Práctica Siembra y Aislamiento
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GESTIÓN ACADÉMICA
VERSIÓN 01
INSTRUCTIVOS DE PRÁCTICAS LABORATORIO FECHA
MICROBIOLOGIA GENERAL PÁGINA
ELABORÓ REVISÓ APROBÓ
MSc Claudia Yaneth Diaz
1. INTRODUCCIÓN
Las muestras de interés microbiológico pueden presentar una gran variedad de
microorganismos, con diferencias macroscópicas, microscópicas y bioquímicas,
incluso entre organismo del mismo género. Por lo que es necesario aislarlas
completamente para obtener un cultivo axénico a partir del que puedan realizarse
pruebas para una identificación posterior. El aislamiento bacteriano se hace evidente
una vez se han formado colonias independientes en medios de cultivo sólidos.
Uno de los procedimientos más importantes para la identificación de
microorganismos en el laboratorio es la siembra en medios de cultivo como base para
la propagación de colonias que nos puedan contribuir para el análisis e identificación
de bacterias, mohos y levaduras.
2. OBJETIVOS
Aplicar los métodos microbiológicos más usuales para el crecimiento y aislamiento
de microorganismos.
Aplicar las diferentes técnicas de siembra en microbiología.
Distinguir los métodos de siembra empleados en microbiología.
3. FUNDAMENTO TEÓRICO
El proceso de colocar las bacterias u otros microorganismos cultivables en medios de
cultivo, recibe el nombre de siembra; esta operación la podemos realizar a partir de
muestras biológicas (orina, pus secreciones, etc.), de análisis para control de calidad
(alimentos, aguas, cosméticos, medicamentos, etc.), procedente de muestras
ambientales (agua, suelo, etc.), o de un cultivo microbiano a otro; si la realizamos de un
cultivo a otro la denominamos subcultivo o repique.
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la caja, las estrías queden trazadas con mayor separación. (iii) Repita el paso ii, por
tres veces (algunos autores reportan solo dos), recordando flamear y enfriar el asa
cada vez que culmine una estría y solo tocar con el asa la estría inmediatamente
anterior, con el objetivo de ir reduciendo la carga microbiana arrastrada por la
argolla. Finalmente se esteriliza el asa antes de descartarla (Figura 1).
La siembra de medios contenidos en tubos requiere mayor cuidado, puesto que un solo
organismo contaminante del aire puede superar en crecimiento al microorganismo de
interés, por lo tanto, se deben tener las siguientes precauciones:
- Mantener inclinado el tubo que contiene el cultivo que se va a transferir, de modo
que los microorganismos del aire caigan en las paredes externas del tubo y no en la
boca de este.
- Los tapones se deben mantener en la mano contraría a aquella que
contiene el tubo, sosteniéndolos entre el dedo meñique, el anular y
el dedo del corazón. Nunca deben colocarse sobre la mesa de
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Fig. 4. Técnicas de siembras aplicadas a medios de cultivo contenidos en tubos, donde: (A) Siembra
por estría simple, (B) siembra mixta (picadura y estría), (C y D) siembra por picadura en agar inclinado
y recto y, (E) siembra con asa bacteriológica en medio líquido (Fuente: Rojas, A.).
4. EQUIPOS
- Mechero Bunsen.
- 2 incubadoras de35±2°C y 25°C.
5. MATERIALES Y REACTIVOS
- 1 caja Petri con agar PDA.
- 4 cajas Petri con agar Nutritivo.
- 1 tubo con 5mL de Caldo Nutritivo.
- 1 tubo con agar SIM.
- 2 tubos con agar Nutritivo en bisel.
- 1 tubo con agar PDA en bisel.
- 2 hisopos estériles en tubo taparosca.
- 1 asa bacteriológica.
- 1 asa micológica.
- 1 cultivo bacteriano en caja Petri con agar Nutritivo de 24h.
- 1 cultivo fúngico en caja Petri con agar PDA de 3 días.
- Etanol 70%.
- Toallas desechables.
- 1 rollo de papel para sellar cajas Petri.
- 1 rollo de cinta de papel.
6. PROCEDIMIENTO
De acuerdo a la fundamentación teórica de esta guía, a las indicaciones
del tutor y al material de trabajo, efectúe las siembras listadas a
continuación:
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7. ACTIVIDAD COMPLEMENTARIA
1. Cuál es el objetivo o finalidad de una siembra por agotamiento?
2. Explique brevemente la metodología para realizar siembras en placa profunda y
placa en superficie.
3. ¿Qué importancia tiene la siembra correcta de microorganismos?