 4-

notofenol, medido a 405 nm.28
 Reactivos:
Reactivo A: 1x 32 ml. HEPES 50 mmol/L, Cloruro de calcio 0.075 mmol/L, cloruro de

sodio 90 mmol/L, cloruro de magnesio 13 mmol/L, α-glucosidasa >4 U/mL, pH 7.1.
Reactivo B: 1 x 8 ml. HEPES 50 mmol/L, 4- nitrofenil-maltoheptaosido-etilideno 18

mmol/L, pH 7.1.
reactivo A + 1 mL de reactivo B. Estable 20 días a 2-80C.
 Muestras:
Suero, plasma u orina recogidos mediante procedimientos estándar. La α-amilasa es estable

durante un mes a 2-80C. Debe utilizarse la heparina o EDTA como anticoagulante.
La α-amilasa en orina es estable durante un mes a 2-80C siempre que el pH se ajuste

aproximadamente a 7 para la conservación.
 Procedimiento:

Suero/plasma orina
37 C
0
30 C
0
37 C
0
300C
Muestra 30µL 60µL 15 µL 30µL
Reactivo (A) 1.0 mL 1.0 mL 1.0 mL 1.0 mL
Temperatura de Suero/ plasma Orina

reacción U/L µkat/L U/L µkat/L
300C28 25-65 0.41-1.08 --- ---
370C28 28-100 0.7-1.67 16-491 0.26-8.15
Lipasa:
Las lipasas hidrolizan los esteres de glicerol con ácidos grasos d cadenas largas. Aunque
existen glándulas y mucosas que secretan esta enzima nicamente la lipasa pancreática tiene
interés diagnóstico. Así la medicación de concentración de lipasa tiene utilidad para
investigar trastornos pancreáticos, la concentración de lipasa sérica aumenta como
consecuencia de una pancreatitis aguda. En general tanto la amilasa como a lipasa sigue el
mismo curso aunque la elevación de lipasa persiste durante más tiempo. Las elevaciones de
la concentración de lipasa también pueden ser debidas a una obstrucción del conducto
pancreático por un cálculo o bien por un carcinoma, en enfermedades renales aguda o
crónica, y como consecuencia de tratamiento con opiáceos.11
La lipasa la hidrolisis del substrato 1.2- O-dilauril-rac-glicerol-3-ácido glutárico (6-

metilresorufina)-éster obteniéndose 1.2- O-dilauril-rac-glicerol y el ácido glutárico (6-
metilresorufina)-éster, un producto intermedio inestable. En solución alcalina, este se
descompone espontáneamente, en ácido glutárico y metilresorufina. La concentración
catalítica se determina a partir de la velocidad de formación del colorante rojo, medida a
580 nm.29
1.2- O-dilauril-rac-glicerol-3-ácido glutárico (6-metilresorufina)-éster lipasa
1.2- O-dilauril-rac-glicerol + ácido glutárico (6-metilresorufina)-ester
 Reactivos:
Reactivo A: 1x 50 ml. Tampón tris 40 mmol/L, colipasa ≥1 mg/L, deoxicolato ≥ 1.8
mmol/L, taurodesoxicolato ≥ 7.0 mmol/L, pH 8.3.
Reactibo B: 1x 10 mL. Tampón tartrato 15 mmol/L, 1.2- O-dilauril-rac-glicerol-3-ácido

glutárico (6-metilresorufina)-éster ≥ 0.7 mmol/L, iones calcio ≥ 1 mmol/L, pH4.0.
Patrón de lipasa: reconstruir el liofilizado con 1.00 ml de agua destilada. Estable 7 días a 2-
80C o bien 3 meses a -18 0C.
 Muestras:
Suero o plasma con heparina de sodio, amonio o litio recogido mediante procedimientos
estándar. La lipasa en la muestra es estable 7 días a 2-80C.
 Procedimiento:


Patrón lipasa (S) --- 10 µL ---
Reactivo (A) 1.0 ml 1.0 mL 1.0 mL
Reactivo (B) 200 µL 200 µL 200 µL
-Suero: 29 ≤ 38 U/L = ≤ 0.633 µkat/L
Fosfatasa alcalina:
La fosfatasa alcalina cataliza la hidrolisis de monoésteres de fosfato orgíacos a pH alcalino.

