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Informe técnico

Producto
ARGIRELINE® peptide

Fecha
Diciembre 2014

Revisión
25
Índice

UNA PREOCUPACIÓN PRIMORDIAL: LAS LÍNEAS DE EXPRESIÓN 3

EL COMPLEJO SNARE EN LA CONTRACCIÓN MUSCULAR 4
LAS PROTEÍNAS SNARE SON OBJETIVOS ESPECIALES EN COSMÉTICA 5
®
ARGIRELINE peptide, EL PRIMER PÉPTIDO CONTRA LAS ARRUGAS DE EXPRESIÓN 6
EFICACIA IN VITRO
Modulación de la formación del complejo SNARE 7
Inhibición de la liberación de glutamato 8
EFICACIA IN VIVO
Reducción de la profundidad de las arrugas 9
Disminución de la rugosidad en arrugas 10
Efecto sobre el volumen y longitud de las arrugas 12
PROPIEDADES COSMÉTICAS 14
APLICACIONES COSMÉTICAS 14
DATOS TÉCNICOS
Nombre INCI del ingrediente activo 15
Presentación y Conservante 15
DATOS DE APLICACIÓN
Procesado 15
Incompatibilidades 15
Solubilidad 15
Dosis 15
REFERENCIAS 16

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Una preocupación primordial: las líneas de expresión
Una de las principales preocupaciones de un elevado porcentaje de la población es evitar los
primeros signos de edad visibles. Los individuos quieren ser capaces de mantener una
apariencia joven tanto tiempo como sea posible.

La aparición de surcos y arrugas en la gravedad, la constante y frecuente presión

frente, glabella, área periorbital lateral (de posicional sobre la piel facial (mientras
relativa intensidad) así como en el mentón, dormimos por ejemplo), y los movimientos
arrugas nasolabiales y en el labio superior y faciales repetidos causados por la
bandas en el cuello (platisma) son algunos contracción de los músculos faciales que
de los signos más llamativos que causan las arrugas, surcos y líneas de
evidencian una piel madura [1]. Estos expresión características [1, 2].
cambios pueden aparecer de forma
natural con los años a raíz de ciertos La estimulación excesiva de las fibras
cambios bioquímicos, histológicos y musculares de la cara (que presiona la piel
fisiológicos que, normalmente, son hacia adentro) aumenta las conocidas
acentuados por la exposición ambiental. líneas de expresión, que pueden ser
evidentes a los 30 años. Atenuar la
También hay otros factores secundarios contracción muscular puede ser una
que pueden ayudar a la formación de estrategia útil para eliminar o retrasar la
arrugas e incluso a originarlas. Entre ellos aparición de estas líneas indeseadas tanto
se encuentra la fuerza persistente de la como sea posible.

Un tratamiento cosmético que actúe

sobre el mecanismo adecuado implicado
en la contracción muscular puede ayudar
a minimizar estas líneas indeseadas.

3
El complejo SNARE en la contracción muscular
La contracción muscular es un proceso en el que el nervio y el músculo están implicados en
una sinapsis conocida como unión neuromuscular (UNM). Los músculos se contraen cuando
reciben un neurotransmisor liberado desde el interior de una vesícula de la neurona
motora. La liberación de este neurotransmisor responde a una cascada de reacciones
altamente regulada a través de una secuencia de interacciones entre proteínas que culmina en
la fusión de las vesículas portadoras del neurotransmisor con la membrana neuronal [3].

Un cambio localizado en el potencial de y la proteína asociada a sinaptosoma 25

membrana (potencial de acción) se (SNAP-25) [3]. Estas proteínas gobiernan
transmite a lo largo de la neurona hasta el directamente el acoplamiento y fusión de
terminal donde activa la entrada de iones las vesículas a través de la formación de
de calcio dentro de la neurona [3]. Cuando una estructura terciaria conocida como el
estos iones entran en el terminal complejo SNARE, que actúa como un
presináptico, las vesículas que contienen el gancho celular que captura vesículas y las
neurotransmisor acetilcolina (ACh) son fusiona con la membrana [3, 4].
inducidas a unirse a otros elementos de la
neurona para liberar la ACh hacia afuera. Una vez estas vesículas se fusionan, se
libera la ACh a la sinapsis entre las células
Este es un proceso complicado regulado neuronales y musculares. Allí, la ACh se
por las proteínas conocidas como une a los receptores de ACh (AChR)
receptores SNAP (SNARE), que incluyen la localizados en la superficie de las células
proteína de membrana asociada a la musculares, llevando finalmente a la
vesícula o sinaptobrevina (VAMP) junto con contracción muscular.
la proteína asociada a membrana sintaxina

Fig. 1. Liberación de ACh y contracción muscular.

