Proyecto Avance 2
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SANTO DOMINGO
PROYECTO DE GENÉTICA
TEMA:
AUTORES:
CURSO:
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1. INTRODUCCIÓN
genoma. Una de las técnicas actualmente más revolucionarias y con mayor aporte al desarrollo
palindromic repeats). Es una técnica reconocida y usada a nivel mundial por su fácil manejo,
rapidez y además con un alto nivel de eficacia. (Lagunas F, s.f. y Gómez, L. et al. 2019).
El CRISPR-Cas9 tuvo sus inicios en el año 1987, cuando durante un estudio realizado
ADN repetidas que parecían no tener una función en específico. Más tarde en el año 1993, de
forma independiente, el investigador Juan Francisco Martínez Mojica junto con su grupo
reportaron el mismo hallazgo, pero en genomas de arqueas, en este caso las secuencias eran
De acuerdo con Jinek et al. (2012), en el año 2012, Jennifer Doudna y Emmanuelle
Según Cárdenas (2019), la técnica CRISPR puede ser comparada con un editor de texto
que corta y pega parte de un genoma. Esto permite, en muchos casos que se pueda eliminar,
modificar o reemplazar algún gen que no esté funcionando correctamente, y estas nuevas
secuencias introducidas pueden ser heredadas a los descendientes. “CRISPR es una curiosa
región del ADN de algunas bacterias que actúa como un mecanismo inmunitario frente a los
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En un estudio realizado por Guevara, F. et al. (2019), se menciona que el sistema
CRISPR, usado para la modificación del genoma de ciertas baterías infecciosas, permite que se
programables que sirvan como nuevos antimicrobianos, debido a la actual resistencia de ciertas
Otros estudios, como el realizado por Martínez, B. (2020), donde se menciona el uso de
CRISPR-Cas9 para el estudio genómico de ajolotes (reptiles que puede regenerar extremidades,
permiten el estudio fenotípico de esa generación, con esto se plantea el reto de conocer cómo
condición de vida o curar enfermedades que afectan al genotipo provenientes del ADN.
y aplicar CRISPR es el factor económico que influye sobre la misma, el método CRISPR a
pesar de no ser el método pionero dentro de la edición genética ofrece grandes beneficios
económicos y es que CRISPR “permite modificar el genoma con una precisión sin precedentes,
y de forma mucho más sencilla y barata que cualquier otro método biotecnológico.” (Becú,
2017).
para fines medicinales o investigativos, a pesar de las múltiples trabas que se le ha impuesto a
esta tecnología, los avances cada día son más visibles desde la primera vez que se sintetizó una
bacteria en 2014 cuyo nombre fue expuesto como “Mycoplasma laboratorium 1” hasta las
investigaciones más recientes como la cura de enfermedades del mtDNA, luego esta
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de ADN foráneo de bacteriófagos o plásmidos invasivos, el cual reconoce y degrada (Mojica,
método bastante eficaz para tratar el cáncer, descubriéndose, hasta el año 2017, más de 140
genes driver que producen cáncer, por lo que, mediante la identificación y secuenciación de las
mutaciones en un tumor, CRISPR sería una buena alternativa para reparar esta secuencia
complejos proteicos que tienen la capacidad de reconocer la secuencia diana sin cortarla, es
decir se ha inhibido esta capacidad a la proteína Cas9 con el fin de usarse para dirigir a otras
proteínas que puedan modificar genes específicos para cambiar los patrones epigenéticos.
