Ut 1. El Laboratorio de BM y Cultivos Celulares

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LABORATORIO DE

BIOLOGÍA MOLECULAR
Y CITOGENÉTICA

05/10/2021 Lola Conesa. BMC.APC 1


Biología molecular y citogenétca
• Biología molecular: Parte de la biología que
estudia la composición, estructura y función
de las moléculas biológicamente importantes,
así como de los procesos en los que están
implicadas.
• Proteína: PROTEÓMICA
• ácidos nucleicos: GENÓMICA (aquí se ubican
los laboratorios de biología molecular
propiamente dichos)
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Biología molecular y citogenétca
• Citogenétca: Parte de la genétca que estudia
la estructura , función y comportamiento de
los cromosomas en metafase.

• La citogenétca es el estudio de los


cromosomas y de las enfermedades
relacionadas, causadas por un número o una
estructura anómalos de los cromosomas

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Biología molecular y citogenétca*
• La Citogenétca Molecular combina técnicas
de Citogenétca Convencional con Técnicas de
Biología Molecular permitendo la detección
de alteraciones cromosómicas numéricas y/o
estructurales submicroscópicas, responsables
de diferentes patologías de origen genétco
imposibles de diagnóstcar con las Técnicas de
Citogenétca Convencional.

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UNIDAD DE GENÉTICA
• Aúna en un mismo espacio:
– Laboratorio de BIOLOGÍA MOLECULAR
– Laboratorio de CITOGENÉTICA
• En ella se realizan todos estudios tanto de BM
como de CG
• Aún consttuyendo una unidad, los
laboratorios pueden ser independientes

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Característcas comunes en el laboratorio de
biología molecular y en el laboratorio de
citogenétca :
 Se realizan técnicas de alta complejidad.
 Equipamiento especializado y costoso.
 Elevado riesgo de contaminación
 Infraestructura en dos áreas perfectamente
separadas: “área de sucio” y “área de limpio”
 Flujo de trabajo unidireccional.

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LABORATORIO DE BIOLOGÍA
MOLECULAR
• EQUIPAMIENTO
• ESTRUCTURA DEL LABORATORIO
• FLUJO DE TRABAJO
• CONDICIONES DE TRABAJO
• USO EFICIENTE DE LOS RECURSOS

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LABORATORIO DE BIOLOGÍA MOLECULAR
La técnica básica que se lleva a cabo en un
laboratorio de biología molecular es la
reacción en cadena de la polimerasa (PCR).

PCR: Técnica in vitro de amplifcación de ADN


que permite obtener millones de copias iguales
de un fragmento concreto de ADN, partendo
de una cantdad mínima de ADN molde.

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LABORATORIO DE BIOLOGÍA MOLECULAR

• EQUIPAMIENTO:
– Específco es el que permite realizar las
técnicas exclusivas de este tpo de
laboratorio (PCR)
– Genérico, material y aparatos de uso
general en cualquier laboratorio clínico

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LABORATORIO DE BIOLOGÍA MOLECULAR
Equipamiento específco
Termociclador
Equipo de electroforesis
Documentador de geles
Aparatos automátcos:
para extracción de ácidos nucleicos
secuenciadores de fragmentos

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LABORATORIO DE BIOLOGÍA MOLECULAR
TERMOCICLADOR:
Aparato en el que se lleva a cabo la PCR
 Permite realizar secuencialmente un número
elevado de ciclos repettvos programables con
temperaturas diferentes y distntos tempos de
incubación, controlados por un microprocesador.
CADA CICLO SUPONE UNA AMPLIFICACIÓN EN
EL NÚMERO DE COPIAS DEL FRAGMENTO DE
ADN QUE QUEREMOS ESTUDIAR
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LABORATORIO DE BIOLOGÍA MOLECULAR

TERMOCICLADOR RT (REAL TIME):


Incorpora un sistema de irradiación láser y
un detector de fluorescencia
Permite detectar la síntesis de productos
de amplifcación a tempo real.
Permite, además, variar las temperaturas y
los tempos de incubación en cada ciclo.

