Identificación de Polimorfismos en El Gen RXAM1 de Yuca y Su Asociación Con La Resistencia A La Bacteriosis Vascular
Identificación de Polimorfismos en El Gen RXAM1 de Yuca y Su Asociación Con La Resistencia A La Bacteriosis Vascular
Identificación de Polimorfismos en El Gen RXAM1 de Yuca y Su Asociación Con La Resistencia A La Bacteriosis Vascular
Received: 29th January 2019, Returned for revision: 27th February 2019, Accepted: 09th May 2019.
Associate Editor: Caroline Turchetto.
Citation/Citar este artículo como: Barrera A, Soto-Sedano J, López Carrascal CE. Identificación de polimorfismos en el gen RXAM1 de yuca y su
asociación con la resistencia a la bacteriosis vascular. Acta biol. Colomb. 2020;25(2):185-193. DOI: http://dx.doi.org/10.15446/abc.v25n2.77564
RESUMEN
La yuca (Manihot esculenta Crantz) es un cultivo importante en regiones del trópico que proporciona alimento para cerca de
1000 millones de personas en todo el mundo. La enfermedad bacteriana más importante es la bacteriosis vascular causada por
Xanthomonas axonopodis pv. manihotis (Xam). Recientemente se logró identificar un gen de resistencia denominado RXAM1, el cual
codifica para una proteína que posee un dominio LRR (Leucine-Rich Repeat) extracelular y un dominio STK (Serine Threonine
Kinase) citoplasmático. RXAM1 colocaliza con un QTL que explica el 13 % de la resistencia a la cepa CIO136 de Xam. En este trabajo
se evaluó la respuesta a la infección con la cepa XamCIO136 en diez diferentes variedades de yuca lo cual permitió identificar que las
variedades TMS60444, SG10735, MCOL1522, MCOL1505 y MCOL2215 fueron susceptibles, mientras que CM6438-14, CM523-7
y MBRA902 se comportaron como resistentes. Así mismo se identificaron polimorfismos tipo SNPs (Single Nucleotide Polymorphism) en
el gen RXAM1 en el mismo grupo de variedades. Las variedades SG10735, CM6438-14, TMS6044 y MBRA685 presentaron el mayor
nivel de polimorfismos, mientras que las variedades CM523-7, CM2177-2 y MCOL1522 fueron menos polimórficas para este gen.
Los análisis estadísticos no permitieron identificar una asociación significativa entre el fenotipo y los polimorfismos identificados.
Este estudio representa un primer esfuerzo con miras a asociar variantes alélicas con el fenotipo de respuesta a la bacteriosis vascular.
Palabras clave: Alelo, diversidad, receptor, síntomas de plantas.
ABSTRACT
Cassava (Manihot esculenta Crantz) is an essential crop in tropical regions providing food for about one billion people around the
world. The most important bacterial disease is cassava bacterial blight (CBB) caused by Xanthomonas axonopodis pv. manihotis (Xam).
Recently, a resistance gene called RXAM1 was identified, which codes for a protein that has an extracellular LRR (Leucine-Rich
Repeat) domain and a cytoplasmic STK (Serine Threonine Kinase) domain. RXAM1 colocalizes with a QTL explaining 13 % of the
resistance to the CIO136 strain of Xam. In this work, the response to infection with the strain XamCIO136 in ten different varieties of
cassava was evaluated, which allowed the classification of the cassava varieties TMS60444, SG10735, MCOL1522, MCOL1505 and
MCOL2215 as susceptible, while CM6438-14, CM523-7, and MBRA902 were cataloged as resistant. Also, SNPs (Single Nucleotide
Polymorphism) polymorphisms were identified in the RXAM1 gene in the same group of cassava varieties. SG10735, CM6438-14,
TMS6044, and MBRA685 presented the highest level of polymorphisms, while the varieties CM523-7, CM2177-2 and MCOL1522
were less polymorphic for this gene. The statistical analyses did not allow to identify a significant association between the phenotype
and the identified polymorphisms. This study represents a first effort towards the establishment of associating between allelic variants
and the cassava response to bacterial blight.
