Copia de Equipo 12. Curva Estándar

UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO.
FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES ZARAGOZA.
“CURVA ESTÁNDAR DE PROTEÍNAS”
LABORATORIO DE BIOQUÍMICA CELULAR Y DE TEJIDOS 1
E Q U I P O :
Beltran Hernández Yahir
Casas Guillermo Eros Yael
Matías Ortiz Cynthia Atenea
Rico García Itze Mariana
A S E S O R A: Martinez Rodriguez Claudia Fabiola
G r u p o : 1452
S e m e s t r e: 25-1
C a r r e r a : Q.F.B
● Objetivos
- Desarrollar y analizar una curva estándar.
- Determinar la concentración de albúmina en la clara de huevo por el
método de Lowry.
● Resumen
Ley de Lambert y Beer
La ley de Beer-Lambert establece que la cantidad de luz que absorbe una solución
es proporcional a la concentración de la solución y al paso de luz. En otras palabras,
una solución más concentrada absorbe más luz que una diluida.
Curvas estándar o cuevas de calibración

Una curva estándar, es un tipo de gráfico que se utiliza como técnica de
investigación cuantitativa. Se miden y grafican varias muestras con propiedades
conocidas, lo que luego permite determinar las mismas propiedades para muestras
desconocidas mediante interpolación en el gráfico.
Método de Lowry
El método de Lowry (1951) utiliza tres sistemas para producir coloración por la
presencia de proteínas. En primer lugar, el Cu+ forma complejos de coordinación
con dos enlaces peptídicos consecutivos de las proteínas, dando lugar a un
compuesto coloreado azul de manera similar al método del biuret.
En segundo lugar, este compuesto es capaz de reducir al reactivo de
Folin-Ciocalteu, dando un color más azulado. Por último, el reactivo de
Folin-Ciocalteu también reacciona con los restos de tirosinil de la cadena
polipeptídica, produciendo asimismo un color azul por la reducción del
fosfomolibdato en medio básico.
● Resultados
TUBO BLANCO 2 3 4 5 6 7
Solución problema - 0.2 0.4 - - - -

de proteínas (mL)
Solución patrón de - - - 0.1 0.2 0.4 0.8

proteínas (mL)
H2O destilada 2.0 1.8 1.6 1.9 1.8 1.6 1.2
Reactivo 3 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0
Agitar y dejar reposar 10 min
Reactivo 4 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1
Agitar inmediatamente y dejar reposar 20 min
Medir absorbancia a 640 nm

Tabla 1. Contenido utilizado para cada tubo
Imagen 1. Tubos 4-7 con la solución patrón, agua destilada y los reactivos 3 y 4
Imagen 1. Tubos 2 y 3 con la solución problema, agua destilada y los reactivos 3 y 4
Tubo mL mg (x) Absorbancia
4 0.1 0.01 0.011
5 0.2 0.02 0.043
6 0.4 0.04 0.076
7 0.8 0.08 0.157

Tabla 2. Resultados obtenidos con el espectrofotómetro
Los mg se obtuvieron de la siguiente manera…
5mg/50mL
0.1mg/mL
Ya que se hizo esa relación se procedió a hacer una regla de 3 para obtener los mg
a partir de los mL de los tubos 4, 5, 6 y 7…
0.1mg—---------------1mL
x—---------------(mL de cada tubo)
Tubo mL Absorbancia
2 0.2 0.078
3 0.4 0.156
Tabla 3. Resultados obtenidos del tubo 2 y 3 con el espectrofotómetro.
Gráfica I. Curva estándar de la albúmina presente en la clara de huevo.
y = 2.02x - 0.004
R² = 0.9939
Concentración aproximada para una absorbancia de 0.078 (P1): 0.202
Concentración aproximada para una absorbancia de 0.156 (P2): 0.198
● Análisis de resultados
En la Tabla I se detalla la composición líquida de cada tubo analizado en relación

con su contenido de solución problema de proteínas, solución patrón, agua
destilada, y los reactivos 3 y 4, así como el tiempo de reposo entre reactivos. Los
datos de la Tabla II corresponden a los valores de absorbancia obtenidos por el
espectrofotómetro para cada muestra, mientras que las concentraciones fueron
calculadas matemáticamente usando la fórmula C1V1=C2V2. La concentración solo
pudo determinarse en las muestras patrón ( 4, 5, 6 y 7). En la Gráfica I se muestra
visualmente la relación entre absorbancia y concentración de proteínas para cada
muestra, observándose una relación lineal entre la concentración calculada y la
absorbancia en los tubos 4, 5, 6 y 7, confirmando el método de Lowry para
concentraciones de proteínas en el rango de 0.1 a 0.8 mg. Aunque las
concentraciones y absorbancias de los tubos 3 y 4 fueron las más bajas,
demostraron la precisión del método en la detección de pequeñas cantidades de
proteína. No obstante, las absorbancias de los tubos 2 y 3 los cuales son nuestro
problema 1 y 2 debidamente tuvieron una concentración de 0.44 para el tubo 2 el
cual tenía una absorbancia de 0.078 y el tubo 3 la concentración es de 0.079 el cual
tenía una absorbancia de 0.156, todo esto lo podemos saber gracias a la curva
estándar la cual podemos utilizar como herramienta para saber la concentración de
muestras problema.
● Conclusión
Al concluir la práctica, se puede afirmar que la relación entre la absorbancia y la