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TERMOCICLADORES

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LABORATORIO DE BIOLOGÍA MOLECULAR
 PARTES DEL TERMOCICLADOR:
• BLOQUE INCUBADOR.
• Es un soporte metálico con múltples pocillos para
colocar los tubos de reacción de PCR.
• Capaz de mantener de manera homogénea
temperatura y tempos programados para cada fase y
en cada uno de los ciclos (entre 4-96o C).
• TAPA DEL BLOQUE INCUBADOR.
• Tapa termostatzada a 102-105o C
• contacta directamente con la tapa de los tubos
evitando la evaporación del agua y concentración de
los reactvos por efecto del calor.
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LABORATORIO DE BIOLOGÍA MOLECULAR*
 EQUIPO DE ELECTROFORESIS:
El laboratorio de biología molecular precisa de
un equipo específco de electroforesis en gel.
La electroforesis es una técnica separatva que
permite obtener separadas sustancias
contenidas en una mezcla.
El fundamento de la técnica es la diferente
migración de las mismas cuando son
sometdas a la acción de un campo eléctrico
sobre un soporte adecuado.
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ELECTROFORESIS:*
Variables de la migración:
Carga
TAMAÑO
Forma de las distntas sustancias a
separar

Según el tpo de soporte utlizado y el pH


del ensayo, priman unas variables sobre las
otras
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ELECTROFORESIS:*
 Toda técnica de electroforesis va a suponer
el empleo de:
 Una fase fja (el soporte)
 Una fase móvil (solución tampón de pH
conocido en el que está disuelta la mezcla)
 Un campo eléctrico establecido entre los
extremos del soporte
 Las bandas de separación obtenidas son
incoloras debiéndose realizar un posterior
revelado de las mismas para su identfcación

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ELECTROFORESIS:

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Sentido de la impronta
migración

Bandas de proteínas séricas (teñidas


con negro amido) obtenidas sobre
cellogel (acetato de celulosa)

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LABORATORIO DE BIOLOGÍA MOLECULAR
 En el laboratorio de biología molecular
precisa de un equipo específco de
electroforesis en gel para:
1. Separar moléculas de ácidos nucleicos de
distntos tamaños
2. Analizar los productos amplifcados en una
PCR
3. Purifcar y obtener fragmentos de tamaños
concretos de ADN.
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LABORATORIO DE BIOLOGÍA MOLECULAR
• La matriz que se utliza para la electroforesis
en gel de ácidos nucleicos puede ser:
1. Geles de agarosa (entre 0,5% -2%) para
separar fragmentos de mayor tamaño;
permiten electroforesis rápidas pero con
resolución limitada.
2. Geles de poliacrilamida para separar
moléculas de menor tamaño con mayor
poder de resolución.

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LABORATORIO DE BIOLOGÍA MOLECULAR
Elementos del equipo de electroforesis en gel:
 Soporte plástco “cama” , para solidifcar el gel.
 Cubeta de electroforesis:
1. Soporte central para la cama con el gel.
2. Zonas de depósito de tampón de electroforesis en
los extremos.
3. Electrodos positvo y negatvo en cada extremo.
 Fuente de alimentación. Suministra
corriente eléctrica contnua a la cubeta.
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ELECTROFORESIS
Punto de aplicación

Cubeta de electroforesis para acetato de celulosa. En la


electroforesis en gel, el tampón cubre completamente el
mismo, realizándose la impronta a través del mismo

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Lola Conesa. BMC.APC
Cubeta de electroforesis y generador de
corriente

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LABORATORIO DE BIOLOGÍA MOLECULAR
 DOCUMENTADOR DE GELES
 Equipo que permite visualizar las bandas de
ácidos nucleicos en el gel después de la
electroforesis y obtener una fotografa de él.
Consta de :
• Transiluminador: Fuente de luz U.V. (245-
360 nm) por debajo de superfcie
transparente donde se coloca el gel.
• Cámara fotográfca o sistema de captación.
En la parte superior de la cámara oscura.
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LABORATORIO DE BIOLOGÍA MOLECULAR
Equipamiento genérico
El equipamiento genérico es común con otro tpo de
laboratorio.
 CABINA DE BIOSEGURIDAD. Se deben utlizar
cabinas de clase II:
 Protegen al técnico, al material con el que trabaja y al
medio ambiente
 Imprescindibles para trabajar con ARN (el ARN se
degrada rápidamente por ARNasas que están presentes
en todas partes)
 Imprescindibles para trabajar con cultvos celulares.
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LABORATORIO DE BIOLOGÍA MOLECULAR
Equipamiento genérico
 SISTEMA DE PURIFICACIÓN DE AGUA.
 Se requiere un suministro estable de agua
purifcada tpo II y agua ultrapura tpo I.

