ESTRUCTURAS DE LAS CELULAS PROCARIOTAS

(Siglo XIX) Microbiología: mikros (pequeño), bios (vida) y logos (ciencias)

“animalcules”
Antoni van Leeuwenhoek, 1684

Facultad de Ciencias Prof. Nicolas Guiliani

Universidad de Chile Microbiología BC711

Otoño 2022
Presencial
 1590/1610 Zacharie Jansen/ Cornelis Van Drebbel Primero Microscopio

Microscopia electrónica

TEM Bacillus subtilis (corte)

SEM
Rhodovibrio sodomensis
 Origen de la vida

Estromatolitos
Capas de procariontes filamentosos

microfósiles

Bacterias fototróficas
Tierra 4,6 mil millones
3,5 mil millones de años
 Árbol filogenético universal y los cronómetros moleculares

3 dominios

4 phyla

Nanoarchaeota

Ancestro
Universal
 Arbol filogenético bacteriano
40 (18) divisiones o phyla
7000 especies conocidas

5 “clusters”
e, d, a, b, g

Diversidad

Fuente energética

Fuente de carbono 5 x 10 30 células procariontes sobre la tierra - biomasa

Tolerancia
a ambientes extremos
Comunidad microbiana

S Poblaciones

Nicho

“Microbial ecology”
 Composición química básica de la célula procariótica
El contenido de agua de una célula vegetativa típica es de 70%.

Tipo de componente Porcentaje sobre

peso seco
Proteína* 55.0
ARN** 20.5
ADN 3.1
Lípidos 9.1
Lipopolisacárido 3.4 (Nucleoido-Citoplasma-Ribosoma)
Peptidoglicano 2.5
Glicógeno 2.5
Total Macromoléculas 96.1
P.M.O. 2.9
(Pared-Gránulos)
Iones inorgánicos 1.0
Escherichia coli (crecimiento “normal”)

(Pared-MC-Gránulos)
 Célula:
Metabolismo, Reproducción, Diferenciación, Comunicación, Movimiento, Evolución

D=1 µm D=65 nm

D=25µm L=1-5 µm

Célula procarionte
vs
Célula eucarionte
Relación S/V (4p r2 / 4/3 p r3) muy alta.
Tamaño de la célula procarionte
Diámetro entre 0,2 µm – 50 µm.

Thiomargarita namibiensis
d=750 µm
Cianobacteria 8 x 50 µm
V= 2.108 µm3

Quimiolitótrofo

E. fishelsoni

Paramecia
(protozoarios)

Epulopiscium fishelsoni
L=600 µm; d=80 µm
 Análisis microscópico: forma, agrupación y motilidad

Cocos
Thiocapsa roseoperscina (d=1.5 µm)

Filamentosa Chloroflexus aurantiacus (d=0.8 µm)

Agrupación celular (división po fisión transversal binaria)

Bacilos
Desulfuromonas acetoxidans (d=1 µm)
Diplococos
Estreptococos
(1 solo plan de división)

Espirilos
Tétradas
Rhodospirillum rubrum (d=1 µm) (2 planos perpendiculares)
Estafilicocos
(muchos planos) Sarcina
(3 planos ortogonales)

Espiroquetas
Estreptobacilos
Spirochaeta stenostrepta (d=0.25 µm) (1 solo plan de división)
(Empalizada)
Tinción de Gram (1884)

Sondas fluorescentes
Análisis macroscópico: la colonia bacteriana

Forma Borde Elevación Superficie

Puntiforma Liso Plana Lisa, brillante

Circular Elevada Rugosa

Ondulado

Rizoide Convexa Arrugada Tamaño

Lobulado
Seca Olor
Irregular
Filamentoso Comportamiento con la luz Consistencia
Filamentosa
Translúcida
Color
Encorvado Opaca
 Representaciones de las diferentes estructuras bacterianas