Keywords: Allele, diversity, receptor, symptoms in plants.
del progreso de la enfermedad AUDPC (Area Under Disease 0,5X. El tamaño del fragmento amplificado se confirmó
Progression Curve) de acuerdo con Shaner y Finney (1977): empleando el marcador de peso molecular 1Kb Plus Ladder
® (Invitrogen, Carlsbad, CA, U.S.A.). El producto de PCR
( Di + Di−1 ) x (ti + ti−1 ) se purificó mediante el kit Wizard SV Gel and PCR Clean-
AUDPC = ∑i 2
(1)
up System (Promega, Madison, WI, USA). Cada amplicón
eluído se clonó en el vector pGEM-T-easy (Promega,
Donde D corresponde al síntoma y t al tiempo post- Madison, WI, USA) de acuerdo con las instrucciones de la
inoculación. casa comercial. El producto de la ligación se transformó
Para el análisis de los datos de AUDPC, se realizó una en células competentes de Escherichia coli DH10B mediante
prueba de homogeneidad y normalidad de los datos electroporación empleando el equipo MicroPulserTM
registrados mediante la prueba de Kolmogorov-Smirnov y BioRad®, siguiendo las condiciones de voltaje, resistencia
un análisis de varianza de comparación múltiple de medias y capacitancia recomendadas por la casa comercial. Las
aplicando los tests de Kruskal-Wallis (H) y de Games- células se incubaron una hora a 37 °C en 1 ml de medio 2XYT
Howell, con un intervalo de confianza de 95 % (p ≤ 0,05), (triptona 16 g, extracto de levadura 10 g, cloruro de sodio
mediante el programa SPSS 19®. 5 g) con agitación constante. Las bacterias se sembraron
en medio LB sólido (extracto de levadura 0,5 %, Triptona 1
Extracción de ADN, amplificación del gen RXAM1, %, NaCl 0,5 % y agar 1,5 %) con selección para ampicilina a
clonación y secuenciación 100 μg/μl –IPTG (0,5 mM X-Gal (50 mg/µl) y se incubaron
La extracción de ADN de las diez variedades de yuca se realizó a 37 °C por 12 h. Se confirmó la presencia de los clones
a partir de 150 mg de tejido foliar almacenado en nitrógeno positivos elegidos al azar mediante PCR de colonia. A partir
líquido basado en el protocolo de Dellaporta et al. (1983). A de los clones positivos se realizó el aislamiento del ADN
partir de la secuencia del gen RXAM1 se diseñaron los primers plasmídico empleando el kit GeneJET Plasmid Miniprep
RX1FSmaI 5’-GCAGGATCCTCTCTGAATCATTACCTGCTGTC-3’ (Fermentas). El inserto fue secuenciado en el centro de
y RX1RBamH1 5’- GCACCCGGGATGGGGTGTGGATGCTTC-3’. servicios certificado MACROGEN, utilizando varios primers
Los primers permitieron amplificar 3182pb desde el inicio de que abarcaban la región completa de RXAM1 (Fig. 1 y
la transcripción del gen, sin incluir la región promotora. La Tabla 1). Posteriormente, se realizaron los alineamientos
reacción de PCR se preparó en un volumen final de 10 μl, con usando el software Sequencher y ClustalW teniendo en cuenta
una concentración de 1X de Buffer de PCR (DreamTaq Buffer, la secuencia de referencia del gen previamente obtenida por
Fermentas), 0,2 mM de dNTPs, 0,1 μM de cada primer, 20 mM Diaz et al. (2018). A partir de los alineamientos, se revisaron
de MgCl2 y 0,05 U de Taq polimerasa (DreamTaq, Fermentas) y manualmente los cromatogramas con el fin de comprobar su
utilizando 100 ng de ADN molde. calidad y revisar la posición correcta de cada polimorfismo.