prometedores en el tratamiento del cáncer usado CRISPR, en dicho estudio se crearon células
T con el gen alterado en ciertas proteínas que se encuentran en dichas células y que se conocen
como PD1, mediante CRISPR; estas fueron implantadas en personas con cáncer de pulmón, y
obtuvo que en ciertos pacientes se logró obtener una enfermedad estable durante 8 semanas,
Por otro lado, en una estudio que se realizó por Balon, K.; Sheriff, A.; Jacków, J.;
Łaczma ´nski, Ł. (2022) , se identificó promotores específicos del cáncer que controlan los
genes sobreexpresados en las células tumorales, en los cuales se puede usar la terapia génica
CRISPR/Cas9 para lograr la expresión selectiva de la proteína Cas9 y los genes dirigidos a
sgRNA (guía único ARN) necesarios para el crecimiento celular; en los resultados se encontró
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que estos promotores en tejidos sanos ejercen una actividad baja pero significativa que es
sin embargo se encontró que usando un método de construcción de un (Y lógico circuito de gen
puerta) usando dos promotores que controlan un gen de salida, se conduce a una apoptosis,
detención del crecimiento y motilidad de las células cancerosas, por lo que empleando
2. OBJETIVOS
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3. MARCO TEÓRICO
importantes acerca de esta enfermedad, todo esto a fin de mantener un soporte teórico que
impredecible e incurable, esta enfermedad dada por cambios en las secuencias del ADN cobra
miles de vidas anualmente y que, en última instancia, “es una enfermedad del organismo, que
coopta los tipos de células normales (Figura 1) y las funciones de los tejidos, y elude los
Con cada vez mayor incidencia a nivel mundial el cáncer como enfermedad heterogénea
y dinámica representa un problema a nivel investigativo ya que remontarse a los orígenes del
Fuente: https://www.cancer.gov/espanol/cancer/naturaleza/que-es
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tratamiento ya existentes se discuten, dentro de los cuales CRISPR-CAS9 se hace presente, aun
enfermedad se presenta en diferentes áreas del cuerpo humano afectando a órganos específicos,
Fuente: https://revistas.ucm.es/index.php/PSIC/article/download/PSIC0606130035A/15910
Se estima que uno de los principales factores asociados al aparecimiento de cáncer tiene
su origen en fallas hormonales (véase tabla 1), se ha descubierto también que estas fallas
hormonales están estrechamente ligadas al sistema inmunológico (véase tabla 2), así, se estima
como descuidos en los hábitos de vida de un paciente propenso a tener cáncer aumentan la
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Ratas estresadas por aislamiento Disminución de la inmunidad (Wu, 2000)
con tumores implantados. celular y aumento del tamaño
tumoral.
factores genéticos en el cáncer de mama, al respecto se han realizado algunos estudios los cuales
han revelado que de todos los casos estudiados se estima que alrededor de un 10 % de ellos se
deban a un origen genético. “Desde 1995, una gran proporción de casos hereditarios son
atribuibles a mutaciones en dos genes, BRCA1 y BRCA2 (10%). Las mujeres portadoras de
una mutación en estos genes tienen un riesgo de 80% de desarrollar cáncer de mama, de ovario
El gen BRCA1 fue nombrado por primera vez en 1991 por Mary-Claire King. Su grupo
casos de cáncer de mama detectado a edades tempranas, y fue así, posterior a estos estudios
como en 1994 se relacionó el cromosoma 13 con el gen BRCA2 El cáncer de mama en hombres
es una alteración rara que representa menos de 1% de todos los cánceres y causa 0.1% de las
investigaciones contra el cáncer, en especial el cáncer de mama. Aunque las pruebas genéticas
Estados Unidos, Canadá, y otros países de Europa Occidental, se unen bajo el objetivo de
evaluar pacientes que bajo alta probabilidad puedan tener cáncer de mama de origen hereditario.
