Trabajo MLST

Multilocus sequences
typing (MLST)

Asignatura: Microbiología básica (TME-147)
Profesora: Dagianna González
Integrantes: Krishna Bravo Contreras, Felipe Carrasco Flores, Gabriela
Chirino Flores, Francisca Chirino Flores, Anaís Cortés Hernández, Catalina
Cortés Alarcón, Diego Reyes Gallardo y Valentina Olivares Droguett

Conceptos Clave
Sitio o ubicación física de un genoma, es utilizado para
LOCUS identificar posibles posiciones de interés para determinar
secuencias.
Genes que codifican proteínas que siempre se expresan de

Gen de forma rutinaria en las células.
mantenimiento
Estudios que analizan la diversidad genética de los

Epidemiología organismos infecciosos mediante la aplicación de distintas
molecular técnicas de laboratorio.
Permite estudiar la relación existente entre dos o más

Tipificación aislamientos de la misma especie.
se utiliza el término ''línea clonal'', para referirse a un grupo

de microorganismos, generalmente bacterias, que
Líneas clonales comparten una ascendencia común y se derivan de un
ancestro común.
INTRODUCCIÓN
Conceptos como enfermedades emergentes y reemergentes se han vuelto
comunes en el ámbito de la epidemiologia.
Surge la necesidad de encontrar métodos de identificación y diferecniación de

las distintas cepas y variantes de un patógeno.
Con los nuevos avances en la tecnología se ha buscado y creado un nuevo

interés por la investigación de epidemiologia molecular, teniendo enfoque en el
desarrollo de métodos prometedores y menos laboriosos.
¿Qué es MLST? Fue desarrollada por Maiden
MC en la década de los 90.
Método de tipificación molecular

utilizado para identificar y
diferenciar entre cepas de bacterias
Técnica que utiliza como base
una secuencia de siete
Secuencia múltiples genes del fragmentos observados.
genoma bacteriano y compara las

secuencias resultantes con una base
de datos .
Fundamento Se utilizan 7 genes
conservados diferentes
para cada bacteria
Secuenciación de varios locus
genéticos que se encuentran
en diferentes partes del
Se amplifican mediante PCR gracias a la
genoma de una bacteria
variabilidad presente se pueden construir
perfiles únicos para cada cepa
En cada gen hay 450-500 pb,

proporcionando Clasificación filogenética
un alto grado de discriminación basada en las diferencias

entre perfiles alélicos o
tipos de secuencias
Métodos
Métodos utilizados para la purificación,
análisis y caracterización de proteínas.
Electroforesis en gel de
La Técnica permite separar moléculas
poliacrilamida (PAGE)
cargadas y explota diferencias en Movilidad
cuando se les somete a la acción de un
campo eléctrico.
Se realiza cambiando alternativamente el
campo eléctrico entre pares de diferentes
electrodos de azimut espacial Electroforesis en campo pulsado
Principalmente en la separación de ADN
cromosómico; Construcción, identificación y
(PFGE)
análisis de bibliotecas de genomas de grandes
fragmentos
Alta sensibilidad y especificidad

Permite la amplificación de múltiples

regiones del genoma en un solo tubo de
Reacción en cadena de la reacción, reduce el tiempo y los costos
polimerasa(PCR) asociados a la tipificación de secuencias
Multilocus.
Proceso
1 2 3
Se comparan las
Amplificación de Asigna número a
secuencias de
Fragmentos alelos identificados
fragmentos con cada
seleccionados
alelo ya descrito
4 5
Comparar en una base de
Se genera perfil
datos centralizada los
alelico
perfiles alelicos
Diagrama de Flujo
1) Amplificación de los fragmentos 2) Examinar Secuencia de
Gen 2 Gen 3 ambas Hebras
Gen 1
=-=-= ATGCCGATAGCTAGGCTATCGAGGATCG
Gen 4 Gen 5 Gen 6 TACGGCTATCGATCCGATAGCTCCTAGC

