TOXICOMETRÍA

• Disciplina encargada de cuantificar los

efectos tóxicos de los compuestos
químicos:
• Dosis única
• Dosis repetidas
 TOXICOMETRÍA

Ratas y ratones
servirán dentro de
Relaciones dosis/respuesta. Los protocolos
animales de experimentación estadísticos para
utilizados son ratas, ratones, salvar vidas
conejos y otros humanas

• Protocolos de la OCDE: mínimo

número de animales con validez
estadística.

• Animales cosanguíneo, peso y

edad semejantes, utilizándose
ambos sexos.
 TOXICOMETRÍA

• Test de toxicidad aguda: dosis única 14 d

• Test de toxicidad subcrónica: dosis repetida 90 d

• Test de toxicidad crónica: dosis repetidas (t/v)

 RESPUESTA POBLACIONAL A UN TÓXICO

Muchos
Número de individuos

Individuos Individuos
sensibles Mayoría de los resistentes
individuos
Efecto medio
Efecto Efecto
mínimo Máximo

pocos

Ligera Respuesta a la MISMA dosis Extrema

 TOXICOMETRÍA

Test de toxicidad aguda

• Las ratas son alimen-

tadas con log-dosis del
agente tóxico

• La admon se hará por

mezcla en pienso o
agua

• O bien forzosa por

sonda bucogastrica
 TOXICOMETRÍA

Respuesta sigmoidal letalidad vs. dosis de tóxico

Dosis Efectiva Dosis Letal

Animales muertos (%)

100 100

80 80
Anestesia (%)

60 60
DE50 40
DL50
40
20 20

1 2 3 5 7 10 10 20 30 50 100
Fenobarbital (mg/kg) Escala log
 TOXICOMETRÍA

El concepto de DL50
100
% Mortalidad acumulada

75

50

La DL50: dosis que produce

25 un 50 % de mortalidad en
una población animal
0
0 10 100 1000
log Dosis
 TOXICOMETRÍA

Porqué el 50% de mortalidad?

1. Permite comparar las pendientes de diferentes
tóxicos y observar:
- cual es más seguro
- cual tiene una respuesta más homogénea

2. La variación estadística alrededor del 50% de

mortalidad es menor

3. Se ha convenido que el valor de DL50 es la

forma normalizada de expresar la toxicidad
aguda.
 TOXICOMETRÍA

100
LD100
% mortalidad acumulada

75

50
LD50
25
Mínima
variación
0
0 10 100 1000
log Dosis
LA TRANSFORMACIÓN PROBIT
potencia eficacia

DE50 DT50

DL50
Índice
terapéutico (IT)

Margen de
seguridad
estándar (MSS)
Expresión de la toxicidad

mg/kg vs. moles/kg

Potencial tóxico (pT)

pT = - log[DL50(M)]
Expresión de la toxicidad

mg/kg vs. mg/cm2

 TOXICOMETRÍA
Test de toxicidad aguda – Determina la dosis que produce
un 50% de mortalidad (DL50) a dosis única.

Tests de toxicidad subcrónica – Determina la máxima dosis

diaria de compuesto químico compatible con la vida del
animal:

• NOEL: No Observable Effect Level

• NOAEL: No Observable Adverse Effect Level
• LOAEL: lowest-observed-adverse-effect-level
• FEL: Frankly Effect Level

Test de toxicidad crónica – Determina los efectos tóxicos

durante la vida completa de un animal de laboratorio.
 TOXICOMETRÍA
Definición OCDE
• Toxicidad oral aguda: Los efectos adversos aparecen tras la
administración de una única dosis de una sustancia, o de
múltiples dosis dadas dentro de las primeras 24 h.

• Toxicidad dérmica aguda: Efectos adversos causados por una

sustancia seguidos de una única e ininterrumpida exposición
dérmica durante un corto periodo de tiempo (24 h o menos).

• Toxicidad inhalatoria aguda : Efectos adversos causados por

una sustancia seguidos de una única e ininterrumpida exposición
inhalatoria durante un periodo de al menos 4 h de una sustancia
capaz de ser inhalada.