Exterior
Cápsula
Estructuras
superficiales Capa S paracristalina
Vaina

Pared celular

Membrana citoplasmática
Citoplasma
Genóforo
Ribosomas
Inclusiones de reserva
Orgánulos
Interior

Apéndices filamentosos
Flagelos
Fimbrias (pelos)
 Membrana citoplasmática [Proteo-lipídica (80:20)]

Integridad
y
Región
Hidrófila
Barrera permeable y selectiva

Ácidos
Grasos
Región
Hidrofóbica
7-8 nm

Ectothiorhodospira halochloris
Glicerol (bacteria fototrófica)

Fosfato

La Bicapa de Fosfolípidos (composición/proporción dependen pH, TºC,…)

@ Derivan del ácido fosfatídico (fosfatidiletanolamina, fosfatidilglicerol; cardiolipina).

@ Además, en bacterias Gram-positivas, hay glucolípidos y glucofosfolípidos.

@ 1% es Undecaprenil-fosfato (UDP o Lípido P; transportador lipídico); Quinonas isoprenoides; pigmentos carotenoides

@ Ácidos grasos (C14; C16): saturados (palmítico) y monoinsaturados (palmitoleico); Relación (AGs/AGmi*) determina FLUIDEZ.

@ Oxyfotobacterias: poliinsaturados:.
 Membrana citoplasmática: Estabilización y control de la flexibilidad
“Fluid Mosaic”
Enlaces hidrógenos
Proteínas periféricas (epiproteínas) Interacciones hidrofóbicas
Interacciones iónicas

Grados de insaturación de
los ácidos grasos (AGs/AGmi).
TºC alta: AGs aumentan

Moléculas estabilizadores (Rígidas y planas).

Funciones
Procesos energéticos Esteroles
5% - 25%
Biosíntesis de polímeros de envueltas (Eucariotas,
(EPS, LPS, Peptidoglicano, ácidos teicóicos y teicurónicos) Oxyfotobacterias*)

Secreción de Proteínas

Punto de anclaje del cromosoma (y algunos plásmidos)

Barrera osmótica y transporte selectivo

Proteínas integrales (endoproteínas)
Transporte pasivo inespecífico (DS)

“Transporte pasivo específico (DF)” - glicerol Hopanoides (C30)

(numerosas bacterias)
Transporte activo (inducible específico (H+; ATP)
 Membrana citoplasmática Archeae:
enlace éter y Isopreno
Lípidos a base de éteres de alcoholes de cadena larga (poliisoprenoides).

(4 isoprenos;
alcoholes)

Mas
Rigidez

“Bicapa monomolecular”

Bacteria
Ester Arquea
Éter

Isopreno
 Gram-positivo Gram-negativo
La Pared Celular Bacteriana Peptidoglicano Peptidoglicano
Excepción: micoplasma 50-90 % 1-10 %

Específico

Rigidez

Resistencia a la presión de Turgor

(integridad en ambiente de
baja osmolaridad)

Malla porosa

Diversidad (100)

10-80 nm

Forma celular

Bacillus subtilis Escherichia coli

 BACTERIA
PEPTIDOGLICANO (MUREINA)
NAG NAM

Propiedades

Gran Rigidez

Flexibilidad

Forma celular

Estructura

1 unidad disacáridica repetitiva;

enlace b(1-4). 10 <n> 100

1 cadena tetrapeptídica;
alternancia D y L.

Una sola macromolécula gigante

(entrecruzamiento 50 %) ; sáculo rígido.

Gram-negativas, 1 sola capa o pocas.