La enzima se encuentra presente en casi todos los tejidos del organismo, ubicado en las
membranas celulares y se halla a concentraciones especialmente elevadas en placenta,
epitelio intestinal, túbulos renales, osteoblastos y en el hígado. La fosfatasa presente en
suero de adulto normal procede principalmente del hígado o hueso.8
Se encuentran concentraciones séricas elevadas de fosfatasa alcalina en pacientes con

enfermedades del hueso asociadas con actividad osteoblastica incrementada (enfermedad
de Paget, hiperparatiroidismo primario o secundario, tumores óseos, raquitismo,
osteomalacia, fracturas) y también en pacientes con alteraciones hepatobiliares (ictericia
obstructiva, hepatitis, hepatotoxicidad causada por medicamentos, cáncer de hígado).
Cambios fisiológicos, como el crecimiento de huesos y el embarazo, pueden causar
incrementos en la fosfatasa alcalina.11
La fosfatasa alcalina (FAL) cataliza en medio alcalino la transferencia del grupo fosfato del
4-nitofenilfosfato al 2-amino-3-metil-1-propanol (AMP), liberando 4-nitrofenol. La
concentración catalítica se determina a partir de la velocidad de formación de 4-nitrofenol,
medido a 405 nm. 30
4-nitrofenilfosfato + AMP FAL

AMP – Fosfato + 4-notofenol
 Reactivos:
-Reactivo A: 2-amino-3-metil-1-propanol o.0 mol/L, filfato de zinc 1.2 mmol/L, acido 4-

hidroxi-etilenodiaminotriacetico 2.5 mol/L, acetato de magnesio 2.5 mmol/L, pH 10.4.
-Reactivo B: 4-nitrofenilfosfato 60 mmol/L.
 Muestras:
Suero o plasma mediante procedimientos estándar. La fosfatasa alcalina en suero o plasma

es estable 7 días a 2-80C. Puede utilizarse heparina como anticoagulante.
 Procedimiento:


Reactivo (trabajo) 1.0 mL 1.0 mL 1.0 mL
Temperatura de reacción Hombres Mujeres

250C 75 U/L = 1.25 µkat/L 68 U/L = 1.13 µkat/L
300C 30 87 U/L = 1.45 µkat/L 80 U/L = 1.33 µkat/L
370C 30 115 U/L = 1.92 µkat/L 105 U/L = 1.75 µkat/L
2.2. Área de hematología:
2.2.1. Introducción:
La hematología es la rama de la ciencia que se encarga del estudio de los elementos formes
de la sangre y sus precursores, así como de los trastornos estructurales y bioquímicos de
estos elementos, que puedan conducir a una enfermedad. Es una ciencia que comprende el
estudio de la etiología, diagnóstico, tratamiento, pronóstico y prevención de las
enfermedades de la sangre y órganos hemolinfoproductores.31
La sangre es un fluido de color rojo y aspecto viscoso que es bombeado por el corazón a
través del sistema vascular para llegar a todos los tejidos y volver de nuevo al corazón. la
sangre consta de un líquido color amarillo denominado plasma y diferentes elementos
formes, que se encuentran suspensión.31
El plasma forma el 50-55 % de la sangre total y a su vez el agua forma el 90% del plasma
el 10% restante lo forman diferentes sustancias disueltas como proteínas, enzimas,
electrolitos o sustancias de desecho. Si eliminamos el fibrinógeno del plasma sanguíneo lo
denominamos suero.31
El 45-50% restante de la sangre lo conforman las células sanguíneas como: hematíes,

leucocitos (neutrófilos, linfocitos, monocitos, eosinófilos, basófilos) y plaquetas. Estas
células tienen su origen de una célula única denominada “célula madre” que se localizan en
los órganos hematopoyéticos y que puede madurar hacia cualquiera de estos tres tipos de
células.31
2.2.2. Analizador Celltac F MEK- 8222J/K:
El analizador de hematología automatizado MEK-8222J/K mide 22 parámetros. Esto

proporciona rapidez en el conteo (80 muestras/hora) y todas las operaciones, incluyendo la
muestra, se llevan a cabo de manera automática. Solo necesita cargar las muestras en la
rejilla de muestras. El resultado de la medición con un claro dispersograma del diferencial
de 5 partes de GSB (WBC) se exhibe en una pantalla ECL TFT de color de alta definición
8,4 pulgadas. La muestra también se puede medir en forma manual. Es útil no solo en
exámenes de rutina, si no en exámenes de emergencia. Este analizador de hematología tiene
un interfaz USB que permite conexión a una computadora personal y al sistema de
información del laboratorio.32
El analizador de hematología automatizado MEK-8222J/K mide 22 parámetros