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Y es que la capacidad de identificar estos genes dentro de pacientes con la enfermedad del
Se denomina CRISPR a una región de ADN presente en ciertas bacterias que funciona
como mecanismo de defensa contra los virus. Tienen la capacidad de detectar a los virus
trocearlos obteniendo así fragmentos que son utilizados para inmunizar a la bacteria frente a
tales virus (Capella, 2016). La constitución del CRISPR-Cas9 comprende dos componentes
básicos: la enzima Cas9 y el CRISPR. El primer componente es una enzima que funciona
como tijeras moleculares ya que permite cortar y pegar cualquier molécula de ADN de
manera muy precisa y controlada (Morán, 2018). El segundo componente es una molécula de
ARN encargada de transmitir información biológica dentro del genoma. Tiene el papel de
guía de las tijeras moleculares, pues conduce a la enzima hasta la base de nucleótidos que
tiene que cortar. Al observar este comportamiento los científicos se dieron cuenta de que
system) al igual que la naturaleza. Tras varios estudios obtuvieron versiones sintéticas de
ARN guía y aprendieron a programarlas para que cumplan su función en todo tipo de células.
Así, en cuanto ponían una enzima (tijeras genéticas) frente a una secuencia de ADN, esta
podía cortar y pegar nucleótidos, editando los genes y manipulando la función de estos de
forma que lograba modificar la secuencia del ADN de un organismo (Zhang et al., 2014).
Debido a que este método es sencillo, económico y eficaz muchos grupos han
empezado a realizar estudios y experimentos para su aplicación y mejora para hacerla más
provechosa. Un ejemplo de ello es un ratón que llevaba en todas sus células el “escalpelo
genético” Cas9, desarrollado por el equipo de Zhang para habilitar ampliamente la aplicación
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de Cas9 in vivo. Este ratón al haber sido modificado genéticamente “acelera toda la
investigación dirigida a conocer las causas genéticas de las enfermedades y los medios para
experimentar con ellos con gran sencillez y poco coste” (Capella, 2016, p.225). Este avance
permite que un experimento que antes tardaba una década trabajando en conjunto con varios
investigadores ahora lo pueda realizar una sola persona y en poco tiempo. Incluso en el año
2015, Zhang volvió a hacer un descubrimiento, la enzima Cpf1, presente en algunas bacterias
y con la característica de ser más pequeña y fácil de transportar a células maduras, además de
falte mucho por saber y hacer. Debido a esto han surgido varias preocupaciones en relación
investigación son reacios a apoyar esta tecnología por motivos éticos y sociales (Munawar &
Ahmad, 2021).
uso de esta nueva tecnología, ya que puede utilizarse para alterar el genoma, cuyo resultado
puede ser nefasto e irreversible (Artigas et al., 2021). Esta nueva tecnología necesita que la
sociedad reflexione sobre, si quiere realmente cambiar la información genética para modelar
cómo han de ser sus descendientes. Capella (2016) señala que “desde que J. Robert
Oppenheimer se diera cuenta de que la bomba atómica que había creado para proteger al
mundo podía igualmente acabar con él, los científicos responsables de un descubrimiento no
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habían vuelto a tener la misma sensación de estar bajo sospecha por el uso que hagan con él”
DNA y la forma en que se unen al mismo, los investigadores han logrado identificar seis tipos
distintos de sistemas CRISPR/Cas (I-VI) (Makarova et al., 2011). En nuestro caso solo nos
enfocaremos en el tipo II ya que es el más utilizado para realizar ediciones genéticas puesto
que, a diferencia de otros sistemas, este solo necesita de la enzima Cas9 (Mei et al., 2016). La
transcripción de los elementos del sistema CRISPR/Cas se realiza en una región promotora
la región CRISPR, compuesta por los elementos repetidos y de los espaciadores, estos últimos
encargados de codificar moléculas de RNA cortas (30-40 pares de bases) denominadas RNA
CRISPR (crRNA) las cuales guían a la proteína Cas a su sitio blanco. Por último, tenemos a los
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En el caso de la proteína Cas9, el reconocimiento y escisión del DNA diana es guiado
por el sgRNA. Según Riveros et al. (2020), el sgRNA se forma por la unión de dos RNA:
crRNA y tracrRNA y forman un complejo con la proteína Cas9. Esta enzima posee los dominios
catalíticos RuvC y HNH, además del dominio de interacción con el PAM. Ambos dominios
De acuerdo con Khan et al. (2018), para todos los tipos de sistema CRISPR/Cas el
e 3) interferencia.