Gram-positivas, numerosas capas.
 ENLACE INTERCADENA (50 %)
rigidez y diversidad

*
directa *
* 1 AA
* 1 péptido corto
directa
*
L-ornitina

50 capas
en Bacillus subtilis

Mas diversidad

DAP Lisina
 Peptiglicano: Síntesis I

Fase 1
Citoplasma
síntesis precursores solubles
Fosfomicina
*
(poli-isoprenoide fosfatado C55) Fase 2*
Membrana
* Primera transglucosidación
Bacitracina

Fase 3
Membrana
Segunda transglucosidación
(Polimerisación)
Vancomicina
Fase 4
Membrana
Transpeptidación
Penicilina

*UDP, Uridin di-fosfato. Permite activar NAM y NAG. No hay que confundirlo
con el undecaprenol que es un lípido de 55 carbonos (Lípido P en está figura).
 Peptiglicano: Síntesis II
Autolisinas

UDP

Streptococcus hemolyticus (d=1 µm) Penicilina

 Pared de bacterias Gram-positivas:
Peptidoglicano +
Ácidos Teicicos, lipoteicoicos y Teicurónicos

Matriz aniónica de polímeros azucarados

Ácidos teicoicos (enlace con OH posición 6 del NAM)
Carga negativa
Interacción con Ca2+ y Mg2+

Ácidos
Lipoteicóicos
(siempre presentes)
AgO

Ác. Teicoicos: Polialcohol substituidos (N = 30) de ribitol-P o glicerol-P con unión fosfodiésteres.
o
Ác. Teicurónicos: Ácidos urónicos—N-acetil-galactosamina.
 PARED DEL GENERO MYCOBACTERIUM (BAAR, Gram-positivo)

Mycobacterium tuberculosis Micolatos de trehalosa

Mycobacterium Leprae Sulfolípidos de trehalosa (evasinas)
Mycobacterium bovis
C60-C90
Propiedades
(Ara)LAM
Más gruesa /manLAM

Cerosa
Pared

Hidrofóbica Ara
OH C5

Rica en Ác. Micólicos

Resistencia C6
a desecación

N-glucolil-murámico
(en lugar NAG)

Pared Pseupeptidoglicano-Arabinogalactano-ácidos micólicos (C78-C91)

Tinción de Ziehl-Neelsen
La Pared de las bacterias Gram-negativas:
2 compartimientos más

Una bicapa asimétrica con menos fluidez que MC

* enlaces iónicos (Prot./PG)
** enlaces hidrófobos (FL/Prot. CI) con Peptidoglicano
*** enlaces covalentes (LPP/PG)
Capa externa
60%

ME 40%

P
**
* *

*** *
 El lipopolisacárido: Composición y Funciones

Tres partes OH y NH2 sustituidos

Distal: hidrofílica intermedia Proximal: hidrofóbica
Viabilidad

Enlace “amine ester”

β(1-6)

NE Et NI

Lípido A
n hasta 40
----
L-glícero-D-manoheptosa
Endotoxina

No es un glicerolípido. 2-ceto-3-desocioctónico
1/ Papel estructural.
Disacárido de glucosamina unida en b-1,6.
2/ Menos
Grupos OHsoluble
(menosauno)
detergentes y resistencia
y NH2 son a disolventes
substituidos por ácidos orgánicos (AG del(blípido
grasos saturados A).
-hidroximirístico).

Oligosacárido medulara moléculas hidrofóbicas como antibióticos (largas cadenas hidrofólicas).

3/ Menos permeable
Unido al lípido A alde
4/ Estabilización nivel del OH en externa
la membrana 3’. (cationes Ca2+, Mg2+).
NI: 2-ceto-3desoxioctónico (KDO) y L-glicero-D-manoheptosa (Hep) unidos con (piro) fosforil-etanolamina .
5/ “Endotoxina” (fiebre, hipotensión, necrosis, fallo cardíaco; activa el complemento)
NE: hexosas (Glucosa, Galactosa, N-acetilglucosamina).
6/ Virulencia (vía antigeno somático AgO e interacción con hospedero).
Cadena lateral específica (Ag somático O)
Unidad repetida de Polisacáridos unidos al nivel del OH en 4’ o 5’y ramaficados.
Hexosas “comunes” y dideoxi-azúcares exclusivos de bacterias (abecuosa, colitosa, paratosa, tivelosa).
 La lipoproteína (LPP; Lipoproteína de Braun)

Muy abundante (7 x 105 copias/ cel).