 ESPECTROFOTÓMETRO
Para la medida de la concentración de ácido
nucleico de una muestra y de su pureza mediante
el registro de absorbancias

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LABORATORIO DE BIOLOGÍA MOLECULAR
Equipamiento genérico
 MICROSCOPIO DE LUZ TRANSMITIDA Y
FLUORESCENCIA
 Para poder observar e interpretar las técnicas de
hibridación in situ
 AUTOCLAVE
 Permite esterilizar material y medios por calor
húmedo
 INCUBADOR O ESTUFA
 Permite cultvar bacterias (estufa cultvo
microbiológico) y células (incubador de CO2)
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LABORATORIO DE BIOLOGÍA MOLECULAR
Equipamiento genérico
 Baños termostatzados
 Placas calefactoras
 Centrífugas y microcentrífugas
 Neveras y congeladores
 Otros: balanzas, vortex…

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LABORATORIO DE BIOLOGÍA MOLECULAR
Estructura del laboratorio
 La técnica PCR implica:
• Preparación de reactvos
• Extracción y purifcación de ADN de una
muestra biológica.
• Reacción de amplifcación
• Análisis de los productos de la reacción
mediante electroforesis y documentación
en gel.
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LABORATORIO DE BIOLOGÍA MOLECULAR
Cuatro salas independientes:
• Sala de preparación de reactvos (área limpia).
– Cabina de bioseguridad
– Presión positva
• Sala de preparación de muestras y extracción
de ADN (área sucia).
– Cabina,
– Espectrofotómetro
– Presión negatva.

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LABORATORIO DE BIOLOGÍA MOLECULAR
• Sala de PCR.
– Termocicladores y espacios de trabajo para añadir
las muestras de ADN a la mezcla de reacción.
• Sala de post-PCR.
– Equipos de electroforesis y documentación de gel.
– Presión negatva y recomendable sala oscura
– Microscopio de fluorescencia.
Puede requerirse una sala “limpia” adicional
para cultvos celulares y otra “sucia” para los
secuenciadores.
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LABORATORIO DE BIOLOGÍA MOLECULAR
Flujo de trabajo
El gran problema de la PCR: CONTAMINACIÓN
POR ADN exógeno
El fujo de trabajo y de las muestras debe ser
siempre unidireccional, desde las áreas limpias
hacia las sucias, en el sentdo único hacia
delante:
pre-PCR PCR post-PCR
Cada área debe disponer de sus propios EPI,
material y aparatos
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LABORATORIO DE BIOLOGÍA MOLECULAR
Condiciones de trabajo
La contaminación de la muestra es la
introducción accidental en la muestra de
material exógeno que altera su pureza.
 Es causa de errores en los resultados.
 Contaminantes más peligrosos:
- Ácidos nucleicos extraños.
- Enzimas que degradan ácidos nucleicos
(nucleasas)

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LABORATORIO DE BIOLOGÍA MOLECULAR
Fuentes de contaminación
Contaminación cruzada
a) Material no amplifcado del medio
ambiente (aerosoles)
b) Contaminantes procedentes del
personal técnico (células de
descamación).
c) Contaminantes de las superfcies de
trabajo.

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LABORATORIO DE BIOLOGÍA MOLECULAR
Fuentes de contaminación
Contaminación por productos
amplifcados anteriormente por la
PCR (carryover)
Contaminación de los reactvos
comerciales y del material fungible,
que viene estéril pero no libre de
ADN ni nucleasas

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Normas de manipulación de materiales y
reactvos
Hay que intentar anular o prevenir las fuentes
de contaminación:
1. Separación fsica de las áreas de trabajo
2. Flujo unidireccional de trabajo
3. Utlizar material libre de nucleasas
4. Control exhaustvo de los reactvos.
5. Controles negatvos en todas las técnicas
6. Condiciones aséptcas en los hábitos de
trabajo
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LABORATORIO DE BIOLOGÍA MOLECULAR
Técnica aséptca
Es el conjunto de actvidades encaminadas a
prevenir la contaminación por
microorganismos, ácidos nucleicos y
nucleasas.
Los objetvos de las medidas de prevención de la
contaminación son:
a) Prevenir la contaminación de la muestra.
b) Prevenir la contaminación del trabajador.