OCDE: Organización para la Cooperación y el Desarrollo Económico

https://www.oecd-ilibrary.org/environment/oecd-guidelines-for-the-testing-of-chemicals-
section-4-health-effects_20745788/dateasc#collectionsort
 TOXICOMETRÍA
ENDPOINT NORMATIVA ANIMALES

Toxicidad aguda en peces OCDE 203 40-120

Toxicidad oral aguda OCDE 401* <15

420/423
Subcrónico 28-90 días OCDE 407 40-65
OCDE 408
Reproducción/desarrollo
(dosis única) OCDE 421 675

Reproducción/desarrollo
(dosis repetida) OCDE 422 675

* Suspendida en 2002
 TOXICOMETRÍA
Procedimiento OCDE 401: Toxicidad aguda oral

OBJETIVOS
1.- ESTIMACIÓN DE LA DL50
2.- IDENTIFICACIÓN DE LOS ÓRGANOS DIANA (TARGET)

ANIMALES
•RATAS Y/O RATONES
•AL MENOS 5 ANIMALES/DOSIS
•AL MENOS 3 DOSIS

RUTA DE ADMINISTRACIÓN
•oral

RESULTADOS
DESPUÉS DE 14 DÍAS
•MORTALIDAD
•ÍNDICE DE CONVERSIÓN
•PROCESOS LETÁRGICOS
•ALTERACIONES CONDUCTUALES
 TOXICOMETRÍA

Rata Wistar

Ratón BalbC
 TOXICOMETRÍA
Procedimiento OCDE 420: Método de la dosis fija

• Grupos de animales de un solo sexo (las hembras

suelen ser más sensibles) se dosifican a las dosis
fijas de 5, 50, 300 and 2000 mg/kg (5000)

• Se van escalando las dosis hasta que se encuentra

el efecto tóxico

Observaciones
• Al menos una vez durante los primeros 30 min

• Periodicamente durante las primeras 24 h

• A diario hasta los 14 d

 TOXICOMETRÍA
Procedimiento OCDE 420: Método de la dosis fija

T+ T Xn U
A ≥ 2 animales muertos
B ≥ 1 animal con toxicidad evidente, o 1 muerto
C ni toxicidad ni muerte
 TOXICOMETRÍA
Procedimiento OCDE 423: Método de la clase tóxica aguda

• Similar al procedimiento 420 excepto:

• Grupos de 3 animales (en vez de 5)

• La mortalidad es el único punto final

(endpoint) (no se incluye el de toxicidad
evidente)
 TOXICOMETRÍA
Procedimiento OCDE 423: Método de la clase tóxica aguda

3 animales

nº de muertos

T+ T Xn U
 TOXICOMETRÍA
Procedimiento OCDE 402: Toxicidad dérmica aguda

OBJETIVOS
SEMEJANTES AL TEST TOXICIDAD AGUDA

ANIMALES
CONEJOS

RUTA DE ADMINISTRACIÓN
DÉRMICA
24 h EXPOSICIÓN EN ZONA AFEITADA Y VENDADA
CON MATERIAL IMPERMEABLE

RESULTADOS
DESPUÉS DE 14 DÍAS
•MORTALIDAD
•ÍNDICE DE CONVERSIÓN
•PROCESOS LETÁRGICOS
•ALTERACIONES CONDUCTUALES
 TOXICOMETRÍA
Procedimiento OCDE 403: Toxicidad aguda por inhalación

OBJETIVOS
SEMEJANTES AL TEST TOXICIDAD AGUDA
GASES y AEROSOLES

ANIMALES
RATAS

RUTA DE ADMINISTRACIÓN
INHALATORIA
4 h EXPOSICIÓN

RESULTADOS
DESPUÉS DE 14 DÍAS
•MORTALIDAD
•ÍNDICE DE CONVERSIÓN
•PROCESOS LETÁRGICOS
•ALTERACIONES CONDUCTUALES
 T+
Propiedades toxicológicas
Muy tóxico

T Xi Xn C

Tóxico irritante Nocivo Corrosivo

Propiedades físico-químicas
E O F+ F

Explosivo Comburente Extremadamente Fácilmente

inflamable inflamable
 TOXICOMETRÍA
• Los resultados de los estudios de toxicidad aguda
constituyen la base de la clasificación en:

• Muy tóxico T+ - Tóxico T - Dañino Xn

• Al ser ingeridos, en contacto con la piel, o inhalados

 TOXICOMETRÍA
Muy tóxicos (T+)
• Compuestos químicos tóxicos (exp. aguda)
– e.g. DL50 oral < 25 mg/kg ó LD50 dérmica < 50 mg/kg
– CL50 para aerosoles es <0,25 mg/l ó para gases y
humos <0,5 mg/l

