Optimizacion Del PCR en Tiempo Real
Optimizacion Del PCR en Tiempo Real
Optimizacion Del PCR en Tiempo Real
Las sondas fluorescentes tienen la
ventaja de ser muy precisas y evitar
posibles artefactos o secuencias
inespecíficas presentes en el producto
de la PCR
MARCADORES FLUORESCENTES
Es posible identificar productos
específicos de la PCR mediante el
análisis de la temperatura de fusión
que se expresa en una curva cuya
forma se relaciona con el contenido de
GC
ANÁLISIS DE LA CURVA DE FUSIÓN
CUANTIFICACION ABSOLUTA.
Esta técnica relaciona la señal obtenida con la PCR al número de copias fijo de una
secuencia estándar utilizando un curva de calibración.
Ratio=2 -^^CP
Otro modelo para cuantificación relativa entre las diferentes eficiencias de la PCR tanto para los
genes en estudio como para los genes de referencia
(E target) ^Cp target (control-simple)
Ratio=
(Eref. ) ^CP
ref.
( control – simple)
En esta ecuación el ratio del gen en estudio se expresa en una muestra
frente a un control en comparación con un gen de referencia . E target
representa la eficiencia de la PCR en tiempo real del amplicom en
estudio
E ref representa la eficiencia de la PCR