simultáneamente incluyendo el diferencial de 5 partes de GBS (WCB), GRS (RBC) y
plaquetas (PLT) medidos mediante el método de detección de resistencia eléctrica. El
conteo de GBS (WBC) se diferencia en neutrófilos, linfocitos, mo0nocitos, eosinófilos, y
basófilos mediante la técnica de dispersión de luz (cartometría de flujo con láser). Para el
conteo de glóbulos, utiliza el método de impedancia volumétrica.32
La hemoglobina se mide mediante espectrofotometría. Este método mide la densidad óptica

de la solución de la muestra. Para esto se agrega a la muestra diluida, un reactivo
hemolizante para romper la membrana del glóbulo rojo y liberar la hemoglobina. La
hemoglobina liberada reacciona con el ferricianuro de potasio y el cianuro de potasio en la
solución para producir cianometahemoglonia. La densidad óptica es proporcional a la
cantidad de hemoglobina en la solución de la muestra.32
Método de detección:
-Conteo de glóbulos sanguíneos: ---------------Detección de resistencia eléctrica.
-Hemoglobina: ---------------------------------------Detección óptica de cianometahemoglonia.
-Hematocrito: ------------------------------------Cálculo de histograma.
-Población de GBS (WBC): --------------------Dispersión por láser.
-Crit de plaquetas: -------------------------------Cálculo de histograma.
-Ancho de la distribución de los GRS (RBC):-Cálculo de histograma.
-Ancho de la distribución de la plaqueta: -----Cálculo de histograma.
Razón de la dilución:
-Sangre venosa:
Volumen de muestra: ----------55µL
GBS (WBC)/HGB: ------------200:1
GRS (RBC)/PLT: --------------40,000:1
Guía de uso diario del analizador Celltac F:32
Encender:
1. –Oprima el interruptor de energía en el panel trasero del analizador colocándolo en

encendido. La lámpara de energía principal en el panel delantero se ilumina.
2. –Oprima la tecla de apertura de paso de energía. Ña lámpara de energía de ilumina. La

limpieza del trayecto de fluido, cebado y auto-verificación del circuito se lleva a cabo en
forma automática y el mensaje de “cebado” aparece.
Después de que se termina la operación de cebado, aparece la pantalla” listo” (ready). El

analizador está listo para el conteo. Se checa que las lámparas de energía y laser en el panel
delantero estén encendidas.
Lista de trabajo:
1. – Exhiba la pantalla de “lista de trabajo” (work list).
2. – Presione la tecla de “regístrese” (register) para exhibir la pantalla “registro en lista de

trabajo” (register to work list).
3. –Introduzca los datos del paciente utilizando el teclado y teclas numéricas de la pantalla.
Para cambiar los conceptos de entrada, utilice las teclas “retroceso (back) y siguiente
(next).
4. –Después de introducir datos, presione la tecla de regístrese (register) en la pantalla para

introducir comentarios. La pantalla regresa a la pantalla de “lista de trabajo” (work list) y la
información se registra en la última columna de la lista de trabajo.
Resultados:
Cuando los resultados del paciente ya están listos el apartado de ID se colorea, lo cual
indica que ya están medios los parámetros.
1. –En la pantalla de “lista de trabajo” escoja el ID que usted desee exhibir en el resultado
de medición.
2. –Oprima la tecla de “resultado (result) para exhibir el resultado de medición.

3. – Oprima la tecla “de acuerdo” (ok) para regresar a la pantalla de la lista de trabajo (work
list).
Borrar lista de trabajo:
-Para borrar un dato:
1. –Escoja el ID del dato a borrar y presione la tecla “bórrese” (delete) en la pantalla d

trabajo. Aparece un mensaje “¿borrar todos los datos de la ID escogida?”
2. –Presione la tecla de “si” (yes) para borrar datos. Oprima la tecla “no” para no borra
datos.
-Para borrar todos los datos que están medidos:
1. –Presione la tecla “bórrese” (delete) en la pantalla de lista de trabajo.
2. –Oprima la tecla de “bórrense datos” (delete data). Aparece le mensaje “¿borro todos los
datos? (dete all data).
3. – Presione la tecla “si” (yes) para borrar datos. Oprima la tecla “no” para no borrar datos.
Apagar:
Para apagarlo, oprima la tecla de energía en el panel delantero. Aparece el mensaje en la