El complejo SNARE es esencial para la liberación de ACh a la

sinapsis neuromuscular, que causa la contracción muscular.

4
Las proteínas SNARE son objetivos especiales en cosmética
Estructuralmente, el complejo SNARE es un haz de cuatro hélices en paralelo formado por dos
hélices de SNAP-25 dispuestas en coiled-coil (hélice superenrollada) interaccionando con una
hélice de sintaxina y una de VAMP [3]. El centro del complejo muestra la presencia de un
motivo estructural de cremalleras de leucina combinadas con una capa iónica y rodeado por un
núcleo hidrofóbico.

El complejo SNARE es la diana de las Aunque las BoNT, y especialmente el tipo

Neurotoxinas Botulínicas (BoNT), una A, fueron una revolución en cosmética y se
familia de neurotoxinas naturales que han utilizado ampliamente para atenuar las
bloquean de forma potente la arrugas de expresión, tienen ciertas
neurosecreción. Estas BoNT causan una limitaciones, ya que necesitan un control
proteólisis específica de SNAP-25 que evita médico estricto (altamente tóxicas) y su
el ensamblaje de este complejo y la fusión aplicación necesita ser espaciada en el
de las vesículas que contienen ACh con la tiempo [5].
membrana del nervio. Así, impiden la
exocitosis del neurotransmisor y su Por ello, los cosméticos tópicos que causen
liberación al espacio sináptico, los mismos efectos pero de forma segura
incapacitando a los terminales nerviosos son una alternativa interesante o incluso
para estimular la contracción muscular y, un tratamiento adicional y complementario
por tanto, conduciendo a la parálisis entre sesiones de BoNT para reducir las
muscular. líneas de expresión.

Existe una necesidad de

alternativas cosméticas tópicas
para reducir las líneas de
expresión de forma segura.

Fig. 2. Inhibición del complejo SNARE debido a BoNT.

5
ARGIRELINE® peptide, el primer péptido contra las arrugas
de expresión
ARGIRELINE® peptide fue diseñado para actuar en el mecanismo presináptico y disminuir la
contracción que lleva a la formación de arrugas.

ARGIRELINE® peptide es un análogo al ARGIRELINE® peptide tiene como diana el

extremo N-terminal de SNAP-25, que mismo complejo proteico que la Toxina
compite con esta proteína natural por una Botulínica tipo A, modulando la contracción
posición en el complejo SNARE, muscular. Este ingrediente es un activo más
desestabilizando su formación, sin seguro con eficacia probada en
romper ninguno de sus componentes. Si el desestabilizar el complejo SNARE,
complejo SNARE se desestabiliza reducir la formación de arrugas y
ligeramente, la vesícula no puede liberar minimizar la profundidad, volumen y
neurotransmisores eficientemente. Como longitud de las arrugas ya existentes y las
consecuencia, el músculo se relaja en vez líneas de expresión in vivo, así como la
de paralizarse, reduciéndose así la rugosidad cutánea.
formación de líneas y arrugas.

ARGIRELINE® peptide es un
excelente ingrediente antiarrugas
que reduce la contracción muscular
y las líneas de expresión.

Fig. 3. Modulación del complejo SNARE mediante

ARGIRELINE® peptide.

6
Eficacia in vitro
M ODULACIÓN DE LA FORMACIÓN DEL COMPLEJO SNARE

Este ensayo evalúa la eficacia competitiva antagonista de ARGIRELINE® peptide frente a SNAP-
25 nativa en ensamblarse con la sintaxina y sinaptobrevina para formar el complejo SNARE.

El complejo SNARE se reconstituyó usando El ensamblaje del complejo SNARE se paró

VAMP recombinada y sintaxina, y [35S]- mediante la adición del amortiguador de la
SNAP-25 transcrita y traducida in vitro. eletroforesis en gel de poliacrilamida con
Cantidades equimolares de VAMP y dodecilsulfato sódico (SDS-PAGE). Las
sintaxina fueron incubadas en ausencia o muestras fueron analizadas mediante el
presencia de ARGIRELINE® peptide durante SDS-PAGE en geles al 12%, seguido de la
2 h a 4 ºC. Después, se añadió [35S]-SNAP- detección fluorográfica en películas de
25 y la mezcla se volvió a incubar a 4 ºC rayos X Kodak X-Omat AR. El calor
durante 12 h. desensambla el complejo SNARE, por lo
tanto se usó como control positivo.

Complejo

SNAP-25

SNARE Calor ARGIRELINE® peptide

Fig. 4. Modulación de la formación del complejo SNARE mediante ARGIRELINE® peptide.