concentración de proteínas es claramente lineal, tal como se observa en la curva
estándar obtenida. Este comportamiento se ajusta de manera precisa a la Ley de
Beer-Lambert, lo cual demuestra que dentro del rango de concentraciones
utilizadas, la absorbancia es directamente proporcional a la cantidad de proteína
presente en las muestras. La linealidad observada respalda que el método de Lowry
fue implementado de manera adecuada, cumpliendo con las condiciones necesarias
para obtener resultados fiables.
La correcta aplicación del método no solo confirma la relación entre la cantidad de

proteínas y la señal absorbida, sino que también valida la precisión de las
mediciones espectrofotométricas empleadas. Esto es especialmente relevante en la
cuantificación de proteínas, ya que la consistencia de los datos obtenidos garantiza
que el análisis es robusto y puede repetirse en condiciones similares con resultados
comparables.
Por tanto, los objetivos planteados al inicio de la práctica fueron cumplidos, ya que
no solo se logró establecer una curva estándar que evidencia la relación
absorbancia-concentración, sino que también se verificó la eficacia del método de
Lowry para la determinación de proteínas en el rango de concentraciones estudiado.
Asimismo, esta práctica refuerza la importancia de seguir de manera rigurosa los
procedimientos experimentales para minimizar errores y obtener resultados
confiables en la cuantificación de biomoléculas como las proteínas.
● Referencias
○ Roca, Pilar, et al. Bioquímica: técnicas y métodos, Editorial Hélice,
2004. ProQuest Ebook Central,
http://ebookcentral.proquest.com/lib/bibliodgbsp/detail.action?docID=3
159423.
○ Manual de Laboratorio de Bioquímica celular y de los tejidos 1.
UNAM.[2022]
● Cálculos de concentración original

Para una absorbancia de 0.078
y= 2.02x-0.004
x= (0.078+0.004)÷2.02
x= 0.0405 mg
((4.05×10-⁵)÷0.2)(1000)=0.202
Para una absorbancia de 0.156

y=2.02x-0.004
x= (0.156+0.004)÷2.02
x= 0.0792 mg
((7.92×10-⁵)÷0.4)(1000)=0.198

Copia de Equipo 12. Curva Estándar

Cargado por

Copyright:

Formatos disponibles

Copia de Equipo 12. Curva Estándar

Cargado por

Información del documento

Título original

Derechos de autor

Formatos disponibles

Compartir este documento

Compartir o incrustar documentos

Opciones para compartir

¿Le pareció útil este documento?

¿Este contenido es inapropiado?

Copyright:

Formatos disponibles

Copia de Equipo 12. Curva Estándar

Cargado por

Copyright:

Formatos disponibles

UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO.

FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES ZARAGOZA.

“CURVA ESTÁNDAR DE PROTEÍNAS”

LABORATORIO DE BIOQUÍMICA CELULAR Y DE TEJIDOS 1

A S E S O R A: Martinez Rodriguez Claudia Fabiola

Ley de Lambert y Beer

Curvas estándar o cuevas de calibración

Solución problema - 0.2 0.4 - - - -

Solución patrón de - - - 0.1 0.2 0.4 0.8

H2O destilada 2.0 1.8 1.6 1.9 1.8 1.6 1.2

Reactivo 3 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0

Agitar y dejar reposar 10 min

Reactivo 4 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1

Agitar inmediatamente y dejar reposar 20 min

Medir absorbancia a 640 nm

Tubo mL mg (x) Absorbancia

4 0.1 0.01 0.011

5 0.2 0.02 0.043

6 0.4 0.04 0.076

7 0.8 0.08 0.157

Los mg se obtuvieron de la siguiente manera…

En la Tabla I se detalla la composición líquida de cada tubo analizado en relación

Al concluir la práctica, se puede afirmar que la relación entre la absorbancia y la

La correcta aplicación del método no solo confirma la relación entre la cantidad de

● Cálculos de concentración original

Para una absorbancia de 0.156

También podría gustarte