Las reacciones de PCR se efectuaron en un termociclador Con el fin de establecer posibles efectos de selección sobre el
MyCyclerTM BioRad® utilizando los siguientes ciclos de gen RXAM1, se determinó si los polimorfismos encontrados
temperatura: denaturación inicial a 95 ºC por 2 minutos, en los dominios LRR y STK son sinónimos o no-sinónimos y
seguido de 30 ciclos de amplificación con 30 segundos de se calcularon sus tasas de sustitución (dN/dS) empleando el
apertura a 95 ºC, 30 segundos de anillamiento a 54 ºC programa DnaSP (Librado y Rozas, 2009).
y 3 minutos y 30 segundos de extensión a 72 ºC, con un
ciclo final de extensión a 72 ºC por 5 minutos y tiempo Asociación polimorfismos y fenotipo
de enfriamiento a 20 ºC por 5 minutos. El producto Se construyó una matriz de polimorfismos y para
de amplificación se verificó por electroforesis en gel de identificar asociación con el fenotipo (resistente/
agarosa al 1 % teñido con bromuro de etidio en buffer TAE susceptible) de las variedades evaluadas. Posteriormente
Figura 1. Posición de los primers en el gen RXAM1 empleados para la secuenciación. Se muestra el esquema del gen RXAM1 clonado en el
vector pGEMT-easy y los primers indicados con su posición y el tamaño promedio de las lecturas de secuenciación obtenidas para cada caso.
se determinaron el alelo común y el alelo raro. El genotipo foliar de dos a tres hojas, perdida de turgencia del tallo,
de las variedades se codificó como homocigotas o expansión del exudado y prolongación del área necrosada
heterocigotas, asignándoles un valor de cero, uno o dos, en las variedades más susceptibles (TMS60444, SG10735,
donde cero es el genotipo homocigoto común, uno el MCOL1505, MCOL1522 y MCOL2215). Finalmente,
genotipo heterocigoto y dos el genotipo homocigoto raro a los 28 DDI se encontró que las variedades SG10735,
(poco frecuente). Para catalogar como R o S se consideró el MCOL1505, MCOL2215 y MCOL1522 alcanzaron un
criterio previamente reportado por Trujillo et al. (2014), alto nivel de decoloración y marchitamiento foliar de tres
en el cual una variedad es considerada como resistente si o más hojas. Además, presentaron un deterioro vascular,
el valor de logAUDPC es inferior a 1,59 y susceptible si es evidenciado como marchitamiento de tallos y hojas,
mayor de este valor. Finalmente, se realizó una prueba de destacándose la variedad TMS60444 por presentar muerte
chi-cuadrado(X2) asignándole un p-valor correspondiente total de la planta al final de la evaluación, alcanzando el
mediante el programa estadístico R® y para evitar errores mayor valor de logAUDPC con 1,89. Por otro lado, las
Tipo I (probabilidad de rechazar la hipótesis nula cuando es variedades CM6438-14, CM523-7 y MBRA902 evidenciaron
cierta), se realizó una corrección de Bonferroni (* = /n), síntomas moderados o reducidos, lo cual se vio reflejado
donde = 0,05. Los análisis se llevaron a cabo en el paquete por bajos valores de logAUDPC, entre 1,43 y 1,53 (Fig. 2).
estadístico R®. La prueba de Kruskal Wallis (H = 53,142; gl = 9; p < 0,05)
indicó diferencias significativas entre variedades y entre
periodos de evaluación (Fig. 2).
RESULTADOS
Identificación de SNPs en el gen RXAM1
Evaluación fenotípica de diez variedades de yuca El gen RXAM1 logró ser amplificado de manera
Con el objetivo de evaluar la respuesta de las diez satisfactoria a pesar de su gran tamaño en cada una de
variedades de yuca a la inoculación con la cepa XamCIO136 diez las variedades de yuca evaluadas. Tras la amplificación,
se llevó a cabo un seguimiento de la respuesta durante 28 días clonación y secuenciación de los clones obtenidos por cada
con evaluaciones periódicas cada siete días. A los primeros variedad se logró obtener secuencias de calidad aptas para
siete DDI, se observó que pese a ser una fase temprana para el análisis de todas las variedades, excepto para los clones
la manifestación de síntomas, el 40 % de las variedades obtenidos de la variedad MCOL2215, cuyas secuencias
mostraron una leve necrosis y exudado de color amarillo mostraron una muy baja calidad y no pudieron ser
claro en el punto de inoculación. Para el segundo tiempo de analizadas.