4. METODOLOGÍA
publicados en distintas bases de datos como “Scopus”, “Google Scholar” y “Medline”. Además,
se revisaron varias revistas científicas de gran impacto internacional y prestigio tales como
edición "programable" de genomas, que se pudiera cortar de manera específica una cadena de
ADN in vitro con fines terapéuticos (Jinek et al., 2012). Para esto fué necesario que los
investigadores diseñaran un protocolo con tres pasos básicos. El primero consiste en el diseño
y síntesis de una molécula de ARN de una solo hebra, conocida con el nombre de ARN guía,
la cual tiene la capacidad de unirse a la enzima Cas9, y cumple con las mismas características
moleculares de las secuencias CRISPR, es decir, que es capaz de reconocer y unirse a una
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secuencia específica del ADN o un gen que se quiera editar o corregir. Cuando el ARN guía ya
se encuentra unido al Cas9, se avanza al segundo paso en el cual se procede a introducir in vitro
reconocerá la posición exacta del genoma donde la enzima Cas9 debe cortar (Castillo, 2016).
célula, como consecuencia del corte que realizó la endonucleasa Cas9, esta acción puede
ocasionar la pérdida o adición de información genética en la región del genoma que se desea
editar. Las consecuencias podrían ser la inactivación del gen o un mal funcionamiento de la
proteína que codifica. Dado que se busca reemplazar las mutaciones cancerígenas, al último
paso se le pueden incorporar algunos cambios, que consisten en adicionar una molécula de
ADN molde homóloga de la región que se quiere editar y que esté libre de mutaciones
5. RESULTADOS
como una excelente herramienta de edición genética, sin embargo, ciertas limitaciones en la
rotura de doble hebra (DSB), misma que en malas prácticas mostraron deleciones equivocas
que no sean de interés científico aplicativo y que puedan resultar en cromotripsis lo que
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El primer informe clínico que usó CRISPR para la terapia del cáncer se dio en un
ex vivo con proteína de muerte celular programada 1 (PD-1) en el tratamiento del cáncer de
pulmón de células,. El regulador del punto de control inmunitario PD-1 es un receptor de células
inmunitario de los cánceres. Los anticuerpos que neutralizan PD-1 o su ligando PD-L1 se
utilizaron con éxito para el tratamiento de cánceres de pulmón, entre otros. Los pacientes
otros cuatro ensayos que aplican el mismo concepto de inactivación de PD-1 para el tratamiento
de otros tipos de cáncer, incluido el cáncer de próstata, vejiga, esófago y células renales (Tabla
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NCT03057912 Neoplasia intraepitelial yo Gel CRISPR/Cas9-sg HPV E6/E7
cervical relacionada con el para interrumpir el ADN del VPH
VPH
NCT03399448 Mieloma múltiple, sarcoma yo Células T autólogas dirigidas al
sinovial, liposarcoma antígeno tumoral NY-ESO-1, editadas
mixoide/de células redondas, con CRISPR-Cas9 para interrumpir
melanoma TCRα, TCRβ y PD-1 endógenos
(Células T NYCE)
NCT03398967 Linfoma/leucemia de células yo/yo Células CAR-T editadas con CRISPR-
B Cas9 dirigidas a CD19 y CD20 o
CD22
Fuente: www.clinicaltrials.gov
Así mismo gracias a los estudios que se han realizado junto a la nanotecnología se ha
logrado la inducción del ciclo celular y la muerte celular de líneas celulares de cáncer in vitro,
cLNP)
Para dar paso a la edición terapéutica del genoma en el cáncer, tras evaluar líneas de
células cancerosas de dos cánceres agresivos y difíciles de tratar: la línea de células 005 y OV8;
una línea celular de adenocarcinoma de ovario seroso de alto grado que es altamente resistente
a los medicamentos y metastatiza para formar ascitis. La incubación in vitro de GBM 005 u
OV8 con sgPLK1, pero no con sgGFP, los cLNP interrumpieron eficientemente el gen PLK1,
horas después del tratamiento y redujo la viabilidad celular 96 horas después del tratamiento en
DAPI y/o anexina V aumentó después de la incubación con sgPLK1, pero no con sgGFP-cLNP.
detención del ciclo celular y la muerte de GBM 005 y OV8 in vitro (Rosenblum et al., 2020).