La banda superior corresponde al complejo

SNARE y la banda inferior muestra la
presencia de SNAP-25. La primera banda de la
izquierda era un control con el complejo ARGIRELINE ® peptide desestabiliza
SNARE intacto mientras que la segunda banda la formación del complejo SNARE.
mostraba el complejo SNARE desensamblado
por calor, donde sólo SNAP-25 era visible. Las
otras bandas mostraron como el número de
complejos SNARE fue menor, cuando el
hexapéptido estaba presente.

7
INHIBICIÓN DE LA LIBERACIÓN DE GLUTAMATO

La inhibición de la liberación de glutamato por células neuronales despolarizadas es un ensayo

celular validado para medir la actividad potencial de compuestos sobre la exocitosis neuronal.
La despolarización de cultivos del hipocampo inducida por K+ en presencia de iones de calcio
extracelulares lleva a la liberación de glutamato, el neurotransmisor excitador más abundante
del sistema nervioso.

Se incubaron células neuronales primarias El medio de cultivo se recogió y se

con L-[3H]-glutamina para cargarlas con L- determinó la cantidad de L-[3H]-glutamato a
[3H]-glutamato. Después, se lavó el exceso través de un contador de escintilación. Los
de L-[3H]-glutamina y las células se resultados se normalizaron respecto a la
incubaron con ARGIRELINE® peptide. La liberación de L-[3H]-glutamato en ausencia
liberación de L-[3H]-glutamato se produjo a del activo analizado (control) y se
través de la despolarización en un corrigieron respecto a la liberación basal en
amortiguador fisiológico. ausencia de calcio.

Inhibición de la liberación de glutamato (%)

Fig. 5. Inhibición de la liberación de glutamato.

El péptido activo disminuyó la

ARGIRELINE® peptide modula
liberación de glutamato de forma
dosis-dependiente, hasta un -32,0% a
eficazmente la liberación de
2 mM, implicando una reducción de la glutamato, indicativo de actividad
exocitosis neuronal. contra las arrugas de expresión.

8
 Eficacia in vivo
REDUCCIÓN DE LA PROFUNDIDAD DE LAS ARRUGAS

Se evaluó el poder antiarrugas de una crema con ARGIRELINE® peptide solution in vivo.

Un panel de 10 voluntarias (edad media: 44) después de 15 y 30 días. Posteriormente, se

se aplicó una crema con 10% ARGIRELINE® analizaron mediante microscopía confocal.
peptide solution alrededor de un ojo y una
crema placebo alrededor del otro, dos La imagen codificada según la profundidad
veces al día durante 30 días. generada a partir de las series de secciones
es un mapa real de la estructura superficial
Se obtuvieron moldes de silicona de las de la muestra.
áreas tratadas antes del tratamiento y

0 días 15 días 30 días

Placebo

10% ARGIRELINE®
peptide solution

Fig. 6. Imágenes de los moldes de las áreas tratadas en diferentes momentos.

El péptido activo redujo la profundidad

ARGIRELINE® peptide
de las arrugas un promedio de un
-16,9% y -27,0% después de 15 y 30 días
disminuyó notablemente la
respectivamente. profundidad de las arrugas.

9
DISMINUCIÓN DE LA RUGOSIDAD EN ARRUGAS

Para analizar el efecto reductor de la rugosidad cutánea de ARGIRELINE® peptide solution C, se

seleccionaron 18 voluntarias entre 35-55 años con arrugas alrededor de los ojos.

Las voluntarias se aplicaron una crema con tomaron macrofotografías y se examinaron

5% ARGIRELINE® peptide solution C en la antes y después del tratamiento.
cara, incluyendo la zona de las patas de
gallo, dos veces al día durante 28 días Se representó la evolución del promedio
consecutivos. Se obtuvieron réplicas aritmético de la rugosidad cutánea (Ra),
cutáneas del área de las patas de gallo y se entendido como el promedio de todas las
analizaron mediante la técnica PRIMOS alturas y profundidades al plano de
antes y después de los 28 días. También se referencia.

Fig. 7. Promedio de la rugosidad media antes y después del tratamiento (*p<0,05).

El péptido activo disminuyó la Ra

La rugosidad cutánea se redujo
un -20,4% después de 28 días (valor
estadísticamente significativo).
claramente con ARGIRELINE ® peptide.

10
 0 días 28 días

Fig. 8. Imágenes de una voluntaria antes y después del tratamiento.

0 días 28 días

Fig. 9. Imágenes de otra voluntaria antes y después del tratamiento.

ARGIRELINE® peptide mejora las arrugas de la zona de las patas de gallo.

11
E FECTO SOBRE EL VOLUMEN Y LONGITUD DE LAS ARRUGAS

Se realizó otro estudio para evaluar la eficacia de una crema con ARGIRELINE® peptide solution
C en disminuir las arrugas usando la técnica Fast Optical In vivo Topometry of human Skin
(FOITS).