evaluación, aquellas variedades que inicialmente no habían Teniendo en cuenta que la yuca es considerada una
presentado signos de la enfermedad (por ejemplo, CM523- especie altamente heterocigota, es posible identificar SNPs
7 y CM6438-14), comenzaron a presentar algunos síntomas dentro de la misma variedad (intravariedad), así como SNPs
tales como exudado de color amarillo claro y necrosis presentes entre dos o más variedades (entrevariedades). Por
en el punto de inoculación. Por otro lado, las variedades esta razón los análisis se realizaron según esta clasificación.
que mostraron síntomas tempranos de la enfermedad En la Tabla 2 se presenta el número de SNPs intravariedades
en el registro anterior presentaron un aumento en el identificados, en donde se observa que las variedades
nivel de infección evidenciado por doblez y decoloración CM643814, TMS60444 y MCOL1505 presentaron el mayor
en los ápices foliares, aumento del área necrosada, cambio número de SNPs, mientras que las variedades CM523-
de tonalidad del exudado de amarillo claro a marrón y 7, CM2177-2 y MBRA685 mostraron un bajo número de
un leve desplazamiento del mismo hacia la parte superior polimorfismos. Con respecto a los SNPs entre variedades,
del tallo. Para la evaluación a los 21 DDI se encontró un se determinaron mediante una comparación pareada para
comportamiento progresivo de la enfermedad para todas precisar el número total de polimorfismos entre variedades
las variedades evaluadas, manifestando marchitamiento (Tabla 2). El número de SNPs varió de manera considerable
Tabla 1. Listado de primers empleados en la secuenciación completa del gen RXAM1 clonado en el vector pGEMT-easy.
Tabla 3. Número total de polimorfismos tipo SNPs en los dominios LRR y STK en el gen RXAM1.
Variedad
CM6438-14 TMS60444 MBRA685 MBRA902 CM523-7 CM2177-2 MCOL1505 SG107-35
Dominio LRR STK LRR STK LRR STK LRR STK LRR STK LRR STK LRR STK LRR STK
MCOL1522 103 10 105 10 103 10 8 9 0 0 6 2 20 7 103 10
CM6438-14 8 3 0 1 105 12 103 11 101 9 111 6 0 1
TMS60444 8 2 108 13 105 10 105 8 114 7 8 2
Variedad
a b
Figura 4. Arboles filogenéticos basados en la secuencia del gen RXAM1. a. Árbol basado en el alineamiento de la secuencia de nucleótidos
correspondientes al dominio LRR. b. Árbol basado en el alineamiento de la secuencia de nucleótidos correspondientes al dominio STK.
parentales de las variedades pertenecen al mismo acervo deberse a que se trata de un QTL que explica un bajo
genético, lo cual indica una estrecha relación filogenética. porcentaje de resistencia (13 %) y por lo tanto es difícil de
Es posible que los programas de mejoramiento genético, al identificar una asociación.
buscar materiales con buenas características agronómicas, A pesar de que en el presente estudio no se observa una
han utilizado un limitado grupo de progenitores en sus relación significativa entre los SNPs y el fenotipo, varios
cruzamientos, reduciendo la base genética de los mismos estudios en plantas reportan SNPs en genes candidatos
(Bredeson et al., 2016). de resistencia asociados significativamente con el fenotipo
En cuanto al análisis de SNPs de las regiones de resistencia para diferentes agentes patógenos (Hart
correspondientes a los dominios LRR y STK de RXAM1, se y Griffiths, 2014; Chang et al., 2016). Es posible también
evidencia que la región correspondiente al dominio STK que el gen RXAM1 pueda tener una función en resistencia,
presenta un número de SNPs relativamente menor a aquella pero a otras cepas o patógenos. Al respecto, es conveniente
que codifica para el dominio LRR. Considerando que los monitorear la resistencia con otras cepas utilizando
dominios LRR en las proteínas de resistencia generalmente las mismas variedades analizadas. Adicionalmente, es
están implicados en la especificidad del reconocimiento importante destacar que en este estudio se trabajó con
de proteínas del patógeno, éstos deben presentar una alta un bajo número de variedades. Los estudios que han
variabilidad para adaptarse a las nuevas variantes de las encontrado asociación genotipo-fenotipo evalúan entre 60 a
proteínas del patógeno (Ellis et al., 1999). A pesar del mayor 100 o incluso más genotipos (Hart y Griffiths, 2014; Chang
número de SNPs en el dominio LRR, los análisis de Ka/Ks et al., 2016). A pesar de que existe una importante colección
demostraron que este dominio se encuentra bajo selección de germoplasma en CIAT, la evaluación fenotípica, la cual
purificadora. Es posible que esta región de la proteína requiere un alto número de réplicas, representa demasiado
reconozca moléculas conservadas del patógeno y por ello sus trabajo y espacio en el invernadero. En este sentido sería
variantes estén asociadas con sustituciones sinónimas. Por importante desarrollar nuevas metodologías de fenotipaje
otro lado, los bajos niveles de polimorfismos en el dominio de resistencia a la bacteriosis a gran escala.