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LABORATORIO DE BIOLOGÍA MOLECULAR
Técnica aséptca
Actvidades de la técnica aséptca:
1. Lavado de manos. Norma higiénica básica
2. Uso de EPI (equipo de protección individual):
Guantes, batas, mascarillas.
3. Centrifugación rápida de Eppendorf antes de
abrirlos.
4. Descontaminación de superfcies:métodos
fsicos (UV), químicos (hipoclorito sódico 10%),
descontaminantes comerciales (DNAzap,
DNAremover, DNAaway)
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LABORATORIO DE BIOLOGÍA MOLECULAR
Técnica aséptca
5. Prevención de contaminación ambiental
 Cabinas de bioseguridad de clase II
 Puntas de micropipeta especiales ( con fltro o
con desplazamiento positvo)
6. Prevención de carryover: la contaminación
con cantdades muy pequeñas de productos
amplifcados da falsos positvos
HAY QUE RESPETAR EL FLUJO UNIDIRECCIONAL

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LABORATORIO DE BIOLOGÍA MOLECULAR
Uso de recursos

 El uso efciente de los recursos debería


contemplar los siguientes puntos mínimos:
Equipamiento e infraestructuras: Plan de
mantenimiento y revisiones técnicas.
Reactvos. Trazabilidad de los reactvos (desde su
consumo hasta eliminación)
Recursos humanos. Formación del personal en
materia de seguridad y gestón de recursos.

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LABORATORIO DE BIOLOGÍA MOLECULAR
Uso de recursos
 Técnicas: uso de procedimientos
normalizados de trabajo.
 Gestón medioambiental. Código de buenas
práctcas en cuanto al:

 consumo de agua y electricidad


Implantación de sistemas de reciclado y gestón
de los residuos

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LABORATORIO DE CITOGENÉTICA Y
CULTIVOS CELULARES

Laboratorio de cultvos celulares:


Laboratorio dedicado a la propagación o
crecimiento de células eucariótcas de
organismos pluricelulares en medios de
cultvo artfciales en condiciones
controladas.

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LABORATORIO DE CITOGENÉTICA Y
CULTIVOS CELULARES

Laboratorio de citogenétca: Laboratorio


para el estudio de cromosomas
metafásicos de especies eucariótcas.
 Punto de vista morfológico: Cariotpo
 Punto de vista molecular: Citogenétca
molecular

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LABORATORIO DE CITOGENÉTICA Y CULTIVOS CELULARES

• Ambos tpos de laboratorio


comparten también su principal
problema, la contaminación de
los cultvos por microorganismos
• Los microorganismos tenen una
velocidad de crecimiento en
cultvo muy superior a la de las
células eucariótcas
• Provocan la muerte del cultvo en
poco tempo.
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LABORATORIO DE CITOGENÉTICA Y CULTIVOS CELULARES

• EQUIPAMIENTO

• ESTRUCTURA DEL LABORATORIO

• CONDICIONES DE TRABAJO: TÉCNICA ASÉPTICA

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LABORATORIO DE CITOGENÉTICA Y CULTIVOS CELULARES
Equipamiento

• Equipamiento específco para cultvos


celulares.
1. Cabina de seguridad biológica de clase II
2. Incubador de CO2
3. Microscopio invertdo
4. Equipo de criogenia

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LABORATORIO DE CITOGENÉTICA Y CULTIVOS CELULARES
Equipamiento

• Equipamiento específco para citogenétca


1. Equipo de análisis de imagen
a) Microscopio óptco convencional
b) Cámara digital
c) Softare específco
2. Microscopio óptco convencional y de
fluorescencia ddistnto al del análisis de
imagen).
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LABORATORIO DE CITOGENÉTICA Y CULTIVOS CELULARES
Equipamiento

• Equipamiento común a los dos laboratorios


En la sala de cultvos dlimpia):
1. Sistema de aire fltrado , con presión positia
2. Cabina de fujo laminar de clase II (bioseguridad).
3. Incubadores
4. Microscopio iniertdo
En la sala de laboratorio convencional dsucia):
5. Todo el equipamiento para extensiones, tnciones,
cariotpos, citogenétca, etc.
En la sala de frío
6. Congeladores
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LABORATORIO DE CITOGENÉTICA Y CULTIVOS CELULARES
Equipamiento específco para cultvos celulares.