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Figura 3. Edición del gen PLK1
Fuente: https://www.science.org/doi/full/10.1126/sciadv.abc9450
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6. BIBLIOGRAFÍA:
17
http://www.scielo.org.co/scielo.php?pid=S1657-
95342016000400178&script=sci_arttext&tlng=es#B6
Zhang, F., Platt, R., Chen, S., Zhou, Y., Yim, M., Swiech, L., Kempton, H., Dahlman, J., Parnas,
O., Eisenhaure, T., Jovanovic, M., Graham, D., Jhunjhunwala, S., Heidenreich, M.,
Xavier, R., Langer, R., Anderson, D., Hacohen, N., Regev, A., . . ..Feng, G. (2014).
CRISPR-Cas9 Knockin Mice for Genome Editing and Cancer Modeling. Cell, 159(2),
440–455. https://doi.org/10.1016/j.cell.2014.09.014
Katti, A., Díaz, BJ, Caragine, CM, Sanjana, NE y Dow, LE (2022). CRISPR en biología y
terapia del cáncer. Nature Reviews Cancer , 22 (5), 259-279.
Morán, A. (2018, 28 mayo). ¿Qué es la tecnología CRISPR/Cas9 y cómo nos cambiará la
vida? Dciencia | Blog de ciencia para todos. Recuperado 1 de julio de 2022, de
https://www.dciencia.es/que-es-la-tecnologia-crispr-cas9/
Zhang, F., Zetsche, B., Gootenberg, J., Abudayyeh, O., Slaymaker, I., Makarova, K.,
Essletzbichler, P., Volz, S., Joung, J., Van Der Oost, J., Regev, A., & Koonin, E.
(2015). Cpf1 Is a Single RNA-Guided Endonuclease of a Class 2 CRISPR-Cas
System. Cell, 163(3), 759–771. https://doi.org/10.1016/j.cell.2015.09.038
Munawar, N., & Ahmad, A. (2021). CRISPR/Cas System: An Introduction. CRISPR Crops, 1-
35.
Artigas, S., Armas, M., Duque, R., & Soca, P. (2021, 30 diciembre). Principios y aplicaciones
médicas de la edición de genes mediante CRISPR/Cas. SciELO. Recuperado de
http://scielo.sld.cu/scielo.php?pid=S1727-
897X2021000601005&script=sci_arttext&tlng=pt#B13
Camps, C., Sánchez, P. T., & Sirera, R. (2006). Inmunología, estrés, depresión y cáncer.
Psicooncología, 3(1), 35-48.
Monjan AA, Collector MI. Stress-induced modulation of the immune response. Science 1977;
196:307-8.
Glaser R, Thorn BE, Tarr KL, Kiecolt-Glaser JK, D’Ambrosio SM. Effects of stress on
methyltransferase synthesis: an important DNA repair enzyme. Health Psychol 1985;
4:403-12.
Visintainer MA, Volpicelli JR, Seligman ME. Tumor rejection in rats after inescapable or
escapable shock. Science 1982; 216:437-9.
18
Ben Eliyahu S, Page GG, Yirmiya R, et al. Evidence that stress and surgical interventions
promote tumor development by suppressing natural killer cell activity. Int J Cancer
1999; 80:880-8.