• Etiquetado
– R26 (muy tóxico por inhalación)
– R27 (muy tóxico por contacto con la piel)
– R28 (muy tóxico por ingestión)
http://www.ilo.org/public/english/protection/safework/cis/products/safetytm/clasann8.htm
 TOXICOMETRÍA
Tóxicos (T)
• Compuestos químicos tóxicos (exp. aguda)
– e.g. DL50 oral < 25 – 200 mg/kg ó LD50 dérmica < 50 - 400
mg/kg
– CL50 para aerosoles es <0,25 – 1 mg/l ó para gases y
humos <0,5 – 2 mg/l
• Etiquetado
– R23 (tóxico por inhalación)
– R24 (tóxico por contacto con la piel)
– R25 (tóxico por ingestión)
• Categoría 1 y 2 de carcinógenos (R45 ó R49), mutágenos
(R46) y tóxcos de la reproducción (R60, R61)
 TOXICOMETRÍA
Dañinos (Xn)
• Compuestos químicos tóxicos (exp. aguda)
– e.g. DL50 oral < 200 – 2000 mg/kg ó LD50 dérmica < 400 –
2000 mg/kg
– CL50 para aerosoles es < 1 – 5 mg/l ó para gases y
humos <2 – 20 mg/l
• Etiquetado
– R20 (dañino por inhalación)
– R21 (dañino por contacto con la piel)
– R22 (dañino por ingestión)
• Si existieran datos de toxicidad a dosis menores a la
tóxica pero durante exposiciones prolongadas (R48)
 TOXICOMETRÍA
Dañinos (Xn)

• Sensibilizantes del aparato respiratorio (R42)

• Categoría 3 de carcinógenos (R 40)
• Categoría 3 de mutágenos (R 68)
• Categoría 3 de tóxicos reproductivos
– (R 62) Posible riesgo sobre la fertilidad
– (R 63) Posible riesgo de dañar al embrión
 TOXICOMETRÍA

Irritantes y Corrosivos
• Irritantes:
– R36/R37/R38
– R41(riesgo de daño irreversible en el ojo)
– R43 sensibilizadores de la piel
• Corrosivos:
– R34 causa quemaduras
– R35 causa quemaduras severas
 TOXICOMETRÍA
Toxicidad aguda de algunas sustancias

SUSTANCIA QUÍMICA DL50 (mg/Kg)*

• Alcohol etílico 10,000
• Cloruro de sodio 4,000
• Sulfato ferroso 1,500
• Sulfato de morfina 900
• Sal sódica del fenobarbital 150
• Picrotoxina 5
• Sulfato de estricnina 2
• Nicotina 1
• d-tubocurarina 0.5
• Hemicolinium-3 0.2
• Tetrodotoxina 0.10
• Dioxina (TCDD) 0.001
• Toxina botulinica 0.00001

Klaassen et al, 1986

 TOXICOMETRÍA

• Test de toxicidad aguda: dosis única 14 d

• Test de toxicidad subcrónica: dosis repetida 90 d

• Test de toxicidad crónica: dosis repetidas (t/v)

 TOXICOMETRÍA
Tests de toxicidad subcrónicos

-Efectos tóxicos por debajo de la letalidad: daños orgánicos;

los animales se exponen a dosis por debajo de la DL50

- Admon continuada a los animales de experimentación

durante un periodo equivalente a 1/10 de su esperanza de
vida (ca. 3 meses en ratas).

- Los test subcrónicos serviran para determinar el NOEL ó

NOAEL de los tóxicos
 TOXICOMETRÍA
Procedimiento OCDE 408: Toxicidad subcrónica 90d
OBJETIVOS
•ESTABLECER LIMITE SIN EFECTOS OBSERVABLES
ANIMALES
•RATAS (10-20 RATAS/DOSIS)
RUTA DE ADMINISTRACIÓN
ORAL (MEZCLADO CON PIENSO O AGUA)
DOSIS
3 DOSIS