pantalla de “después de 30 segundos, empezara la limpieza “. Después de la limpieza la
energía se cortara automáticamente.
Para apagarlo totalmente, presione el interruptor de energía principal del panel trasero.
Verifique que la lámpara de energía principal en el panel delantero este apagada.
Biometría hemática:
La biometría hemática es uno de los estudios que con más frecuencia se solicita la
laboratorio, tanto en los pacientes ambulatorios como los pacientes hospitalizados; así
mismo es el primer examen al que nos enfrentamos en la valoración diagnostica de una
paciente. Aunque se considera un solo examen de laboratorio, valora tres estirpes celulares,
cada una con funciones diferentes entre sí, pero que comparten un origen común en la
célula ósea: eritrocitos, leucocitos y plaquetas.33A
La biometría hemática es útil para el diagnóstico y vigilancia de diversos trastornos, pero se

utiliza con mayor frecuencia para el seguimiento de pacientes con quimioterapias o
radioterapias, y para establecer los diagnósticos de síndrome anémico, síndrome febril o
síndrome purpúrico.33C
Serie roja:
Consiste en la cuantificación de los índices primarios y secundarios. Los primarios se

establecen de manera directa en el laboratorio a partir de la muestra de sangre total del
paciente en estudio y constan de la cuantificación de hemoglobina, del hematocrito y el
nuero de eritrocitos/µL. Se utilizan para diagnosticar normalidad, anemia o policitemia.31
Los índices secundarios son el volumen corpuscular medio (VCM), la hemoglobina

corpuscular media (HCM) y la concentración de hemoglobina corpuscular media (CHCM).
Los cuales se calculan a partir de los índices primarios.33A
Eritrocitos:
Los hematíes son las células sanguíneas de mayor nuero. Son producidos en la medula
ósea, de modo que cuando logran su madures son soltados al torrente sanguíneo a modo de
células enucleadas. Normalmente son células con forma de discos bicóncavos, con un
diámetro medio de 8 micras, de espesor 2 micras y 1 micra en el centro aproximadamente,
siendo el volumen medio de 83 micras cubicas.31
La forma del eritrocito cambia cuando atraviesa los capilares, gracias a que a su exceso de
membrana frente a la cantidad de materia que contiene es capaz de estirar la membrana
hasta el punto de no romperla, algo que claro ocurre en una célula normal. Su principal
función es trasportar la hemoglobina y así llevar el oxígeno desde los pulmones a los
diferentes tejidos del cuerpo.31
Los valores de referencia que manejamos en el laboratorio “Labpac” para este conteo
celular son: 4.2 – 6.2 k/µL (masculino) y 4.2 – 5.4 k/µL (femenino).
Hematocrito:
Es un examen que mide, que porcentaje del volumen de toda la sangre son glóbulos rojos.
Esta medición depende del número de glóbulos rojos y de su tamaño. 31
Valores de referencia:
42-54 %RRC (masculino) y 37-47 %RRC (femenino).
Significado de los resultados anormales:
Loa valores bajos de hematocrito pueden deberse a: 31
-Anemia.
-Sangrado.
-Destrucción de glóbulos rojos.