Wu W, Yamaura T, Murakami K, Murata J, Matsumoto K, Watanabe H, et al.. Social isolation
stress enhanced liver metastasis of murine colon 26-L5 carcinoma cells by suppressing
immune responses in mice. Life Sci 2000; 66:1827-38
Torres, D., Umaña, Á., Robledo, J. F., Caicedo, J. J., Quintero, E., Orozco, A., ... & Briceño, I.
(2009). Estudio de factores genéticos para cáncer de mama en Colombia. Universitas
médica, 50(3), 297-301.
Narod, S. A., & Rodríguez, A. A. (2011). Predisposición genética para el cáncer de mama:
genes BRCA1 y BRCA2. Salud pública de México, 53(5), 420-429.
Gutierrez y Salazar, (2017). CRISPR-Cas: Utilidad clínica de la edición genómica como opción
terapéutica. https://www.medigraphic.com/pdfs/revcliescmed/ucr-2017/ucr176a.pdf
Makarova, K. S., Half, D. H., Barrangou, R., Brouns, S. J. J., Charpentier, E., Horvath, P.,
Moineau, S., Mojica, F. J. M., Wolf, Y. I., Yakunin, A. F., Oost, J. & Koonin, E. V.
(2011) Evolution and classification of the CRISPR-Cas systems. Nat. Rev. Microbiol.,
9(6), 467-477. DOI: 10.1038/nrmicro2577.
Mei, Y., Wang, Y., Chen, H., Sun, Z. S., & Ju, X. D. (2016). Recent Progress in CRISPR/Cas9
Technology. Journal of Genetics and Genomics, 43(2), 63–75.
https://doi.org/10.1016/j.jgg.2016.01.001
Ibáñez et al, (2021.). CRISPR-Cas, el editor de genes. Recuperado de
https://www1.hospitalitaliano.org.ar/multimedia/archivos/noticias_attachs/47/docume
ntos/121929_37-42-13-4-21-Ibanez-A.pdf
Khan, S., Mahmood, M. S., Rahman, S. U., Zafar, H., Habibullah, S., Khan, Z., & Ahmad, A.
(2018). CRISPR/Cas9: the Jedi against the dark empire of diseases. Journal of
biomedical science, 25(1), 29. https://doi.org/10.1186/s12929-018-0425-5
Sempere, C. (2021). APLICACIÓN DE CRISPR EN LA EDICIÓN DE CÉLULAS T PAR EL
TRATAMIENTO DE PACIENTES CON CÁNCER. Recuperado de
http://repositori.uji.es/xmlui/bitstream/handle/10234/195419/TFG_2021_Sempere%20
Navarro_Carmen.pdf?sequence=1
Chávez, V. M. (2020, 3 septiembre). El sistema de edición genética CRISPR/Cas y su uso como
antimicrobiano específico. SciELO. Recuperado 2 de julio de 2022, de
19
http://www.scielo.org.mx/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1405-
888X2018000200200#B19:%7E:text=https%3A//doi.org/10.22201/fesz.23958723e.20
18.2.5%C2%A0
Balon, K.; Sheriff, A.; Jacków, J.; Łaczma ´nski, Ł, (2022). Targeting cancer with
CRISPR/Cas9-Based therapy. Int. J. Mol. Sci. 2022, 23, 573.
https://doi.org/10.3390/ijms23010573
Jiang, W., & Marraffini, L. A. (2015). CRISPR-Cas: New Tools for Genetic Manipulations
from Bacterial Immunity Systems. Annual Review of Microbiology, 69(1), 209–228.
https://doi.org/10.1146/annurev-micro-091014-104441
Katti, A., Diaz, B.J., Caragine, C.M. et al. CRISPR in cancer biology and therapy. Nat Rev
Cancer 22, 259–279 (2022). https://doi.org/10.1038/s41568-022-00441-w
Zhan, T., Rindtorff, N., Betge, J., Ebert, MP y Boutros, M. (abril de 2019). CRISPR/Cas9 para
investigación y terapia del cáncer. En Seminars in cancer biology (Vol. 55, pp. 106-
119). Prensa Académica.
20