CABINA DE FLUJO LAMINAR DE CLASE II


Infraestructura en el interior de la cual se
realizan todos los procesos y manipulaciones
de cultvos celulares:
• Preparación de medios
• Siembra de cultvos
• Cambios de medio
• Subcultvos
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Elementos de la cabina de flujo laminar de clase II
• Panel frontal transparente. Mantene estabilidad
del fujo laminar en el interior.
• Rejilla frontal. Genera una corriente entrante de
aire.
• Sistema mecánico. Impulsa el aire entrante y el
aire recircularizado hacia la parte superior.
• Filtro HEPA de gran superfcie. Forma el techo de
la cabina.
• Segundo fltro HEPA. Más pequeño y por encima
del anterior fltra el aire que se elimina al exterior.
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INCUBADOR DE CO2
El incubador de CO2 es el aparato que
proporciona las condiciones ambientales
óptmas para el crecimiento de las células en
el medio de cultvo.
Incubador roller: para incubar cultios de
células que sólo crecen en monocapa de botellas
especiales cilíndricas con gran superfcie de
adhesión.Un sistema de rotación hace que las
botellas de cultio roten y las células crezcan en
toda la superfcie

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Incubador roller

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Elementos del incubador:
• Control de temperatura (fja y mantene la Tª
óptma para el cultvo)
• Recircularización del aire interior
(homogeiniza la temperatura)
• Control de CO2 ( Mezcla el CO2 suministrado
con aire en proporción 4-7% y lo inyecta en el
interior del incubador)
• Control de humedad (inyecta agua estéril)

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Incubador de CO2

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MICROSCOPIO INVERTIDO

Tiene invertda la posición de la fuente de luz


y el revólver de objetvos respecto al
microscopio convencional.

Si tene sistema de contraste de fases se


visualizaran mejor las células en crecimiento,
ya que son estructuras vivas , transparentes y
sin tnción.

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EQUIPO DE CRIOGENIA

Permite conservar a largo plazo muestras de


células y líneas celulares en forma viable.
Consta de un tanque o depósito de nitrógeno
líquido.
Es imprescindible para el laboratorio de
cultvos celulares.

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Equipo de criogenización

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LABORATORIO DE CITOGENÉTICA Y
CULTIVOS CELULARES
Equipamiento específco para citogenétca

EQUIPO DE ANÁLISIS DE IMAGEN


Para documentar y analizar metafases con el
objetvo de obtener un cariotpo.

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Elementos del equipo de análisis de imagen:
• Microscopio óptco convencional. Para visualizar
cromosomas en metafase.
• Cámara digital. Para obtener imágenes de las
metafases y posteriormente analizarlas.
• Sofware específco. Para analizar las metafases,
permitendo su reconocimiento con base en el patrón
de bandas y su emparejamiento para obtener el
cariotpo.
• Microscopio óptco convencional y de fluorescencia.
Para recuentos celulares, estudios de viabilidad y
morfología, visualización de hibridación in situ
fuorescente,…
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LABORATORIO DE CITOGENÉTICA Y CULTIVOS CELULARES
Otro equipamiento común

EQUIPO DE ESTERILIZACIÓN.
• Autoclave , para esterilizar material.
• Sistema de fltración ( fltros 0,22 Um) para
soluciones.
SISTEMA DE PURIFICACIÓN DE AGUA.
• Se necesita agua purifcada para preparar
reactvos
• Ultrapura, estéril y libre de pirógenos para
medios de cultvo
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NEVERAS Y CONGELADORES (-20ºC Y -80ºC).
Para conservar muestras y reactvos.

OTROS EQUIPAMIENTOS. Centrífugas,


pHmetros, vórtex, agitadores, placas
calefactoras, pipeteadores automátcos…

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05/10/2021 Lola Conesa. BMC.APC 79
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05/10/2021 Lola Conesa. BMC.APC 83
05/10/2021 Lola Conesa. BMC.APC 84
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05/10/2021 Lola Conesa. BMC.APC 86
05/10/2021 Lola Conesa. BMC.APC 87
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FRASCOS DE CULTIVO Y PLACAS DE PETRI

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PLACAS DE MICROTITULACIÓN Y TUBOS
FALCON