STK estuvieron asociados con sustituciones no sinónimas, Otra de las limitaciones de este trabajo fue la obtención
sugiriendo la posibilidad de que es necesaria cierta variación de la secuencia completa del gen candidato RXAM1, lo
en la acción ejecutora del dominio responsable de la cual se logró para nueve variedades, pero sería importante
activación de la señalización de la inmunidad. La estructura expandirlo a un mayor número de variedades. La obtención
general de RXAM1, al ser del tipo RLK, apunta a que este de la secuencia como se realizó en este estudio fue costosa y
podría ser un PRR que reconociera un PAMP particular de dispendiosa. Dado que la yuca es una especie heterocigota,
Xanthomonas y que podría existir un mecanismo molecular la secuenciación de los productos directamente de PCR
conservado entre la PTI y la resistencia cuantitativa (Vásquez generan secuencias ilegibles. Por esta razón fue necesario
et al., 2018). hacer clonación para capturar las variantes. Con la reducción
A partir del análisis de asociación no se observó una en los costos de secuenciación y el desarrollo de nuevas
relación significativa entre las variantes alélicas identificadas estrategias de secuenciación, tales como GBS (Genotyping
del gen RXAM1 en las diferentes variedades y su respuesta by Sequencing) o exómica, es posible obtener la secuencia
fenotípica a la cepa CIO136 de Xam. Este resultado puede parcial del genoma de un gran número de variedades, lo
que facilitaría la identificación de polimorfismos de manera biotec por su apoyo y discusiones enriquecedoras. Especial
simultánea en varios genes candidatos (Xiao et al., 2017; agradecimiento a los dos evaluadores anónimos, quienes
Cockram y Mackay, 2018). con sus comentarios permitieron mejorar la calidad del
El presente estudio representa una aproximación inicial manuscrito.
que complementa otros estudios relacionados con la
búsqueda de fuentes de resistencia a diferentes cepas de
Xam. A futuro, las variedades que muestran un fenotipo CONFLICTO DE INTERESES
contrastante identificadas en este estudio podrían cruzarse Los autores declaran que no existe conflicto de intereses.
para obtener poblaciones y desarrollar mapas genéticos
y nuevos análisis de QTLs. Así mismo, algunas de las
variedades estudiadas en este trabajo podrán cruzarse con REFERENCIAS
otras variedades comerciales susceptibles a la bacteriosis Boher B, Kpemoua K, Nicole M, Luisetti J, Geiger JP.
y así obtener progenies con rasgos comerciales superiores. Ultrastructure of interactions between Cassava and
Finalmente, el resultado de esta investigación es promisorio Xanthomonas campestris pv. manihotis; cytochemistry of
para continuar con otros análisis que validen los efectos cellulose and pectin degradation in a susceptible cultivar.
de estos genes candidatos en yuca y sus variantes como Phytopathology. 1995;85:777-788. Doi: http://doi.
herramienta útil para la búsqueda de asociaciones con el org/10.1094/Phyto-85-777
fenotipo de resistencia. Este trabajo puede considerarse Boutrot F, Zipfel C. Function, discovery and exploitation
como un paso preliminar a los estudios de asociación a of plant pattern recognition receptors for broad-
gran escala (GWAS). Este tipo de estrategias permiten no spectrum disease resistance. Annu Rev Phytopathol.