RESULTADOS
DESPUÉS DE 90 d DE EXPOSICIÓN
•Índice de conversión
•Cambios de color y textura del pelo
•Anomalías respiratorias y/o cardiovasculares
•Anomalías en el comportamiento
•Aparición de masas palpables
 TOXICOMETRÍA
Procedimiento OCDE 408: Toxicidad subcrónica 90d

DESPUÉS DE LOS 90 d
•Sacrificio de los animales supervivientes
•Estudio anatomopatológico completo
•Obtencíón de orina
•Análisis completo de orina
•Obtención de sangre
•Hematología
•Bioquímica clínica
 TOXICOMETRÍA
LÍMITES SIN EFECTOS OBSERVABLES
dosis-respuesta

100 FEL

90

80

70

60 LOAEL
% Respuesta

50 NOEL

40
NOAEL
30
Control
20 incidence

10

0.1 1 10 100

Dosis (mg/kg/day)
 TOXICOMETRÍA
NOEL NIVEL DE EXPOSICIÓN SIN EFECTOS OBSERVABLES
Cantidad máxima de sustancia que no induce ningún tipo de
efectos en experimentación animal o en una población humana.

NOAEL NIVEL DE EXPOSICIÓN SIN EFECTOS ADVERSOS

OBSERVABLES
Cantidad de sustancia que NO INDUCE EFECTOS ADVERSOS
en experimentación animal o en una población humana.

LOAEL NIVEL DE EXPOSICIÓN CON EFECTOS ADVERSOS

OBSERVABLES
Cantidad de sustancia mínima que INDUCE EFECTOS
ADVERSOS a una población animal o humana.

FEL NIVEL DE EXPOSICIÓN TÓXICA.

Cantidad de sustancia que induce efectos tóxicos a una población
animal o humana.
 TOXICOMETRÍA

EXPOSICIÓN TOLERABLE (ET) O

DOSIS DE REFERENCIA (RfD):
Cantidad de una determinada sustancia que no produce
efectos adversos en la salud humana a lo largo de su vida.

MDA. MAXIMA DOSIS TOLERADA/TOLERABLE

Dosis máxima que produce una reduccion del peso corporal
del 10%
 TOXICOMETRÍA

Durante los test subcrónicos se analizarán

aparte de los efectos orgánicos:

• Teratogénicos

• Mutagénicos

• Carcinogéncos

La claúsula Delaney del Pure Food and Drug Act de

1960 establece que si un carcinógeno es detectado,
el compuesto químico debe ser inmediatamente
abolido.
 TOXICOMETRÍA

• Test de toxicidad aguda: dosis única 14 d

• Test de toxicidad subcrónica: dosis repetida 90 d

• Test de toxicidad crónica: dosis repetidas (t/v)

 TOXICOMETRÍA
Procedimiento OCDE 452: Toxicidad crónica
OBJETIVOS
EVALUACIÓN DE LA TOXICIDAD ACUMULATIVA DE LOS
COMPUESTOS QUÍMICOS
EVALUACIÓN DE LA CAPACIDAD CARCINOGÉNICA

ANIMALES
RATAS Y RATONES

RUTA DE ADMINISTRACIÓN
ORAL (MEZCLADO CON PIENSO O AGUA)

DOSIS
ELEVADA 1 MDT
INTERMEDIA ½ MDT
BAJA ¼ MDT
 TOXICOMETRÍA
Procedimiento OCDE 452: Toxicidad crónica

NÚMERO DE ANIMALES
50 – 100 RATAS/GRUPO (< 8% TUMORES ESPONTÁNEOS)

DURACIÓN
18 m – 2 años RATONES
2 años – 2,5 años RATAS
~ 1 año PERROS Y MONOS

Summary of Considerations in the Report from the OECD Expert Groups on Short and Long TermToxicity
 EVALUACIÓN DEL RIESGO
EVALUACIÓN DEL RIESGO

SIN UMBRAL UMBRAL

EXTRAPOLACIÓN FACTORES DE
DOSIS-BAJAS SEGURIDAD

RIESGO EXPOSICIÓN
ASOCIADO CON ASOCIADA A
LA EXPOSICIÓN INOCUIDAD

Supuesto: No existe nivel de Supuesto: existe un nivel

exposición que no suponga de exposición por debajo
una probabilidad finita, de del cual el compuesto es
producir daño inocuo
 EVALUACIÓN DEL RIESGO
FACTORES DE INCERTIDUMBRE (UF)