===== ::::::::: =:=:=:
Gen 7
4) Asignar a cada alelo de los 7
-:-:-:- genes para conseguir un perfil Alélico
3) Comparar secuencias a Alelos #ID: 5 #ID: 67 #ID: 15
ya descritos =-=-=
5) Comparar perfil Alelico con base de

datos
=:=:=:
-:-:-:-
#ID #ID
:::::::::
Ejemplo
Perfil Alélico Staphylococcus aureus
Imagen extraída de: Vázquez, J. A., & Berrón, S. (2004). Multilocus sequence typing: el marcador
molecular de la era de Internet. Enfermedades infecciosas y microbiologia clinica, 22(2), 113–120. Imagen extraída de: Search or browse profiles [Internet]. Pubmlst.org. [citado el 6 de mayo de 2023].
https://doi.org/10.1016/s0213-005x(04)73045-1 Disponible en: https://pubmlst.org/bigsdb?db=pubmlst_saureus_seqdef&page=query&scheme_id=1
Aplicaciones FARMACOLOGIA: para
identificación de clones
EPIDEMIOLOGIA: es utilizada asociados con resistencia a los
para identificar brotes y antimicrobianos permitiendo
epidemias (propagación de desarrollar estrategias de
infecciones causadas por tratamiento más efectivas.
bacterias proporcionando
información sobre la fuente de
estas).
INDUSTRIA ALIMENTARIA: se puede
utilizar para caracterizar las cepas
bacterianas presentes en un ambiente
específico para la identificación de
fuentes de contaminación y la
implementación de medidas
preventivas para reducir la
propagación de infecciones.
Ventajas Desventajas
La necesidad de equipos
especializados y personal
Alta Resolución .
capacitado.
Capacidad para distinguir El alto costo asociado a esta
entre cepas bacterianas técnica.
estrechamente relacionadas. El proceso de selección de
Útil para la identificación de genes no es el mismo para
nuevos patógenos. todas las especies de los
microrganismos.
Evaluación de la eficacia de
Interpretación de los
las medidas de control de resultados puede ser difícil
enfermedades. debido a la complejidad de los
datos generados.
CONCLUSIÓN
La MLST es una técnica importante para la investigación biomédica y molecular.
El esquema MLST identifica secuencias internas de nucleótidos de aproximadamente

400-500 pb en múltiples genes de mantenimiento. Su reporte mostrará qué alelos
coinciden al 100% y cuales no.
MLST puede tener algunas limitaciones
En Microbiología, el método es utilizado para la vigilancia de microorganismos que van

recombinando su genética, esto quiere decir que van desarrollando nuevas propiedades
Rol del Tecnólogo Médico: tiene la capacidad de identificar, seleccionar y aplicar técnicas
para la resolución de problemas en el laboratorio, quién contribuye en la gestión del
proceso y determinación del diagnostico, tratamiento y seguimiento de todo aquel
microorganismo que se está estudiando
Bibliografía
1. Díaz-Sánchez Adrian Alberto, Martínez-Marrero Siomara, Corona-González Belkis. Tipificación
multilocus de secuencias aplicada a la caracterización molecular de hemoparásitos en el ganado
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https://m.blog.naver.com/PostView.naver?
blogId=hyouncho2&logNo=220483348600&proxyReferer=https:%2F%2Fwww.google.com%2F
3. Vázquez C, Dolores M. Tipificación molecular de “Mannheimia haemolytica y Pasteurella
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2018. p26
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molecular para la caracterización inequívoca de cepas de Oenococcus oeni y Lactobacillus
plantarum. En Avances en Ciencias y Técnicas Enológicas. Transferencia de Tecnología de la Red
GIENOL al Sector Vitivinícola: (Vol. 3, pp. 4–35). Junta de Extremadura.
5. Menor, C. (2019, julio 29). Multilocus Sequence Typing MLST Analysis Tool. BioBam; BioBam
Bioinformatics. https://www.biobam.com/multilocus-sequence-typing/?cn-reloaded=1
6. How to use the MLST App in Omicsbox. 2019. Disponible en: https://youtu.be/v4F2-rExbps
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Genes que codifican proteínas que siempre se expresan de

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Surge la necesidad de encontrar métodos de identificación y diferecniación de

Con los nuevos avances en la tecnología se ha buscado y creado un nuevo

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genoma bacteriano y compara las

En cada gen hay 450-500 pb,

Permite la amplificación de múltiples

Gen 4 Gen 5 Gen 6 TACGGCTATCGATCCGATAGCTCCTAGC

5) Comparar perfil Alelico con base de

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