solo la identificación de nuevos genes candidatos, sino 2017;55:257-286. Doi: http://doi.org/10.1146/
que determinan su distribución y frecuencia en diferentes annurev-phyto-080614-120106
subpoblaciones de yuca. Esta información es vital en la Bredeson JV, Lyons JB, Prochnik SE, Wu GA, Ha CM,
identificación de una amplia gama de fuentes de resistencia Edsinger-Gonzales E, et al. Sequencing wild and cultivated
a Xam para ser incorporadas en los programas regionales, cassava and related species reveals extensive interspecific
aumentando así la eficiencia de mejoramiento con base en hybridization and genetic diversity. Nature Biotechnol.
la buena calidad de los datos fenotípicos y genotípicos. 2016;34:562–570. Doi: http://doi.org/10.1038/nbt.3535
Castelblanco W, Fregene M, Perea M. Diversidad y
diferenciación genética de la yuca (Manihot esculenta
CONCLUSIONES Crantz) con marcadores microsatélites en poblaciones de
La evaluación fenotípica de la resistencia en diez África y Latinoamérica. Acta Biol Colomb. 2004;9(2):124.
variedades de yuca a la cepa CIO136 de Xam permitió Ceballos H, de la Cruz G. Cassava Taxonomy and
identificar respuestas diferenciales en la velocidad e Morphology. En Ospina B, Ceballos H, editores.
intensidad de los síntomas entre las variedades. TMS60444, Cassava in the third millennium: modern production,
SG10735, MCOL1505, MCOL2215 y MCOL1522 fueron processing, use, and marketing systems. Cali, CO:
las variedades más susceptibles a la cepa CIO136 de Xam, Centro Internacional de Agricultura Tropical (CIAT);
mientras que CM6438-14, CM523 y BRA902 fueron Latin American and Caribbean Consortium to support
resistentes. La identificación de SNPs en el gen RXAM1 para Cassava Research and Development (CLAYUCA);
estas variedades mostró una gran variabilidad en el número Technical Centre for Agricultural and Rural Cooperation
de SNPs, tanto entre variedades como dentro de las mismas.
(CTA); 2012. p. 15-28.
El dominio STK presentó menor número de SNPs pero
Chang HX, Lipka AE, Domier LL, Hartman GL. Characterization
estos estuvieron asociados con selección diversificadora.
of disease resistance loci in the USDA soybean germplasm
Aunque el dominio LRR presentó en algunos casos un alto
número de SNPs, la mayoría de ellos estuvieron asociados collection using genome-wide association studies.
con cambios sinónimos. Es posible que esto se deba a que Phytopathology. 2016;106(10):1139-1151. Doi: https://
reconoce moléculas conservadas del patógeno. En este doi.org/10.1094/PHYTO-01-16-0042-FI
estudio no se observó una correlación significativa entre Cockram J, Mackay I. Genetic Mapping populations for
los SNPs y el fenotipo. Es necesario expandir este tipo de conducting high-resolution trait mapping in plants.
estudio a un repertorio mayor de variedades de yuca y frente Adv Biochem Eng Biotechnol. 2018;164:109-138. Doi:
a otras cepas de Xam. http://doi.org/10.1007/10_2017_48
Contreras E, López CE. Identificación de polimorfismos en
RXam2, un gen candidato de resistencia a la bacteriosis
AGRADECIMIENTOS vascular de yuca. Rev Colomb Biote. 2011;13(2):63-69.
A la profesora Liliana López por el apoyo en el análisis Dellaporta S, Wood J, Hicks J. A plant DNA minipreparation:
estadistico. A todos los miembros del grupo Manihot version II. Plant Mol Biol Report. 1983;1:19-21.
Diaz P, Herrera M, Ochoa JC, Medina A, Prias M, Verdier V, Olsen KM, Schaal B. Evidence on the origin of cassava:
et al. The overexpression of RXAM1, a cassava gene coding phylogeography of Manihot esculenta. Proc Natl Acad
for an RLK confers disease resistance to Xanthomonas Sci USA. 1999;96(10):5586-5591. Doi: https://doi.
axonopodis pv. manihotis. Planta. 2018;247(4):1031-1042. org/10.1073/pnas.96.10.5586.