Parte Proteica (7.2 kDa)

con estructura en a-hélice

Trímero.
N-ter

C-ter

Función esencialmente estructural: estabilizar el complejo PG/ME vía uniones covalentes

la Cisteína N-terminal forma enlaces tioéter y amido con AG (embebida en la membrana).
la Lisina C-terminal (enlace peptídico) con el peptidoglicano (COOH libre del DAP); 1/3 LPP– 1/10 Mureina.
 Las Proteínas de membrana externa (OMP) Las Porinas

Extracelular

Poros específicos y inespecíficos

para pequeñas moléculas hidrofílicas

En E. coli
OmpF (hasta 600 da),
OmpC (<500 da),
PhoE (carencia de P)
Periplasma
Relativamente Abundante: 2%

Phe
Arg-Leu-Gly-Phe- Carboxy-terminal
Lys-Gly-Glu
 Las porinas II

PM PM ps
a b c d e f kDa
kDa

A 175
120
83

62

47,5

40
32,5

30

25

20 16.5

B 175

Omp40 trimeric form

83

62

47,5

Omp40
32,5

25

16.5
 Arquea y pared alternativa
Pseudopeptidoglicano
Capa S (Glucoproteína o Proteína)

Disposición Unidades morfológicas

Simetría binaria: filas oblicuas paralelas Dímeros

Simetría cuadrangular Tetrámeros

Simetría hexagonal Hexámeros

En todos los grupos de Archea (halófilos, metanógenos, hipertermófilos)

 Cápsula y capa viscosa (Glucocalix)
1/ Consistencia 2/ Interacción con la pared
Estructuras Inertes muy hidrtadas (99 % H2O) Rígida Integral Cápsula
Flexible Periférica Capa mucilaginosa

Composición: polisacáridos (polipéptidos en Bacillus)

Síntesis
Precursores de tipo
UDP glucosa,
UDP manosa,
UDP galactosa
+
Transportador lípidico

Acinobacter sp. Rhizobium trifolii (0.7 µm de diametro)

Funciones*: Mejora difusión, Antígeno K

Protección contra Desecación, (variabilidad; E. coli: 70 tipos diferentes)
Protección contra Predación (Protozoos),
Protección contra Agentes antibacterianos (MP; Ab)
*anaerobiosis Adherencia sustratos (inertes o vivos)
Apéndices Filamentosos:
Filamento helicoiddal
El flagelo bacteriano (fibrillas: 9+2)

Flagelina (15-62 kDa / biestable / sin W y C / AA ácidos y neutros)

perítricas

Monótricas Codo/Gancho
(polar o sub-polar) Juntura Universal

lofótricas Patrón de
flagelación

Corpúsculo basal
Anclaje y Motor

Rhodospirillum photometricum Rhodospirillum centenum

Rhodospirillum centenum Antígeno H
 Aerotaxis / Quimiotaxis / Phototaxis

Aparato flagelar + quimiotaxis : 14 operones (40 genes)

Apéndices Filamentosos II: Fimbrias sexuales : conjugación
Pili y Fimbrias (Pelos)
F = 10 nm

Fimbrias adhesivas : toda la superficie

lectina
virulencia (placa dental)
F = 3 nm Plasmidio
L = 4-7 nm Tipo F o I

Escherichia coli

Composición: Pilina (17 – 25 kDa); ensamblaje desde la base

Proteína globular muy hidrofóbica

Cromosoma
Fim +
Salmonelle thyphi Bacterias Gram-negativas
 Diferenciación celular:
Esporulación y endosporas

Esporangio

refringentes

Terminal

Subterminal
Bacterias Gram-positivas
Bacillus, Clostridium, Sporosarcina y Thermoactinomyces
Central
Gracias

La mayoría de las ilustraciones presentes en esta clase provienen del libro

“Brock - Biology of Microorganisms” Eleventh edition