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LABORATORIO DE CITOGENÉTICA Y CULTIVOS
CELULARES
Estructura del laboratorio
Debe estructurarse en tres salas:
Sala de cultvos dlimpia). Dotada de sistema de suministro
de aire fltrado y ligera presión positva.
Sala de laboratorio convencional dsucia). Se realizan
procedimientos relacionados con la preparación de
extensiones, tnciones, cariotpos, citogenétca molecular,…
Puede tener zona oscura para el microscopio de
fluorescencia.
Sala de frío. Esta separada de la sala de cultvos. Tiene los
congeladores y equipo de criogenia. Sería ideal que toda la
sala fuera una cámara frigorífca .
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LABORATORIO DE CITOGENÉTICA Y CULTIVOS
CELULARES
Condiciones de trabajo
Los hábitos de trabajo deben estar
condicionados totalmente por la prevención
de la contaminación.

TÉCNICA ASÉPTICA
TÉCNICA ASÉPTICA
EnEnlalasala
salade
decultvos
cultvoslos
loshábitos
hábitosdedetrabajo
trabajo
seseajustan
ajustanaauna unaestricta
estrictatécnica
técnicaaséptca.
aséptca.
Todas las
Todas las manipulaciones
manipulaciones sese realizan
realizan
dentrode
dentro delalacabina
cabinade
defujo
fujode
delaminar.
laminar.
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Normas en la cabina de flujo laminar:
Lavado de manos
Uso de guantes y de bata desechables
estériles
Puerta cerrada
Uso exclusivo de material y reactvos
No introducir mecheros Bünsen en las cabinas
(altera el fujo laminar)
Introducir en la cabina sólo el material a
utlizar

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No sacar el material estéril hasta el momento
de su uso, evitando tocar superfcies.
El material usado reutlizable de vidrio se
colocara en solución de hipoclorito 10%
El material fungible se deposita en
contenedores adecuados para material
contaminado.
Restringir acceso a la sala de cultvos
exclusivamente al personal.

05/10/2021 Lola Conesa. BMC.APC 95


Limpieza de las cabinas con etanol al 70% o
desinfectante comercial
En cabinas con lámpara UV se puede conectar
después de la limpieza, un máximo de 30 min.
Realizar mantenimiento programado de
cabinas (min anual) que incluya fltro HEPA
Limpieza y desinfección de superfcies con
etanol al 70% o desinfectantes apropiados.

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SEGURIDAD EN EL LABORATORIO
Prevención de la exposición del personal a
agentes nocivos y a impedir la liberación
de éstos al exterior

La seguridad puede ser:


• Biológica o bioseguridad. Prevención ante agentes
patógenos y toxinas.
• Química. Prevención ante la exposición a agentes químicos.

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SEGURIDAD EN EL LABORATORIO
Bioseguridad

Bioseguridad engloba todas las normas,


técnicas, práctcas y hábitos de trabajo que
intentan evitar la exposición accidental dno
intencionada) del personal a agentes
biológicos potencialmente peligrosos
dpatógenos y toxinas) o su liberación al
medio ambiente.

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Para la prevención de riesgos biológicos la
legislación establece las llamadas actvidades de
confnamiento
Se clasifcan en 4 tpos en función del riesgo para
el ser humano y el medio ambiente:
Tipo 1: Riesgo nulo o insignifcante
Tipo 2: Riesgo bajo.dlab. Cultvos y citogenétca)
Tipo 3: Riesgo moderado.
Tipo 4: Riesgo alto.
dver tabla de medidas de confnamiento en pg.23)
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SEGURIDAD EN EL LABORATORIO
Seguridad química

Buenas práctcas en seguridad química:


1. Prevenir la exposición del personal
(cutánea, inhalación o ingestón)
2. Almacenamiento seguro
3. Gestón efciente de residuos