-Leucemia.
-Desnutrición.
-Sobrehidratación.
Los valores altos de hematocrito pueden deberse a: 31
-Cardiopatías congénitas.
-Deshidratación.
-Eritrocitosis.
-Niveles bajos de oxígeno en la sangre (hipoxia).
-fibrosis pulmonar.
-Policitemia vera.
Hemoglobina:
La hemoglobina es una proteína compleja que está formada por un grupo “hem” y por la
globina, que se encuentra en el citoplasma del glóbulo rojo, que llega a construir el 95%
del peso de los hematíes, esta proteína se confiere al hematíe sus características.31
Su función principal es recoger el oxígeno de los alveolos pulmonares y llevarlo hacia los
tejidos y a su vez recoger el CO2 producido y de nuevo llevarlo hacia los pulmones para ser
liberado y volver a captar el O2. El CO2 que no es trasportado por la Hb ira disuelto en el
plasma en forma de bicarbonato. 34A
Valores normales:
13-18 g/dL (masculino) y 12-16 g/dL (femenino).
Volumen corpuscular medio
El VGM Mide el tamaño de los eritrocitos y se calcula por la relación entre el Hematocrito
y el recuento de eritrocitos, su valor se expresa en fentolitros (fl). Con este valor, las
anemias se clasifican en microcíticas (volumen corpuscular medio [VCM] disminuido) y
macrocíticas (VCM aumentado).31
Debido a que la valoración del tamaño de los hematíes es fundamental para el diagnóstico
de una anemia, el VCM es el más importante de todos los índices eritrocitarios, aun en los
caso en los que la cifra de hematíes sea normal, debe anotarse la cifra del VCM en el
informe hematológico, ya que la anemia declarada puede ir precedida de una anomalía en el
tamaño medio de los hematíes. 34A
Los valores normales en el laboratorio “Labpac” para el volumen corpuscular medio van de
78 a 98 fl.
Hemoglobina corpuscular media (HCM):
Es la cantidad de Hgb por célula. Se calcula dividiendo la cifra de hemoglobina por la de

hematíes. Su valor se expresa en picogramos (pg). Este resultado es de gran utilidad como
prueba presuntiva de deficiencia de hierro, clasifica los eritrocitos como normocrómicos o
hipocrómicos. 34A
Al parecer, la concentración de hemoglobina no varía más que en aquellos trastornos en los

que exista una gran alteración de la síntesis de aquélla. Es por ello que, con el recuento
electrónico, la HCM se ha convertido en un dato superfluo para el clínico, que sirve
solamente para confirmar el VCM, medido directamente. No obstante, es un parámetro útil
para el personal de laboratorio, como comprobación de la precisión alcanzada por el
aparato de medición.31
Para la hemoglobina corpuscular media, los valores normales que se manejan en el

laboratorio “Labpac” son: 31- 37 Pg.
CHCM:
Aunque la hemoglobina está presente sólo en el interior de los hematíes, éstos se lisan para
medir la concentración de hemoglobina y los resultados se expresan con relación al del de
sangre total. Para convertir este valor en concentración de hemoglobina dentro del hematíe,
(CHCN) se divide la cifra de hemoglobina por la del hematocrito, es decir, por el volumen
de sangre total que ocupan los hematíes. Los límites normales de la CHCM oscilan entre 27
y 35 g/dl de hematíes (expresados habitualmente, de forma simple, como 27-35%). 31
La hipocromía moderada no solos se debe a una baja concentración de hemoglobina en los

hematíes, sino también a la presencia de unos hematíes más pequeños y delgados de lo
normal.
Reticulocitos:
El reticulocito es el precursor inmediato del eritrocito y su concentración permite conocer

de manera indirecta el grado de eritropoyesis en la médula ósea (MO). Se le conoce como
reticulocito, por tener un fino retículo basófilo que se hace evidente con tinciones supra-
vitales (para células vivas), sin embargo en las tinciones habituales se infiere su presencia
por eritrocitos de aspecto mayor a lo normal (falsa macrocitosis) y se informa como baso-
filia difusa, ya que las células se tiñen de color azul claro o gris. 34B
Material biológico: Sangre total con EDTA.
Material:.–Tubos de cristal de 13 x 100.

–Baño maria a 370 o estufa microbiológica.
–Porta-objetos.
Reactivos: Colorante azul de metileno.
Técnica:
1. –En un tubo de cristal limpio colocar 2 gotas de sangre, y una gota de colorante azul de
metileno.
2. –mesclar perfectamente.
3. –Incubar 15 minutos a 370C.
4. –Después de incubar la mezcla, se hace un extendido en el porta-objetos.
5. –Leer al microscopio con objetivo de 100x y aceite de inmersión.
NOTA: Se leen hasta 500 células.
Formula: Reticulocitos observados ------- 500 células
X% ------- 100 células
La cifra normal de reticulocitos en la sangre periférica (SP) es de 0.5 a 2.0%, pero antes de
interpretar el valor de la cuenta conviene corregir la cifra mediante la siguiente fórmula:
Reticulocitos corregidos: (R) = % R x Hto. del paciente Hto. Ideal (45%).
Serie blanca:
Su valoración inicial consiste en la interpretación cuantitativa total y los subtipos celulares.