Se seleccionó un panel de 24 voluntarias Se tomaron fotografías y se evaluó la

(entre 35-45 años) para que se aplicaran topografía de la piel cuantitativamente,
una crema con 2% ARGIRELINE® peptide después de las medidas mediante FOITS
solution C en la mitad de la cara, (volumen y longitud de las arrugas) al
especialmente en la zona de las patas de principio y al final del tratamiento.
gallo, y una crema placebo en la otra mitad,
dos veces al día durante 7 días.

Fig. 10. Evolución de los parámetros de las arrugas después de 7 días (*p<0,05).

El péptido redujo el volumen y longitud

promedio de las arrugas un -20,6% y -15,9% ARGIRELINE® peptide disminuyó
respectivamente, después de 7 días. Ambos el volumen y longitud de las
valores fueron estadísticamente arrugas después de 7 días.
significativos.

12
 0 días 7 días

Fig. 11. Imágenes de una voluntaria antes y después del tratamiento activo.

ARGIRELINE® peptide mejoró visiblemente el

aspecto de las arrugas después de sólo 1 semana.

13
Propiedades cosméticas
ARGIRELINE® peptide:

es un hexapéptido antiarrugas que desestabiliza la formación del complejo SNARE,

reduciendo la formación de líneas de expresión en la superficie cutánea inducida por
contracciones musculares.

moduló la liberación de glutamato de forma dosis-dependiente, disminuyéndola hasta

un -32,0% a 2 mM, lo que implica una reducción notable de la exocitosis neuronal.

es un excelente ingrediente activo muy efectivo contra las arrugas, que ofreció un
-16,9% y -27,0% de reducción promedio de la profundidad de las arrugas después de
15 y 30 días de un tratamiento in vivo respectivamente (10% peptide solution).

disminuye la rugosidad promedio (Ra) de la piel en voluntarios, puesto que este

parámetro se redujo un -20,4% después de 28 días (5% peptide solution C).

mejora la apariencia de las arrugas, ya que disminuyó su volumen un -20,6% y su

longitud un -15,9% después de sólo 7 días (2% peptide solution C).

Aplicaciones cosméticas
ARGIRELINE® peptide puede incorporarse en formulaciones diseñadas para eliminar las líneas
profundas o arrugas de la frente y alrededor de los ojos. Actúa principalmente sobre la
formación de las arrugas de expresión, retrasando su formación.

Por ello, es perfecto para añadir a cremas, sérums y tratamientos faciales para combatir las
primeras líneas de expresión y para incorporar en productos antiedad.

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Datos técnicos
NOMBRE INCI DEL INGREDIENTE ACTIVO

Ingrediente activo Nombre INCI

ARGIRELINE® peptide Acetyl Hexapeptide-8

P RESENTACIÓN Y CONSERVANTE
Solución que contiene 0,05% de ingrediente activo.

Código Presentación de producto Conservante

®
P06-PD010 ARGIRELINE peptide solution C Sin conservantes

Datos de aplicación
P ROCESADO
ARGIRELINE® peptide solution C puede ser formulado en la fase acuosa en la última etapa del
proceso de fabricación. En caso de preparar una emulsión, se debería añadir después de que
ésta se forme. En ambos casos, la temperatura debe ser inferior a 40 ºC aunque
excepcionalmente puede permanecer estable durante 2 h a 80 ºC.

Rango de pH recomendado entre 3,0 y 8,0 para ARGIRELINE® peptide.

INCOMPATIBILIDADES
Oxidantes, electrófilos y taninos.

SOLUBILIDAD
Soluble en agua.

DOSIS
Se recomienda una dosis del 2-10% de ARGIRELINE® peptide solution C en formulaciones
cosméticas finales.

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 Referencias

1. Benedetto AV. Environmental and skin aging. Clin Derm. 16:129:139, 1998.

2. Stegman SJ, Tromovitch TA, Clogau RG. The skin of the aging face in cosmetic
dermatologic surgery. 2nd edn. Mosby year book. St Louis. MO, pp:5-15, 1990.

3. Blanes-Mira C, Merino JM, Valera E, et al. Small peptides patterned after the N-terminus
domain of SNAP25 inhibit SNARE complex assembly and regulated exocytosis. J
Neurochem. 88:124-135, 2004.

4. Chen YA, Scheller RH. SNARE-mediated membrane fusion. Nature Reviews Molecular Cell
Biology 2: 98-106, 2001.

5. Blanes-Mira C, Clemente J, Jodas G, et al. A synthetic hexapeptide (Argireline) with

antiwrinkle activity. J Cosm Sci. 24:303-310, 2002.

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