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Medidas genéricas:
1. Utlización de los EPI
2. Prohibido pipetear con la boca
3. Manipular productos volátles en el interior de las
campanas de aspiración de gases.
4. Manipulación de productos infamables lejos de
llamas y fuentes de calor.
5. Correcto etquetados de todos los envases de
agentes químicos.
6. Almacenamiento en armarios adaptados y
respetando las incompatbilidades.(ver fcha pg.
24)
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Listado y clasifcación de sustancias peligrosas en los
laboratorios de biología molecular y citogenétca.
A. Inflamables( alcoholes).
B. Tóxicos y muy tóxicos (acrilamida, azida sódica,
bromuro de etdio, diaminobencidina DAB, formamida,
tetrametl urea).
C. Carcinógenos (acrilamida grado 2 , DAB, formaldehído
grado 1)
D. Mutágenos (acrilamida grado 2, bromuro de etdio
grado 3)
E. Teratógenos y/o perjudiciales para la fertlidad
(acrilamida grado 3, formamida grado 2, tetrametl
urea grado 1)
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SEGURIDAD EN EL LABORATORIO
Equipamiento y normas de seguridad
EQUIPAMIENTO, INSTALACIONES Y DISTRIBUCIÓN
• Deben disponer de instalaciones de emergencias
señalizadas.
• Deben estar dotados con los EPI
• Deben tener instalaciones adecuadas para el
almacenamiento de sustancias tóxicas y peligrosas.
• Deben tener contenedores para la recogida selectva
y clasifcación de los residuos.
• Deben disponer de kits para recogida de derrames.
• Deben contar con manual de seguridad y un plan de
gestón de residuos.
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SEGURIDAD EN EL LABORATORIO
Normas básicas para el personal
 Lavado frecuente de manos
 Utlización de EPI
 Uso de ropa de trabajo adecuada.
 Prohibición de pipetear con la boca.
 Recibir la formación adecuada para el manejo
de aparatos.
 Conocer el plan de gestón de residuos y el
manual de seguridad y cumplir las normas.
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SEGURIDAD EN EL LABORATORIO
Manual de seguridad
El manual de seguridad es un documento de obligado
cumplimiento de todo el personal del laboratorio. La
información que recoge:
1. Eialuación de los riesgos inherentes a cada puesto.
2. Descripción y normas de utlización del equipamiento
3. Hábitos de trabajo apropiados.
4. Normas de almacenamiento de productos químicos.
5. Normas de eliminación de desechos,
residuos,derrames..
6. Normas de actuación en caso de emergencias,
accidentes biológicos y accidentes químicos.
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SEGURIDAD EN EL LABORATORIO
Gestón de residuos

El plan de gestón de residuos


tóxicos y peligrosos debe incluir
medidas para la:
 recogida,
clasifcación y
almacenamiento temporal de residuos
hasta su recogida por una empresa gestora

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SEGURIDAD EN EL LABORATORIO
Gestón de residuos
Los grupos de residuos que distnguimos en los
laboratorios de biología molecular y citogenétca
son:
1. Residuos biosanitarios especiales.
a) Objetos punzantes y cortantes que han estado en
contacto con productos biológicos
b) Cultvos microbiológicos y su material contaminado
c) Sangre en grandes cantdades
d) Otros líquidos biológicos

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SEGURIDAD EN EL LABORATORIO
Gestón de residuos

2. Residuos químicos.
a) Envases que han contenido residuos
químicos
b) Reactvos caducados o innecesariso
c) EPI contaminados
d) Filtros de las cabinas
e) Derrames
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SEGURIDAD EN EL LABORATORIO
Gestón de residuos

3. Residuos citotóxicos
a) Restos de productos carcinógenos,
mutágenos y teratógenos.
b) Envases que hayan contenido estos
productos.
4. Residuos radiactvos
a) Contenedores de residuos radiactvos sólidos
b) Garrafas de residuos radiactvos líquidos
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químicos citotóxicos

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SEGURIDAD EN EL LABORATORIO
Gestón de residuos
DERRAMES
Es uno de los accidentes más comunes, la gestón de sus
residuos implica tres pasos principales:
Neutralización
Absorción :
• Serrín para no infamables, no tóxicos, no corrosivos.
• Carbón actvo para infamables, tóxicos y corrosivos.
• Absorbentes-neutralizadores para derrames líquidos según
indicaciones fabricante
• Celulosa para derrames pequeñas cantdades.

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SEGURIDAD EN EL LABORATORIO
Gestón de residuos
Eliminación:
• Derrames de productos en polvos, se recogen
evitando aerosoles y polvo en suspensión.
• Derrames de productos volátles tóxicos por
inhalación, se recogen:
– Con celulosa y en envases hermétcos
– Con celulosa en cabina hasta su evaporación y
después se elimina como residuo químico.

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SEGURIDAD EN EL LABORATORIO
Gestón de residuos
Acttud del personal frente a derrames:
Restringir acceso
Equipamiento adecuado con EPI
Especial cuidado con líquidos infamables y
volátles.

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