En México los valores normales de la cifra de leucocitos en adultos sanos es de 3,800 a
11,000/mm3 (3.8-11 X 109/l). Los neutrófilos segmentados (NS) varían de 40 a 82%, los
linfocitos de 13 a 50%, los monocitos de 2 a 13%; los eosinófilos y los basófilos de 0 a 3%.
En las variaciones de la cuenta de leucocitos se debe tomar en cuenta el efecto del ejercicio
y de algunos fármacos (esteroides, adrenalina y carbonato de litio) que indu- cen
leucocitosis por aumento en la liberación marginal (de marginación) de los sitios de
almacenamiento. Al contrario, cuando la sangre entra en contacto con superficies extrañas
(filtros, líneas de hemodiálisis) y pentobarbital producen “seudoneutropenia”.34B
Leucocitos:
Los leucocitos o glóbulos blancos, son las células nucleadas de la sangre circulante, esto
nos permite diferenciarlos con facilidad de las otras células presentes. Participan en la
defensa del organismo frente a las infecciones. 31
Se pueden clasificar atendiendo a diferentes criterios:
- Origen: unos derivan de la célula madre mieloide (granulocitos y monocitos) y otros de

la célula madre linfoide (linfocitos).
- Función: unos poseen capacidad fagocítico (granulocitos y monocitos) y otros carecen de

ella, aunque intervienen en el sistema inmune de forma específica (linfocitos).
- Morfología: unos, denominados mononucleares, poseen el núcleo sin lobulaciones

(monocitos y linfocitos), otros denominados polinucleares, lo tienen lobulado y de
apariencia múltiple (granulocito).31
En lo que concierne a estas células, se efectúan tres estudios principales:
• Recuento total: este recuento en la actualidad se hace mediante aparatos automatizados

con gran precisión y exactitud. Se acepta como normal un valor entre 4 000 y 11 000
leucocitos/μl.
• Recuento diferencial de leucocitos. Este recuento se expresa como los valores

porcentuales (relativos) que se obtienen contando 100 leucocitos al microscopio en un frotis
teñido con colorante de Wright.
Material Biológico: Sangre total con EDTA.
Material: Porta objetos.
Reactivos:
–Colorante de Wright.
–Solución Buffer pH 6.4
Técnica:
1. – Hacer un extendido sobre lo ancho de un porta-objeto, colocando una pequeña gota de

sangre, la cual es extendida por otro portaobjetos.
2. –Cubrir el extendido con colorante de Wright y dejarlo durante 2 minutos.
3. –Añadir solución de buffer cuidando que no se derrame el colorante.
4. Homogeneizar la mezcla soplando con una pipeta. Dejarlo durante 5 minutos.
5. – Enjuagar con agua corriente. Y dejarlo secar.
6. –Verlo al microscopio con objetivo 100x y aceite de inmersión. Realizar conteo tomando
en cuenta las características únicas de cada glóbulo blanco.
• Recuento diferencial de Schilling.
El recuento diferencial de Schilling se hace en el caso de los neutrófilos y ofrece el

porcentaje de éstos junto a la cifra total de 100 leucocitos. Lo normal es que predominen
los neutrófilos de mayor grado de maduración, como los neutrófilos segmentados y
bandas.33C
Plaquetas: enfermedades de la sangre pag. 197
Las plaquetas, junto con los glóbulos rojos y el plasma, constituyen una proporción
importante en la sangre humana y animal. Microscópicamente, se ven como pequeños
óvalos espinas o púas, y sólo pueden ser vistos por este medio, ya que su tamaño promedio
es de unas cuatrocientas milésimas de pulgada (1 a 3,5 um).31
Las plaquetas son fragmentos de las células madre en la médula ósea, también conocidos
como los megacariocitos. Estimulados por la trombopoyetina hormonal, las plaquetas se
desprenden los megacariocitos y entran al torrente sanguíneo. Cuando el endotelio de los
vasos sanguíneos se daña, las plaquetas se adhieren al sub-endotelio e inician la hemostasia
primaria, la cual será defectuosa si el número o la función de las plaquetas son anormales.
Las plaquetas producidas en condiciones fisiológicas normales sobreviven en la circulación
durante siete a 10 días antes de terminar su corta vida en el bazo. 31, 33D
En el cuerpo sano, la trombopoyetina ayudará a mantener el recuento de plaquetas a un