Doi: http://doi.org/10.1007/s00425-018-2863-4 Roa AC, Maya MM, Duque MC, Tohme J, Allem AC,
El-Sharkawy MA. Cassava biology and physiology. Plant Mol Bonierbale MW. AFLP analysis of relationships among
Biol. 2004;56(4):481-501. cassava and other Manihot species. Theor Appl Genet.
Ellis JG, Lawrence GJ, Luck JE, Dodds PN. Identification of 1997;95(5-6):741-750. Doi: https://doi.org/10.1007/
regions in alleles of the flax rust resistance gene L that s001220050620
determine differences in gene-for-gene specificity. Plant Roa AC, Chavarriaga-Aguirre P, Duque MC, Maya
Cell. 1999;11(3):495–506. MM, Bonierbale MW, Iglesias C, et al. Cross-
Food and Agriculture Organization of the United Nations species amplification of cassava (Manihot esculenta C)
(FAO). El estado de la seguridad alimentaria y la nutrición (Euphorbiaceae) microsatellites: allelic polymorphism
en el mundo 2017. Disponible en: www.fao.org/3/a- and degree of relationship. Am J Bot. 2000;87(11):1647-
I7695s.pdf 1655.
García B, Jiménez M, Coto O, Rayas A, Basail M, Santos Shaner G, Finney RE. The effect of nitrogen fertilization
A, et al. Caracterización morfológica y agronómica de in the expression of slow-mildewing resistance in
cultivares cubanos de yuca (Manihot esculenta Crantz). Knox wheat. Phytopathology. 1997;67:1051-1056.
Cultrop. 2014;35(2):43-50. http://dx.doi.org/10.1094/Phyto-67-1051
Hart JP, Griffiths PD. Genotyping-by-Sequencing enabled Trujillo CA, Ochoa JC, Mideros F, Restrepo S, López C,
mapping and marker development for the By-2 Bernal A. A complex population structure of the cassava
Potyvirus resistance allele in common bean. Plant pathogen. Microb Ecol. 2014;68(1):155-167. Doi:
Genome. 2015;8(1):1-14. Doi: http://doi.org/10.3835/ https://doi.org/10.1007/s00248-014-0411-8
plantgenome2014.09.0058 Vásquez A, Soto J, López C. Unraveling the molecules hidden
Librado P, Rozas J. DnaSP v5: A software for comprehensive in the gray shadows of quantitative disease resistance to
analysis of DNA polymorphism data. Bioinformatics. pathogens. Acta Biol Colomb. 2018;23(1):5-16. Doi:
2009;25(11):1451-1452. Doi: http://doi.org/10.1093/ http://dx.doi.org/10.15446/abc.v23n1.66487
bioinformatics/btp187 Verdier V, López C, Bernal A. Cassava Bacterial Blight caused
Jorge V, Fregene M, Duque MC, Bonierbale M, Tohme J, by Xanthomonas axonopodis pv. manihotis. En: Ospina B,
Verdier V. Genetic mapping of resistance to bacterial Ceballos H, editors. Cassava in the third millennium:
blight disease in cassava. Theor Appl Genet. 2000;101(5- modern production, processing, use, and marketing
6):865-872. Doi: https://doi.org/10.1007/s001220051 systems. Centro Internacional de Agricultura Tropical
López C, Bernal A. Cassava Bacterial Blight: using genomics (CIAT); Latin American and Caribbean Consortium to
for the elucidation and management of an old problem. support Cassava Research and Development (CLAYUCA);
Trop Plant Biol. 2012;5(1):117-126. Doi: https://doi. Technical Centre for Agricultural and Rural Cooperation
org/10.1007/s12042-011-9092-3. (CTA), Cali, CO. 2012. p. 200-212.
Lozano J, Sequeira L. Bacterial blight of cassava in Colombia: Xiao Y, Liu H, Wu L, Warburton M, Yan J. Genome-
epidemiology and control. Phytopathology. 1974;64:83- wide Association Studies in Maize: Praise and Stargaze.
88. Doi: https://doi.org/10.1094/Phyto-64-83 Mol Plant. 2017;10(3):359-374. Doi: https://doi.
Lozano JC. Cassava Bacterial Blight: a manageable disease. org/10.1016/j.molp.2016.12.008.
Plant Dis. 1986;70:1089. Doi: https://doi.org/10.1094/
PD-70-1089