PRODUCTO DE VARIOS FACTORES INDIVIDUALES

PARA OBTENER LA RfD: INTERESPECÍFICOS
INTRAESPECÍFICOS
NATURALEZA DEL TÓXICO
VALORES GUÍA

ET(RfD) = NOAEL
UF
 EVALUACIÓN DEL RIESGO
PIRÁMIDE DE INCERTIDUMBRE DE RENWICK
100 x FACTOR INCERTIDUMBRE

INTER-SPECIES INTER-INDIVIDUAL
DIFERENCIAS DIFERENCIAS

10 X veces 10 X veces

TOXICO- TOXICO- TOXICO- TOXICO-

DINAMIA CINÉTICA DINAMIA CINÉTICA

10 0.4 10 0.6 10 0.5 10 0.5

2.5 4.0 3.2 3.2
(WHO, 2001; IPCS, 2006)
 EVALUACIÓN DEL RIESGO
FACTORES DE INCERTIDUMBRE (UF)
FACTORES INDIVIDUALES
PARA OBTENER LA RfD:
INTERESPECÍFICOS
INTRAESPECÍFICOS
NATURALEZA DEL TÓXICO
VALORES GUÍA

ET(RfD) = NOAEL
UF
 EVALUACIÓN DEL RIESGO
CALCULO EXPOSICIÓN TOLERABLE
RfD = NOAEL (LOAEL) ÷ factores de incertidumbre
Factor (UF) Incertidumbre
• Intraespecies Factor10x variabilidad entre humanos
• Interspecies Factor10x diferentes respuestas entre hombre y
animales de experimentación
• Subcrónico vs. crónico Factor10x cuando los valores de crónicidad
no están disponibles y se usan los de 90 d
• LOAEL vs NOAEL Factor10x cuando se usa LOAEL en vez NOAEL
• Falta de datos Factor3-10x cuando se disponen de datos incompletos

•Usando un NOAEL de 10 mg/kg de un ensayo crónico en ratas:

ET(RfD) = 10 mg/kg ÷ 10 (cambio de especie) ÷ 10 (factores individuales)
= 0.10 mg/kg para humanos

•Usando un LOAEL de 50 mg/kg de un ensayo crónico en ratas:

ET(RfD) = 50 mg/kg ÷ 10 (cambio de especie) ÷ 10 (factores individuales) ÷ 10 (por no tener NOAEL)
= 0.05 mg/kg para humanos
 TOXICOMETRÍA
100
población afectada (%)

d a
la

NO
50 o La claúsula Delaney del Pure Food
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A debe ser inmediatamente abolido.

CA
C

NO
0
Dosis, mg/kg
umbral

• El riesgo se determina como la pendiente de la línea recta que une la

dosis 0 (riesgo 0) a la dosis que origina un 1% en la incidencia de
tumores
• Se expresa en 1/(mg/kg-day).
 EVALUACIÓN DEL RIESGO
PARÁMETROS DE RIESGO

Exposición Tolerable RfD :

Máxima cantidad de compuesto químico cuya exposición
diaria no supone ningún efecto deletéreo sobre una
población humana:
RfD = NOAEL/UF

IDA: ingesta diaria admisible

máxima cantidad de sustancias (contaminantes etc.) que,
según los conocimientos actuales, pueden ingerirse
diariamente sin que se produzcan efectos tóxicos a largo
plazo*.

*La cantidad máxima de un residuo permitida es 100 veces menor a su NOEL

 EVALUACIÓN DEL RIESGO
PARÁMETROS DE RIESGO

MAC: Máxima Concentración Admisible:

Cantidad de tóxico que inhalada diariamente (durante 8 h

diarias 5 días a la semana, o durante 24 horas en caso de la
población general), no parece inducir daño apreciable ni
durante la vida laboral, ni posteriormente, ni en siguientes
generaciones.
 EVALUACIÓN DEL RIESGO
PARÁMETROS DE RIESGO

TLV: Threshold Limit Value.

Concentración de material en aire al que puede estar expuesto un
trabajador diariamente sin presentar efectos adversos.

•TLV-TWA Concentración promedio permitida, ponderada por tiempo

para un día laboral de 8 h o una semana de 40 h.

•TLV-STEL Máxima concentración para un periodo de exposición

continua de 15 min.

•TLV-C Máxima concentración que no debe ser excedida ni por un

instante.