nivel normal, el recuento plaquetario normal varía entre 150 000 y 450 000 por microlitro
(μl). Las plaquetas proporcionan las hormonas necesarias para la coagulación y las
proteínas. El colágeno es liberado cuando el revestimiento de un vaso sanguíneo está
dañado. Las plaquetas generan el colágeno y comienzan a trabajar en la coagulación de la
sangre mediante la formación de una especie de tapón sellando cualquier posible
hemorragia. 31
Un mayor número fuera de lo normal de plaquetas, conocida como la trombocitosis, puede

causar graves riesgos de salud. El exceso de coagulación de la sangre pueden conducir a
la formación de coágulos de sangre que pueden causar un accidente cerebrovascular. 31
Por el contrario, un número más bajo de lo normal puede dar lugar a hemorragias
extensas y causar daños graves al paciente. La disminución del número de plaquetas se
denomina trombocitopenia y puede deberse a tres mecanismos: disminución de su
producción en la médula ósea, por ejemplo en la aplasia medular, o por reemplazo, como en
las leucemias agudas; su destrucción periférica, más a menudo por un fenómeno
autoinmune, o secundaria a su secuestro, como en el caso de crecimiento esplénico
secundario a cirrosis hepática. Sin embargo, en algunos casos, inducir a un número
plaquetario inferior puede ser posible, por ejemplo, si una persona tiene alta sensibilidad a
los movimientos o ha tenido una cirugía de corazón. El número de plaquetas se puede
bajar por una ingesta diaria de ácido acetilsalicílico u otras drogas que lo ayudan a
reducir. 31 Y 33D
La trombocitopenia significativa es aquella menor a 100 000 plaquetas/μl; la

trombocitopenia leve con recuentos entre 50 000 y 100 000 plaquetas/μl se relaciona con un
tiempo de sangrado prolongado.33D
Tiempo de protrombina (TP):
Material biológico: sangre citratada.
Material: Cronometro, fibrometro, pipetas automáticas de 100 micro litros, cubeta de

plástico.
Reactivos: Cloruro de calcio, Citrato de sodio al 3.8 %, tromboplastina liquida.
Técnica: 1. –Centrifugar la sangre a 1500 rpm / 5 minutos.
2. –Colocar 100 micro litros de plasma del paciente y 100 micro litros de tromboplastina,
en una cubeta de plástico.
3. –Incubar 3 minutos a 370C.
4. –Agregar 100 micro litros de cloruro de calcio, oprimiendo inmediatamente el

cronometro del fibrometro.
Tiempo de tromboplastina parcial:
Material biológico: sangre citratada.
Material: Fibrometro, cronometro, cubeta de plasrico, pipeta automática de 100 microlitros.
Reactivos: Cloruro de calcio,
Tiempo de sangrado:
Material biologico: esta prueba debe realizarse directamente en el paciente.
Material: Lanceta y papel filtro.
Reactivos: Ninguno
Tecnica:
1. –Seleccionar una zona del antebrazo en donde no haya alguna vena visible. Limpial con
alcohol esazona.
2. –Colocar el torniquete en el brazo del paciente.

3. –En el sito escogido del antebrazo, hacer una punción con la lanceta, de 2 a 3 mm de
profundidad.
4. -
4. –Con una hoja de papel filtro, absorber toda la sangre que haya salido en ese momento y
después cada 30 segundos.
b) Área Inmunología
La inmunología es una rama amplia de la biología y de las ciencias biomédicas que se

ocupa del estudio del sistema inmunitario en todos los organismos, entendiendo como tal al
conjunto de órganos, tejidos y células que en los vertebrados tienen como función biológica
el reconocer elementos extraños o ajenos dando una respuesta (respuesta inmunológica).
La inmunología clínica es el estudio de las enfermedades causadas por los desórdenes del
sistema inmunitario. También involucra enfermedades de otros sistemas, donde las
reacciones inmunológicas juegan un papel en los rasgos clínicos y patológicos. Las
enfermedades causadas por los desórdenes del sistema inmunológico se dividen en dos
amplias categorías:
• Inmunodeficiencia, en la cual partes del sistema inmunitario fallan en proveer una

respuesta adecuada. Por ejemplo el SIDA.
• Autoinmunidad, en la cual el sistema inmunológico ataca las células del propio

organismo. Por ejemplo lupus o la enfermedad de Hashimoto.
Otros desórdenes del sistema inmunológico incluyen diferentes grados de hipersensibilidad,

en
los que el sistema responde inapropiadamente a componentes inofensivos (asma y otras

alergias) o responde con mucha intensidad. Para la detección de desórdenes inmunológicos
se utilizará un autoanalizador de Enzimo-Inmuno Análisis
1.-Serologia:
2.- Hormonas:

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Recepción de muestras en el laboratorio:

Con la intención de preservar la calidad y la inalterabilidad de las muestras, desde el

1 - Espécimen o petición no recibidas.

>No coinciden los datos de la solicitud y la muestra.

>La muestra está sin identificar.

3 - Derrame o ruptura del contenedor.

4 - Solicitud mal cumplimentada o tramitada incorrectamente. Siendo ésta aquella solicitud

>Nombre y apellidos del paciente.

>Número de afiliación (si es el caso).

>Procedencia de la solicitud y destino del resultado.

>Facultativo responsable de la solicitud.1

Hay determinaciones, como el hemograma y pruebas de coagulación, cuyos resultados se

4 - Nivel incorrecto de la muestra (muestra insuficiente):

Muestra obtenida en contenedor incorrecto.

7 - Muestra estropeada en el laboratorio:

Aquella muestra que llegando correctamente al laboratorio, se estropea en el proceso de

• Respetar los tiempos de retracción del coagulo. Normalmente, el tiempo de espera es de

• Las muestras con barrera de gel nunca deben volverse a centrifugar.

• Plasma: 10 minutos a 3000 r.p.m. (temperatura en función de la prueba solicitada).

• Plasma pobre en plaquetas: 10 minutos a 3000 r .p.m. a temperatura ambiente.

• Plasma rico en plaquetas: 10 minutos a 900 r.p.m. a temperatura ambiente.2

Se conservarán a temperatura ambiente todas las muestras que se vayan a analizar

5.2.8 REGISTRO DE PETICIONES EN EL S.I.L

La entrada de datos en el Sistema Informático de Laboratorio (SIL) es otro paso crítico.

5.2.9 DISTRIBUCIÓN DEL TRABAJO

Para terminar la fase pre-analítica se clasificarán las muestras en función de la naturaleza de

Capítulo 2: Fase analítica

En el área analítica se deberán llevar a cabo todos los procedimientos relacionados

2.1 Área de bioquímica.

La Bioquímica Clínica es un campo multidisciplinario cuya finalidad es la aplicación de la

2.1.2 Analizador A 15:

Es un instrumento de precisión, automático para diagnóstico In Vitro de acceso aleatorio

Guía de uso diario para A-15

Encendido del equipo:

1.- Encender el analizador, en la parte posterior izquierda.

2.- Encender el equipo de cómputo.

6.- Colocar el ROTOR en el analizador LIMPIO.

7.- Inicializar el equipo con W-Up (warming up).

9.- Quitar la tapa de los frascos para reactivos.

10.- En lo que termina el W-Up, se puede ir creando la lista de trabajo.

Crear lista de trabajo:

Nota: se “calibra” y se programa “blanco de reactivo” cada semana. Los “controles” se

Programar controles y/o calibradores:

2.- Se selecciona en clase el control o la pestaña de controles.

2.- Colocar el código o nombre del paciente.

-Para agregar más pruebas a un mismo paciente. Se selecciona el paciente y se regresa

NOTA: - Si mandamos a posicionar desde “blancos y calibradores”; solo manda “Blancos

-Una vez que mandamos a posicionar un paciente, ya no se podrá borrar de la lista de

Pantalla de posicionamiento de muestras y reactivos:

-Automáticamente se quedan programados los racks de reactivos.

3.-Cerrar la tapa del analizador.

4.-Dar clic en “aceptar” para salir de la pantalla de posicionamiento de muestras y

3. - Dar clic en “S-Down” (shut down).

4.- Al terminar el “shut down” vaciar el contenedor de residuos y enjuagarlo.

5.- Darle clic en “salir” para cerrar el programa.

6.- Apagar el equipo de cómputo y el analizador (de la parte posterior izquierda).

2.1.3. Parámetros que se procesan en química clínica:

La glucosa es la es la principal fuente de energía del organismo. La insulina, producida en